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EVALUACIN DE MEZCLAS COMPOST INMADURO/SUELO DE MORAVIA Y FUENTES DE NUTRIENTES PARA LA

DEGRADACIN DE LOS PESTICIDAS CLORPIRIFOS, MALATIN Y METIL PARATIN


SERGIO AUGUSTO UPEGUI SOSA

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3 MARCO TERICO
3.1 PESTICIDAS
Se entiende por pesticidas a todos aquellos productos utilizados para combatir
los parsitos y enfermedades de las plantas, proteger los cultivos de agentes
dainos, aunque no sean parsitos (malas hierbas, algas, etc.) y mejorar
cualitativa y cuantitativamente la produccin agrcola (Dorronsoro & Garca,
2004; U.S. Department of Agriculture, 1998).
3.1.1 Clasificacin de los Pesticidas
Los pesticidas pueden clasificarse en diferentes grupos, dependiendo de la
propiedad evaluada. Generalmente se clasifican teniendo en cuenta 3
propiedades: 1) organismo al que atacan, 2) naturaleza qumica y 3) toxicidad.
3.1.1.1 Clasificacin segn el organismo que atacan
Segn el tipo de organismo hacia el cual se dirigen, se dividen en dos grandes
grupos: plaguicidas y herbicidas, aunque estos no pueden separase totalmente
porque muchas sustancias presentan efectos combinados:
Plaguicidas. Son sustancias que sirven para combatir parsitos y
enfermedades que afectan los cultivos, el ganado, los animales domsticos y el
hombre. Dentro de este grupo a su vez, pueden separarse de acuerdo con el
grupo de especies que atacan en: insecticidas, acaricidas, nematicidas,
fungicidas, antibiticos y rodenticidas (Dorronsoro & Garca, 2004; Weber,
1994).
Herbicidas. Productos que evitan el desarrollo de plantas adventicias o malas
hierbas.
3.1.1.2 Clasificacin segn su naturaleza qumica
En lo referente a su naturaleza qumica, los pesticidas pueden clasificarse en
inorgnicos y orgnicos.
Dentro del grupo de los orgnicos, los principales tipos son (Dorronsoro &
Garca, 2004; Marquez, 2001):
Derivados Halgenos. Compuestos orgnicos que contienen generalmente
tomos de cloro en su molcula. Actualmente su acumulacin en el medio
ambiente y en los seres vivos ha dado lugar a restricciones en su uso por parte
de algunos pases. Dentro de estos compuestos podemos distinguir tres grupos:
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Derivados halgenos de hidrocarburos alifticos: utilizados principalmente
como fumigantes.
Derivados halogenados de hidrocarburos alicclicos. Importancia prctica
como insecticidas y fungicidas.
Derivados halogenados aromticos. Tienen propiedades insecticidas,
acaricidas, herbicidas y fungicidas dependiendo de la naturaleza del tomo
de halgeno, del nmero de ellos en la molcula de benceno y de su
posicin en el anillo. Su principal representante es el DDT.

Figura 1. Frmula Qumica del DDT
Carbamatos. Son sales o esteres del cido carbmico o uretano. Los
carbamatos pueden tener propiedades insecticidas y herbicidas, algunos de
los cuales pueden ser sistmicos (Dorronsoro & Garca, 2004; Marquez, 2001).
Este grupo de plaguicidas presenta algunas ventajas frente a los compuestos
organofosforados, como son su eficacia contra insectos resistentes a estos
ltimos y su mayor seguridad de manejo, pero tambin presentan desventajas,
ya que son de ms difcil produccin, ms caros y de mayor toxicidad frente a
los insectos polinizadores (Marquez, 2001).
Derivados de la urea y tiourea. Todos estos compuestos se utilizan como
herbicidas, cuyas propiedades aumentan notablemente con la presencia de
tomos de halgeno en la molcula del compuesto. Actan por medio de la
inhibicin del proceso de fotosntesis.
Compuestos heterocclicos. Uso como herbicidas. Pueden tener ciclos de 5
6 tomos y con 1, 2 3 tomos diferentes en el anillo, siendo los ms
importantes las triazinas sustituidas.
Organofosforados. Son compuestos orgnicos complejos, que incluyen fsforo
en su composicin, ya que son steres o amidas derivadas del cido fosfrico,
tiofosfrico, ditiofosfrico, fosfnico y fosfnico. Tienen efecto insecticida
principalmente, aunque algunos de ellos presentan actividad nematicida,
fungicida y herbicida.
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Se caracterizan por tener un espectro de accin ms estrecho que el de los
organoclorados, por su baja persistencia y fcil descomposicin a productos no
txicos. Se metabolizan relativamente rpido en organismos vertebrados y
presentan ausencia de acumulacin en los mismos; todo lo anterior los hace
preferibles en comparacin con los organoclorados. Sin embargo, como
desventaja de estos compuestos se tiene su toxicidad, la cual es relativamente
alta para los vertebrados y seres humanos, lo que obliga a una manipulacin
ms cuidadosa.

