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3 MARCO TERICO 3.1 PESTICIDAS Se entiende por pesticidas a todos aquellos productos utilizados para combatir los parsitos y enfermedades de las plantas, proteger los cultivos de agentes dainos, aunque no sean parsitos (malas hierbas, algas, etc.) y mejorar cualitativa y cuantitativamente la produccin agrcola (Dorronsoro & Garca, 2004; U.S. Department of Agriculture, 1998). 3.1.1 Clasificacin de los Pesticidas Los pesticidas pueden clasificarse en diferentes grupos, dependiendo de la propiedad evaluada. Generalmente se clasifican teniendo en cuenta 3 propiedades: 1) organismo al que atacan, 2) naturaleza qumica y 3) toxicidad. 3.1.1.1 Clasificacin segn el organismo que atacan Segn el tipo de organismo hacia el cual se dirigen, se dividen en dos grandes grupos: plaguicidas y herbicidas, aunque estos no pueden separase totalmente porque muchas sustancias presentan efectos combinados: Plaguicidas. Son sustancias que sirven para combatir parsitos y enfermedades que afectan los cultivos, el ganado, los animales domsticos y el hombre. Dentro de este grupo a su vez, pueden separarse de acuerdo con el grupo de especies que atacan en: insecticidas, acaricidas, nematicidas, fungicidas, antibiticos y rodenticidas (Dorronsoro & Garca, 2004; Weber, 1994). Herbicidas. Productos que evitan el desarrollo de plantas adventicias o malas hierbas. 3.1.1.2 Clasificacin segn su naturaleza qumica En lo referente a su naturaleza qumica, los pesticidas pueden clasificarse en inorgnicos y orgnicos. Dentro del grupo de los orgnicos, los principales tipos son (Dorronsoro & Garca, 2004; Marquez, 2001): Derivados Halgenos. Compuestos orgnicos que contienen generalmente tomos de cloro en su molcula. Actualmente su acumulacin en el medio ambiente y en los seres vivos ha dado lugar a restricciones en su uso por parte de algunos pases. Dentro de estos compuestos podemos distinguir tres grupos: EVALUACIN DE MEZCLAS COMPOST INMADURO/SUELO DE MORAVIA Y FUENTES DE NUTRIENTES PARA LA DEGRADACIN DE LOS PESTICIDAS CLORPIRIFOS, MALATIN Y METIL PARATIN SERGIO AUGUSTO UPEGUI SOSA
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Derivados halgenos de hidrocarburos alifticos: utilizados principalmente como fumigantes. Derivados halogenados de hidrocarburos alicclicos. Importancia prctica como insecticidas y fungicidas. Derivados halogenados aromticos. Tienen propiedades insecticidas, acaricidas, herbicidas y fungicidas dependiendo de la naturaleza del tomo de halgeno, del nmero de ellos en la molcula de benceno y de su posicin en el anillo. Su principal representante es el DDT.
Figura 1. Frmula Qumica del DDT Carbamatos. Son sales o esteres del cido carbmico o uretano. Los carbamatos pueden tener propiedades insecticidas y herbicidas, algunos de los cuales pueden ser sistmicos (Dorronsoro & Garca, 2004; Marquez, 2001). Este grupo de plaguicidas presenta algunas ventajas frente a los compuestos organofosforados, como son su eficacia contra insectos resistentes a estos ltimos y su mayor seguridad de manejo, pero tambin presentan desventajas, ya que son de ms difcil produccin, ms caros y de mayor toxicidad frente a los insectos polinizadores (Marquez, 2001). Derivados de la urea y tiourea. Todos estos compuestos se utilizan como herbicidas, cuyas propiedades aumentan notablemente con la presencia de tomos de halgeno en la molcula del compuesto. Actan por medio de la inhibicin del proceso de fotosntesis. Compuestos heterocclicos. Uso como herbicidas. Pueden tener ciclos de 5 6 tomos y con 1, 2 3 tomos diferentes en el anillo, siendo los ms importantes las triazinas sustituidas. Organofosforados. Son compuestos orgnicos complejos, que incluyen fsforo en su composicin, ya que son steres o amidas derivadas del cido fosfrico, tiofosfrico, ditiofosfrico, fosfnico y fosfnico. Tienen efecto insecticida principalmente, aunque algunos de ellos presentan actividad nematicida, fungicida y herbicida. EVALUACIN DE MEZCLAS COMPOST INMADURO/SUELO DE MORAVIA Y FUENTES DE NUTRIENTES PARA LA DEGRADACIN DE LOS PESTICIDAS CLORPIRIFOS, MALATIN Y METIL PARATIN SERGIO AUGUSTO UPEGUI SOSA
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Se caracterizan por tener un espectro de accin ms estrecho que el de los organoclorados, por su baja persistencia y fcil descomposicin a productos no txicos. Se metabolizan relativamente rpido en organismos vertebrados y presentan ausencia de acumulacin en los mismos; todo lo anterior los hace preferibles en comparacin con los organoclorados. Sin embargo, como desventaja de estos compuestos se tiene su toxicidad, la cual es relativamente alta para los vertebrados y seres humanos, lo que obliga a una manipulacin ms cuidadosa.
Figura 2. Frmula Qumica del Paratin La toxicidad y la accin insecticida de estos compuestos son atribuidas a la inhibicin de la actividad acetilcolinesterasa, enzima que se encuentra en las clulas nerviosas de los organismos y cuya desactivacin paraliza su sistema nervioso (Marquez, 2001; U.S. Department of Agriculture, 1998). Los organofosforados al ser ingeridos o inhalados, pasan rpidamente al torrente sanguneo, inhibiendo la acetilcolinesterasa y causando efectos en el sistema muscular involuntario como: temblores, convulsiones e incluso la muerte en humanos (Mosquera, 2007; Defensoria del Pueblo, 2003). Los steres organofosforados son muy susceptibles a la hidrlisis, el cual es el proceso ms comn de degradacin, donde el H 2 O y OH - actan como nuclefilos sobre el grupo funcional ster (Bavcon et al., 2003). Dentro de este grupo de plaguicidas se encuentran tres productos que han sido de gran uso en el pas, y los cuales son analizados en el presente estudio, estos son: Clorpirifos, Malatin y Metil Paratin. 3.1.1.3 Clasificacin segn su toxicidad De acuerdo con su toxicidad, la clasificacin de los pesticidas se realiza en funcin de su dosis letal 50 (DL 50 ) o cantidad de producto que es capaz de eliminar al 50% de una poblacin. En la Tabla 1 se establecen las categoras y dosis letales correspondientes a cada categora.
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Tabla 1. Clasificacin de los pesticidas de acuerdo con su toxicidad Categora Dosis Letal 50 (DL 50 ) Supertxicos. < 5mg/Kg Extremadamente txicos. 5-50mg/kg Muy txicos. 50-500 mg/kg Moderadamente txicos. 500 5000 mg/kg Ligeramente txicos. 5 - 15gr/Kg Prcticamente no txicos. > 15 gr/Kg
3.1.2 Disponibilidad de los Pesticidas en el Ambiente. Muchos plaguicidas no permanecen en el lugar donde se aplicaron, sino que se esparcen a travs del agua, suelo, aire y biota; muchas veces a grandes distancias (Kerle et al., 2007; Hayo, 1996). El movimiento de los plaguicidas y los compuestos orgnicos est influenciado por diversos factores, que incluyen entre otros: la adsorcin, la volatilizacin, la dilucin, actividad biolgica y reactividad (Navarrete, 1995). El fenmeno de adsorcin de un compuesto desde una solucin acuosa, depende de dos condiciones: 1) el soluto tiene una baja afinidad por el agua 2) el soluto tiene una alta afinidad por el slido (FAO, 2000). En el caso de la volatilidad, sta depende fundamentalmente de la presin de vapor del compuesto y est fuertemente influenciada por las condiciones ambientales (temperatura, velocidad del viento, etc.), cuanto menor es la presin de vapor, ms tendencia tiene el producto a permanecer en el suelo (FAO, 2000). La solubilidad en agua est ntimamente relacionada con la movilidad del pesticida, de forma que cuanto mayor es la solubilidad, mayor ser la movilidad. En la Figura 3 se presentan las interacciones que se llevan a cabo entre los pesticidas y el ambiente. EVALUACIN DE MEZCLAS COMPOST INMADURO/SUELO DE MORAVIA Y FUENTES DE NUTRIENTES PARA LA DEGRADACIN DE LOS PESTICIDAS CLORPIRIFOS, MALATIN Y METIL PARATIN SERGIO AUGUSTO UPEGUI SOSA
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Figura 3. Interaccin de los pesticidas con en el ambiente (Mosquera, 2007) 3.1.2.1 Movilidad en el suelo La movilidad de un pesticida depende del grado de solubilidad en agua, el cual puede ser medido mediante el coeficiente de particin o tambin llamado coeficiente de adsorcin (Koc). Este coeficiente se define como la razn o relacin entre la concentracin del pesticida adherido a las partculas del suelo, y la concentracin del pesticida disuelto en el agua o solucin del suelo. Por lo tanto, cuanto menor sea el valor de Koc, mayor ser la concentracin del plaguicida en la solucin (Mosquera, 2007; FAO, 2000). De acuerdo con lo anterior, cuando un pesticida se introduce en el suelo, una parte de l se adhiere a las partculas del suelo (especialmente a la materia orgnica) a travs de un proceso llamado adsorcin, y otra parte se disuelve en el agua del suelo. La solubilidad de un pesticida y la adsorcin en el suelo estn inversamente relacionadas, esto quiere decir, que un aumento en la solubilidad se traduce en un descenso de la adsorcin (Mosquera, 2007; ACS Symposium series, 1986). EVALUACIN DE MEZCLAS COMPOST INMADURO/SUELO DE MORAVIA Y FUENTES DE NUTRIENTES PARA LA DEGRADACIN DE LOS PESTICIDAS CLORPIRIFOS, MALATIN Y METIL PARATIN SERGIO AUGUSTO UPEGUI SOSA
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Cuando la adsorcin es muy baja, los compuestos son muy mviles y susceptibles a ser lavados, provocando una fuerte contaminacin de las aguas freticas. Esto suele ocurrir en los suelos de cultivo muy pobres en materia orgnica, ms an cuando se trata de suelos irrigados en los que el lavado es mayor (Mediterranea de Agroqumicos, S.F.). Por el contrario, una adsorcin muy elevada puede hacer que los productos aplicados no lleguen a ser eficaces, y permanezcan un largo tiempo en el suelo, lo que suele ocurrir cuando los contenidos de materia orgnica en los suelos son muy altos. Por consiguiente, se considera que la lixiviacin de los plaguicidas ser ms lenta en este tipo de suelos, que en aquellos que poseen bajo contenido de materia orgnica (Mosquera, 2007; Universidad de Extremadura, 2004). Debido a la importancia de la materia orgnica en la adsorcin, se utiliza para ella un modelo basado en el coeficiente de reparto Octanol/Agua (Koa Kow), donde el octanol representa la fase lipdica o hidrofbica. Este coeficiente describe el reparto de un compuesto (como los pesticidas) entre la materia orgnica del suelo y la solucin del mismo. Por lo tanto, los compuestos con bajos valores de Koa corresponden a molculas pequeas y polares, mientras que compuestos con altos valores de Koa presentan grandes molculas, poco o nada polares (Dorronsoro & Garca, 2004). Otros factores que rigen la adsorcin de los pesticidas al suelo, se encuentran: la naturaleza del complejo adsorbente y el pH. En la primera, tiene mucho que ver el adems del contenido de materia orgnica, la concentracin y naturaleza de las arcillas presentes, las cuales presentan gran influencia en el intercambio inico del suelo. Los compuestos catinicos pueden ser adsorbidos por las cargas negativas de las arcillas y de la materia orgnica, mientras que los compuestos aninicos son adsorbidos principalmente por la materia orgnica y por los oxi-hidrxidos de hierro y aluminio. En ambos casos la adsorcin estar muy influida por el pH (Kerle et al., 2007; U.S. Department of Agriculture, 1998). Una consecuencia atribuida al uso de fertilizantes qumicos, es la modificacin del pH del suelo (en diferente sentido segn el tipo empleado), lo que provoca que existan excesos de algunos elementos que pueden lavarse y pasar a las aguas freticas y de ellas a las de consumo (Dorronsoro & Garca, 2004).
