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ESTUDIO DE BIOLIXIVIACIN DE UN MINERAL DE SULFUROS DE COBRE DE BAJA LEY CON BACTERIAS Tio- Y Ferro-oxidantes EN CONDICIONES TERMFILAS.
R. E. Rivera1, P. Y. Camejo1, F. J. Moya1, J. L. Lpez-Mndez2, M. Mungua-Bravo2
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Facultad de Qumica, Universidad Nacional Autnoma de Mxico, Distrito Federal, Mxico 2 Unidad Minera La Caridad, Mxico relva@servidor.unam.mx camejo.pamela@gmail.com moya.francisco@gmail.com

RESUMEN La solubilizacin de los constituyentes de un mineral por accin bacteriana es conocida como biolixiviacin. Este tipo de extraccin es utilizado comercialmente en la lixiviacin de minerales de sulfuros de cobre secundarios, adems de ser responsable de la generacin de drenaje cido de mina. El objetivo de esta investigacin fue encontrar cepas bacterianas termfilas capaces de oxidar especies reducidas de hierro y azufre para su aplicacin en la lixiviacin de minerales de sulfuros de cobre de baja ley. Para ello, se obtuvieron cultivos a partir de cepas termfilas tio- y ferro-oxidantes nativas de la mina La Caridad (Mxico), midindose peridicamente pH, ORP, conductividad, concentracin de ion ferroso y crecimiento bacteriano. Posteriormente, se adaptaron al mineral lixiviable de La Caridad, bajo esta condicin. Finalmente se seleccionaron las cepas y condiciones en que stas se adaptaron mejor al mineral para realizar pruebas de biolixiviacin en columnas construidas bajo la norma ASTM-D5744. Palabras claves: Biolixiviacin, sulfuros metlicos, microorganismos ferrooxidantes, microorganismos tiooxidantes. ABSTRACT The solubilization of ores constituents under bacterial action is known as bioleaching. This type of extraction is commercially used in the leaching of secondarys copper sulfide minerals, besides being responsible for the generation of acid mine drainage. The objective of this research was to find strains of thermophilic bacterial species capable of oxidizing reduced iron and sulfur for use in the leaching of lowgrades copper sulfide ores. To this end, cultures were obtained from thio-and ferro-oxidizing thermophilic strains native of La Caridad mine (Mexico), periodically measuring pH, ORP, conductivity, concentration of ferrous iron and bacterial growth. Later, they adapted the leachable mineral of La Caridad under this condition. Finally, the strains and conditions under which they were better adapted were tested to mineral bioleaching on columns constructed under the ASTM-D5744. Keywords: Bioleaching, metal sulfides, ferro-oxidizing microorganisms, thio-oxidizing microorganisms.

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R. E. Rivera, P. Y. Camejo, F. J. Moya, J. L. Lpez-Mndez, M. Mungua-Bravo; 26 (2011) 65-73 1. INTRODUCCIN La solubilizacin de metales a partir de minerales bajo la accin directa o indirecta de microorganismos para la recuperacin posterior de los metales en solucin, se conoce como biolixiviacin. Este mtodo es una alternativa econmica para la recuperacin de metales a partir de minerales, especialmente minerales de baja ley y residuos de las actuales operaciones de minera, que requiere un moderado capital de inversin y costos de operacin. La lixiviacin en pilas, depsitos, etc., con microorganismos ofrece una serie de ventajas que abarcan equipos simples, inversin y costos de operacin menores, y rendimientos razonables. La aplicacin de la tcnica es importante en el caso de minerales de sulfuros complejos y en el caso de minerales de metales preciosos refractarios a la cianuracin. Como todo proceso hidrometalrgico, se caracteriza por la ausencia de emisiones de SO2, y al ser un proceso natural desarrollado por microorganismos, es amigable con el medio ambiente. La importancia del proceso reside en la oxidacin microbiolgica de las especies reducidas de fierro y de azufre presentes en los minerales. Las primeras investigaciones en el campo de la biohidrometalurgia se basaron en el aislamiento e identificacin de cultivos puros y su posterior caracterizacin fisiolgica, de Acidithiobacillus ferrooxidans como la principal bacteria mesfila implicada en los procesos de biolixiviacin. Estudios posteriores han demostrado que si bien At. ferrooxidans no es el nico organismo implicado en procesos de este tipo, es uno de los ms importantes y significativos. Adems de los microorganismos ferrooxidantes y tiooxidantes mesfilos, existen microorganismos trmofilos con importantes ventajas en las aplicaciones biohidrometalrgicas [1,2], por lo que cada da cobra ms fuerza la idea de la utilizacin de microorganismos termfilos, ya que el aumento de la temperatura conlleva una aceleracin de la cintica qumica del proceso. El uso de estas bacterias no est restringido a condiciones de laboratorio o a reactores controlados, diversos autores comprobaron la existencia en el interior de los montones de lixiviacin de temperaturas con valores que oscilan entre los 50 y los 80 C con reconocida capacidad lixiviante [3-6]. La disolucin de los elementos metlicos contenidos en los minerales puede deberse a procesos qumicos o biolgicos. El papel de los microorganismos es catalizar la reaccin de disolucin del sulfuro metlico la cual se puede esquematizar con la siguiente reaccin:

