Universidad Nacional del Nordeste - Facultad de Medicina - Microbiologa e Inmunologa

BACILOS GRAMNEGATIVOS DE UBICACIN INCIERTA

Dentro de esta categora se incluyen diversos bacilos gramnegativos, pequeos, aerobios, que requieren para su desarrollo una atmsfera rica en CO2 (capnfilos) y medios enriquecidos. Estas bacterias pertenecen a los gneros Haemophilus, Brucella y Bordetella. Todas producen patologas de gran importancia en medicina humana, algunas de ellas fatales si no se realiza tratamiento adecuado. Gnero Haemophilus Su nombre significa afinidad por la sangre debido a que requiere de factores hemticos para su desarrollo. Las especies ms importantes son H. influenzae, H. ducreyi, H. parainfluenzae y H. aphrophilus Son bacilos y cocobacilos gramnegativos, se agrupan en empalizada y algunos poseen una cpsula polisacrida. Para su desarrollo requieren alguno o ambos factores hemticos para crecer (Factor V o NAD y Factor X o Hemina). Haemophilus influenzae El nombre de la especie proviene de la creencia inicial de que era el agente causal de la gripe (influenza), pero luego se demostr que puede aparecer produciendo una infeccin pulmonar agregada en pacientes con gripe. Determinantes antignicos y de patogenicidad La cpsula est constituida por un polisacrido, inmungeno y antifagocitario del cual existen diferentes serotipos; el polisacrido tipo b es el ms frecuente en las cepas patgenas y es el que se utiliza para fabricar vacunas. La endotoxina: presente en la pared celular es similar a la de todas las bacterias gramnegativas. Accin patgena Entre el 5 y el 10% de las personas sanas son portadoras de H. influenza en faringe y desde all puede producir los cuadros infecciosos. Entre las patologas que produce Haemophilus influenzae se encuentran: Meningitis: principalmente en menores de 5 aos. Neumonas: generalmente complicando cuadros virales. Epiglotitis: es un cuadro grave que provoca asfixia. Otitis y sinusitis: tanto agudas como crnicas. Las cepas capsuladas, principalmente del tipo b son las causantes de meningitis y neumona, mientras que las otras infecciones son producidas por cepas no capsuladas. Diagnstico de laboratorio Debido a que esta bacteria produce enfermedades muy graves, es imprescindible realizar un diagnstico etiolgico con aislamiento, identificacin y estudios de sensibilidad antibitica del germen. El siguiente es el esquema diagnstico para una infeccin por Haemophilus

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Muestras: LCR, secrecin tica, esputo, sangre, secrecin sinusal, etc. Coloracin de Gram Siembra en Agar sangre y Agar chocolate Incubar 48 hs a 37C y 5% CO2 Coloracin de Gram Requerimiento de factores Antibiograma La siembra en agar sangre es para permitir el desarrollo de otras bacterias que puedan producir la misma enfermedad mientras que el agar chocolate, por poseer factores hemticos debido a la sangre lisada por calor, permite el desarrollo de las especies de Haemophilus. Para estudiar los requerimientos de factores, se siembra la cepa en estudio sobre la superficie de una placa de agar Mueller-Hinton y se colocan 3 discos de papel impregnados con factores V, X y V+X. Se incuba 24 hs a 37C y se observa alrededor de cul disco desarroll la bacteria (ver figuras siguientes)

V XV

X XV

V XV

V XV

Factor X

Requerimiento de: Factor V Factores X+V

Ningn factor

En la tabla siguiente se muestran los requerimientos de factores de las principales especies de Haemophilus Especie H. influenzae H. ducreyi H. parainfluenzae Epidemiologa y prevencin La bacteria se transmite de persona a persona por va area a travs de las gotitas de Pflgge, ya sea desde personas enfermas o desde portadores nasofarngeos. Las infecciones generalmente no se manifiestan como brotes sino como casos aislados. Evitar el hacinamiento y realizar el aislamiento respiratorio del paciente enfermo son medidas profilcticas tiles para prevenir la diseminacin de la bacteria, pero la forma ms efectiva de prevenir las enfermedades invasivas por H. influenzae como meningitis y neumonas es la aplicacin de la vacuna con polisacrido capsular tipo b que es la cudruple bacteriana (D.P.T.Hib). El plan de vacunacin contra H. influenzae es el siguiente: 1era. dosis: 2 meses 2da. dosis: 4 meses 3ra. dosis: 6 meses 1er. refuerzo: 18 meses Requerimiento de Factor V + + Factor X + +