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Por otra parte, entre los factores propios del producto, que rigen la adsorcin de los pesticidas al suelo, los factores decisivos son: el tamao de su molcula y la polaridad de la misma (Dorronsoro & Garca, 2004). El suelo tiene mecanismos de defensa ante los contaminantes, pero muchos de estos mecanismos estn basados en la precipitacin, adsorcin y fijacin de los mismos; por lo que estos mecanismos no constituyen una destruccin de los plaguicidas como tal, sino que eliminan su bio-disponibilidad, pudiendo ser reversible en etapas posteriores. Entre los factores que influyen en la bio-disponibilidad de los contaminantes en el suelo se destacan (Kerle et al., 2007): Capacidad de intercambio catinico. Como ya se mencion, ste es un parmetro decisivo en el almacenamiento de sustancias de naturaleza catinica, como algunas molculas de pesticidas, en el suelo. pH. Acta facilitando el almacenamiento o la liberacin de los compuestos presentes en el suelo, de modo que es uno de los factores ms importantes. Cuando el pH baja se incrementa la solubilidad de las sustancias catinicas retenidas, mientras que un aumento del pH provoca el mismo efecto en las sustancias aninicas. Potencial de oxidacin. Es importante porque puede movilizar elementos txicos encerrados en las estructuras moleculares de los compuestos de hierro y manganeso. Contenido de materia orgnica. Afecta al complejo de cambio, a la capacidad tampn y a la actividad biolgica del suelo, sin olvidar su carcter complejante y su influencia sobre la estructura, que afecta la aireacin del suelo. Estructura. Regula el drenaje, controla la humedad y afecta la erodabilidad de la capa superior. 3.1.3 Persistencia de los Pesticidas La Persistencia de un pesticida es la resistencia a ser degradado o transformado como resultado de distintas reacciones fisicoqumicas y microbiolgicas en el suelo (Mosquera, 2007; Kerle et al., 2007). La persistencia vara de unos suelos a otros y est muy relacionada con la adsorcin del suelo, adems de las propiedades del pesticida; cuando la adsorcin es muy intensa, el pesticida puede permanecer en el suelo durante EVALUACIN DE MEZCLAS COMPOST INMADURO/SUELO DE MORAVIA Y FUENTES DE NUTRIENTES PARA LA DEGRADACIN DE LOS PESTICIDAS CLORPIRIFOS, MALATIN Y METIL PARATIN SERGIO AUGUSTO UPEGUI SOSA
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un largo tiempo (Dorronsoro & Garca, 2004; U.S. Department of Agriculture, 1998). Los compuestos cuyo periodo de degradacin es extremadamente largo se consideran persistentes, y estos se dispersan en el medio ambiente sin experimentar mayores cambios (FAO, 2000). En la Tabla 2 se presenta la persistencia promedio de los pesticidas, segn su naturaleza qumica. Tabla 2. Persistencia promedio de los pesticidas Tipo Accin Persistencia Organoclorados Insecticida 2 5 aos Derivados benzoicos Herbicidas 3 12 meses Derivados de la urea Herbicidas 4 10 meses Amidas Herbicidas 2 10 meses cidos alifticos Herbicidas 3 10 semanas Organofosforados Insecticidas 7 8 semanas Carbamatos Todas 2 8 semanas (Dorronsoro & Garca, 2004) 3.1.4 Bioacumulacin de los Pesticidas La bioacumulacin indica la tendencia de un compuesto a acumularse en los organismos. El coeficiente de particin Octanol-agua (Kow), es el ndice ms utilizado para cuantificar la bioacumulacin de un plaguicida. Los compuestos con un valor de Kow alto se acumulan en los organismos (Dorronsoro & Garca, 2004). 3.1.5 Degradacin de los pesticidas Con el tiempo, casi todos los plaguicidas se descomponen o se degradan como resultado de distintas reacciones qumicas y microbiolgicas en el suelo. Estos procesos tienen como resultado la degradacin final del compuesto en CO 2 , H 2 O, HCl, SO 2 , entre otros compuestos minerales (Kerle et al., 2007; FAO, 2000). El tiempo de vida media de degradacin o semidesintegracin (DT 50 ), es el tiempo que tarda un plaguicida para ser transformado o degradado a la mitad de su concentracin inicial. A medida que se degradan, algunos pesticidas producen sustancias intermedias llamadas metabolitos, cuya actividad biolgica tambin puede presentar repercusiones ambientales importantes, incluso algunos de ellos pueden llegar a ser ms txicos que los compuestos originales (FAO, 2000). EVALUACIN DE MEZCLAS COMPOST INMADURO/SUELO DE MORAVIA Y FUENTES DE NUTRIENTES PARA LA DEGRADACIN DE LOS PESTICIDAS CLORPIRIFOS, MALATIN Y METIL PARATIN SERGIO AUGUSTO UPEGUI SOSA
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Los procesos de degradacin ms importantes llevados a cabo en el suelo son: 3.1.5.1 Hidrlisis La hidrlisis es un proceso en el que un compuesto es transformado por contacto con el agua, sufriendo una reaccin qumica en la que una parte de la molcula del compuesto es reemplazada por un grupo hidroxilo. El pH del medio en el que se encuentra el compuesto, influye considerablemente en este proceso (Mosquera, 2007). 3.1.5.2 Fotlisis La fotlisis es la descomposicin de un compuesto qumico como resultado directo de la radiacin ultravioleta (Mosquera, 2007). sta puede separarse en dos procesos: fotolisis indirecta y fotolisis directa. En la primera, la reaccin se da por accin directa de la luz ultravioleta sobre la molcula del compuesto, generando la descomposicin del mismo. Por otro lado, en la foto-degradacin indirecta, la degradacin se da por sustancias oxidantes generadas a partir de la luz ultravioleta, estas sustancias atacan la molcula del pesticida y ocasionan su transformacin. Algunas especies orgnicas como los cidos hmicos y flvicos, e inorgnicas como los nitratos y nitritos, pueden acelerar considerablemente la fotolisis de un pesticida (Ruiz, 2001). 3.1.5.3 Biodegradacin La descomposicin biolgica o biodegradacin consiste en la transformacin de una sustancia por accin de los microorganismos, ste es un proceso de degradacin muy importante en el suelo, especialmente cuando el pH es menor a 7.0 (Mosquera, 2007), donde es posible que la velocidad de la hidrlisis sea lenta. En condiciones ambientales, la biodegradacin puede verse afectada por varios factores, entre ellas la presencia o ausencia de oxgeno (condiciones aerobias o anaerobias) y nutrientes, el tamao de la poblacin de microorganismos y la capacidad de adaptacin de estos (Castaeda, 2005; Vidali, 2001). En este proceso, cuando los contaminantes son degradados metablicamente se utilizan como fuente de carbono y/o nutrientes para la obtencin de la energa necesaria para el crecimiento, reproduccin y mantenimiento celular; la otra parte termina en forma de dixido de carbono, agua y sales minerales, EVALUACIN DE MEZCLAS COMPOST INMADURO/SUELO DE MORAVIA Y FUENTES DE NUTRIENTES PARA LA DEGRADACIN DE LOS PESTICIDAS CLORPIRIFOS, MALATIN Y METIL PARATIN SERGIO AUGUSTO UPEGUI SOSA
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logrndose una autentica mineralizacin con desaparicin completa del pesticida. Los contaminantes tambin pueden ser atacados por una gran variedad de enzimas extracelulares y consorcios microbianos que se encuentran en el suelo, en este caso su degradacin es de forma cometablica (Jin, Englande, & Qiu, 2003). En el cometabolismo se produce una transformacin de la estructura del pesticida sin que pueda considerarse que es utilizado como fuente de energa por los microorganismos. El catabolito resultante, ya no posee la accin inicial, pero puede tener otros efectos, en muchas ocasiones desconocidos y cuya toxicidad puede ser variable (Universidad de Extremadura, 2004). Dentro de las enzimas relacionadas con la transformacin de los pesticidas organofosforados Singer & Crohn (2002) y Jokanovic (2001), sealan que las mono y di-oxygenasas juegan un papel importante, ya que introducen uno o varios tomos de oxgeno dentro de la molcula qumica de estos pesticidas, incrementando su solubilidad en agua y por lo tanto su biodisponibilidad, volvindolos ms susceptibles a ser mineralizados. En la Figura 4, se muestra la desulfuracin oxidativa que sufren el Malatin y el Paratin por accin del citocromo P450, un sistema de monooxigenasas que se caracteriza por utilizar el NADPH (Nicotinamida-Adenina-Dinucletido-Fosfato) para reducir el oxgeno molecular hasta agua, e incorporar un tomo de oxgeno a la molcula que ataca (Gonzlez, 2007).
Figura 4. Transformacin del Paratin y Malatin a travs de la Desulfuracin Oxidativa (Jokanovic, 2001)
Otro grupo de enzimas son las carboxilesterasas, las cuales son capaces de metabolizar lpidos y un largo nmero de medicamentos, as como de catalizar EVALUACIN DE MEZCLAS COMPOST INMADURO/SUELO DE MORAVIA Y FUENTES DE NUTRIENTES PARA LA DEGRADACIN DE LOS PESTICIDAS CLORPIRIFOS, MALATIN Y METIL PARATIN SERGIO AUGUSTO UPEGUI SOSA
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la hidrlisis de esteres del acido carboxlico, sta es una forma importante de detoxificacin del Malatin (Fukuto, Mechanism of Action of Organophosphorus and Carbamate Insecticides, 1990; WHO, 1976) y su metabolito txico, el Malaoxn (Fukuto & Metcalf, 1969). Las carboxilesterasas tambin participan en la detoxificacin de Carbofuran, Piretroides y otros organofosforados diferentes al Malatin Cashman et al., (1996). Enzimas similares a las Carboxilesterasas son las arilesterasas, que pueden hidrolizar algunos compuestos organofosforados que contienen grupos aromticos como el Paraoxn y el Clorpirifos oxn (Jokanovic, 2001). En la Figura 5 se presenta la hidrlisis del Malatin bajo la accin de una enzima Carboxilesterasa.
Figura 5. Hidrlisis del Malatin por una enzima Carboxilesterasa (Jokanovic, 2001) El grupo nitro del Paratin (NO 2 ) y otros compuestos similares, como el Metil Paratin, pueden ser reducidos enzimticamente a grupos amino (NH 2 ) (Figura 6), los cuales son inactivos como insecticidas y no inhiben la Acetil Colinesterasa, debido a que los grupos amino liberan electrones, mientras que los grupos nitro los atraen fuertemente (Jokanovic, 2001).
