Prctica 4. EXTRACCIN DE CAFENA DE HOJAS DE T NEGRO OBJETIVOS: 1.- Aislar cafena de hojas de t negro. 2.

- Caracterizar el producto obtenido por su p.f., pruebas de color y formacin de un derivado. INTRODUCCIN:

La cafena es uno de los ms importantes metil derivados naturales de la xantina (1, 3, 7- trimetilxantina). La concentracin de este alcaloide, que se encuentra en el caf, t, nuez de cola, mate, etc., vara dependiendo de las condiciones climticas y topogrficas en las que se desarrollan los cultivos de donde se extrae. Se ha encontrado un intervalo de variacin entre 2.0 a 4.6% de cafena en dichos vegetales. La cafena presenta varias acciones farmacolgicas de inters teraputico. Es fisiolgicamente activa produciendo un efecto estimulante sobre el sistema nervioso central (SNC). La popularidad de las bebidas que contienen cafena es parcialmente debida a este efecto; sin embargo, su consumo en exceso puede causar efectos irritantes tales como nerviosismo e insomnio. Adems de su efecto sobre SNC la cafena acta sobre el rin para producir diuresis; estimula el msculo cardiaco y relaja el msculo liso, especialmente el bronquial. REACTIVOS Y DISOLVENTES: Hojas de T Negro Camellia sinensis L. o en su defecto bolsitas de t negro (alumno), Diclorometano, Acetato de plomo al 10%, Agua destilada, Hidrxido de amonio Acetona, Yoduro de potasio, Yodo, Metanol, Acetato de etilo, Agua oxigenada, carbonato de calcio, Papel filtro, cido clorhdrico, Tela de algodn. Materiales y equipo 1 Matraz Erlenmeyer de 125 mL 1 Anillo metlico

2 Vasos de precipitados de 400 mL 1 Embudo de vidrio tallo corto 1 Probeta graduada de 100 mL 1 Vaso de precipitado de 50 mL 1 Embudo de separacin de 500 mL 1Matraz Erlenmeyer de 50 mL 1 Matraz Kitazato de 500 mL 1 Vidrio de reloj 1 Embudo Bchner 1 Agitador de vidrio 1 Recipiente p/bao Mara 1 Pipeta 1 Soporte metlico 1 Parrilla de calentamiento 1 Esptula 1 Cpsula de porcelana Balanza analtica PROCEDIMIENTO: Poner a hervir 100 mL de agua destilada en vaso de precipitados de 400 mL. Sumergir en el vaso 10-11 g de hojas de t (cinco bolsitas de t negro) y hervir por 15 min. Enfriar, remover las bolsas de t, exprimindolas con unas pinzas. Aadir 5.0 g de carbonato de calcio y calentar por 5 min. Filtrar la mezcla a un vaso limpio a travs de la tela de algodn y exprimir la tela. Filtrar ahora con vaco en un embudo Bchner para eliminar por completo el residuo de t. Enfriar el filtrado a temperatura ambiente y pasarlo al embudo de separacin; aadir 30 mL de diclorometano y agitar el embudo suavemente, dejar separar las fases, quitar el tapn del embudo y drenar la fase orgnica inferior de la fase acuosa superior. Repetir la extraccin de la fase acuosa con dos porciones ms de diclorometano (30 mL c/u). Evaporar el disolvente en el bao Mara. Purificar la cafena cruda con acetona. Dejar secar los cristales. Pesar el producto, determinar su p.f. y efectuar las siguientes pruebas: a).- Poner unos cuantos cristales de cafena en una cpsula de porcelana y aadir 3 gotas de H202 + 3 gotas de HC1. Evaporar a sequedad con calor y aadir 2 gotas de hidrxido de amonio; observar la formacin de un color prpura. (Prueba de la Murexida).

b).- Como prueba adicional obtener el espectro UV de la cafena, observndose max a 278 nm. c).- Alternativamente realizar la cromatografa en capa fina utilizando como mezcla eluyente acetato de etilo: metanol: agua (100:13.5:10). Revelar con el revelador de yodo/yoduro de potasio en medio cido (Ver apndice 2 para su preparacin). RESIDUOS Y SU MANEJO: Bolsitas con te negro Se colocan en bolsa de papel de estraza y se depositan en el cesto de la basura. Diclorometano Se deposita en el recipiente de residuos halogenados. Mezcla de etanol: ter etlico y ter de petrleo Se vierten en el recipiente de residuos orgnicos. Residuos de la prueba de Murexida (cido clorhdrico, hidrxido de amonio). Dado que se trata de pequeas cantidades del orden de unos cuantos mililitros, se diluye con agua y se vierte en el recipiente de los residuos acuosos. REFERENCIAS: Harborne, J. B. 1991. Phytochemical Methods. 3a ed. Chapman & Hall. Londres. 288 p. Ikan, R. 1991. Natural Products. A Laboratory guide. Academic Press New York. 293 P. Pavia, D.D., Lampman, G.M. y Kriz, G.S. Jr. 1976. Introduction to Organic Laboratory Techniques. W.B. Saunders Co. Filadelfia. 699 p. Soto, H. M. R. 2007. Fitoqumica, Manual de prcticas. Colegio de Postgraduados Campus Montecillos. 102 p. RESULTADOS: 1.- Indicar el rendimiento de cafena obtenido (escribir los clculos correspondientes) 2.- Indicar los valores del punto de fusin, Rf experimental y espectro de la cafena obtenida y compararlo con datos bibliogrficos, hacer la discusin correspondiente y escribir conclusiones.

3.- Escriba las estructura qumica de la cafena representndolas con el acd/labs y las reacciones qumicas con su mecanismo de reaccin, que se efectan en la la prueba de Murexida. CUESTIONARIO 1.- Mencione fuentes naturales para el aislamiento de cafena, incluyendo la referencia bibliogrfica 2.- Explique el fundamento del proceso de extraccin de cafena 3.- En que se basa el proceso de recristalizacin por par de disolventes 4.- Menciona los principales usos que se le dan a la cafena y sus efectos fisiolgicos. 3.- Escriba cual es la ruta metablica de biosntesis de la cafena.