Figura 2. Frmula Qumica del Paratin
La toxicidad y la accin insecticida de estos compuestos son atribuidas a la
inhibicin de la actividad acetilcolinesterasa, enzima que se encuentra en las
clulas nerviosas de los organismos y cuya desactivacin paraliza su sistema
nervioso (Marquez, 2001; U.S. Department of Agriculture, 1998).
Los organofosforados al ser ingeridos o inhalados, pasan rpidamente al
torrente sanguneo, inhibiendo la acetilcolinesterasa y causando efectos en el
sistema muscular involuntario como: temblores, convulsiones e incluso la
muerte en humanos (Mosquera, 2007; Defensoria del Pueblo, 2003).
Los steres organofosforados son muy susceptibles a la hidrlisis, el cual es el
proceso ms comn de degradacin, donde el H
2
O y OH
-
actan como
nuclefilos sobre el grupo funcional ster (Bavcon et al., 2003).
Dentro de este grupo de plaguicidas se encuentran tres productos que han sido
de gran uso en el pas, y los cuales son analizados en el presente estudio, estos
son: Clorpirifos, Malatin y Metil Paratin.
3.1.1.3 Clasificacin segn su toxicidad
De acuerdo con su toxicidad, la clasificacin de los pesticidas se realiza en
funcin de su dosis letal 50 (DL
50
) o cantidad de producto que es capaz de
eliminar al 50% de una poblacin. En la Tabla 1 se establecen las categoras y
dosis letales correspondientes a cada categora.

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Tabla 1. Clasificacin de los pesticidas de acuerdo con su toxicidad
Categora Dosis Letal 50 (DL
50
)
Supertxicos. < 5mg/Kg
Extremadamente txicos. 5-50mg/kg
Muy txicos. 50-500 mg/kg
Moderadamente txicos. 500 5000 mg/kg
Ligeramente txicos. 5 - 15gr/Kg
Prcticamente no txicos. > 15 gr/Kg