Figura 6. Reduccin del grupo nitro a amino en el Paratin por accin enzimtica (Jokanovic, 2001) Otras interacciones que pueden darse entre los contaminantes y los microorganismos son: 1) la polimerizacin o conjugacin del pesticida, formando un polmero menos mvil que el compuesto original y carente de su efecto, 2) Los microorganismos pueden incorporar el pesticida a su propio organismo, provocando una acumulacin dentro de ste, quedando de nuevo liberado el compuesto en el momento en que muere el organismo captor y 3) pueden ejercer una accin semejante a la que tiene lugar en el suelo de forma abitica, es decir, realizar procesos de oxidacin, de reduccin o de hidrlisis (Universidad de Extremadura, 2004). EVALUACIN DE MEZCLAS COMPOST INMADURO/SUELO DE MORAVIA Y FUENTES DE NUTRIENTES PARA LA DEGRADACIN DE LOS PESTICIDAS CLORPIRIFOS, MALATIN Y METIL PARATIN SERGIO AUGUSTO UPEGUI SOSA
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Adems de la transformacin de los contaminantes realizada por la accin de los microorganismos, tambin est la transformacin realizada por las plantas, quienes absorben el producto y pueden metabolizarlo por procedimientos semejantes a los utilizados por los microorganismos. Esta absorcin puede causar su muerte como en el caso de los herbicidas, o servir para su defensa como en el caso de los insecticidas sistmicos. En el proceso general de descomposicin biolgica intervienen algunas propiedades del pesticida, como son: su estructura qumica, la capacidad de adsorcin (que impide su ataque), el coeficiente de reparto entre las fracciones inorgnica y orgnica, y las constantes de disociacin cida y bsica que determinan la forma de descomposicin de la sustancia. Otros factores explicados anteriormente se deben al suelo, y su influencia en la adsorcin o desorcin de los compuestos, tales como: el contenido de materia orgnica, la textura, la estructura, la aireacin, el potencial redox y el pH. Por ltimo, no se puede olvidar la actividad biolgica del suelo (favorecida por un elevado contenido de material orgnico) que es la biomasa potencial para la degradacin de los compuestos (Kerle et al., 2007). Hay otros factores relacionados con el medio ambiente como son: la temperatura, que favorece la accin bacteriana, y por ende, la velocidad de degradacin; la pluviosidad, que determina la humedad y el lavado de las sustancias; y su conjunto, que determina la densidad de la cubierta vegetal, cuya accin degradante tambin puede ser importante (Donzar, 1995). 3.2 CLORPIRIFOS 3.2.1 Propiedades del Clorpirifos El Clorpirifos es un slido blanco de apariencia cristalina y de aroma fuerte. No es muy soluble en agua, de manera que generalmente se mezcla con lquidos aceitosos antes de aplicarse a cosechas o animales. Tambin se puede aplicar a cosechas en forma de cpsulas (ATSDR, 1997). En la Tabla 3. Se presentan las principales propiedades del Clorpirifos.
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Tabla 3. Propiedades del Clorpirifos Nombre qumico O,O-diethyl O-(3,5,6-trichloro- 2-pyridyl) phosphorothioate Frmula Qumica C9H11Cl3NO3PS Nmero CAS 2921-88-2 Peso Molecular 350.6 g/mol Densidad a 21C 1,51 g/ml Presin de vapor 2.5 mPa @ 25C Punto de fusin 41.5 42.5 C Punto de ebullicin >300C Coef. De Particin (Log Kow) 4.69 Coef. De adsorcin (Koc) 6070 Solubilidad en agua 2.0 mg/L @ 25C (ATSDR, 1997) 3.2.2 Degradacin del Clorpirifos Clorpirifos es un compuesto degradable, y en su descomposicin pueden participar activamente diversos factores ambientales. Tanto la degradacin microbiana como la degradacin abitica (como hidrlisis) son factores importantes en su disipacin del suelo, siendo sta ltima especialmente predominante en suelos alcalinos (Dow Agrosciences, 2008). En todos los sistemas (suelo, aguas, plantas y animales), la ruta principal de degradacin se inicia con la ruptura del enlace ster-fsforo, produciendo 3,5,6-tricloro-2-piridinol (TCP). Este primer paso es una detoxificacin, ya que el TCP no presenta actividad insecticida y las autoridades regulatorias lo consideran toxicolgicamente insignificante. Sin embargo, el TCP ha mostrado tener efecto txico sobre los microorganismos, lo que hace que sea un poco lenta la degradacin de este compuesto por la microflora del suelo (Castaeda, 2005). En el suelo y agua, el TCP contina degradndose a travs de la actividad microbiana y la fotlisis en dixido de carbono y materia orgnica. En los animales, el TCP puede ser excretado directamente o tras su conjugacin; en las plantas, se aslan los conjugados de TCP (Dow Agrosciences, 2008). En la Figura 7, se presentan las diferentes rutas y degradacin del Clorpirifos. EVALUACIN DE MEZCLAS COMPOST INMADURO/SUELO DE MORAVIA Y FUENTES DE NUTRIENTES PARA LA DEGRADACIN DE LOS PESTICIDAS CLORPIRIFOS, MALATIN Y METIL PARATIN SERGIO AUGUSTO UPEGUI SOSA
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Figura 7. Clorpirifos y sus metabolitos de degradacin (Dow Agrosciences, 2008) 3.2.3 Persistencia del Clorpirifos en el ambiente El Clorpirifos puede llegar al suelo mediante aplicacin directa, por la deriva del pulverizado o por el lavado desde el follaje. Es moderadamente persistente y presenta un coeficiente de adsorcin en el suelo (K oc ) mayor a 5000, por lo que tiene una fuerte tendencia a ser adsorbido por el suelo y la materia orgnica en ste, dificultando su lixiviacin a las aguas subterrneas. Una vez alcanza ecosistemas acuticos, puede generar graves daos, ya que es un compuesto muy txico para los organismos acuticos, y puede causar efectos adversos a largo plazo. Cuando se aplica en las dosis agrcolas normales, las vidas medias tpicas de degradacin en el suelo en condiciones aerbicas para el Clorpirifos, son del orden de 60 a 120 das (Kamrin, 1997). 3.3 MALATIN De acuerdo con (Cordoba, 2001), el Malatin es un insecticida organofosforado catalogado toxicolgicamente en la categora III de la EPA (ligeramente txico). Ingresa a los organismos por ingestin y por el aire. Su inespecificidad hace EVALUACIN DE MEZCLAS COMPOST INMADURO/SUELO DE MORAVIA Y FUENTES DE NUTRIENTES PARA LA DEGRADACIN DE LOS PESTICIDAS CLORPIRIFOS, MALATIN Y METIL PARATIN SERGIO AUGUSTO UPEGUI SOSA
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que a las dosis utilizadas contra la mosca de las frutas, por ejemplo (Tephritidae), resulte txico y letal para la mayor parte de los insectos con una biomasa similar. Este efecto indeseado disminuye la biodiversidad y crea condiciones para la aparicin de otras plagas (EPA, Environmental Protection Agency, 2000). El Malaoxn es un anlogo oxigenado del Malatin, y pude ser encontrado tambin como una impureza en una formulacin de Malatin, o puede ser generado a partir de la oxidacin del Malatin en el aire o el suelo. El Malaoxn es el metabolito activo del Malatin que inhibe la colinesterasa. Ambos compuestos son detoxificados a compuestos polares solubles en agua por medio de carboxiesterasas (Newhart, 2006).
Figura 8. Estructura Qumica del Malatin
Figura 9. Estructura Qumica del Malaoxn (Newhart, 2006)
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3.3.1 Propiedades del Malatin En la Tabla 4 se presentan las propiedades del Malatin Tabla 4. Propiedades del Malatin Nombre qumico 0,0 dimetil fosforoditioato de dietil mercapto succinato Formula Molecular C 10 H 19 O 6 PS 2
Nmero CAS 121-75-5 Peso molecular (g/mol) 330,36 Densidad (g/mL) 1,2076 @ 20C Punto de ebullicin (C) 156-157 @ 0,7 mm Hg Punto de fusin (C) 2,85 Solubilidad en agua (mg/L) 130 @ 25C Presin de vapor (mPa) 5.3 @ 30C Coef. de particin (Log Kow) 2.75 Coef. de adsorcin (Koc) 1800 (ATSDR, 2003) 3.3.2 Degradacin del Malatin El Malatin tiene una movilidad en la solucin del suelo entre moderada y alta. Generalmente su degradacin es rpida, y la contaminacin de la solucin del suelo no se ha encontrado sea extendida. La Divisin de Efecto y Destino Ambiental de la EPA (EFED), concluy que es potencialmente mvil en la solucin del suelo, especialmente en aquellos con bajo contenido de materia orgnica y alto contenido de arena (Newhart, 2006; Neal et al., 1993). El Malatin es degradado particularmente por hidrlisis, fotlisis y por accin de los microorganismos (LeNoir et al., 1999). De acuerdo con Mosquera (2007) y Newhart, (2006), la principal ruta de degradacin del Malatin en el suelo es a travs del metabolismo aerbico. El tiempo de vida medio del Malatin en el suelo fue reportado en 3 das en suelos alcalinos, y 7 das para suelos cidos. Segn Paschal & Neville, (1976), los cidos Malatin mono y di-carboxlicos, el Malaoxn, el fumarato de etilo, diethyl thiosuccinate y el CO 2 son los productos de degradacin que han sido identificados en estudios de campo y de laboratorio. El mayor metabolito en suelos es el Malatin beta-monoacido y ha sido reportado con un tiempo de vida media de 4 a 6 das (Newhart, 2006). En el agua, el Malatin es susceptible de hidrlisis y su semidesintegracin vara entre 0,2 semanas a pH de 8 y 21 semanas a pH de 6 (FAO, 2000). EVALUACIN DE MEZCLAS COMPOST INMADURO/SUELO DE MORAVIA Y FUENTES DE NUTRIENTES PARA LA DEGRADACIN DE LOS PESTICIDAS CLORPIRIFOS, MALATIN Y METIL PARATIN SERGIO AUGUSTO UPEGUI SOSA
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3.3.3 Persistencia en el suelo La persistencia es larga en condiciones secas, arena, bajo nitrgeno y condiciones cidas; y es degradado ms rpidamente en el suelo que en la fase acuosa. Se considera que la vida del Malatin puro en el suelo vara de 24 horas a un promedio de 6 das. Montenegro (2001), considera que se extiende hasta los 25 das. La tasa de degradacin se incrementa cuando aumenta la humedad y pH o contenido de carbonatos (Mosquera, 2007). 3.4 METIL PARATIN 3.4.1 Propiedades del Metil Paratin El Metil Paratin es un slido de color entre blanco y tostado. Sufre una rpida hidrlisis en medios alcalinos, pero se hidroliza lentamente en cidos dbiles (Spectrum Laboratory, 2003; EPA, Environmental Protection Agency, 1984). Tabla 5. Propiedades del Metil Paratin Nombre Qumico O,O-dimethyl O-4-nitrophenyl phosphorothioate Formula Molecular C 8 H 10 NO 5 PS Nmero CAS 298-00-0 Peso Molecular (g/mol) 263.21 Punto de fusin (C) 3738 Punto de Ebullicin (C) 143 @ 0.05 mm Hg Presin de vapor (mPa) 1,3 @ 20C Densidad (g/mL) 1,4 Solubilidad en agua (mg/L) 55-60 @ 20C Coef. de particin (Log Kow) 3.52-3.84 Coef. de adsorcin (Koc) 5100 (ATSDR, 2001) 3.4.1 Degradacin del Metil Paratin El Metil Paratin se degrada en el suelo principalmente como resultado de procesos biolgicos (biodegradacin), aunque tambin se puede presentar la transformacin qumica, por foto-degradacin (Spectrum Laboratory, 2003; WHO, World Health Organization, 1993). La degradacin aumenta con la temperatura y la exposicin a la luz solar. La principal excepcin corresponde a los derrames, en los que la degradacin slo se produce al cabo de muchos aos, siendo la principal ruta de transformacin la fotolisis (Spectrum Laboratory, 2003; FAO, 2000). EVALUACIN DE MEZCLAS COMPOST INMADURO/SUELO DE MORAVIA Y FUENTES DE NUTRIENTES PARA LA DEGRADACIN DE LOS PESTICIDAS CLORPIRIFOS, MALATIN Y METIL PARATIN SERGIO AUGUSTO UPEGUI SOSA
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Los principales procesos empleados para eliminar el compuesto del agua son la biodegradacin y la fotlisis. En un perodo de 2 a 4 semanas tiene lugar el 100 por ciento de la degradacin. La hidrlisis se produce (del 5 al 11 por ciento) en 4 das en ros y ms lentamente en sistemas marinos. El Metil Paratin se degrada mediante fotlisis directa en aguas naturales (semidesintegracin de 8 das en verano y de 38 das en invierno) (FAO, 2000; EPA, 1984). La degradacin ocurre ms rpidamente en 1) suelos poco permeables que en suelos permeables, y 2) en suelos hmedos que en suelos secos (Spectrum Laboratory, 2003). La degradacin en suelos poco permeables ocurre principalmente por la reduccin del grupo nitro. La hidrolisis ocurre en mayor medida bajo condiciones de buena permeabilidad (WHO, 1993). El Metil Paratin puede ser degradado en el ambiente por hidrlisis a p- nitrofenol y cido dimetil tiofosfrico, o por reduccin del grupo nitro a Metil Amino-paratin. Otro producto de degradacin, generado por la desulfuracin oxidativa, es el Metil Paraoxn; el cual es el subproducto de mayor actividad en la inhibicin de la actividad de la acetilcolinesterasa (New Jersey Department of Health and Senior Services, 1999; WHO, 1993). 3.4.2 Movilidad del Metil Paratin en el ambiente Se considera que el Metil Paratin es moderadamente mvil en el suelo. La adsorcin no parece estar relacionada con el contenido orgnico del suelo, pero el contenido de arcilla puede ser importante (FAO, 2000). Debido a que el Metil Paratin tiene una adsorcin moderada en el suelo, y es rpidamente degradado, es poco probable que se presente lixiviacin a aguas subterrneas. Sin embargo podra tener lugar la lixiviacin a aguas subterrneas en suelos expuestos a grandes cantidades del pesticida, tal como en un derrame accidental o la acumulacin de desechos, en particular, en suelos con baja capacidad de adsorcin (EPA, 1984). Se considera que la volatilizacin y la evaporacin no son procesos de transporte importantes (Spectrum Laboratory, 2003).