R-1 La biolixiviacin ocurre mediante dos mecanismos: el directo y el indirecto. En el primer caso la disolucin del mineral es consecuencia de reacciones qumicas catalizadas enzimticamente mediante el contacto fsico de los microorganismos con el mineral, en el segundo caso es consecuencia de reacciones qumicas, enzimticas o no enzimticas, no habiendo contacto fsico entre los microorganismos y el mineral, los microorganismos juegan un papel central en la formacin de reactivos qumicos que pueden tomar parte en el proceso. En el caso de la pirita, la transformacin directa del sulfuro en sulfato ocurre a travs de una oxidacin enzimtica segn la reaccin global:

R-2

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R. E. Rivera, P. Y. Camejo, F. J. Moya, J. L. Lpez-Mndez, M. Mungua-Bravo; 26 (2011) 65-73 El sulfato ferroso formado es oxidado, en una etapa posterior por las bacterias, a sulfato frrico segn la siguiente reaccin:

R-3

La transformacin indirecta en el caso de la pirita, es consecuencia del ataque qumico de los iones frricos que proceden de la accin

bacteriana sobre el mineral sulfurado disolvindolo. La reaccin global correspondiente es la siguiente:

R-4 Paralelamente, la accin bacteriana cataliza la oxidacin del ion ferroso y del azufre elemental, formado como intermediario, segn las dos reacciones siguientes:

R-5

R-6

2. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL 2.1. Materiales

PLS (RGpe) y una muestra de solucin de colas (P11). 2.2. Obtencin de microorganismos

Las muestras utilizadas en el estudio fueron proporcionadas por la compaa minera Mexicana de Cobre. El mineral a lixiviar, mineral de sulfuros de cobre de baja ley, fue obtenido por excavacin a 3 metros de profundidad del terrero de lixiviacin 1380F de la Unidad Minera La Caridad, Mxico. A partir de ste se prepararon 2 muestras representativas, una con tamao de partcula menor a 100 micras y otra entre 5/6 y pulgada, para los estudios de biolixivacin en incubadora y de biolixiviacin en columna, respectivamente. La composicin del mineral utilizado fue de 0,405 % Cu y 3,669 % Fe. Para la obtencin de microorganismos biolixiviantes se utilizaron tres muestras ambientales, una muestra mineral de terrero de lixivacin (1515G) obtenida por excavacin a 1,5 m, una muestra de solucin

Los microorganismos ferrooxidantes y tiooxidantes nativos de La Caridad fueron obtenidos a partir de muestras ambientales, mediante eutrofizacin de stas en medio nutriente Kelly modificado (MKM) enriquecido con Fe(II) y con S, a 50C y a 70C, y a 150 rpm en incubadora orbital. Los cultivos se prepararon de acuerdo a la metodologa desarrollada en el grupo de investigacin dirigido por la Dra. Rivera-Santilln [7], en medio lquido MKM, al 0.1% p/v en el caso de la muestra slida T1515G y al 10% v/v en el caso de las muestras lquidas, RGpe y P11. Cada 24 h se monitorearon pH, potencial oxido-reduccin y bacterias/mL. Es importante hacer notar que en este trabajo se desarrollaron cultivos de microorganismos tiooxidantes y ferooxidantes por separado y que en el caso de cultivos enriquecidos con S en este trabajo se implement el 67