3.1.2 Disponibilidad de los Pesticidas en el Ambiente.
Muchos plaguicidas no permanecen en el lugar donde se aplicaron, sino que se
esparcen a travs del agua, suelo, aire y biota; muchas veces a grandes
distancias (Kerle et al., 2007; Hayo, 1996).
El movimiento de los plaguicidas y los compuestos orgnicos est influenciado
por diversos factores, que incluyen entre otros: la adsorcin, la volatilizacin, la
dilucin, actividad biolgica y reactividad (Navarrete, 1995).
El fenmeno de adsorcin de un compuesto desde una solucin acuosa,
depende de dos condiciones: 1) el soluto tiene una baja afinidad por el agua
2) el soluto tiene una alta afinidad por el slido (FAO, 2000).
En el caso de la volatilidad, sta depende fundamentalmente de la presin de
vapor del compuesto y est fuertemente influenciada por las condiciones
ambientales (temperatura, velocidad del viento, etc.), cuanto menor es la
presin de vapor, ms tendencia tiene el producto a permanecer en el suelo
(FAO, 2000).
La solubilidad en agua est ntimamente relacionada con la movilidad del
pesticida, de forma que cuanto mayor es la solubilidad, mayor ser la
movilidad.
En la Figura 3 se presentan las interacciones que se llevan a cabo entre los
pesticidas y el ambiente.
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Figura 3. Interaccin de los pesticidas con en el ambiente
(Mosquera, 2007)
3.1.2.1 Movilidad en el suelo
La movilidad de un pesticida depende del grado de solubilidad en agua, el cual
puede ser medido mediante el coeficiente de particin o tambin llamado
coeficiente de adsorcin (Koc). Este coeficiente se define como la razn o
relacin entre la concentracin del pesticida adherido a las partculas del suelo,
y la concentracin del pesticida disuelto en el agua o solucin del suelo. Por lo
tanto, cuanto menor sea el valor de Koc, mayor ser la concentracin del
plaguicida en la solucin (Mosquera, 2007; FAO, 2000).
De acuerdo con lo anterior, cuando un pesticida se introduce en el suelo, una
parte de l se adhiere a las partculas del suelo (especialmente a la materia
orgnica) a travs de un proceso llamado adsorcin, y otra parte se disuelve en
el agua del suelo. La solubilidad de un pesticida y la adsorcin en el suelo estn
inversamente relacionadas, esto quiere decir, que un aumento en la solubilidad
se traduce en un descenso de la adsorcin (Mosquera, 2007; ACS Symposium
series, 1986).
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Cuando la adsorcin es muy baja, los compuestos son muy mviles y
susceptibles a ser lavados, provocando una fuerte contaminacin de las aguas
freticas. Esto suele ocurrir en los suelos de cultivo muy pobres en materia
orgnica, ms an cuando se trata de suelos irrigados en los que el lavado es
mayor (Mediterranea de Agroqumicos, S.F.).
Por el contrario, una adsorcin muy elevada puede hacer que los productos
aplicados no lleguen a ser eficaces, y permanezcan un largo tiempo en el suelo,
lo que suele ocurrir cuando los contenidos de materia orgnica en los suelos
son muy altos. Por consiguiente, se considera que la lixiviacin de los
plaguicidas ser ms lenta en este tipo de suelos, que en aquellos que poseen
bajo contenido de materia orgnica (Mosquera, 2007; Universidad de
Extremadura, 2004).
Debido a la importancia de la materia orgnica en la adsorcin, se utiliza para
ella un modelo basado en el coeficiente de reparto Octanol/Agua (Koa Kow),
donde el octanol representa la fase lipdica o hidrofbica. Este coeficiente
describe el reparto de un compuesto (como los pesticidas) entre la materia
orgnica del suelo y la solucin del mismo. Por lo tanto, los compuestos con
bajos valores de Koa corresponden a molculas pequeas y polares, mientras
que compuestos con altos valores de Koa presentan grandes molculas, poco o
nada polares (Dorronsoro & Garca, 2004).
Otros factores que rigen la adsorcin de los pesticidas al suelo, se encuentran:
la naturaleza del complejo adsorbente y el pH. En la primera, tiene mucho que
ver el adems del contenido de materia orgnica, la concentracin y naturaleza
de las arcillas presentes, las cuales presentan gran influencia en el intercambio
inico del suelo. Los compuestos catinicos pueden ser adsorbidos por las
cargas negativas de las arcillas y de la materia orgnica, mientras que los
compuestos aninicos son adsorbidos principalmente por la materia orgnica y
por los oxi-hidrxidos de hierro y aluminio. En ambos casos la adsorcin estar
muy influida por el pH (Kerle et al., 2007; U.S. Department of Agriculture, 1998).
Una consecuencia atribuida al uso de fertilizantes qumicos, es la modificacin
del pH del suelo (en diferente sentido segn el tipo empleado), lo que provoca
que existan excesos de algunos elementos que pueden lavarse y pasar a las
aguas freticas y de ellas a las de consumo (Dorronsoro & Garca, 2004).