3.5 BIORREMEDIACIN EVALUACIN DE MEZCLAS COMPOST INMADURO/SUELO DE MORAVIA Y FUENTES DE NUTRIENTES PARA LA DEGRADACIN DE LOS PESTICIDAS CLORPIRIFOS, MALATIN Y METIL PARATIN SERGIO AUGUSTO UPEGUI SOSA
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La biorremediacin de suelos es una estrategia biotecnolgica de carcter ambiental, la cual utiliza la biodegradacin acelerada, desarrollada por sistemas biolgicos tales como bacterias, hongos, algas, consorcios microbianos, entre otros, para degradar contaminantes como hidrocarburos o plaguicidas y/o sus productos de degradacin que se acumulan en los suelos. Esta tcnica puede emplear microorganismos autctonos o alctonos para llevar a cabo la transformacin de los contaminantes (Universidad de Extremadura, 2004). Este proceso puede presentarse en los agro-ecosistemas naturalmente como consecuencia del uso extensivo y repetido de un pesticida para el control de plagas y enfermedades sin rotacin de cultivos (Vidali, 2001). sta es una tcnica amigable con los ecosistemas y es mucho ms especfica, por lo que las rutas de degradacin y la eficiencia varan de acuerdo al tipo de pesticida, concentracin y tipo de formulacin empleado (DEQ, 1998). De acuerdo con (Vidali, 2001) y Atlas & Unterman (1999), los parmetros crticos a considerar en un tratamiento biolgico son: el tipo y concentracin de contaminante, la concentracin de microorganismos, la concentracin de nutrientes, la aireacin, las condiciones macroambientales, la presencia de inhibidores y la biodisponibilidad del contaminante. A continuacin se explican los efectos de algunos de los factores mencionados, sobre la bio-degradacin de los contaminantes en el suelo. 3.5.1 Efecto de la actividad microbiana en el proceso de biorremediacin Los microorganismos pueden degradar hidrocarburos y otras sustancias contaminantes en forma de cultivos puros (especie nica) o cultivos mixtos (varias especies que mantienen una relacin simbitica). Cuando se trata de este ltimo caso, el tratamiento biolgico implica una compleja interaccin de especies microbianas (DEQ, 1998). La velocidad de crecimiento y la utilizacin de sustratos es generalmente superior en cultivos mixtos que en cultivos puros (Interstate Technology and Regulatory Council, 2002). En los ambientes naturales, los microorganismos poseen una notable capacidad de adaptacin, lo que se favorece por su integracin en poblaciones dentro de una comunidad. La base de este fenmeno est, por una parte, en la adquisicin de nuevas capacidades metablicas mediante mecanismos de variacin gentica convencionales (mutacin, conversin gnica, duplicacin, transposicin) o intercambio de genes y, por otra, en la posibilidad de EVALUACIN DE MEZCLAS COMPOST INMADURO/SUELO DE MORAVIA Y FUENTES DE NUTRIENTES PARA LA DEGRADACIN DE LOS PESTICIDAS CLORPIRIFOS, MALATIN Y METIL PARATIN SERGIO AUGUSTO UPEGUI SOSA
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complementacin de las actividades metablicas de los distintos grupos microbianos (Snchez & Rodrguez, 2004; DEQ, 1998). En una mezcla de poblaciones, los consumidores primarios inician el proceso de degradacin y los consumidores secundarios utilizan los productos metablicos de los primeros para degradarlos (Singer & Crohn, 2002). Adems pueden facilitar el crecimiento de los primarios, suministrndoles productos metablicos (como factores de crecimiento), eliminando txicos mediante cometabolismo y produciendo intercambio de material gentico (Ercol, et al., 2001). El primer paso suele ser realizado por bacterias hetertrofas y actinomicetos, seguidos de bacterias auttrofas, hongos, incluidos basidiomicetos, y protozoos especficos. De acuerdo con Mosquera (2007) y la Universidad de Extremadura (2004), los pesticidas en el suelo son principalmente degradados por la actividad microbiana, a mayor actividad microbiana ms rpido ocurrir la degradacin del compuesto contaminante. Sobre la degradacin de contaminantes por cultivos puros, Walter (1997) y Atlas & Unterman (1999), mencionan el uso de tcnicas de biorremediacin en las que se suelen utilizar microorganismos aclimatados modificados genticamente, con el fin de mejorar la biodegradacin, proceso tambin llamado: Bioaumentacin. Segn Alexander (1999), estas tcnicas generalmente funcionan bien en condiciones de laboratorio o biorreactores, pero en ambientes externos su implantacin depende de una serie de inconvenientes que pueden volver complicada la aplicacin de estas tcnicas, entre los inconvenientes se encuentran: La capacidad de carga de muchos ambientes, viene determinada por factores tales como la presencia de toxinas, nutrientes y condiciones ambientales, movilidad y/o distribucin de los microorganismos y la presencia de abundante materia orgnica. Por lo que los microorganismos introducidos debern tener capacidad para adaptarse a estas condiciones. Los microorganismos aadidos deben sobrevivir a los depredadores y competir con xito con la poblacin autctona antes de ocupar los nichos potenciales. 3.5.1.1 Efecto de consorcios microbianos EVALUACIN DE MEZCLAS COMPOST INMADURO/SUELO DE MORAVIA Y FUENTES DE NUTRIENTES PARA LA DEGRADACIN DE LOS PESTICIDAS CLORPIRIFOS, MALATIN Y METIL PARATIN SERGIO AUGUSTO UPEGUI SOSA
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El cometabolismo es una actividad importante desde el punto de vista medioambiental, con matices complejos. Implica esencialmente, el metabolismo "gratuito", es decir, no til para el crecimiento u obtencin de energa, de un substrato secundario (compuesto contaminante) por medio de la generacin de enzimas, generndose nuevos productos, con caractersticas diferentes en comparacin con los compuesto iniciales (Vidali, 2001; DEQ, 1998). La existencia de diversidad microbiana en el suelo hace factible la degradacin posterior de esos productos mediante reacciones sintrficas y, en ltima instancia, su mineralizacin (descartando la posibilidad, a tener en cuenta, de que dichos productos sean txicos, y/o persistentes) (Wackett & Hershberger, 2001; Alexander, 1999). El trmino de cometabolismo sintrofa, por tanto, implica la accin concertada de diferentes microorganismos sobre un sustrato mediante la combinacin de sus actividades metablicas, lo que permite su degradacin (Snchez & Rodrguez, 2004). Este proceso no sera posible en presencia de microorganismos aislados. De acuerdo con Snchez & Rodrguez (2004), poblaciones mixtas (que a veces se denominan consorcios) presentan gran importancia para la degradacin ms efectiva de los contaminantes orgnicos; reflejndose esto, en el creciente aumento de datos experimentales, en los que la biorremediacin, tanto a nivel de laboratorio como en campo, est produciendo resultados esperanzadores. 3.5.2 Efecto del pH en los procesos de biorremediacin El pH afecta significativamente la actividad microbiana. El crecimiento de la mayor parte de los microorganismos es mximo dentro de un intervalo de pH situado entre 6 y 8. As mismo, el pH tambin afecta directamente en la solubilidad del fsforo y en el transporte de metales pesados en el suelo. La acidificacin o la reduccin del pH en el suelo, se puede realizar adicionando azufre, aluminio, cal, entre otros compuestos (Maroto & Rogel, 2000). 3.5.3 Efecto de la materia orgnica en la biorremediacin La materia orgnica tiene una importante participacin dentro del suelo en la retencin y mineralizacin de plaguicidas. Estas caractersticas junto con la humedad, aireacin y temperatura adecuadas, convierten a la materia orgnica en el volumen de suelo donde las condiciones para la actividad biolgica son ms favorables para la disipacin e inactivacin de los xenobiticos (Hang, Destino de los Plaguicidas en el Ambiente Suelo, 2003). EVALUACIN DE MEZCLAS COMPOST INMADURO/SUELO DE MORAVIA Y FUENTES DE NUTRIENTES PARA LA DEGRADACIN DE LOS PESTICIDAS CLORPIRIFOS, MALATIN Y METIL PARATIN SERGIO AUGUSTO UPEGUI SOSA
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En la superficie del suelo, las condiciones favorecen las vas de mineralizacin y de estabilizacin de un xenobitico. En el subsuelo, el contenido de materia orgnica decrece, y esto se refleja en menor degradacin y menor retencin, de modo que aumenta la persistencia y los riesgos de contaminacin por transporte a aguas subterrneas (Hang, Destino de los Plaguicidas en el Ambiente Suelo, 2003). Segn Bollag et al. (1992), la materia orgnica del suelo es la fraccin ms activa en la formacin de residuos ligados. La efectividad de este mecanismo est estrechamente vinculada con las transformaciones de la materia orgnica, con las que interacta el compuesto. La distribucin de la materia orgnica en el perfil, con distintos grados de transformacin, es otro factor que modifica estas interacciones (Barriuso & Koskinen, 1996). Se han determinado diferencias en la capacidad de formacin de residuos ligados de atrazina dentro de un mismo suelo entre las distintas fracciones granulomtricas, como tambin entre suelos con distinto manejo, lo que afecta la distribucin del carbono orgnico (Hang, 2002). Esto provoca modificaciones en la capacidad de formacin de residuos ligados, y se considera que tambin modifica la estabilidad en el tiempo de los residuos ligados formados (Hang, Destino de los Plaguicidas en el Ambiente Suelo, 2003). 3.5.4 Efecto de los nutrientes en la biorremediacin Los nutrientes son substancias qumicas necesarias para el desarrollo de los microorganismos y se pueden dividir en cuatro grupos: fuentes de Carbono, Fsforo, Nitrgeno y oligoelementos o elementos minoritarios (micronutrientes) (Interstate Technology and Regulatory Council, 2002; Vidali, 2001). La dosificacin de Nitrgeno y Fsforo se realiza en funcin de la concentracin de contaminante de acuerdo a una relacin que vincula la relacin C:N:P, que vara segn los autores entre 100:10:1 a 100:2:0,2, de acuerdo con: 1) la tcnica con que se mida la concentracin del contaminante, y que aporta un 80 % de su masa como carbono al proceso, 2) la velocidad de degradacin esperada y 3) un balance de masa del material en tratamiento y del aporte de cada fertilizante con los nutrientes presentes considerados (Ercol, et al., 2001). El metabolismo microbiano est orientado a la reproduccin de los organismos, y stos requieren que los constituyentes qumicos se encuentren disponibles para su asimilacin y sintetizacin (Maroto & Rogel, 2000). EVALUACIN DE MEZCLAS COMPOST INMADURO/SUELO DE MORAVIA Y FUENTES DE NUTRIENTES PARA LA DEGRADACIN DE LOS PESTICIDAS CLORPIRIFOS, MALATIN Y METIL PARATIN SERGIO AUGUSTO UPEGUI SOSA
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En la Figura 10 se muestran los requerimientos y productos generados por microorganismos.
