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Eduardo Brambila, Rosalba Castillo-Guerra, Patricia Lozano-Zarain Comparacin entre tres mtodos manuales empleados en la cuenta diferencial de leucocitos respecto a un equipo automatizado Bioquimia, vol. 28, nm. 3, julio-septiembre, 2003, pp. 4-12, Asociacin Mexicana de Bioqumica Clnica, A.C. Mxico
Disponible en: http://www.redalyc.org/articulo.oa?id=57611572002

Bioquimia, ISSN (Versin impresa): 0185-5751 publicacionesbioquimia@prodigy.net.mx Asociacin Mexicana de Bioqumica Clnica, A.C. Mxico

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ARTICULOS ORIGINALES

HEMATOLOGA

Comparacin entre tres mtodos manuales empleados en la cuenta diferencial de leucocitos respecto a un equipo automatizado
Eduardo Brambila*1, Rosalba Castillo-Guerra1 y Patricia Lozano-Zarain2
1

Laboratorio de Investigaciones Qumico Clnicas, Facultad de Ciencias Qumicas, Benemrita Universidad Autnoma de Puebla, Puebla, Pue. Mxico. 2 Centro de Investigaciones en Ciencias Microbiolgicas, ICUAP, Benemrita Universidad Autnoma de Puebla, Puebla, Pue. Mxico *Sobretiros: Laboratorio de Investigaciones Qumico Clnicas, Facultad de Ciencias Qumicas, BUAP. Av. 18 Sur y Av. San Claudio, Edif. 179 Cd. Universitaria, San Manuel. C.P. 72570. Puebla, Pue. Mxico. e-mail: ebrambil@siu.buap.mx Recibido: 18/03/03 Aceptado: 18/08/03

Resumen
Introduccin Introduccin. No obstante que el recuento diferencial, basado en extensiones sanguneas contina siendo un mtodo frecuente en los laboratorios, los resultados son imprecisos e inexactos, especialmente para clulas de gran tamao y bajo nmero. Objetivo Objetivo. Comparar los resultados del recuento diferencial de tres mtodos manuales con los resultados de un autoanalizador de clulas hemticas. Material y mtodos mtodos. A partir de 200 especimenes se prepararon extensiones por los mtodos transversal, longitudinal y de la plumilla. Las extensiones se tieron y se realiz el diferencial. Simultneamente se evalu el nmero leucocitos y el recuento diferencial con un autoanalizador. El anlisis estadstico incluy la estimacin de los coeficientes de variacin (CV) intra- e inter-individuales, y la comparacin de mtodos con la prueba pareada t, anlisis de correlacin y regresin de Deming. Resultados y Discusin Discusin. Los CV oscilaron entre 5.7 y 77.5%, las diferencias dependieron del tipo celular y la tcnica de preparacin de las extensiones. Los mtodos transversal y de la plumilla no mostraron diferencias significativas para los polimorfonucleares y neutrfilos, sin embargo, el recuento de neutrfilos por el mtodo longitudinal mostr diferencias significativas. Independientemente de los mtodos, el recuento de linfocitos y monocitos mostr diferencias significativas en comparacin con el equipo automatizado. Conclusiones Conclusiones. Estos resultados ponen en evidencia la existencia de errores intrnsecos en los mtodos manuales para el recuento de linfocitos y monocitos. Palabras Clave Clave. Cuenta diferencial de leucocitos, extensiones sanguneas, comparacin de mtodos, regresin de Deming, variabilidad intra- e inter-individual.