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Por otra parte, entre los factores propios del producto, que rigen la adsorcin
de los pesticidas al suelo, los factores decisivos son: el tamao de su molcula y
la polaridad de la misma (Dorronsoro & Garca, 2004).
El suelo tiene mecanismos de defensa ante los contaminantes, pero muchos de
estos mecanismos estn basados en la precipitacin, adsorcin y fijacin de los
mismos; por lo que estos mecanismos no constituyen una destruccin de los
plaguicidas como tal, sino que eliminan su bio-disponibilidad, pudiendo ser
reversible en etapas posteriores.
Entre los factores que influyen en la bio-disponibilidad de los contaminantes en
el suelo se destacan (Kerle et al., 2007):
Capacidad de intercambio catinico. Como ya se mencion, ste es un
parmetro decisivo en el almacenamiento de sustancias de naturaleza
catinica, como algunas molculas de pesticidas, en el suelo.
pH. Acta facilitando el almacenamiento o la liberacin de los compuestos
presentes en el suelo, de modo que es uno de los factores ms importantes.
Cuando el pH baja se incrementa la solubilidad de las sustancias catinicas
retenidas, mientras que un aumento del pH provoca el mismo efecto en las
sustancias aninicas.
Potencial de oxidacin. Es importante porque puede movilizar elementos
txicos encerrados en las estructuras moleculares de los compuestos de hierro
y manganeso.
Contenido de materia orgnica. Afecta al complejo de cambio, a la capacidad
tampn y a la actividad biolgica del suelo, sin olvidar su carcter complejante
y su influencia sobre la estructura, que afecta la aireacin del suelo.
Estructura. Regula el drenaje, controla la humedad y afecta la erodabilidad de
la capa superior.
3.1.3 Persistencia de los Pesticidas
La Persistencia de un pesticida es la resistencia a ser degradado o
transformado como resultado de distintas reacciones fisicoqumicas y
microbiolgicas en el suelo (Mosquera, 2007; Kerle et al., 2007).
La persistencia vara de unos suelos a otros y est muy relacionada con la
adsorcin del suelo, adems de las propiedades del pesticida; cuando la
adsorcin es muy intensa, el pesticida puede permanecer en el suelo durante
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un largo tiempo (Dorronsoro & Garca, 2004; U.S. Department of Agriculture,
1998).
Los compuestos cuyo periodo de degradacin es extremadamente largo se
consideran persistentes, y estos se dispersan en el medio ambiente sin
experimentar mayores cambios (FAO, 2000).
En la Tabla 2 se presenta la persistencia promedio de los pesticidas, segn su
naturaleza qumica.
Tabla 2. Persistencia promedio de los pesticidas
Tipo Accin Persistencia
Organoclorados Insecticida 2 5 aos
Derivados benzoicos Herbicidas 3 12 meses
Derivados de la urea Herbicidas 4 10 meses
Amidas Herbicidas 2 10 meses
cidos alifticos Herbicidas 3 10 semanas
Organofosforados Insecticidas 7 8 semanas
Carbamatos Todas 2 8 semanas
(Dorronsoro & Garca, 2004)
3.1.4 Bioacumulacin de los Pesticidas
La bioacumulacin indica la tendencia de un compuesto a acumularse en los
organismos. El coeficiente de particin Octanol-agua (Kow), es el ndice ms
utilizado para cuantificar la bioacumulacin de un plaguicida. Los compuestos
con un valor de Kow alto se acumulan en los organismos (Dorronsoro & Garca,
2004).
3.1.5 Degradacin de los pesticidas
Con el tiempo, casi todos los plaguicidas se descomponen o se degradan como
resultado de distintas reacciones qumicas y microbiolgicas en el suelo. Estos
procesos tienen como resultado la degradacin final del compuesto en CO
2
,
H
2
O, HCl, SO
2
, entre otros compuestos minerales (Kerle et al., 2007; FAO, 2000).
El tiempo de vida media de degradacin o semidesintegracin (DT
50
), es el
tiempo que tarda un plaguicida para ser transformado o degradado a la mitad
de su concentracin inicial. A medida que se degradan, algunos pesticidas
