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CULTIVO IN VITRO DE TEJIDOS VEGETALES Conjunto de tcnicas que permiten el mantenimiento y/o crecimiento de clulas o tejidos en un medio nutritivo y en condiciones ambientales controladas.
Diferenciacin celular
La clula adquiere propiedades diferentes a las de la clula que la origin Desdiferenciacin
Clula diferenciada Clula diferenciada Clula desdiferenciada Retiene informacin
Totipotencialidad
CULTIVO IN VITRO DE TEJIDOS VEGETALES Conjunto de tcnicas que permiten el mantenimiento y/o crecimiento de clulas o tejidos en un medio nutritivo y en condiciones ambientales controladas.
Medio nutritivo
Las porciones del vegetal que se cultivan in vitro: explantos No son autotrficos
Necesidades nutricionales y hormonales de los cultivos de rganos y tejidos vegetales Agua Macro Micro Sustancias orgnicas Nutrientes Fe Zn Azcares N B Aminocidos P Mn Vitaminas K Cu Auxinas Ca Ni Citocininas Mg Co Giberelinas S Al Mo I
Citocininas
0.03 a 10 mg/l
Bencil adenina-(BA) Bencilaminopurina (BAP) 2ip Zeatina Tridiazuron
Se disuelven en NaOH 1N
Giberelinas
Medio nutritivo
Auxinas Citocininas
Auxinas
Citocininas
Parte area
Enraizamiento
Cultivo de anteras
Cultivo de embriones
Cultivo de protoplastos
Esquema modificado a partir de Lindsey y Jones, 1989, en Plant Biotechnology in Agriculture. p 59)
Vegetativa:
Reproduccin asexual Progenie con idntico genotipo Descendencia uniforme Se transmiten enfermedades
Cultivo de meristemas
Cultivo de meristemas
Consideraciones generales
El proceso no ofrece total seguridad Importancia de las tcnicas de diagnstico Anlisis confiables Sistemas de deteccin sensibles Especificar de qu virus se ha liberado y la tcnica de diagnstico empleada
Microinjertos
Injertar pices caulinares en un portainjerto
Etapas: Germinacin in vitro de las semillas del portainjerto Preparacin de la plntula para ser injertada Extraccin del pice de la planta infectada Mantenimiento de la plntula injertada en cultivo Mantener la planta obtenida en invernadero Indexar las plantas obtenidas
Microinjertos
Microinjertos
http://www.ivia.es/germo/Foto1.jpg
Esquema modificado a partir de Lindsey y Jones, 1989, en Plant Biotechnology in Agriculture. p 59)
Edad: Partes juveniles mejor que las adultas Estado del rgano o tejido: Mejor no leosos Estado fisiolgico: Partes vegetativas
mejor que partes generativas
Capacidad regenerativa
Estado sanitario: Las ms saludables
y vigorosas
Capacidad regenerativa
Posicin del explanto: Hay un gradiente
de regeneracin en la planta
Prevenir insectos de cualquier tipo Prevenir hongos y bacterias Regar slo en la maceta (evitar riegos por encima) Mantener baja la humedad
Contaminaciones
Micropropagacin
Segmentos uninodales
Fuente: http://www.etsea2.udl.es
Fuente: http://www.etsea2.udl.es
Micropropagacin
Tipos de micropropagacin
Esquema modificado a partir de Lindsey y Jones, 1989, en Plant Biotechnology in Agriculture. p 59)
Tipos de micropropagacin
Tipos de micropropagacin
Micropropagacin:
Etapa I
Etapas (Murashige)
Etapa II
Multiplicacin a travs de subcultivos
Etapa III
Enraizamiento
Micropropagacin
Transplante y aclimatacin
Fuente: http://www.etsea2.udl.es
Micropropagacin
Transplante y aclimatacin
Invernadero
Fuente: http://www.etsea2.udl.es
Tnel de aclimatacin
Plntulas en aclimatacin
Plntulas aclimatadas
Esquema modificado a partir de Lindsey y Jones, 1989, en Plant biotechnology in agriculture. p 59)
Morfognesis directa
Regeneracin en hojas de Violeta africana
Fuente: http://www.unizar.es
Esquema modificado a partir de Lindsey y Jones, 1989, en Plant biotechnology in agriculture. p 59)
Morfognesis indirecta
Masas de callos indiferenciados
Cultivo de Anteras
En qu consiste?
Polen inmaduro en medios adecuados para la formacin de embriones o callos
Cultivo de Anteras
Aplicaciones en fitomejoramiento
Cruzamiento A X B Plantas F1
Fuente: Cultivo de tejidos en la Agricultura. CIAT 1991
Cultivo de anteras
Recuperacin de hbridos
Barreras a los cruzamientos interespecficos Precigticas: el grano de polen no germina o no atraviesa el estilo. Postcigticas: relacionadas con el desarrollo del embrin
P. cerasifera X P. munsoniana
P. avium X P. seudocerasus
rboles polinizados
Cruzamientos: Metodologa
Parental Maculino
Polinizacin
Ubicacin del polen
Embolsado de ramas
Frutos cuajados
En laboratorio
Acondicionamiento del fruto y extraccin de semilla
Germinacin in vitro
Alternativas
In vitro
A sustrato
Hbridos ambientados
Hbridos en campo