Abstract
Introduction Introduction. Leukocyte differential counts, based in blood films is a routinely method in clinical laboratories, however, results are imprecise and biased, particularly for big cells and cells circulating in small number. Objective Objective. Comparison between results obtained from three manual methods, based in blood films review, and the results obtained from a cell auto-analyzer. Material and methods methods. Two hundred specimens were used to prepare blood films using transversal, longitudinal and pen smears on slides methods. At the same time, leukocyte total number and differential counts from specimens were determined with an auto-analyzer. Statistical analysis included intra- and inter-individual variability, and method comparison was evaluated with paired t test, correlation and Deming regression analysis. Results and Discussion Discussion. Intra- and inter-individual variability, as determined by the coefficient of variation, ranged between 5.7 and 77.5%, differences were dependent of cellular type and blood film preparation. Transversal and pen methods did not shown significant differences in polymorphonuclear and neutrophil leukocyte counts, however neutrophil number determined by longitudinal film method showed a significant difference, as compared with the automated method. Conclusion Conclusion. Independently of blood film preparation methods used, lymphocytes and monocytes number shown significant differences when were compared with an automated equipment. Key words words. Leukocyte differential count, blood films, method comparison, Deming regression, intra- and inter-individual variability.

Introduccin
Los recuentos diferenciales tienen como finalidad obtener informacin de la distribucin relativa de los diferentes 4

leucocitos en sangre perifrica. El porcentaje obtenido, o ms adecuadamente, el nmero absoluto de cada clula es de gran utilidad para el diagnstico de mltiples enfermedades, orienta en la eleccin del tratamiento a seguir en los pacientes
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y pone de manifiesto la existencia de efectos secundarios en pacientes que reciben quimioterapia o radioterapia. 1 Los laboratorios clnicos utilizan diferentes procedimientos para efectuar el recuento diferencial de los leucocitos, los ms empleados se basan en la preparacin de extensiones sanguneas sobre cubreobjetos o portaobjetos. Actualmente se dispone de tcnicas semi-automatizadas para la preparacin de extensiones sanguneas con algunas ventajas sobre los mtodos tradicionales. 1,2 Sin embargo, los resultados obtenidos a partir de extensiones sanguneas generalmente son imprecisos e inexactos, debido a la tendencia de algunas clulas, especialmente las de gran tamao, a distribuirse hacia los extremos y al final de las extensiones sanguneas, al bajo nmero de clulas contadas, errores significativos de muestreo, etc. 2-4 Como una alternativa para disminuir el error intrnseco de los mtodos manuales, se ha hecho extensivo el uso de analizadores hematolgicos, los cuales se basan en el conteo y la diferenciacin de un gran nmero de leucocitos. 5 No obstante que estos analizadores producen resultados bastante precisos para todos los parmetros hematolgicos, en muchas ocasiones, los resultados de la cuenta diferencial deben ser corroborados mediante una inspeccin visual de las clulas, especialmente en los casos donde se sospecha la existencia de una patologa. Aunado a lo anterior, y tomando en consideracin que an un gran nmero de laboratorios emplean tcnicas manuales para el recuento diferencial de leucocitos, este trabajo se llev a cabo con la finalidad de comparar los resultados de tres mtodos manuales empleados en los laboratorios de anlisis clnicos con los resultados obtenidos al emplear un analizador de clulas hemticas.

5 min en alcohol etlico de 96 y posteriormente se dejaron secar al aire. Los portaobjetos se flamearon por ambas caras con un mechero y finalmente se almacenaron cuidando de no tocarlos con los dedos. Las extensiones sanguneas se realizaron mediante los siguientes mtodos:

Mtodo longitudinal. Con una pipeta pasteur se coloc una gota de sangre a una distancia de uno a dos cm del borde de un portaobjetos, con el borde liso de un segundo portaobjetos y formando un ngulo de aproximadamente 30, se extendi la gota de sangre teniendo cuidado de que el deslizamiento fuera constante y uniforme. 2 Mtodo transversal. Con una pipeta pasteur se coloc una gota de sangre en la parte media de un portaobjetos, sobre la gota se dej caer un segundo portaobjetos, de tal manera que la sangre se extendiera en forma rpida y uniforme. En el momento en que la sangre dej de extenderse, se desliz paralelamente el portaobjetos superior con un movimiento constante. 1 Mtodo con plumillas. La punta de una plumilla (de las comnmente empleadas para dibujo con tinta china) se sumergi en la muestra de sangre previamente mezclada, posteriormente la plumilla se presion ligeramente contra la pared del tubo de la muestra para eliminar el exceso de sangre. La punta de la plumilla se coloc sobre un portaobjetos limpio, y formando un ngulo de aproximadamente 30, se desliz longitudinalmente aplicando una ligera presin. Este procedimiento se repiti dos veces ms en diferentes lugares del mismo portaobjetos, obteniendo as tres extensiones lineales de sangre. 6,7 Tincin. Una vez realizadas las extensiones sanguneas, las clulas se tieron de acuerdo a la tcnica de Wright. 8 Recuento de las clulas en las laminillas teidas. El personal seleccionado para realizar el recuento diferencial de leucocitos en las extensiones sanguneas estuvo constituido por qumicos clnicos con una experiencia de al menos 5 aos en el rea de hematologa. El nmero de clulas evaluadas en cada extensin fue de 100, nmero rutinariamente contado en los laboratorios. En todos los casos, la cuenta de leucocitos se inici inspeccionando la extensin sangunea con el objetivo de bajo aumento para as seleccionar la regin con la mejor distribucin de leucocitos. Posteriormente, se cambi al objetivo de inmersin colocndolo en el extremo superior de la extensin sangunea, inicindose el recuento y clasificacin de los leucocitos en direccin del extremo inferior en campos sucesivos. Cuando fue necesario, se continu con el recuento de ms campos desde el extremo superior al inferior, hasta completar el nmero de clulas requeridas.8 En el caso particular del mtodo de la plumilla, la cuenta y clasificacin de las clulas se inici desde
5

Material y mtodos
Especmenes Para este estudio se emplearon 200 especimenes de sangre total, obtenidos a partir de individuos sin evidencia clnica de alteraciones hematolgicas, con una edad que oscil entre los 28 y 55 aos. Los especimenes se recolectaron con un sistema de extraccin al vaco (Vacutainer) en tubos con EDTA-Na2 como anticoagulante. Inmediatamente despus de obtenidos los especimenes, se prepararon las extensiones sanguneas, como se describe ms adelante. Simultneamente, se determin el nmero total de leucocitos y se evalu el diferencial de los leucocitos en cada muestra. Preparacin y tincin de las extensiones sanguneas Portaobjetos. Las extensiones sanguneas se realizaron sobre portaobjetos de tamao estndar, previamente tratados para eliminar la grasa y la suciedad que pudieran contener. Las laminillas de vidrio se sumergieron durante
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el inicio de la extensin sangunea, hasta completar 100 clulas. 6,7 En este estudio nicamente se compararon polimorfonucleares (PMN), neutrfilos (N), linfocitos (L) y monocitos (M). Debido al bajo porcentaje de eosinfilos y basfilos en las extensiones sanguneas, estas clulas se incluyeron en el grupo de los PMN. Los resultados obtenidos se expresaron en valores absolutos (clulas/L) de cada tipo celular estudiado.

Por ejemplo: la desviacin estndar de la regresin (Sy/x), la desviacin estndar de las diferencias (SDd) y el coeficiente de correlacin (r ) informan acerca de la existencia de errores al azar. La interseccin de la lnea de regresin en el eje de las ordenadas (a ) y el sesgo informan acerca de la magnitud de un error constante. Finalmente, el error proporcional puede ser estimado mediante la pendiente (b ), el sesgo y la SDd. 11,12