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Gnero Bordetella El nombre del gnero proviene del microbilogo francs Bordet. Las principales especies son B. pertussis, B. parapertussis y B. bronchiseptica Son cocobacilos gramnegativos, aerobios estrictos, parsitos intracelulares que requieren de medios enriquecidos para desarrollar. Bordetella pertussis El nombre de la especie significa productora de tos y se debe a que es el agente causal de la tos convulsa, tos ferina o coqueluche. Determinantes antignicos y factores de patogenicidad Antgeno O: es el lipopolisacrido somtico presente en todas las bacterias gramnegativas. Antgeno K: polisacrido capsular que evita la destruccin de la bacteria por los macrfagos. Citotoxina traqueal proteica: paraliza los cilios de las vas areas y produce muerte celular. Hemaglutinina: permite la adherencia a las clulas epiteliales respiratorias. Endotoxina: presente en la pared celular. Factor histamn-sensibilizante: produce hipoglucemia y aumenta los efectos de la histamina y serotonina con reacciones del tipo alrgico en vas areas. Factor de proliferacin de linfocitos Patologa El hombre es el nico husped de B. pertussis, B. parapertussis puede infectar ovejas y B. bronchiseptica infecta a animales y raramente produce infeccin en el hombre La enfermedad denominada tos convulsa, tos ferina o coqueluche se presenta en tres perodos y es ms frecuente en la primera infancia: Perodo catarral: contagioso Perodo de estado: contagioso Perodo de convalecencia: no contagioso Diagnstico de laboratorio Aunque el diagnstico de la tos convulsa es principalmente clnico, existen casos atpicos, principalmente en pacientes inmunocomprometidos o en aquellos que han recibido alguna dosis vacunal, los cuales requieren del diagnstico de laboratorio. Esta bacteria es de crecimiento lento y muy exigente en cuanto a sus requerimientos nutricionales por lo que es infrecuente que se solicite el cultivo de una muestra para diagnosticar esta enfermedad. El siguiente esquema muestra los pasos del diagnstico bacteriolgico Muestras: Hisopado nasofarngeo o placa de tos Coloracin de Gram Siembra en Agar Bordet-Gengou Incubar 4 das a 37C Coloracin de Gram Pruebas bioqumicas y serologa directa

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El agar Bordet-Gengou es un medio que contiene agar, papa y glicerina con el agregado de sangre desfibrinada y antibiticos lo cual lo hace un medio enriquecido y selectivo. La confirmacin del gnero puede realizarse mediante aglutinacin de las bacterias que desarrollaron enfrentndolas con sueros especficos (identificacin serolgica) El diagnstico serolgico puede realizarse detectando anticuerpos IgG e IgA antitoxina pertussis y anti hemaglutinina mediante la tcnica de ELISA Los anticuerpos vacunales no interfieren en el diagnstico debido a que son del tipo IgG e IgM pero dirigidos contra antgenos fimbriales y protenas de membrana externa. Epidemiologa y profilaxis La bacteria se transmite de persona a persona por va area y la incidencia de la enfermedad disminuy significativamente con la vacunacin. Para la prevencin se utilizan: o Clulas bacterianas completas o vacuna celular (P) formando parte de la vacuna quntuple (D.P.T.Hib.HB) y de las vacunas triple bacteriana (DPT) y cudruple bacteriana (D.P.T.Hib) o Fracciones antignicas denominada vacuna acelular (Pa) formando parte de la vacuna triple bacteriana acelular (DTPa) El plan de vacunacin es el siguiente: 1 dosis D.P.T.Hib.HB: 2 meses 2 dosis D.P.T.Hib.HB: 4 meses 3 dosis D.P.T.Hib.HB: 6 meses 1. Refuerzo D.P.T.Hib: 18 meses 2 Refuerzo DPT: 6 aos (ingreso escolar) 3 Refuerzo DTPa: 11 aos No debe aplicarse la vacuna anticoqueluche celular en mayores de 6 aos debido a la posible aparicin de efectos adversos. Gnero Brucella El nombre del gnero se refiere al microbilogo Bruce. Se conocen varias especies cuyos nombres derivan del animal que se comporta como reservorio principal B. melitensis (cabras), B. canis (perros), B. suis (cerdos), B. ovis (ovejas) y de la patologa que produce en el ganado vacuno en el caso de B. abortus. Son cocobacilos gramnegativos, aerobios estrictos y parsitos intracelulares. Su reservorio en la naturaleza son principalmente los animales domsticos de diferentes especies. Determinantes antignicos y factores de patogenicidad Antgeno O: es el lipopolisacrido somtico especfico de gnero Endotoxina: est presente en la pared celular Multiplicacin en macrfago: permite la diseminacin linfohemtica y permanencia en el sistema retculoendotelial. Patologa Brucella es el agente etiolgico de la brucelosis animal (entre los cuales se considera una enfermedad de transmisin sexual) y de la brucelosis humana (zoonosis).