producen sustancias intermedias llamadas metabolitos, cuya actividad
biolgica tambin puede presentar repercusiones ambientales importantes,
incluso algunos de ellos pueden llegar a ser ms txicos que los compuestos
originales (FAO, 2000).
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Los procesos de degradacin ms importantes llevados a cabo en el suelo son:
3.1.5.1 Hidrlisis
La hidrlisis es un proceso en el que un compuesto es transformado por
contacto con el agua, sufriendo una reaccin qumica en la que una parte de la
molcula del compuesto es reemplazada por un grupo hidroxilo. El pH del
medio en el que se encuentra el compuesto, influye considerablemente en este
proceso (Mosquera, 2007).
3.1.5.2 Fotlisis
La fotlisis es la descomposicin de un compuesto qumico como resultado
directo de la radiacin ultravioleta (Mosquera, 2007). sta puede separarse en
dos procesos: fotolisis indirecta y fotolisis directa.
En la primera, la reaccin se da por accin directa de la luz ultravioleta sobre la
molcula del compuesto, generando la descomposicin del mismo.
Por otro lado, en la foto-degradacin indirecta, la degradacin se da por
sustancias oxidantes generadas a partir de la luz ultravioleta, estas sustancias
atacan la molcula del pesticida y ocasionan su transformacin. Algunas
especies orgnicas como los cidos hmicos y flvicos, e inorgnicas como los
nitratos y nitritos, pueden acelerar considerablemente la fotolisis de un
pesticida (Ruiz, 2001).
3.1.5.3 Biodegradacin
La descomposicin biolgica o biodegradacin consiste en la transformacin
de una sustancia por accin de los microorganismos, ste es un proceso de
degradacin muy importante en el suelo, especialmente cuando el pH es menor
a 7.0 (Mosquera, 2007), donde es posible que la velocidad de la hidrlisis sea
lenta. En condiciones ambientales, la biodegradacin puede verse afectada por
varios factores, entre ellas la presencia o ausencia de oxgeno (condiciones
aerobias o anaerobias) y nutrientes, el tamao de la poblacin de
microorganismos y la capacidad de adaptacin de estos (Castaeda, 2005;
Vidali, 2001).
En este proceso, cuando los contaminantes son degradados metablicamente
se utilizan como fuente de carbono y/o nutrientes para la obtencin de la
energa necesaria para el crecimiento, reproduccin y mantenimiento celular;
la otra parte termina en forma de dixido de carbono, agua y sales minerales,
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logrndose una autentica mineralizacin con desaparicin completa del
pesticida.
Los contaminantes tambin pueden ser atacados por una gran variedad de
enzimas extracelulares y consorcios microbianos que se encuentran en el
suelo, en este caso su degradacin es de forma cometablica (Jin, Englande, &
Qiu, 2003). En el cometabolismo se produce una transformacin de la
estructura del pesticida sin que pueda considerarse que es utilizado como
fuente de energa por los microorganismos. El catabolito resultante, ya no
posee la accin inicial, pero puede tener otros efectos, en muchas ocasiones
desconocidos y cuya toxicidad puede ser variable (Universidad de
Extremadura, 2004).
Dentro de las enzimas relacionadas con la transformacin de los pesticidas
organofosforados Singer & Crohn (2002) y Jokanovic (2001), sealan que las
mono y di-oxygenasas juegan un papel importante, ya que introducen uno o
varios tomos de oxgeno dentro de la molcula qumica de estos pesticidas,
incrementando su solubilidad en agua y por lo tanto su biodisponibilidad,
volvindolos ms susceptibles a ser mineralizados. En la Figura 4, se muestra la
desulfuracin oxidativa que sufren el Malatin y el Paratin por accin del
citocromo P450, un sistema de monooxigenasas que se caracteriza por utilizar
el NADPH (Nicotinamida-Adenina-Dinucletido-Fosfato) para reducir el
oxgeno molecular hasta agua, e incorporar un tomo de oxgeno a la molcula
que ataca (Gonzlez, 2007).