Equipo automatizado. La evaluacin del nmero total de leucocitos y el diferencial de leucocitos en los especmenes se determin con el autoanalizador de clulas hemticas CellDyn 3000 (Abbot Laboratorios), de acuerdo a las instrucciones del proveedor. Este autoanalizador emplea un sistema capilar que permite la separacin de clulas individuales. La incidencia de un rayo lser sobre cada clula produce un fenmeno de absorcin y dispersin de luz de acuerdo a su tamao. La luz emergente es captada y registrada por cuatro detectores localizados en diferentes ngulos. De esta forma el CellDyn 3000 es capaz de contar y diferenciar hasta 2,500 clulas/seg, los resultados son expresados en forma de histogramas de frecuencia en relacin al volumen. 9 Para asegurar la calidad de los resultados, este estudio se realiz bajo un sistema de control de calidad interno basado en el uso diario de sangre control comercial a tres niveles. Los resultados fueron aceptados solo si los CV para la cuenta del total de leucocitos, N y L de los controles estuvieron dentro de los lmites de tolerancia del 10%, criterio clnico de aceptabilidad de acuerdo a Dacie. 10

Resultados
En el cuadro 1 se muestran los CV para los PMN, N, L y M, obtenidos de 20 extensiones sanguneas preparadas a partir de una muestra de sangre total, seleccionada al azar y evaluada por un mismo qumico en 20 das consecutivos (variabilidad intra-individual), as como los CV del recuento diferencial de una extensin sangunea evaluada por 20 qumicos diferentes (variabilidad inter-individual). La variabilidad intra-individual oscil entre 5.7% y 47.2%, mientras que la variabilidad interindividual fue del 6.3% al 77.5%. Las diferencias entre los CV dependieron del tipo celular evaluado y la tcnica empleada para la preparacin de las extensiones sanguneas, los PMN y los N mostraron los menores CV, mientras que los L y M presentaron los CV mayores. Con relacin a la tcnica de preparacin de las extensiones sanguneas, la menor variabilidad se present con el mtodo de la plumilla, seguido por el mtodo transversal. La mayor variabilidad fue mostrada por el mtodo longitudinal. El cuadro 2 muestra los resultados estadsticos obtenidos de la comparacin de 200 diferenciales de leucocitos entre los mtodos manuales y el equipo automatizado. La comparacin Cuadro 1. Coeficientes de variacin (%) del recuento diferencial de leucocitos por mtodos manuales.

Anlisis Estadstico La variacin intra-individual de los mtodos manuales se estim mediante el coeficiente de variacin (CV) obtenido por un mismo qumico al analizar 20 extensiones sanguneas preparadas el mismo da de una muestra tomada al azar en 20 das consecutivos. La precisin inter-individual se evalu mediante el CV obtenido del anlisis de una extensin sangunea tomada al azar por 20 qumicos diferentes. Para realizar la comparacin estadstica de cada uno de los mtodos manuales respecto al equipo automatizado, se prepararon 200 extensiones sanguneas por cada mtodo manual y a la par se realiz la determinacin automatizada de cada una de estas 200 muestras. Con la finalidad de eliminar el efecto de la variabilidad inter-individual en los resultados, los recuentos celulares se realizaron por un mismo analista. El anlisis estadstico incluy la prueba t para datos pareados, anlisis de correlacin y regresin de Deming con ayuda de los programas estadsticos Microsoft EXCEL, Method Validator y Cbstat. Los parmetros obtenidos con estos anlisis permiten poner de manifiesto la existencia de errores al azar y errores sistemticos constantes y proporcionales en cada mtodo a evaluar. 6

Variacin

PMN

Intra - individual Mtodo Longitudinal Mtodo Transversal Mtodo de la Plumilla Inter - individual Mtodo Longitudinal Mtodo Transversal Mtodo de la Plumilla 9.6 7.2 6.5 10.2 7.6 6.3 18.3 17.7 15.2 77.5 52.4 67.9 8.5 7.4 6.3 8.4 7.6 5.7 9.1 11.7 12.1 47.2 19.5 18.6

PMN-Polimorfonucleares, N-Neutrfilos, L-Linfocitos, M-Monocitos

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DIFERENCIAL DE LEUCOCITOS, COMPARACIN DE MTODOS

Cuadro 2. Resultados estadsticos de los estudios de comparacin entre los mtodos manuales y el mtodo automatizado para el recuento diferencial de leucocitos.