3.5.4.1 Carbono En el caso de la biodegradacin de un contaminante, la fuente principal de carbono es el mismo contaminante, y proporciona el carbono necesario para producir compuestos celulares, productos metablicos (CO 2 , agua, enzimas) y nuevos microorganismos (Carillo, 2003; Ercol, et al., 2001). 3.5.4.2 Nitrgeno El Nitrgeno es el elemento necesario para la produccin de aminocidos y enzimas. Dado que la utilizacin de estos compuestos es muy rpida, los suelos no alcanzan a cubrir todas las necesidades del proceso, y debe ser incorporado bajo la forma de fertilizantes de uso agrcola como urea o sulfato de amonio. Tambin se pueden utilizar fertilizantes de origen orgnico como estircol (Ercol, et al., 2001). 3.5.4.3 Fsforo El fsforo interviene en la formacin de compuestos energticos dentro de la clula, que se utilizan en los procesos de reproduccin y degradacin. Interviene en diferentes sistemas enzimticos, y es particularmente importante en la fermentacin de los carbohidratos estructurales, principalmente de la celulosa (Durand et al., 1983 citado por Ramirez & Meschy, 2005). Forma parte del material celular, como cidos nucleicos, ATP, fosfolpidos de la membrana celular y cido teicoico de las paredes celulares de las bacterias Gram+ (Ramirez & Meschy, 2005). Dado que la utilizacin de este compuesto es muy rpida, algunos suelos no alcanzan a cubrir todas las necesidades del proceso y debe ser incorporado bajo la forma de fertilizantes de uso agrcola como fosfato diamnico o fosfato triclcico. Tambin se pueden utilizar fertilizantes de origen orgnico como estircol. Este parmetro es de importancia crtica para el buen desarrollo del proceso biolgico (Vidali, 2001). EVALUACIN DE MEZCLAS COMPOST INMADURO/SUELO DE MORAVIA Y FUENTES DE NUTRIENTES PARA LA DEGRADACIN DE LOS PESTICIDAS CLORPIRIFOS, MALATIN Y METIL PARATIN SERGIO AUGUSTO UPEGUI SOSA
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Figura 10. Interaccin de los microorganismos con su ambiente (Rodrguez & Snchez, 2004) 3.5.4.4 Micronutrientes La fuente de oligoelementos constituye un conjunto variado de elementos como hierro, cobre, zinc, azufre, cobalto, manganeso, magnesio, calcio y otros compuestos; que dependen del tipo de microorganismo y del proceso que se realiza. Las concentraciones de los mismos son muy pequeas (menos de 1 ppm en total). Normalmente no se incorporan en los procesos de campo ya que el suelo provee estos elementos en cantidades suficientes, aunque en algunos casos se han debido incorporar algunos gramos por hectrea para tratar algn contaminante muy especfico o en los que el suelo no posea ese elemento (Ercol, et al., 2001). El efecto de la adicin de nutrientes ha sido evaluado por varios autores para la degradacin de compuestos derivados del petrleo (Sublette et al., 2007; Juhasz et al., 2005; Npoles et al., 2005), centrando su atencin principalmente al hallazgo de un balance adecuado en la relacin C:N:P, que permita mayores eficiencias de degradacin de estos compuestos y se pueda aplicar a condiciones de campo. Esta relacin es alterada por los altos contenidos de carbono y las bajas concentraciones de nutrientes que presentan los compuestos derivados del petrleo, lo que ocasiona limitaciones en la biorremediacin de suelos contaminados con dichos hidrocarburos. EVALUACIN DE MEZCLAS COMPOST INMADURO/SUELO DE MORAVIA Y FUENTES DE NUTRIENTES PARA LA DEGRADACIN DE LOS PESTICIDAS CLORPIRIFOS, MALATIN Y METIL PARATIN SERGIO AUGUSTO UPEGUI SOSA
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En los estudios citados por (Singh & Ward, 2004), se han reportado diferentes relaciones C:N:P que han generado resultados exitosos en procesos de biorremediacin, entre los cuales se encuentra la relacin 100:10:1 para la degradacin de diferentes compuestos orgnicos (Frankenberger, 1992), la relacin 60:1 (C:N) y 800:1 (C:P) para la degradacin de petrleo (Dibble & Bartha, 1979) y un rango entre 9:1 y 200:1 (C:N) para degradacin de residuos de aceites y lodos (Morgan & Watkinson, 1989). Entre los estudios reportados, se encuentran el de Anwar et al. (2009), quienes estudiaron el efecto de la adicin de extracto de levadura y caldo nutritivo en la degradacin de Clorpirifos por una bacteria aislada de la especie Bacillus pumilus strain C2A1, adems, evaluaron la Glucosa como fuente adicional de carbono. Encontrando una mayor velocidad en la degradacin del Clorpirifos en el medio que contena glucosa como fuente adicional de carbono. Los medios que contenan nutrientes mostraron una capacidad para degradar el Clorpirifos menor que el medio con glucosa, pero mayor que el medio que contena Clorpirifos como nica fuente de carbono y energa. Xie et al. (2007) evaluaron el efecto de la adicin de fertilizantes a base de PK, NK y NPK, adems de una enmienda orgnica en la degradacin de Cipermetrin, un pesticida piretroide, y encontraron que el tratamiento con NK gener un aumento en la persistencia del pesticida en el suelo, mientras que los dems tratamientos no presentaron diferencia alguna con el control. Por su parte, Akhtar et al. (2004) estudiaron la persistencia de Clorpirifos y Fenpropatrin en un suelo, adicionados solos o con los fertilizantes sintticos: Urea, DAP, SOP y fertilizante foliar Polidol, durante dos meses, y encontraron que la adicin de fertilizantes no mostr efecto alguno sobre la persistencia de estos compuestos. Senapati y Padhihari (2002), evaluaron un suelo de Bhubaneswar, india tratado con Urea (46% Nitrgeno), Superfosfato simple (16% P 2 O 5 ) y muriato de potasio (60% de K 2 O) como fertilizantes inorgnicos, y con estircol de corral como enmienda orgnica (adems de la adicin de limo), para la degradacin de Phorate, un insecticida y acaricida organofosforado. Encontrando mayores tasas de degradacin de Phorate en el tratamiento con enmienda orgnica, por encima de todos los fertilizantes inorgnicos, los cuales degradaron el insecticida en el orden: fsforo, potasio, nitrgeno. La adicin de limo mostr aumento de la degradacin de phorus en todos los tratamientos (en comparacin con el control). EVALUACIN DE MEZCLAS COMPOST INMADURO/SUELO DE MORAVIA Y FUENTES DE NUTRIENTES PARA LA DEGRADACIN DE LOS PESTICIDAS CLORPIRIFOS, MALATIN Y METIL PARATIN SERGIO AUGUSTO UPEGUI SOSA
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Rajagopal et al. (1983), encontraron que la adicin de amonio a un medio mineral retard la degradacin del pesticida Carbaril por culturas microbianas enriquecidas con micro-flora del suelo. Rajaram et. al (1978), encontraron que la aplicacin de nitrato de potasio o sulfato de amonio a un suelo inundado e inoculado con culturas enriquecidas capaces de hidrolizar Paratin, inhibieron la hidrlisis del insecticida. Agnihotri (1978) coment que la degradacin de Disulfon y Forato en suelo fue ligeramente menor que con la adicin de fertilizante. Sin embargo, en condiciones in situ la degradacin fue mucho mayor con la adicin de fertilizantes, pero esto fue atribuido al efecto que el fertilizante tuvo sobre el crecimiento y desarrollo de las plantas que potenci la degradacin. Por ltimo, Siddaramappa & Seiber (1979), evidenciaron que la aplicacin de sulfato de amonio y urea tuvo muy poca influencia en la degradacin de Carbofuran en un suelo de arroz en Filipinas. Castaeda (2005), evalu la adicin de Nitrgeno a diferentes dosis (6, 24 y 32 ppm) en la degradacin de Clorpirifos en un suelo agrcola, y encontr que a dosis de nitrgeno de 6 ppm no se observ efecto alguno en la degradacin de este compuesto, pero a una concentracin de 24 ppm o superior, se evidenci un aumento notorio en la velocidad de degradacin del Clorpirifos. Perrin et al. (2001), evaluaron el efecto del uso de lodo generado a partir de un proceso de tratamiento de aguas residuales como enmienda orgnica y de un fertilizante inorgnico a base de nitrgeno y fosfato en la degradacin del herbicida Isoproturon, obteniendo mejores porcentajes de degradacin con el tratamiento a base de nitrgeno y fsforo que con el tratamiento basado en el lodo. 3.5.5 Efecto de la humedad del suelo en la biorremediacin El agua es importante para el desarrollo y crecimiento de los microorganismos, el agua forma parte del protoplasma bacteriano y sirve como medio de transporte de compuestos orgnicos, nutrientes y oxgeno a la clula. Es conveniente mantener una humedad del orden del 70 % de la capacidad de campo 1 , Un exceso de humedad produce inhibicin del proceso al reducir la concentracin de oxgeno, o incluso generarse condiciones anaerbicas. Por su parte, un dficit de humedad impide el desarrollo de los microorganismos (Vidali, 2001; Ercol, et al., 2001; Maroto & Rogel, 2000).