R. E. Rivera, P. Y. Camejo, F. J. Moya, J. L. Lpez-Mndez, M. Mungua-Bravo; 26 (2011) 65-73 monitoreo de la conductividad especfica como indicativo de la reaccin R-6 [8]. En el caso de los cultivos enriquecidos con Fe(II) se realiz determinacin de Fe(II) residual por titulacin con KMnO4-, indicativo del avance de la reaccin R-5. Las cepas que presentaron mejor adaptacin a las condiciones de cultivo y un mayor crecimiento bacteriano, se seleccionaron para el estudio de biolixiviacin en incubadora de la muestra mineral. Los cultivos seleccionados fueron: P11 con azufre y hierro como sustrato y las muestras de T1515G y RGpe crecidas con azufre, todas a 50C. 2.3. Estudios incubadora de biolixiviacin en Diariamente y durante un perodo de 30 das se recolect el licor de lixiviacin y se caracteriz, al igual que las soluciones de alimentacin. La experimentacin fue realizada con 6 de los cultivos bacterianos estudiados y con dos testigos (uno de ellos no-inoculado y el otro estril) alimentados con medio MKM. Las columnas inoculadas con microorganismos provenientes de la solucin de P11, se mantuvieron durante 90 das. 3. RESULTADOS Y DISCUSIN 3.1. Obtencin de microorganismos El primer pase de adaptacin de la muestra a 50 y a 70C dur 17 das y se finaliz una vez que las variables medidas pH, Fe(II) y K, no presentaron mayor variacin. El segundo pase de adaptacin termin despus de 17 das, y como criterio de trmino se consider la oxidacin completa del sulfato ferroso y el crecimiento logartmico de las bacterias. Durante este pase se observ que en el caso de las muestras cultivadas con sulfato ferroso como fuente de energa, la disminucin de pH y Fe(II) era ms rpida a 70 que a 50C, mientras que en las muestras cultivadas con azufre la disminucin de pH y K fue mayor a 50C. Entre las bacterias del gnero sulfobacillus, se ha observado que S. thermosulfidooxidans es la ms activa de las dos especies en cuanto a la oxidacin de Fe 2+ y de sulfuros minerales; mientras que S. acidophilus es ms eficiente en la oxidacin del azufre [11,12]. Existe una amplia probabilidad de que en los cultivos en los que utiliz S como sustrato se hayan desarrollado este tipo de bacterias termfilas moderadas. Debido a la menor tasa de crecimiento bacteriano en las muestras en las que se utiliz FeSO4 como sustrato y 50C, es posible que el consorcio bacteriano presente sea del tipo mesfilo adaptndose a esta temperatura y con un bajo metabolismo. Debido a estos resultados, se decidi que adems de realizar el tercer pase para cada cultivo a la misma temperatura en la que se cultivaron en el primer y segundo pase, realizar simultneamente otro pase donde se cultivara a 50C*, bacterias ferrooxidantes crecidas anteriormente a 70C, y cultivar a 70C*, bacterias tiooxidantes crecidas a

Los cultivos se prepararon de acuerdo a la metodologa desarrollada en el grupo de investigacin dirigido por la Dra. RiveraSantilln [7], inoculando con las cepas seleccionadas al 5% v/v una pulpa mineral preparada al 10% p/v en medio MKM basal. Peridicamente se monitorearon pH, potencial redox, conductividad y bacterias/mL. Una vez adaptados los microorganismos al mineral mediante realizacin de pases sucesivos, en el tercer pase se monitorearon tambin las concentraciones de cobre y hierro en la solucin. La tcnica utilizada para su determinacin fue espectrometra de absorcin atmica. Los resultados de estos cultivos se compararon con dos sistemas testigo, uno de ellos no-inoculado y el otro esterilizado. 2.4. Estudios columna de biolixiviacin en

Las columnas fueron construidas en policarbamato bajo la norma ASTM D5744 [9,10]. Cada columna se llen con 450 gramos de mineral de sulfuros de cobre de baja ley, T1380F, el cual fue lixiviado a 50C. El primer lixiviado, se obtuvo alimentando las columnas con un caudal de 0,5 mL/min de solucin de cido sulfrico (H2SO4) a una concentracin de 10 g/L durante tres das, posteriormente se alimentaron con solucin bacteriana a una concentracin del orden de 106 microorganismos/mL manteniendo el mismo caudal. Finalmente a partir del 13 da se empez a alimentar con medio MKM. 68