Sesgo n

SDd r b a

Sy/x Clulas/ L

Clulas/ L

Polimorfonucleares M. longitudinal M. transversal M. plumilla Neutrfilos M. longitudinal M. transversal M. plumilla Linfocitos M. longitudinal M. transversal M. plumilla Monocitos M. longitudinal M. transversal M. plumilla 200 200 200 -155a -35
a

200 200 200 200 200 200 200 200 200

-190a -9 -32 -140a 36 17 365a 40 64a

370 336 265 381 330 276 412 291 269 144 122 115

0.914 0.927 0.950 0.905 0.929 0.945 0.809 0.863 0.881 0.329 0.528 0.567

0.959 0.972 0.974 0.960 0.986 0.977 1.41b 1.14

b

-24 124 90 12 105 123 -604c -287c -197c -556c -395c -303c

357 327 261 368 323 273 412 291 268 134 120 110

1.11b 1.80b 1.72

b

-59a

1.49b

n = Nmero de muestras SDd = Desviacin estndar de las diferencias r = Coeficiente de correlacin b = Pendiente mmmm a = Interseccin en las ordenadas

Sy/x = Desviacin estndar de la regresin

a b c

Diferencia significativa respecto al equipo automatizado; p 0.05 Diferencia significativa de la interseccin = 0; p 0.05 Diferencia significativa de la pendiente = 1; p 0.05

mostr un sesgo negativo en el recuento de los PMN, sin embargo, las diferencias (evaluadas mediante la prueba t para datos pareados) solo fueron estadsticamente significativas para el mtodo longitudinal. La comparacin del recuento de N mostr un sesgo negativo con el mtodo longitudinal y positivo con los mtodos transversal y de la plumilla, aunque el sesgo slo fue significativo para el mtodo longitudinal. Respecto a la comparacin del recuento de los L, los mtodos manuales mostraron sesgos positivos significativos para todos los mtodos, mientras que para los M, los mtodos mostraron sesgos negativos significativos en todos los casos. En el cuadro 2 tambin se muestra la variabilidad entre los mtodos manuales respecto al automatizado, determinada mediante SDd. Con la finalidad de describir adecuadamente la relacin entre los mtodos manuales y el mtodo automatizado, los datos fueron evaluados mediante anlisis de correlacin lineal y regresin de Deming. Los mayores valores de r se obtuvieron para los recuentos de PMN y N con el mtodo de la plumilla (0.950 y 0.945, respectivamente), seguido por el
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mtodo transversal (0.927 y 0.929). En general, el recuento de L mostr r menores a los exhibidos por los PMN y N, aunque como puede observarse en el cuadro 2, los mayores coeficientes de regresin (r) se presentaron con los mtodos de la plumilla (0.881) y el transversal (0.863). Los menores r se presentaron en los recuentos de M, con una correlacin de 0.578 y 0.567, por los mtodos transversal y de plumilla. El anlisis de correlacin tambin puso de manifiesto la existencia de diferencias en la cuenta de cada tipo celular evaluado y el tipo de extensin sangunea, en este mismo cuadro se muestra que el mtodo de la plumilla present los mayores r para la cuenta de PMN, N y L, seguido por el mtodo transversal y finalmente el mtodo longitudinal. Las figuras 1 a 3 muestran grficamente los resultados del anlisis de regresin de Deming. Como puede observarse, los mtodos longitudinal, transversal y de la plumilla mostraron un error sistemtico proporcional negativo para el recuento de los PMN y N, mientras que para la cuenta diferencial de los L y M, los recuentos de estas clulas presentaron un error sistemtico proporcional positivo, adems de la existencia de 7

BRAMBILA Y COL. M. Longitudinal PMN/L

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M. Longitudinal Neutrfilos/L
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CellDyn 3000 (PMN/L)

CellDyn 3000 (Neutrfilos/L)