1 Masa de agua que admite el suelo hasta la saturacin, depende de cada tipo de suelo. EVALUACIN DE MEZCLAS COMPOST INMADURO/SUELO DE MORAVIA Y FUENTES DE NUTRIENTES PARA LA DEGRADACIN DE LOS PESTICIDAS CLORPIRIFOS, MALATIN Y METIL PARATIN SERGIO AUGUSTO UPEGUI SOSA
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Schroll et al. (2006), cuantificaron el efecto de la humedad del suelo en la mineralizacin de pesticidas y encontraron que: 1) en suelos con un potencial de agua -20 MPa, ocurri una mnima mineralizacin del pesticida; 2) existe una correlacin linear entre el incremento de la humedad del suelo, y el incremento relativo de la mineralizacin del pesticida; 3) La optima mineralizacin del pesticida se obtuvo en un suelo con un potencial de agua de -0.015 MPa, y 4) cuando la humedad del suelo se aproxim a la capacidad de campo, la mineralizacin del pesticida fue considerablemente reducida. Debido a que, tanto los pesticidas como los suelos elegidos variaron en un amplio rango, los autores proponen que la relacin observada en este estudio puede tambin ser vlida para la degradacin aerbica de otros compuestos orgnicos en suelos nativos y artificiales. 3.6 BIORREMEDIACIN CON COMPOST La tecnologa de Biorremediacin con Compostaje se fundamenta en la estimulacin de la actividad biodegradadora de las poblaciones microbianas presentes en un suelo contaminado, mediante la adicin de compost, segn las caractersticas y requerimientos de cada suelo contaminado a tratar y enriquecido con poblaciones microbianas degradadoras de los contaminantes presentes en dicho suelo (Singer & Crohn, 2002; EPA, 1998; INKOA SISTEMAS S.L., S.F.). Los suelos contaminados suelen tener una actividad microbiana baja, bsicamente debido a condiciones ambientales desfavorables, tales como una baja concentracin de materia orgnica, oxgeno, nitrgeno y/o fsforo, etc (Mora, 2006). As, la adicin de compost, durante el proceso de tratamiento in- situ de los suelos contaminados, con poblaciones microbianas biodegradadoras y con un alto porcentaje de materia orgnica biodegradable, provocar un aumento de la capacidad biorremediadora intrnseca de cada suelo contaminado, acelerando as el proceso de recuperacin del emplazamiento (EPA, 1998; INKOA SISTEMAS S.L., S.F.). Otras tecnologas de remediacin estn basadas en la inoculacin de microorganismos exgenos, siendo extremadamente dificultosa la adaptabilidad de estos microorganismos a un medio tan hostil como es un suelo contaminado. Adems, estos microorganismos exgenos deben competir por los escasos recursos con los microorganismos autctonos, perfectamente EVALUACIN DE MEZCLAS COMPOST INMADURO/SUELO DE MORAVIA Y FUENTES DE NUTRIENTES PARA LA DEGRADACIN DE LOS PESTICIDAS CLORPIRIFOS, MALATIN Y METIL PARATIN SERGIO AUGUSTO UPEGUI SOSA
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adaptados a las condiciones ambientales de un suelo contaminado (INKOA SISTEMAS S.L., S.F.; Snchez & Rodrguez, 2004). Adems de reducir los niveles de contaminacin, el compost adelanta la tarea de mejoramiento de las condiciones del suelo para el crecimiento y fortalecimiento vegetal. En este rol, el compost provee acondicionamiento del suelo, y tambin provee nutrientes a una amplia variedad de vegetacin (EPA, 1998; BIOAGRO, S.F.). Segn EPA (1998), en un estudio, en el cual se remedi un suelo que contena 3000 partes por milln (ppm) de herbicida dicamba a niveles no detectables en 50 das mezclando chips de madera y compost maduro en el suelo en una relacin compost:suelo contaminado (10:90). De acuerdo con los autores, el dicamba se degrada eventualmente en el suelo, pero el proceso lleva aos en vez de das. Otras ventajas del uso de compost, en comparacin con otros procesos de biorremediacin son (Singer & Crohn, 2002): Consigue niveles finales de descontaminacin ms altos, debido a la presencia de un inculo bioaumentado de microorganismos degradadores en el compost, acelerando, as, el proceso de remediacin. El tratamiento tiene una duracin menor, comparado con otros procesos de remediacin. Es una tecnologa verstil, puesto que se desarrolla a medida, segn los requerimientos especficos de cada contaminante. Necesita menores requerimientos de manipulacin y mantenimiento, lo que reduce los costos de tratamiento. 3.7 ORIGEN DEL SUELO DE MORAVIA Moravia es un barrio ubicado en la Comuna 4, al nororiente de la ciudad entre las estaciones del Metro: Universidad y Caribe. Es una de las zonas con procesos de ocupacin espontnea ms arraigados desde los aos 60, influenciados principalmente por la presencia de la Estacin del Ferrocarril: El Bosque, y la extraccin de materiales del ro Medelln. Cuenta con una superficie de 43.7 hectreas y est conformado por los sectores de El Bosque, Moravia, El Morro, El Oasis Tropical y La Herradura (G4moravia, 2007; Alcalda de Medelln, 2006). EVALUACIN DE MEZCLAS COMPOST INMADURO/SUELO DE MORAVIA Y FUENTES DE NUTRIENTES PARA LA DEGRADACIN DE LOS PESTICIDAS CLORPIRIFOS, MALATIN Y METIL PARATIN SERGIO AUGUSTO UPEGUI SOSA
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En 1976 el alcalde de la poca, debi resolver el problema del depsito de basuras de la ciudad y dado que en este lote haba un gran hueco dejado por la extraccin de material de playa que all tena lugar de tiempo atrs, decidi disponerlas all con carcter provisional (El Mundo, 2006). Moravia entonces, se convirti en el depsito de basuras de Medelln y de sus municipios vecinos. Y fue muy reconocido en la ciudad por tres cosas: desechos, recicladores y por ser cuna de uno de los botaderos de cadveres ms tradicionales de Medelln (Medina, 2006). Este uso del suelo motiv a la invasin del predio aledao por parte de familias sin hogar de muy bajos ingresos, quienes vieron all la oportunidad para resolver su problema de vivienda. Hoy en da Moravia es un barrio de invasin habitado por gran cantidad de gente que tiene sus casas construidas sobre una montaa de cenizas, desechos industriales, y acumulacin de metano (Medina, 2006). En la fase inicial de operacin de este vertedero, se depositaban unas cien toneladas diarias de basura, cantidad que con el tiempo fue aumentando (AMVA, 2006); dando como resultado para 1983 la produccin de una montaa de basuras con un rea de 10 hectreas. Hoy en da, an se presenta generacin de lixiviados como producto de las aguas que se infiltran en el terreno, arrastrando los componentes qumicos y txicos que se producen con la descomposicin de la materia orgnica, que aunque es normal que se presenten, en el caso de El Morro son altamente contaminantes porque all tambin se depositaban residuos peligrosos, que poseen metales pesados como el plomo (Agencia de Noticias UN, 2008; El Mundo, 2006; AMVA, 2000). Esta rea ha sido catalogada como: de riesgo no recuperable y por tal motivo se ha establecido su desalojo a travs de un plan de reubicacin de los asentamientos humanos en los sectores con mayor potencial para la generacin de efectos adversos a la salud (Oasis y El Morro), ests zonas quedaron a cargo del rea Metropolitana del Valle de Aburr, como autoridad ambiental competente, para su manejo y cuidado de forma tal que se evite una nueva ocupacin (AMVA, 2007). 3.8 EFECTO CRUZADO DEGRADACIN CRUZADA La habilidad de algunos microorganismos del suelo para metabolizar estructuras qumicas relativamente similares, de compuestos introducidos al EVALUACIN DE MEZCLAS COMPOST INMADURO/SUELO DE MORAVIA Y FUENTES DE NUTRIENTES PARA LA DEGRADACIN DE LOS PESTICIDAS CLORPIRIFOS, MALATIN Y METIL PARATIN SERGIO AUGUSTO UPEGUI SOSA
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suelo ha sido reconocida y referenciada como adaptacin cruzada o degradacin cruzada (Kearney & Kellogg, 1985). Hoy en da hay varias evidencias que la adaptacin cruzada no es solo un fenmeno presentado en condiciones idealizadas de laboratorio, o algo exclusivo para los herbicidas ms biodegradables en ciertas condiciones de suelo, sino que puede ser un problema agronmico con unas dimensiones poco conocidas (Kearney & Kellogg, 1985). En ciertas regiones geogrficas se ha evidenciado que diferentes pesticidas aplicados a un mismo suelo, han fallando en su funcin de controlar las plagas objetivo. Los suelos en los que ocurre este fenmeno, han sido llamados suelos problema, y entre los parmetros responsables de esta caracterstica se encuentran principalmente involucradas las poblaciones microbianas extremadamente eficientes para degradar estos pesticidas. Las variables que hacen que se produzcan estos problemas en el suelo incluyen: El uso repetido del mismo pesticida peridicamente sobre el mismo suelo. Las similitudes qumicas de los pesticidas usados sobre el mismo cultivo. Se ha sugerido que la similitud entre estructuras qumicas de diferentes pesticidas, puede inducir a la produccin de enzimas capaces de degradar estos compuestos qumicos, adicionados simultneamente o subsecuentemente al mismo suelo (Kearney & Kellogg, 1985). Por su parte en un estudio realizado por Karpouzas et al. (2005), se lograron aislar dos bacterias capaces de degradar el nematicida Cadusafos de un suelo tratado con este producto para el control de plagas durante varios aos. Adems de lograr obtener una alta eficiencia de degradacin del nematicida con estas bacterias, tambin se encontr que stas podan degradar Etoprofos, otro nematicida con una estructura qumica similar a la del Cadusafos. Los enlaces de pesticidas, que parecen ser susceptibles a la degradacin cruzada en los suelos problema incluyen: Carbamato (NCOO), Urea (NCON), amida (NCOC), ester (COOC), tiocarbamato (NCOS), y ditiocarbamato (NCSS). Singh et al. (2005), agrega como pesticidas susceptibles las dicarboxiamidas y los isotiocianatos. EVALUACIN DE MEZCLAS COMPOST INMADURO/SUELO DE MORAVIA Y FUENTES DE NUTRIENTES PARA LA DEGRADACIN DE LOS PESTICIDAS CLORPIRIFOS, MALATIN Y METIL PARATIN SERGIO AUGUSTO UPEGUI SOSA