Figura 4. Transformacin del Paratin y Malatin a travs de la Desulfuracin
Oxidativa (Jokanovic, 2001)

Otro grupo de enzimas son las carboxilesterasas, las cuales son capaces de
metabolizar lpidos y un largo nmero de medicamentos, as como de catalizar
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la hidrlisis de esteres del acido carboxlico, sta es una forma importante de
detoxificacin del Malatin (Fukuto, Mechanism of Action of Organophosphorus
and Carbamate Insecticides, 1990; WHO, 1976) y su metabolito txico, el
Malaoxn (Fukuto & Metcalf, 1969). Las carboxilesterasas tambin participan
en la detoxificacin de Carbofuran, Piretroides y otros organofosforados
diferentes al Malatin Cashman et al., (1996). Enzimas similares a las
Carboxilesterasas son las arilesterasas, que pueden hidrolizar algunos
compuestos organofosforados que contienen grupos aromticos como el
Paraoxn y el Clorpirifos oxn (Jokanovic, 2001). En la Figura 5 se presenta la
hidrlisis del Malatin bajo la accin de una enzima Carboxilesterasa.

Figura 5. Hidrlisis del Malatin por una enzima Carboxilesterasa
(Jokanovic, 2001)
El grupo nitro del Paratin (NO
2
) y otros compuestos similares, como el Metil
Paratin, pueden ser reducidos enzimticamente a grupos amino (NH
2
) (Figura
6), los cuales son inactivos como insecticidas y no inhiben la Acetil
Colinesterasa, debido a que los grupos amino liberan electrones, mientras que
los grupos nitro los atraen fuertemente (Jokanovic, 2001).

Figura 6. Reduccin del grupo nitro a amino en el Paratin por accin enzimtica
(Jokanovic, 2001)
Otras interacciones que pueden darse entre los contaminantes y los
microorganismos son: 1) la polimerizacin o conjugacin del pesticida,
formando un polmero menos mvil que el compuesto original y carente de su
efecto, 2) Los microorganismos pueden incorporar el pesticida a su propio
organismo, provocando una acumulacin dentro de ste, quedando de nuevo
liberado el compuesto en el momento en que muere el organismo captor y
3) pueden ejercer una accin semejante a la que tiene lugar en el suelo de
forma abitica, es decir, realizar procesos de oxidacin, de reduccin o de
hidrlisis (Universidad de Extremadura, 2004).
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Adems de la transformacin de los contaminantes realizada por la accin de
los microorganismos, tambin est la transformacin realizada por las plantas,
quienes absorben el producto y pueden metabolizarlo por procedimientos
semejantes a los utilizados por los microorganismos. Esta absorcin puede
causar su muerte como en el caso de los herbicidas, o servir para su defensa
como en el caso de los insecticidas sistmicos.
En el proceso general de descomposicin biolgica intervienen algunas
propiedades del pesticida, como son: su estructura qumica, la capacidad de
adsorcin (que impide su ataque), el coeficiente de reparto entre las
fracciones inorgnica y orgnica, y las constantes de disociacin cida y
bsica que determinan la forma de descomposicin de la sustancia.
Otros factores explicados anteriormente se deben al suelo, y su influencia en la
adsorcin o desorcin de los compuestos, tales como: el contenido de materia
orgnica, la textura, la estructura, la aireacin, el potencial redox y el pH.
Por ltimo, no se puede olvidar la actividad biolgica del suelo (favorecida
por un elevado contenido de material orgnico) que es la biomasa potencial
para la degradacin de los compuestos (Kerle et al., 2007).
Hay otros factores relacionados con el medio ambiente como son: la
temperatura, que favorece la accin bacteriana, y por ende, la velocidad de
degradacin; la pluviosidad, que determina la humedad y el lavado de las
sustancias; y su conjunto, que determina la densidad de la cubierta vegetal,
cuya accin degradante tambin puede ser importante (Donzar, 1995).
3.2 CLORPIRIFOS
3.2.1 Propiedades del Clorpirifos
El Clorpirifos es un slido blanco de apariencia cristalina y de aroma fuerte. No
es muy soluble en agua, de manera que generalmente se mezcla con lquidos
aceitosos antes de aplicarse a cosechas o animales. Tambin se puede aplicar a
cosechas en forma de cpsulas (ATSDR, 1997).
En la Tabla 3. Se presentan las principales propiedades del Clorpirifos.