R. E. Rivera, P. Y. Camejo, F. J. Moya, J. L. Lpez-Mndez, M. Mungua-Bravo; 26 (2011) 65-73 50C, con la finalidad de determinar si la temperatura era el factor determinante en el crecimiento y oxidacin bacteriana [13]. La medicin peridica de los parmeros de biolixiviacin durante el tercer pase de adaptacin muestra los siguientes resultados. Con respecto al pH, figura1, se observ que para los cultivos ferrooxidantes mantenidos a 70C, la curva de pH no se diferenci del testigo, por lo que se infiere que para todos los medios expuestos a 70C solamente existi lixiviacin qumica y no bacteriana. Los cultivos tiooxidantes a 70C no mostraron cambios significativos respecto al testigo, infirindose que no hubo actividad bacteriana implicada en el cambio de pH, por otro lado en el caso de las bacterias crecidas a 50C en comparacin con el testigo, s existi disminucin importante de pH demostrndose que esta disminucin se asoci a la presencia de bacterias. La mayor tasa de crecimiento se present en las muestras en las que se utiliz S como sustrato [7], con un orden de poblacin de 106 bacterias/mL, mientras que en aquellas muestras en las que se utiliz Fe(II) como sustrato el mejor cultivo present una poblacin bacteriana del orden de 105 bacterias/mL, figura 2.

Figura 1. Variacin del pH en cultivos de bacterias ferrooxidantes (izq) y tiooxidantes (der) en p11.

Figura 2. Crecimiento de bacterias ferrooxidantes (izq) y tiooxidantes (der) en p11. 3.2. Biolixiviacin en incubadora Las cepas que presentaron una mejor adaptacin a las condiciones de cultivo y un mayor crecimiento bacteriano, se seleccionaron para realizar el estudio en de biolixiviacin en incubadora con el mineral a 100 micras. Los cultivos seleccionados fueron: P11 con azufre y hierro como sustrato y las muestras de T1515 y RGpe crecidas con azufre como sustrato, cultivndose a 50C. Los resultados se compararon con los testigos T1380F no inoculado, y con T1380FE estril. El cultivo P11(Fe) present la mayor velocidad de extraccin de cobre, seguido por RGpe(S) y Testigo no inoculado, y la velocidad ms baja de extraccin de hierro, figura 3.

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Figura 3. Extraccin de cobre (izq) y de hierro (der) en la biolixiviacin del mineral en incubadora. Este fenmeno puede ser explicado con la formacin de sulfatos frricos bsicos que ha sido reportado en bacterias ferrooxidantes [14]. En la figura 4 se observa que el pH de P11(Fe) se mantuvo mayor a 2 hasta aproximadamente el da 14, favorecindose as la formacin de jarositas; a partir de este da se observa una disminucin del pH debido a que en la reaccin de formacin de estos precipitados se liberan protones H+ que acidifican el medio.

Figura 4. Variacin del potencial redox (izq) y del pH (der) en la biolixiviacin del mineral en incubadora. 3.3. Biolixiviacin en columnas Las pruebas de lixiviacin en columnas se realizaron con las mismas soluciones bacterianas empleadas en las pruebas en incubadora, y los dos testigos, manteniendo la temperatura de las columnas y de la alimentacin a 50C. Dado que las soluciones de alimentacin contenan licor de lixiviacin, los parmetros de biolixiviacin tambin fueron medidos en stas, para ser considerados en los resultados. 70 De acuerdo a los parmetros medidos en el licor de lixiviacin de las columnas, no hubo variacin significativa en el pH, potencial y conductividad de las muestras con respecto a la alimentacin durante los primeros 15 das, debido a que la produccin inicial de cido por accin bacteriana no compensa el consumo ocasionado por la reaccin de las especies oxidadas, provocndose un ligero incremento del pH. El conteo celular al microscopio permiti cuantificar la poblacin bacteriana libre en el medio lquido. En la figura 5, las grficas

R. E. Rivera, P. Y. Camejo, F. J. Moya, J. L. Lpez-Mndez, M. Mungua-Bravo; 26 (2011) 65-73 muestran que durante la alimentacin con solucin bacteriana, desde el inicio hasta el da 13, hubo un incremento en el nmero de bacterias en suspensin. A partir de este punto aunque la poblacin bacteriana en general disminuye, se mantiene alrededor de 106 B/mL. Comparando el crecimiento entre las muestras, slo P11(Fe) y RGpe(S) presentaron un crecimiento bacteriano sostenido en el tiempo, mientras que en las otras muestras el crecimiento no se mantuvo.

Figura 5. Poblacin bacteriana libre en la biolixiviacin del mineral en columnas.