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Una vez establecida la degradacin acelerada, los microorganismos involucrados en este proceso pueden mantener esta capacidad por ms de un ao (Singh et al., 2005; Karpouzas et al., 2005). La degradacin cruzada ha llevado a investigar sobre prcticas agronmicas, o inhibidores necesarios, para proteger el potencialmente gran nmero de pesticidas de futuras perdidas de efectividad. 3.9 MTODOS PARA LA EXTRACCIN DE PESTICIDAS La extraccin de los pesticidas hace parte del mtodo de evaluacin analtica de los mismos y es un procedimiento complicado cuando se trabaja con matrices complejas como el suelo (Babic et al., 1998). La finalidad de toda tcnica de extraccin es permitir la transferencia cuantitativa de los pesticidas que se encuentran en una muestra de suelo a una fase liquida (Tor et al., 2006); utilizndose comnmente como fase lquida los solventes orgnicos; lo cual va seguido, por lo general, de procedimientos para la limpieza y remocin de interferencias (p. e. filtracin o decantacin) segn el mtodo de anlisis empleado (Nollet y Signh, 2009). Segn Tor et al. (2006), los mtodos de extraccin con solventes orgnicos ms utilizados son: extraccin con agitacin (Kleibhmer, 2001), Soxhlet, Sonicacin (Kleibhmer, 2001), extraccin asistida por microondas (MAE, por sus siglas en ingls) (Kramer y Ryan, 2000; Onuska y Terry, 1993), extraccin con fluidos supercrticos (SFE por sus siglas en ingls) (Gonalves et al., 2006; Reverchon y De Marco, 2006) y extraccin con lquidos presurizados (PLE, por sus siglas en ingls) (Antunes et al., 2008; Hussen et al., 2006). Siendo las tres primeras, las tcnicas ms usadas (Babic et al., 1998) por su simplicidad, eficacia, amplio uso y aprobacin por organizaciones como la U.S. EPA (United States Environmental Protection Agency) (Saleh y Sanagi, 2009; Sanghi y Kannamkumarath, 2004). 3.9.1 Extraccin con agitacin En esta tcnica de extraccin, las muestras slidas (ej.: suelo, sedimentos, etc.) son dispuestas en un frasco junto con el solvente que atrapar el analito, el sistema completo es agitado usando un agitador mecnico por un periodo definido de tiempo, usualmente alrededor de una hora. Se pueden realizar repetidas extracciones para remover cuantitativamente el analito desde la muestra, y luego se combinan los extractos antes del anlisis. Como la muestra est en contacto con el slido, la muestra puede requerir de procesos como la filtracin para deshacerse del material partculado (Kleibhmer, 2001). EVALUACIN DE MEZCLAS COMPOST INMADURO/SUELO DE MORAVIA Y FUENTES DE NUTRIENTES PARA LA DEGRADACIN DE LOS PESTICIDAS CLORPIRIFOS, MALATIN Y METIL PARATIN SERGIO AUGUSTO UPEGUI SOSA
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3.9.2 Extraccin por sistema Soxhlet La extraccin con Soxhlet se fundamenta en la ebullicin del solvente extractor, que se condensa a reflujo y cae sobre un recipiente que contiene la muestra en su interior, quedando en contacto con sta hasta que se alcanza el tiempo de retencin (Tr) del recipiente y vuelve a caer el solvente (con el material retenido) al baln, este proceso se repite la cantidad de veces necesaria para que la muestra quede agotada del analito, el cual se va concentrando en el baln del solvente (Nollet y Signh, 2009). De acuerdo con Nuez (2008), en esta tcnica los principales factores a tener en cuenta son: 1) La cantidad de solvente a utilizar, la cual debe ser la necesaria para que no quede seco el baln inferior porque de esa manera, se seca la muestra y se quema se puede producir una explosin de los vapores cuando caiga el lquido rebosado sobre el vidrio recalentado. 2) La seleccin del solvente, hay una temperatura mxima y mnima de ebullicin en la que el equipo funciona adecuadamente. En el extremo inferior se encuentran los 40 C (muy cercano a la temperatura ambiente particularmente en los climas clidos). Con respecto al extremo superior debe ternerse en cuenta que a medida que aumenta el punto de ebullicin del solvente disminuye significativamente el caudal que se evapora y por ende la velocidad de extraccin. 3) Tipo de solvente, los de carcter no polar suelen tener alguna dificultad en drenar puesto que no mojan el vidrio. Ello es frecuente con los derivados clorados como el diclorometano y el cloroformo y los hidrocarburos superiores al hexano. Segn Nollet y Signh (2009) la extraccin con sistema Soxhlet es una tcnica simple y econmica, en la que a menudo se obtienen buenas recuperaciones. Pero sin embargo se presenta la degradacin trmica del analito y adicionalmente el tiempo de la tcnica y la cantidad de solvente orgnico empleada para la recuperacin son altos. 3.9.3 Extraccin con Ultrasonido Las extracciones con ultrasonido se realizan con el sometimiento de la muestra y el solvente en un bao de ultrasonido, o por medio de la insercin de una sonda snica dentro del sistema solvente-muestra (Kleibhmer, 2001). La energa ultrasnica impartida a las soluciones causa cavitacin acstica, la cual consiste en la formacin de burbujas y su subsecuente implosin. El colapso de las burbujas creado por la sonicacin de soluciones, genera EVALUACIN DE MEZCLAS COMPOST INMADURO/SUELO DE MORAVIA Y FUENTES DE NUTRIENTES PARA LA DEGRADACIN DE LOS PESTICIDAS CLORPIRIFOS, MALATIN Y METIL PARATIN SERGIO AUGUSTO UPEGUI SOSA
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temperaturas locales extremadamente altas y gradientes de presin, lo que potencia el contacto entre el solvente y el analito contenido en la matriz slida. Posteriormente el analito solubilizado puede ser medido por tcnicas instrumentales (Ashley et al., 2001). Babic et al., (1998) afirman que la extraccin por ultrasonido provee un mayor contacto entre la matriz slida y el solvente orgnico que el logrado por el mtodo de extraccin con agitacin, lo que usualmente resulta en una mayor recuperacin del analito. 3.9.4 Extraccin de malatin Segn la ASTDR (2003), la extraccin del malatin presente en muestras de suelos y sedimentos se ha realizado principalmente por medio del sistema Soxhlet, ya que es la tcnica de extraccin estndar usada en la mayora de los mtodos de la EPA. A continuacin se presentan algunos estudios realizados a matrices slidas contaminadas con Malatin. Saenz et al (1995), cuantificaron la cantidad residual de los pesticidas malatin, diclofuanid y fenitrotion en manzana, por medio del uso del sistema de extraccin Soxhlet, utilizando 100 mL de Acetato de Etilo como solvente, con un tiempo de extraccin de 90 minutos; con lo cual se obtuvo porcentajes de recuperacin cercanos al 100% para los tres pesticidas. Bavcon et al. (2003) Utiliz un mtodo de extraccin consistente en alcuotas de 10 g de suelo al cual se le adicion tres porciones de acetato de etilo (15 mL la primera porcin y dos porciones de 10 mL cada una). La fase orgnica fue colectada, evaporada y el residuo resuspendido en 1 mL de acetato de etilo para su posterior anlisis. Mosquera (2007) obtuvo porcentajes de recuperacin promedios de 89.4% para un suelo agrcola contaminado con Malatin utilizando como tcnica de extraccin agitacin mecnica rotativa durante 4 horas, y acetato de etilo como solvente extractor. Hernndez et al. (2009) realiz la extraccin de malatin de un suelo mediterrneo por medio de la implementacin del mtodo MAE. Para lo cual utiliz 5 g de suelo a los que adicion 25 mL de acetato de etilo en un tubo PTFE cerrado, luego el sistema fue sometido a agitacin en vortex. La mezcla fue extrada en un horno microondas (Mars Xpress) con un calentamiento de 10 a 132 C, y luego se mantuvo por 5 minutos. Posteriormente, la muestra fue centrifugada a 3000 rpm y 15 C por 15 minutos y la fase orgnica fue EVALUACIN DE MEZCLAS COMPOST INMADURO/SUELO DE MORAVIA Y FUENTES DE NUTRIENTES PARA LA DEGRADACIN DE LOS PESTICIDAS CLORPIRIFOS, MALATIN Y METIL PARATIN SERGIO AUGUSTO UPEGUI SOSA
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concentrada hasta sequedad en un rota-evaporador (Laborota 4000, Heidolph) a 40 C. El residuo seco fue resuspendido en 1 mL de acetato de etilo y posteriormente fue analizado. Con el proceso descrito se obtuvo una recuperacin de 94%. 3.9.5 Extraccin de clorpirifos La extraccin por Soxhlet es comnmente empleado para evaluar residuos de Clorpirifos en suelos y sedimentos (Fenske et al. 1990; Lewis et al. 1994 citados por ATSDR, 1997). La extraccin con fluidos super-crticos (SFE) ha mostrado buenos resultados para la recuperacin de Clorpirifos de matrices slidas (ATSDR, 1997). Chu (2008) realiz la cuantificacin de Clorpirifos en una muestra de suelo de 25 g depositandola en un erlenmeyer de 250 mL, posteriormente se adicion 100 mL de acetona:ter de petroleo (1:1, V:V) y se agit a 150 rpm por 2 horas en un agitador mecnico. La mezcla fue decantada, y filtrada a travs de un embudo buchner, el retenido fue lavado tres veces con 20 mL de la mezcla acetona:ter de petrleo (1:1, V:V). El filtrado fue recolectado en un embudo de separacin de 250 mL, conteniendo 50 mL de sulfato de sodio al 3%, y extrado tres veces con 50, 40 y 40 mL de ter de petrleo. La fase orgnica fue recogida en un matraz de fondo plano y fue concentrado en un rotaevaporador hasta quedar casi seca. Luego fue resuspendida en ter de petrleo hasta un volumen final de 10 mL, y posteriormente analizado. Lopera et al. (2005) extrajo el clorpirifos de muestras de suelo agregando 35 mL de una mezcla hexano:acetona en una relacin 1:1, y aplicando agitacin mecnica a temperatura ambiente durante 12 horas a 240 rpm. Luego por decantacin en probeta se separ la fase orgnica, se midi su volumen y se tomaron 250 L de fase orgnica para su anlisis. Con este procedimiento se lograron extracciones del 73.42% en los controles y 82.38% en los ensayos de degradacin. Castaeda (2005) evalu diferentes soluciones extractoras para la recuperacin del clorpirifos de un suelo agrcola tales como: acetronitrilo, acetronilito:agua, acetona, acetonitrilo:acetona, metanol, metanol:acetato de etilo, acetato de etilo:acetona y acetato de etilo. Con todos los solventes se aplic agitacin rotativa usando diferentes volmenes de solvente (10, 20, 30, 40 mL), tiempo de agitacin (1, 2, 3, 4, 6 y 8 h), velocidad de agitacin (200, 250, 300 y 360 rpm) y nmero de extracciones (1, 2 o 3). Obteniendose los mejores porcentajes de EVALUACIN DE MEZCLAS COMPOST INMADURO/SUELO DE MORAVIA Y FUENTES DE NUTRIENTES PARA LA DEGRADACIN DE LOS PESTICIDAS CLORPIRIFOS, MALATIN Y METIL PARATIN SERGIO AUGUSTO UPEGUI SOSA
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recuperacin (100) utilizando 30 mL de acetato de etilo como solucin extractora y aplicando agitacin rotativa a una velocidad de 360 rpm por 4 h, luego se rotaevaporo el solvente a 30 C hasta un volumen final de 100 L y se resuspendio en 7 mL de Acetonitrilo:Agua acidulada para su cuantificacin. Karnchanasest et al. (2007) utiliz una mezcla de hexane:acetone en una proporcin 8:2. 2 g de muestra fueron mezclados con 40 mL de solvente y 5 mL de Triton x -100 al 15%. Las mezclas fueron agitadas a 250 rpm por 4 horas. Despus de la agitacin los frascos fueron congelados a -4 C para solidificar la pequea capa de agua y luego el solvente fue transferido a un vial donde se adicion de 2-3 g de Na 2 SO 4 para deshidratar por completo la muestra. El clorpirifos disuelto en la fraccin de solvente fue concentrado usando una corriente de nitrgeno al 99.5% y posteriormente cuantificado. 3.9.6 Extraccin de metil paratin Segn la ASTDR (2001) la extraccin y limpieza de muestras contaminadas con metil paratin depende ampliamente de la matriz y el mtodo de deteccin. De acuerdo con World Health Organization (1993) el metil paratin es extrado del suelo con acetona, acetona:n-hexano o hexano/isopropanol. Luego se realiza su particin en diclorometano en un segundo paso, posteriormente puede o no realizarse limpieza de la muestra, utilizando para tal fin silica gel. Logrndose as recuperaciones de metil paratin entre 70-85%. Wang et al. (2008) evalu un Nuevo mtodo para la extraccin de pesticidas utilizando acetona. La extraccin y la particin fueron combinadas en un solo paso saturando el solvente extractor con NaCl y simultneamente retirando el agua con diclorometano. La fase orgnica, es posteriormente secada con Na 2 SO 4 y evaporada para su posterior anlisis. 3.9.7 Extraccin multiresiduos El gran incremento en el nmero de pesticidas que presentes en el ambiente requiere del desarrollo de mtodos analticos que permitan la determinacin simultnea de diferentes pesticidas con un mnimo nmero de etapas para la extraccin y limpieza de las muestras (Babic et al., 1998). Por tal razn, varios autores han desarrollado en los ltimos aos mtodos flexibles para la determinacin analtica de estos compuestos en diferentes muestras de suelo, a continuacin se presentan algunos de estos mtodos. Blasco et al. (2005), determine niveles traza de pesticidas (benzimidazoles y azoles, organofosforados, carbamatos, neonicotinoides y acaricidas) en frutas. EVALUACIN DE MEZCLAS COMPOST INMADURO/SUELO DE MORAVIA Y FUENTES DE NUTRIENTES PARA LA DEGRADACIN DE LOS PESTICIDAS CLORPIRIFOS, MALATIN Y METIL PARATIN SERGIO AUGUSTO UPEGUI SOSA