M. Longitudinal Linfocitos/L
5000

M. Longitudinal Monocitos/L
1000

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3000

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CellDyn 3000 (Linfocitos/L)

CellDyn 3000 (Monocitos/ L)

Figura 1. Regresin de Deming. Comparacin del recuento de clulas polimorfonucleares, neutrfilos, linfocitos y monocitos por el mtodo longitudinal respecto equipo CellDyn 3000. 8
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DIFERENCIAL DE LEUCOCITOS, COMPARACIN DE MTODOS M. Transversal PMN/L

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M. Transversal Neutrfilos/L
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CellDyn 3000 (PMN/L) M. Transversal Linfocitos/L

5000

CellDyn 3000 (Neutrfilos/L)

M. Transversal Monocitos/L
800

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CellDyn 3000 (Linfocitos/L)

CellDyn 3000 (Monocitos/L)

Figura 2. Regresin de Deming. Comparacin del recuento de clulas polimorfonucleares, neutrfilos, linfocitos y monocitos por el mtodo transversal respecto equipo CellDyn 3000.
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BRAMBILA Y COL. M. de la Plumilla PMN/L

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M. de la Plumilla Neutrfilos/L
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CellDyn 3000 (PMN/L) M. de la Plumilla Linfocitos/L

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CellDyn 3000 (Neutrfilos/L) M. de la Plumilla Monocitos/L

1000

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CellDyn 3000 (Linfocitos/L)

CellDyn 3000 (Monocitos/L)

Figura 3. Regresin de Deming. Comparacin del recuento de clulas polimorfonucleares, neutrfilos, linfocitos y monocitos por el mtodo de la plumilla respecto equipo CellDyn 3000. 10
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DIFERENCIAL DE LEUCOCITOS, COMPARACIN DE MTODOS

una gran variabilidad en los resultados, lo cual est de acuerdo con los resultados obtenidos para la variabilidad intra-individual. La evaluacin cuantitativa del anlisis de regresin lineal es mostrada en el cuadro 2, los parmetros estimados incluyeron b, a y el Sy/x.

para aquellas clulas ms frecuentes en circulacin, particularmente PMN y N. Los estudios de comparacin de mtodos permiten poner de manifiesto la existencia de errores al azar, as como errores sistemticos constantes y proporcionales entre un mtodo a evaluar respecto a uno de referencia.14 La comparacin estadstica de dos mtodos esta basada en la informacin que ofrece el anlisis de regresin. Frecuentemente se emplea el anlisis de regresin lineal simple, sin embargo, esta prueba presenta deficiencias ya que asume que solo las medidas de y (mtodo a evaluar) estn asociadas con errores al azar, por lo que en muchas ocasiones la pendiente estimada por este mtodo es sesgada, sobretodo cuando el mtodo de referencia muestra una variabilidad significativa. El mtodo estadstico de Deming toma en consideracin los errores al azar del mtodo de referencia y el mtodo a evaluar.15 Recientemente, Linnet 16 ha mostrado la utilidad de esta tcnica para evaluar la significacin estadstica del sesgo de la pendiente. Debido a que el mtodo seleccionado para comparacin (equipo automatizado) no puede ser considerado como un mtodo de referencia libre de errores al azar o sistemticos, en este trabajo empleamos la regresin de Deming con la finalidad de obtener valores no sesgados de la pendiente. En este estudio, el anlisis grfico y la regresin de Deming mostraron un error proporcional negativo en la comparacin de los mtodos manuales respecto al automatizado, para los recuentos de PMN y N, sin embargo, solo el mtodo longitudinal mostr diferencia estadsticamente significativa. Estos resultados indican que los mtodos transversal y de la plumilla producen resultados comparables con el equipo automatizado. No obstante que el mtodo longitudinal mostr diferencia significativa respecto al autoanalizador, su aceptacin o rechazo requiere de una evaluacin del error total del mtodo y su comparacin con el error lmite tolerable de utilidad clnica.12 Con relacin a la comparacin de los recuentos de L y M, los mtodos manuales presentaron un error proporcional positivo y una variabilidad significativa. Con un nmero bajo de clulas, estos mtodos tienden a subestimar el recuento de L y M, mientras que con nmeros elevados de clulas, los mtodos sobrestiman los L y M. Estos resultados confirman la existencia de un elevado error intrnseco en la preparacin de extensiones sanguneas para estos tipos celulares. La correlacin entre los mtodos manuales y el mtodo automatizado mostr una gran diferencia (variaciones entre 0.329 a 0.950). De acuerdo a los mtodos estudiados, los mayores r se presentaron con los mtodos de la plumilla y transversal, y el menor r con el mtodo longitudinal. Independientemente de los mtodos, el r para cada tipo 11