Figura 6. Extraccin de cobre (izq) y fierro (der) en la biolixiviacin del mineral 1380F en columnas. Los cultivos que mostraron un mayor porcentaje de cobre extrado en funcin del tiempo fueron P11(S) y RGpe(S), por el contrario, a diferencia de lo ocurrido en incubadora, en la columna testigo no inoculada donde se aliment slo con medio MKM, no se logr extraer mayor cantidad del metal de inters, por lo que se infiere que las bacterias nativas del mineral no lograron lixiviar en estas condiciones. Por otro lado, P11(Fe) mostr el mayor porcentaje de extraccin de hierro con respecto a las dems muestras, lo que se puede explicar considerando que la alimentacin de esta columna tena un contenido de iones frricos ms abundante que las otras y por lo tanto se favoreci el mecanismo indirecto de lixiviacin. En las columnas P11(S) y P11(Fe) que fueron mantenidas durante 60 das ms, el pH alcanz un valor alrededor de 1,5, el ORP se mantiene alrededor del 550-590 mV, la conductividad aumenta ligeramente hasta un valor alrededor de 10 mS y la poblacin bacteriana se mantiene alrededor de 106 B/mL, en ambos casos. Con microorganismos termfilos moderados tiooxidantes la extraccin alcanzada fue de 8,50% para Cu y 2,85% para Fe. Con los microorganismos ferrooxidantes fue de 7,40% para Cu y 15,34% para Fe, siendo la cintica de extraccin de Fe tambin mayor (figura 6). 71

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Figura 7. Extraccin de cobre y hierro en columnas con microorganismos de P11. 4. CONCLUSIONES Se observ mayor crecimiento bacteriano a 50C que a 70C, lo que se evidenci en la diferencia entre las variables medidas (pH, ORP, Fe (II), K y B/mL) entre la muestra testigo y los cultivos. A 50C, crecieron aproximadamente 10 veces ms las bacterias cultivadas con S como sustrato que las cultivadas con Fe2+. Las muestras P11(Fe) y RGpe(S) obtuvieron un alto rendimiento en la extraccin de cobre y favorables parmetros de biolixiviacin. En el caso de P11(Fe) existi una posible acumulacin de jarositas, lo que conllev a una disminucin en la concentracin de Fe en el cultivo. Las muestras mencionadas anteriormente tambin obtuvieron un alto rendimiento en la extraccin de hierro y cobre en columnas de lixiviacin durante 30 das. En el caso de P11(Fe), debido a que la alimentacin contena una alta concentracin de iones frricos, el mecanismo indirecto de lixiviacin se vio favorecido. Para las muestra P11(Fe) y RGpe(S) debe contemplarse la posibilidad de realizar estudios posteriores para identificacin del consorcio bacteriano presente y optimizacin del proceso de lixiviacin. La extraccin alcanzada en las columnas P11(Fe) y P11(S) aunque fue baja y requiere optimizarse, muestra la importancia de utilizar cepas mixtas, as como de la presencia de fierro en la solucin. AGRADECIMIENTOS Uno de los autores, R. E. Rivera-Santilln, agradece a DGAPA-UNAM el financiamiento aportado al proyecto PAPIIT-IN212109 Estudio de biolixiviacin de minerales de cobre de baja ley para la realizacin del presente trabajo. 5. REFERENCIAS [1] Brewis, T. Mining, Vol. Abril (1984), p. 35-41. [2] Brierley, C. Extracting metals with microorganisms. Biomining (2002). [3] Johnson, D., Hallberg, K. The microbiology of acidic mine waters. Res. Microbiol., 154, (2003). [4] Naranjo, G. Oxidacin Bacteriana de sulfato ferroso en Acidithiobacillus Ferrooxidans, Tesis Universidad de Chile. Facultad de Ciencias Fsicas y Matemticas, Departamento de Ingeniera Qumica. [5] Baker, C., Dopson, M. Life in acid: pH homeostasis in acidophiles. TRENDS in Microbiology, Vol. 15, (2007), N 4. [6] Acevedo, F., Gentina, J. C. Fundamentos y Perspectivas de las Tecnologas Biomineras. Archivos de Ingeniera Bioqumica Pontificia Universidad Catlica de Valparaso, (2005). [7] Lpez-Jurez, A., Gutirrez-Arenas, N., Rivera-Santilln, R. E. Electrochemical behavior of massive chalcopyrite bioleached electrodes in presence of silver at 35 C. Hydrometallurgy, Vol. 83 (2006), p. 63 68.

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