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La extraccin de las muestras se realiz por medio de la tcnica PLE, a una temperatura de 75 C y una presin de 1500 psi, usando acetato de etilo como solvente extractor y almina acida como agente secante. Obteniendo un rango de recuperacin de los pesticidas entre 58% a 97% y de desviacin estndar relativa de 5% a 19%. Gonalves et al. (2005) desarrollaron una metodologa para el anlisis de 44 analitos (pesticidas y algunos metabolitos de degradacin) en muestras de suelos, la extraccin se bas en agitacin por ultrasonido (USE) en tres periodos de 15 minutos cada uno (en total 45 minutos). Para esto, se tom una muestra de suelo de 5 g, y se adicion 5 mL de solvente orgnico en cada periodo de agitacin (15 mL en total).Se evaluaron los solventes: n-hexano, acetato de etilo, acetonitrilo y diclorometano con el fin de optimizar el proceso de extraccin, obtenindose los mejores resultados con el acetato de etilo. Los pesticidas evaluados pertenecan a diferentes grupos (insecticidas organoclorados, organofosforados, y piretroides; herbicidas trianzina y acetanilida y otros pesticidas miscelneos). Los porcentajes de recuperacin fueron buenos (69-118%, 88% en promedio) para la gran mayora de los analitos. La evaluacin de los pesticidas fue realizada a tres profundidades y en diferentes tipos de suelos con el fin de estudiar la influencia de las caractersticas del suelo y su comportamiento travs del tiempo. 3.10 MTODOS DE ANLISIS DE PESTICIDAS Los mtodos de anlisis de pesticidas deben suministrar resultados que sean efectivos en costos, en tiempo, confiables y verificables. Segn con la subdivisin O de la EPA, Pesticide Assessment Guidelines, los mtodos aprobados para el anlisis de pesticidas deben: 1) tardar como mximo 24 horas, 2) Utilizar equipos y reactivos de fcil disponibilidad. 3) Identificar residuos en presencia de otros residuos, y 4) detectar los residuos a los niveles de tolerancia establecidos o por debajo de stos. Adems deben ser inalterables por variaciones ambientales como humedad, temperatura, y pureza del solvente (U.S. Congress, 1988). Segn Nollet y signh (2009) para la medicin de pesticidas organofosforados pueden utilizarse diferentes tcnicas de anlisis, dentro de las cuales se encuentran: Bioensayos, Ensayos con enzimas, Inmunoensayos, radio ensayos, Cromatografa en capa fina (TLC, por sus siglas en ingls), Cromatografa de Columna, y Electroforesis capilar (CE, por sus siglas en ingls). Sin embargo la metodologa ms utilizada es la cromatografa de gases (CG), debido a su EVALUACIN DE MEZCLAS COMPOST INMADURO/SUELO DE MORAVIA Y FUENTES DE NUTRIENTES PARA LA DEGRADACIN DE LOS PESTICIDAS CLORPIRIFOS, MALATIN Y METIL PARATIN SERGIO AUGUSTO UPEGUI SOSA
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disponibilidad y reproducibilidad, su amplio rango de detectores sensibles y lineales y la compatibilidad con los espectrofotmetros de masas (Ludwig, 1994). Sin embargo, para varios compuestos que no pueden ser analizados por esta tcnica como compuestos muy polares que no son fcilmente vaporizables, con puntos de ebullicin por encima de los 200C y que son lbiles trmicamente; la cromatografa lquida (CL) con detectores como: ultravioleta (UV), de fotodiodos (PAD), de fluorescencia (FD) y Espectrometra de masas (MS) ha sido una opcin muy utilizada (Ramrez, 2009). 3.10.1 Cromatografa La cromatografa es un trmino colectivo para separacin de mezclas basado en la particin de las sustancias entre dos fases heterogeneas inmiscibles, una de las cuales es estacionaria o fija, con una gran rea superficial; y la otra una fase mvil, la cual fluye sobre la fase estacionaria (Ramrez, 2009; Nollet, 2009). 3.10.1.1 Cromatografa de gases En la cromatografa gaseosa la fase estacionaria puede ser tanto slida (como en cromatografa de adsorcin) como lquida (como en cromatografa de particin). La fase mvil puede ser un gas, lquido, vapor o solido voltil (Gutirrez y Droguett, 2002). Hay dos principios de separacin basados en la naturaleza de la fase estacionaria: 1) Cromatografa Gas-slido (GSC, por sus siglas en ingls), en la cual la fase mvil es un gas y la estacionaria es un slido activo como la almina, silica gel, entre otros. 2) Cromatografa Gas-lquido (GLC, por sus siglas en ingls) en la cual la fase mvil es un gas y la fase estacionaria es un liquido distribuido en un soporte solido inerte. La GLC es usada para la separacin de una variedad de compuestos, generalmente orgnicos, mientras que GSC es usada para la separacin de gases (Brewer, 1973). El principio de operacin se basa en la introduccin de pequeas cantidades de una muestra (gaseosa o lquida) conteniendo nanogramos de compuestos (gaseosos o vaporizables) de inters analtico, los cuales son transportados por un gas inerte entre una columna (que contiene la fase estacionaria) bajo condiciones controladas de temperatura. Los componentes son separados entre distintas bandas (o zonas) de molculas, debido a diferencias en la absorcin, solubilidad y enlace qumico de sus molculas (Gutirrez y Droguett, 2009; Ramrez, 2009). Estas fracciones se mueven a travs de la columna a diferentes velocidades y emergen como compuestos separados. El gas portador emerge EVALUACIN DE MEZCLAS COMPOST INMADURO/SUELO DE MORAVIA Y FUENTES DE NUTRIENTES PARA LA DEGRADACIN DE LOS PESTICIDAS CLORPIRIFOS, MALATIN Y METIL PARATIN SERGIO AUGUSTO UPEGUI SOSA
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de la columna y pasa a travs de un detector, el cual produce una seal proporcional a la cantidad de cada compuesto arrastrado. La respuesta del detector es amplificada y mostrada en un reproductor como un pico. El cromatograma obtenido es una grfica del tiempo vs la intensidad de una serie de picos, que representan los compuestos eluidos en la corriente portadora (Brewer, 1973). La cantidad de tiempo requerida para que cada pico aparezca en el grfico es el tiempo de retencin (Tr), y es caracterstico de cada una de las sustancias presentes para las condiciones cromatograficas establecidas. El tiempo de retencin, por lo tanto, identifica la sustancia, y el rea del pico es una medida cuantitativa, la cual es proporcional a la cantidad de cada compuesto presente. Una apropiada seleccin del puerto de inyeccin, columna y temperatura del detector determina la efectividad de las separaciones cromatograficas de los compuestos en cada tipo de muestra (Brewer, 1973). La cromatografa gaseosa se ha convertido en la tcnica analtica ms popular debido a su simplicidad de operacin, alto poder de separacin y velocidad. La gran variedad de columnas empacadas, detectores y controles de temperatura permite su gran diversidad de aplicaciones, las cuales incluyen: anlisis medioambientales, qumicos, procesos petroqumicos y alimentarios, as como aplicaciones en la industria farmacutica (Nollet, 2009; Gutirrez y Droguett, 2002; Ludwig, 1994). 3.10.1.1.1 Detectores acoplables a cromatografa de gases Los detectores deben medir continuamente, rpidamente y con gran sensitividad los componentes, los cuales aparecen en el gas portador mientras este emerge de la columna, por medio de cambios en una propiedad fsica o qumica de la corriente de gas efluente. La correspondiente respuesta elctrica es amplificada y alimenta el reproductor (Brewer, 1973). Un buen detector es altamente sensible (sensibilidad), tiene una respuesta lineal (linearidad) sobre un amplio rango de concentracin y es relativamente insensible a variaciones de flujo y temperatura (rango dinmico lineal) (Olgun y Rodrguez, 2004). Los detectores ms utilizados para la deteccin de pesticidas organofosforados son: el detector fotomtrico de llama (FPD), el detector de captura de electrones (ECD) y el detector de Nitrogeno/Fsforo (NPD) (Ramrez, 2009; Olgun y Rodrguez, 2004). EVALUACIN DE MEZCLAS COMPOST INMADURO/SUELO DE MORAVIA Y FUENTES DE NUTRIENTES PARA LA DEGRADACIN DE LOS PESTICIDAS CLORPIRIFOS, MALATIN Y METIL PARATIN SERGIO AUGUSTO UPEGUI SOSA
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Detector fotomtrico de llama (FPD) De acuerdo con y Olgun y Rodrguez (2004), el detector fotomtrico de llama consiste en una llama reductora que produce especies quimioluminiscentes, las cuales emiten una luz caracterstica que es ptimamente filtrada por la longitud de onda deseada que determina los componentes detectados en el foto- detector. Detector Nitrogeno/Fsforo (NPD) El corazn del detector NPD es una perla de cermica recubierta por una sal de un material fcilmente ionizable, generalmente rubidio. El calor crea una plasma superficial sobre la perla. Los compuestos de nitrgeno y o fsforo se ionizan y originan una corriente entre los polos cargados del dispositivo. Ambos detectores poseen una gran selectividad para las molculas que contienen fsforo y/o nitrgeno. Los analitos ms usuales que se estudian con estos detectores son los plaguicidas fosforados, aunque algunos disolventes de uso industrial muy frecuentes tambin se estudian con este sistema (Cardona y Giraldo, 2008). Detector de Captura de Electrones (ECD) Este detector utiliza una cmara de iones conteniendo un gas (generalmente Ar o N 2 ) y electrones libres (partculas ) generados por una fuente radioactiva (63Ni), con un potencial aplicado lo suficientemente grande para colectar por completo los electrones libres. Las molculas de la muestra (las cuales tienen una afinidad por los electrones libres) capturan los electrones libres y se convierten en iones negativos, por lo que la corriente de electrones decrece, siendo esta la base de la respuesta transmitida al sistema de datos del equipo (Olgun y Rodrguez, 2004; Brewer, 1973). Es altamente sensible a compuestos halogenados, nitrogenados y fosforados; por lo tanto es muy til en la deteccin de pesticidas. Da un poco de respuesta a hidrocarburos y otros carbonilos conjugados (Olgun y Rodrguez, 2004). Esta tcnica ha sido utilizada para cuantificar residuos de pesticidas organofosforados como el Malatin (ASTDR, 2003), Metil paratin (ASTDR, 2001) y Clorpirifos (ASTDR, 1997) o para determinar varios pesticidas organoclorados (Abhilash y Singh, 2008; Sun et al., 2007; Zhang et al., 2005) y organofosforados (Mohd, 2010; Murcia, 2008; Gonalves et al., 2005).