Discusin
Los procedimientos tradicionales empleados para el recuento diferencial de leucocitos, y que estn basados en la preparacin de extensiones sanguneas, se caracterizan por un elevado error intrnseco, reflejado por una imprecisin e inexactitud significativa. 3,4 En la actualidad, la variabilidad de los mtodos manuales ha sido reducida con el empleo de equipos automatizados capaces de contar un nmero muy elevado de clulas por unidad de tiempo, lo que ha disminuido significativamente el error estadstico y de muestreo en los recuentos diferenciales . 5 En este trabajo se evalu la variabilidad intra- e interindividual en tres mtodos manuales usados en la preparacin de extensiones sanguneas para el recuento diferencial de leucocitos, y adems, se compararon estadsticamente con los resultados de un equipo automatizado. Los mtodos manuales presentaron diferencias de variabilidad entre cada uno de los mtodos estudiados, as como entre los diferentes leucocitos evaluados. Independientemente del tipo celular, los mtodos transversal y de la plumilla mostraron la menor variabilidad en comparacin con el mtodo longitudinal. La variabilidad exhibida por cada tipo leucocitario, estuvo relacionada con su frecuencia en la circulacin, los CV intra- e inter-individuales fueron menores para los PMN y N, seguidos por los L y finalmente los M con los mayores CV. Estos resultados sugieren que la preparacin manual de las extensiones sanguneas produce distribuciones celulares poco homogneas, que aunado a la variabilidad en los sitios de conteo de las extensiones sanguneas, explican los elevados CV encontrados, particularmente para las clulas con menor frecuencia y mayor arrastre (por ejemplo: M). En combinacin con estos factores, seguramente juega un papel importante la existencia de errores estadsticos y de muestreo, directamente relacionados con el bajo nmero de clulas contadas rutinariamente, as como el error de conteo duplicado y la variacin del observador al distinguir los diferentes tipos celulares como clulas en banda de neutrfilos maduros y monocitos, o linfocitos atpicos de linfocitos.13 Los resultados tambin mostraron que la preparacin de extensiones sanguneas con las tcnicas transversal y de la plumilla, producen extensiones ms homogneas
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celular tambin vari significativamente, presentndose de mayor a menor, para los PMN, N, L y M. Westgard y Hunt (1973) han mostrado que una elevada variabilidad entre el mtodo a evaluar y el mtodo de referencia (determinada por la Sy/x), disminuye r y aumenta la incertidumbre del valor de b y a. 12 En resumen, los mtodos transversal y de la plumilla empleados para el recuento diferencial de los PMN y N, producen resultados estadsticamente indistinguibles a los obtenidos con el equipo automatizado, no as el mtodo longitudinal, el cual mostr un sesgo significativo. Los recuentos de L y M obtenidos a partir de extensiones sanguneas mostraron errores proporcionales y al azar significativos. Estos resultados confirman la existencia de un elevado error intrnseco en la cuenta de L y M obtenida a partir de extensiones sanguneas, independientemente del mtodo de preparacin empleado.

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Referencias
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BIOQUIMIA VOL. 28 NO. 3, 4-12, 2003