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Tabla 3. Propiedades del Clorpirifos
Nombre qumico
O,O-diethyl O-(3,5,6-trichloro-
2-pyridyl) phosphorothioate
Frmula Qumica C9H11Cl3NO3PS
Nmero CAS 2921-88-2
Peso Molecular 350.6 g/mol
Densidad a 21C 1,51 g/ml
Presin de vapor 2.5 mPa @ 25C
Punto de fusin 41.5 42.5 C
Punto de ebullicin >300C
Coef. De Particin (Log Kow) 4.69
Coef. De adsorcin (Koc) 6070
Solubilidad en agua 2.0 mg/L @ 25C
(ATSDR, 1997)
3.2.2 Degradacin del Clorpirifos
Clorpirifos es un compuesto degradable, y en su descomposicin pueden
participar activamente diversos factores ambientales. Tanto la degradacin
microbiana como la degradacin abitica (como hidrlisis) son factores
importantes en su disipacin del suelo, siendo sta ltima especialmente
predominante en suelos alcalinos (Dow Agrosciences, 2008).
En todos los sistemas (suelo, aguas, plantas y animales), la ruta principal de
degradacin se inicia con la ruptura del enlace ster-fsforo, produciendo
3,5,6-tricloro-2-piridinol (TCP). Este primer paso es una detoxificacin, ya que
el TCP no presenta actividad insecticida y las autoridades regulatorias lo
consideran toxicolgicamente insignificante. Sin embargo, el TCP ha mostrado
tener efecto txico sobre los microorganismos, lo que hace que sea un poco
lenta la degradacin de este compuesto por la microflora del suelo (Castaeda,
2005). En el suelo y agua, el TCP contina degradndose a travs de la
actividad microbiana y la fotlisis en dixido de carbono y materia orgnica. En
los animales, el TCP puede ser excretado directamente o tras su conjugacin;
en las plantas, se aslan los conjugados de TCP (Dow Agrosciences, 2008).
En la Figura 7, se presentan las diferentes rutas y degradacin del Clorpirifos.
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Figura 7. Clorpirifos y sus metabolitos de degradacin
(Dow Agrosciences, 2008)
3.2.3 Persistencia del Clorpirifos en el ambiente
El Clorpirifos puede llegar al suelo mediante aplicacin directa, por la deriva
del pulverizado o por el lavado desde el follaje. Es moderadamente persistente
y presenta un coeficiente de adsorcin en el suelo (K
oc
) mayor a 5000, por lo
que tiene una fuerte tendencia a ser adsorbido por el suelo y la materia
orgnica en ste, dificultando su lixiviacin a las aguas subterrneas.
Una vez alcanza ecosistemas acuticos, puede generar graves daos, ya que es
un compuesto muy txico para los organismos acuticos, y puede causar
efectos adversos a largo plazo.
Cuando se aplica en las dosis agrcolas normales, las vidas medias tpicas de
degradacin en el suelo en condiciones aerbicas para el Clorpirifos, son del
orden de 60 a 120 das (Kamrin, 1997).
3.3 MALATIN
De acuerdo con (Cordoba, 2001), el Malatin es un insecticida organofosforado
catalogado toxicolgicamente en la categora III de la EPA (ligeramente txico).
Ingresa a los organismos por ingestin y por el aire. Su inespecificidad hace
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que a las dosis utilizadas contra la mosca de las frutas, por ejemplo
(Tephritidae), resulte txico y letal para la mayor parte de los insectos con una
biomasa similar. Este efecto indeseado disminuye la biodiversidad y crea
condiciones para la aparicin de otras plagas (EPA, Environmental Protection
Agency, 2000).
El Malaoxn es un anlogo oxigenado del Malatin, y pude ser encontrado
tambin como una impureza en una formulacin de Malatin, o puede ser
generado a partir de la oxidacin del Malatin en el aire o el suelo. El Malaoxn
es el metabolito activo del Malatin que inhibe la colinesterasa. Ambos
compuestos son detoxificados a compuestos polares solubles en agua por
medio de carboxiesterasas (Newhart, 2006).

