LABORATORIO DE BIOQUMICA 502507 Gua No 3- CUANTIFICACION DE PROTEINAS

I. EL PROBLEMA. Conocer la concentracin de protena de una muestra de origen animal. II. FUNDAMENTO TEORICO Como se ha discutido, las protenas constituyen un grupo de biomolculas muy importante, puesto que son las responsables de muchas funciones biolgicas. Conocer los contenidos de protenas presentes en los tejidos, ha sido objeto de varios estudios y en consecuencia se han desarrollado muchas tcnicas de anlisis. Dentro de las tcnicas de valoracin por espectrofotometra visible est la del Biuret, en la que se forma un complejo coloreado entre el reactivo y los enlaces peptdicos. Es importante anotar que el reactivo tambin forma este complejo con sustancias que contengan grupos amido simples, amino y tioamido, por lo tanto, al efectuar el anlisis, se debe tener la certeza que la muestra est constituida por una protena o extracto proteico. En esta prctica, se valora el contenido de protena en muestras de origen animal. III. CUESTIONARIO PARA EL PREINFORME Elabore el preinforme, segn lo pre-establecido y que contenga los resultados de las siguientes consultas mximo en dos pginas: - Promedio de concentracin de protena en las muestras a analizar, consultada en tablas de composicin nutricional de alimentos. - Ley de Lambert-Beer que relaciona la absorbancia con la concentracin. - Los componentes y la reaccin que ocurre en la determinacin de protena por el mtodo de Biuret, aclarando para qu concentraciones de protena se recomienda y hasta que concentracin de protena conserva su linealidad. -Qu es la albmina srica bovina (BSA) y cul es su funcin biolgica?

IV. MATERIALES Y REACTIVOS Materiales por grupo: Diez tubos de ensayo Gradilla para tubos de ensayo Dos pipetas de 1ml Una pipeta de 5ml Una pipeta de 2ml Pipeteador 8 Goteros plsticos Materiales y reactivos generales: (calcular volmenes para ocho grupos de laboratorio) Espectrofotmetro Uv-Vis

- Celdas - Solucin patrn de albmina srica en NaCl al 0,9% ( 5mg/ml). Muestra: Dilucin de clara de huevo de gallina comn en NaCl al 0,9% - Reactivo de Biuret - Solucin de NaCl al 0,9% -Agua destilada V. PROCEDIMIENTO Mtodo de Biuret Usted recibir del monitor una muestra de clara de huevo el da de la prctica de laboratorio, la cul utilizar como su nica muestra para determinar la concentracin de protena y elaborar el informe correspondiente. Para la determinacin de protena por el mtodo de Biuret complete la tabla 1 de acuerdo con las indicaciones, de esta forma usted realizar una curva de calibracin con una solucin de albmina srica bovina como patrn (tubos 1 al 6) y con esta se determinar la concentracin de protena en la clara de huevo correspondiente (tubo 7). Muestra/tubo Patrn(ml) Muestra(ml) Agua(ml) Biuret(ml) B 0 0 2 4 1 0,2 0 1,8 4 2 0,4 0 1,6 4 3 0,6 0 1,4 4 Tabla 1 4 0,8 0 1,2 4 5 1 0 1 4 6 2 0 0 4 7 0 0,1 1,9 4

Mezcle bien y deje en reposo por 30 min a temperatura ambiente para el desarrollo del color; luego lea la absorbancia a 540nm usando el tubo B (blanco) para ajustar el 100% de transmitancia o el 0,0 de absorbancia. VI. PAUTAS PARA LA ELABORACIN DEL INFORME . Datos, observaciones y fotos debidamente tabulados. .Trazar en papel milimetrado o en una hoja de clculo la grfica de calibracin (absorbancia vs concentracin en mg/ml) planteada en el mtodo de Biuret. . De acuerdo con la grfica elaborada y teniendo en cuenta los factores de dilucin, calcular el contenido de protenas en su muestra de clara de huevo, expresada en % p/v.

. Comparar los resultados con los encontrados en la literatura y analizarlos. .Para su muestra consulte el contenido de aminocidos esenciales para el hombre y discuta su valor nutricional. VII. BIBLIOGRAFA. - Official methods of analysis of AOAC International editado por Patricia Conniff. Publicado por AOAC International, 16th edicin, volumen 1 y 2, U.S.A, 1998.