PURIFICACION Y CARACTERIZACION DE LECTINAS DE SEMILLAS AMARANTO CULTIVADO EN EL ESTADO DE HIDALGO

Julia Dolores Salgado Telpalo, Maria del Carmen Valadez Vega Universidad Autnoma del Estado de Hidalgo, Instituto de Ciencias de la Salud Ex Hacienda la Concepcin, Tilcuautla, Hidalgo, C.P. 42160 m.valadezvega@lycos.com
Palabras clave: lectinas, amaranto, eritrocitos Introduccin. El amaranto es un pseudocereal con un muy alto valor nutritivo por su alto contenido de protenas, aminocidos y minerales (1), sin embargo puede contener factores antinutricionales que interfieren negativamente, en la absorcin y metabolismo de sustancias nutritivas (2). Uno de los factores antifisiolgicos ms estudiados son las lectinas que son glicoprotenas, de origen no inmunolgico, que se caracterizan por ligar carbohidratos o glicoconjugados con alta especificidad, unindose de manera reversible sin alterar su estructura covalente (3). Las lectinas despiertan gran inters cientfico debido al gran potencial que poseen cuando se utilizan de forma pura en reacciones biolgicas para fines de diagnsticos clnicos e investigaciones de estructura de protenas y carbohidratos en clulas pudiendo obtener diversos tratamientos alternativos a enfermedades como lo es el cncer. El objetivo del presente trabajo fue la extraccin, purificacin y caracterizacin bioqumica y fisicoqumica de lectinas de semillas de amaranto cultivado en el Estado de Hidalgo. Metodologa. La extraccin de la lectina se realizo mediante la metodologa reportada por Meja y col, 1989. La purificacin de la lectina se llevo a cabo mediante cromatografa de afinidad utilizando una matriz de estroma de eritrocitos humanos. La lectina purificada se caracteriz mediante su actividad hemaglutinante utilizando eritrocitos humanos y de animales (4), estudios de inhibicin de la aglutinacin, determinacin de peso molecular mediante electroforesis nativa y desnaturalizante, contenido de carbohidratos totales (5), determinacin de metales, efecto de iones metlicos sobre la hemaglutinacin, estabilidad al pH y termoestabilidad. Resultados y discusin. La lectina fue purificada presentando un solo pico despus de ser eluido con cido actico. La lectina de amaranto es una glicoprotena (3.69 % carbohidratos totales). Esta compuesta por dos subunidades con un peso molecular de 26.68 y 28.43 kDa. Es una metaloprotena que contiene y biolgica iones iones
Cuadro1. Purificacin de la lectina de amaranto (AM)
Fraccin Protena mg/ml Protena Recuperada (%) 100 34.1023 0.03039 Titulo AT 256 8 128 OT 16777216 16777216 128 Recuperacin de actividad (%) AT 100 3.125 50 OT 100 100 0.00076294

Ca2+, Mg2+, Mn2+, Cu2+ y Zn2+. La lectina presenta mayor especificidad hacia eritrocitos humanos tipo O tripsinizados y sin tripsinizar; lo que se indica que es una lectina especfica para la fucosa que es un carbohidrato presente en la membrana de los eritrocitos. Asimismo, es ms afn hacia eritrocitos de hmster y de conejo. Presenta inhibicin de la aglutinacin cuando es tratada con monosacridos; es muy estable a pH 6.0, 7.0, 7.5 y 8.0; y presenta una alta estabilidad y actividad biolgica a temperaturas entre 25-60C ya que a temperaturas mayores la actividad hemaglutinante disminuye considerablemente debido a la desnaturalizacin de las protenas.
Fig. 1. Estabilidad de la lectina AM a diferentes condiciones de pH(izq) y temperatura (der).
10 9 8 Ttulo 7 6 5 4 3 5 7 pH 9 11 2 0 20 40 60 80 100 120 Temperatura (C) AT OT Ttulo 10 8 6 4 AT OT

Conclusiones. Hoy en da es interesante conocer ms acerca de la funcin e identificacin de lectinas, por lo que en el presente trabajo se realiz la purificacin y caracterizacin de lectinas de semillas de amaranto cultivado en el Estado de Hidalgo con la finalidad de encontrar una fuente potencial de estas protenas para su utilizacin posterior en estudios biolgicos. Agradecimiento. Agradecemos a la Universidad Autnoma del Estado de Hidalgo y al Instituto Nacional de Pediatra por las facilidades otorgadas Bibliografa. 1. Lehmann, J. 1991. The industrialization and
commercialization of Amaranth an alternate approach. In: Primer Congreso Internacional del Amaranto. Oaxtepec, Morelos. Mxico. Septiembre 22-27. 2. Valle, P. Lucas B. 2000. Toxicologa de alimentos. Documento publicado en Inst Nac Sal Pub. 219-222. 3. Rini, J. 1995. Lectin structure. Annu. Rev. Biomol. Struct. 24: 551-77. 4. Jaff, W. 1980. Hemagglutinin. ln: Toxic constituents of plant foodstuff. Ed. by lE. Liener. New York, U.S.A., Academic Press. 73102. 5. Dubois, M., Gilles, K., Hamilton, J., Rebers, A., Smith, F.

Ext. Crudo No retenido Retenido

368.847 125.79 0.1121

1956. Colorimetric method for determination of sugars and related substances. Anal Chem. 28: 350-356.