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TECNICAS DE MEDICION DEL CRECIMIENTO MICROBIANO Podemos enunciar el crecimiento microbiano como el aumento ordenado de los constituyentes de un microorganismo

que conduce al aumento en el nmero de individuos de la poblacin. Para lograr un crecimiento adecuado de la poblacin microbiana se requiere de un medio de cultivo apropiado que le proporcione todos los nutrientes necesarios para su metabolismo. Los mtodos para el seguimiento de la evolucin de un cultivo microbiano, es decir de determinacin del crecimiento microbiano pueden clasificarse en directos e indirectos.

METODOS DIRECTOS Medida de la evolucion del numero de celulas vivas o del numero de particulas.

METODOS INDIRECTOS Medida de algun parametro de cultivo que permita deducir informacion sobre la evolucion del numero de microorganismos.

La eleccin de un mtodo de seguimiento del cultivo en concreto depende de las caractersticas del cultivo y del proceso. Entre los mtodos principales de recuento de microrganismos podemos destacar: Medida de peso seco celular: Es el mtodo ms usado para medir el crecimiento microbiano. El sistema consiste en la filtracin del cultivo a travs de una membrana que retenga las clulas y su posterior desecacin hasta peso constante. El sistema, obviamente, no diferencia clulas vivas de muertas y su sensibilidad es limitada debido a la absorcin de humedad atmosfrica por las clulas secas y los tubos de centrifuga en el enfriamiento. Medida del peso hmedo: es un proceso de centrifugacin o filtracin de muestras de cultivo seguida por el pesado directo. Es un mtodo extremadamente rpido, pero se requiere estandarizar el procedimiento puesto que se mide agua intra y extracelular, especialmente cuando se miden pequeos cambios en la poblacin celular. Masa de un componente celular: este indicador representa una cantidad constante del peso seco total, y se puede estimar a partir del mismo, la concentracin de clulas o de biomasa. Se han usado componentes como el Nitrgeno, protenas, ARN, ADN y ATP celulares. Puede generar errores debido a la variacin de estos componentes durante el crecimiento de las clulas. Nmero de clulas: el crecimiento se puede determinar en trminos del nmero de clulas por litro. El nmero total de clulas se puede medir colocando muestras de cultivo

adecuadamente diluidas sobre portaobjetos de microscopios graduados como los de Helber. Aunque este mtodo es relativamente rpido y exacto, o distingue entre clulas viables y no viables, tambin es muy agotador si no se cuenta con los contadores automticos. Tcnicas de recuento en placa: Basadas en colocar en un medio de cultivo adecuado un volumen determinado de muestra. Cada una de las clulas aisladas dar lugar, despus de la incubacin correspondiente, a una colonia de forma que el nmero de estas nos permitir estimar el nmero de clulas presentes en la muestra plaqueada. Para que el sistema de recuento en placa tenga validez estadstica, es necesario contar entre 30 y 300 colonias con objeto de disminuir el error de la medida. Tcnicas turbidomtricas: Estn basadas en la medida de la turbidez de los medios de cultivo en los que crecen microorganismos unicelulares. La turbidez es proporcional a la masa de las partculas en suspensin (clulas) y su medida nos permite estimarla. Para ello se utiliza un equipo similar al que se emplea en la medida de la absorbancia de luz por disoluciones coloreadas. La limitacin de este sistema, por otra parte muy sencillo, es que no distingue clulas vivas de muerta y que normalmente no es capaz de detectar densidades celulares menores a 10.000 clulas por mililitro. Medida del ATP: Es una medida relativamente sencilla basada en la emisin de luz por la luciferasa de lucirnaga (Photimus pyralis) en presencia de O2 y de ATP. De esta forma se puede medir la concentracin de ATP en un volumen dado de cultivo. Esta medida es interesante porque la concentracin de ATP decae rpidamente en las clulas muertas, de forma que esa medida indirecta detecta nicamente las clulas vivas. Los sistemas de medida del crecimiento celular se han adaptado tcnicamente para poder ser utilizados como sistemas online. En una operacin on line no es necesario extraer la muestra del cultivo para realizar la medida. Esto es muy importante en el caso de fermentaciones en gran volumen porque permite realizar medidas en tiempo real y disminuye los riesgos de contaminacin. Mediciones fisicas: El crecimiento de las clulas microbianas siempre va acompaado de generacin de calor. Se ha demostrado que hay una relacin directa entre la cantidad de calor producido y la concentracin de biomasa La rapidez de la captacin de oxigeno es utilizado en los cultivos aerbicos, pues est relacionado con la concentracin de biomasa

TECNOLOGIA DEL ADN RECOMBINANTE