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Los signos ms tpicos son la fiebre ondulante y los dolores articulares. Puede manifestarse en forma aguda y cronificarse y despierta una gran respuesta de anticuerpos especficos. Epidemiologa y profilaxis La brucelosis es una tpica zoonosis donde el hombre es slo un husped accidental. Los reservorios son principalmente el ganado caprino, ovino, porcino y vacuno en los cuales se transmite por va sexual y produce abortos. En nuestro pas existen dos grandes reas endmicas de brucelosis, la zona litoral (Chaco, Corrientes, Santa F y Buenos Aires) donde predomina B. abortus y la zona Centro-Oeste (Crdoba, Mendoza, San Luis) donde predomina B. melitensis. En el hombre la bacteria ingresa por va respiratoria, oral a travs de los alimentos (principalmente lcteos), o cutnea por inoculacin accidental y no se transmite directamente de hombre a hombre Las medidas profilcticas consisten en la vacunacin de los animales, evitar el contacto con restos de placenta o mortinatos animales, aplicacin de medidas de bioseguridad entre operarios del campo, mataderos y personal veterinario y control estricto de los alimentos de origen animal, principalmente mediante pasteurizacin de la leche. Diagnstico de laboratorio La gran variabilidad en las manifestaciones clnicas de la brucelosis, hace indispensable un diagnstico mediante el aislamiento de la bacteria y pruebas serolgicas. El siguiente procedimiento resume los pasos diagnsticos. Muestras: Sangre, LCR, Mdula sea, Abscesos Coloracin de Gram

Siembra en Medio Bifsico de Castaeda Incubar 7 a 30 das a 37C y 5% CO2 Coloracin de Gram Pruebas bioqumicas El hemocultivo es la tcnica ms recomendada en la etapa aguda mientras que las otras muestras son ms tiles en las etapas crnicas de la enfermedad. El Medio de Castaeda es un medio bifsico (contiene agar y caldo) que permite una mejor visualizacin de las colonias. Para detectar anticuerpos anti-Brucella las pruebas ms utilizadas son la reaccin de Huddleson y de Rosa de Bengala (Aglutinacin directa en placa) o la reaccin de Wright (aglutinacin directa en tubos). Una prueba positiva no discrimina la especie responsable. Se consideran positivos ttulos > 1:80 (en zona no endmica) y ttulos > 1:160 (en zona endmica), o un aumento de 4 ttulos en el lapso de 10 das. En las brucelosis crnicas las pruebas serolgicas pueden dar resultados negativos debido a la presencia de anticuerpos incompletos no aglutinantes por lo que debe realizarse la reaccin de Coombs anti-Brucella que consiste en adicionar inmunoglobulinas anti-IgG humana a la prueba de aglutinacin en tubo, las que actan formando puentes entre los anticuerpos presentes y permiten que se forme la red de aglutinacin.