Figura 8. Estructura Qumica del Malatin

Figura 9. Estructura Qumica del Malaoxn
(Newhart, 2006)




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3.3.1 Propiedades del Malatin
En la Tabla 4 se presentan las propiedades del Malatin
Tabla 4. Propiedades del Malatin
Nombre qumico
0,0 dimetil fosforoditioato de
dietil mercapto succinato
Formula Molecular C
10
H
19
O
6
PS
2

Nmero CAS 121-75-5
Peso molecular (g/mol) 330,36
Densidad (g/mL) 1,2076 @ 20C
Punto de ebullicin (C) 156-157 @ 0,7 mm Hg
Punto de fusin (C) 2,85
Solubilidad en agua (mg/L) 130 @ 25C
Presin de vapor (mPa) 5.3 @ 30C
Coef. de particin (Log Kow) 2.75
Coef. de adsorcin (Koc) 1800
(ATSDR, 2003)
3.3.2 Degradacin del Malatin
El Malatin tiene una movilidad en la solucin del suelo entre moderada y alta.
Generalmente su degradacin es rpida, y la contaminacin de la solucin del
suelo no se ha encontrado sea extendida. La Divisin de Efecto y Destino
Ambiental de la EPA (EFED), concluy que es potencialmente mvil en la
solucin del suelo, especialmente en aquellos con bajo contenido de materia
orgnica y alto contenido de arena (Newhart, 2006; Neal et al., 1993).
El Malatin es degradado particularmente por hidrlisis, fotlisis y por accin
de los microorganismos (LeNoir et al., 1999). De acuerdo con Mosquera (2007)
y Newhart, (2006), la principal ruta de degradacin del Malatin en el suelo es a
travs del metabolismo aerbico. El tiempo de vida medio del Malatin en el
suelo fue reportado en 3 das en suelos alcalinos, y 7 das para suelos cidos.
Segn Paschal & Neville, (1976), los cidos Malatin mono y di-carboxlicos, el
Malaoxn, el fumarato de etilo, diethyl thiosuccinate y el CO
2
son los productos
de degradacin que han sido identificados en estudios de campo y de
laboratorio. El mayor metabolito en suelos es el Malatin beta-monoacido y ha
sido reportado con un tiempo de vida media de 4 a 6 das (Newhart, 2006).
En el agua, el Malatin es susceptible de hidrlisis y su semidesintegracin
vara entre 0,2 semanas a pH de 8 y 21 semanas a pH de 6 (FAO, 2000).
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3.3.3 Persistencia en el suelo
La persistencia es larga en condiciones secas, arena, bajo nitrgeno y
condiciones cidas; y es degradado ms rpidamente en el suelo que en la fase
acuosa. Se considera que la vida del Malatin puro en el suelo vara de 24 horas
a un promedio de 6 das. Montenegro (2001), considera que se extiende hasta
los 25 das. La tasa de degradacin se incrementa cuando aumenta la humedad
y pH o contenido de carbonatos (Mosquera, 2007).
3.4 METIL PARATIN
3.4.1 Propiedades del Metil Paratin
El Metil Paratin es un slido de color entre blanco y tostado. Sufre una rpida
hidrlisis en medios alcalinos, pero se hidroliza lentamente en cidos dbiles
(Spectrum Laboratory, 2003; EPA, Environmental Protection Agency, 1984).
Tabla 5. Propiedades del Metil Paratin
Nombre Qumico
O,O-dimethyl O-4-nitrophenyl
phosphorothioate
Formula Molecular C
8
H
10
NO
5
PS
Nmero CAS 298-00-0
Peso Molecular (g/mol) 263.21
Punto de fusin (C) 3738
Punto de Ebullicin (C) 143 @ 0.05 mm Hg
Presin de vapor (mPa) 1,3 @ 20C
Densidad (g/mL) 1,4
Solubilidad en agua (mg/L) 55-60 @ 20C
Coef. de particin (Log Kow) 3.52-3.84
Coef. de adsorcin (Koc) 5100
(ATSDR, 2001)
3.4.1 Degradacin del Metil Paratin
El Metil Paratin se degrada en el suelo principalmente como resultado de
procesos biolgicos (biodegradacin), aunque tambin se puede presentar la
transformacin qumica, por foto-degradacin (Spectrum Laboratory, 2003;
WHO, World Health Organization, 1993). La degradacin aumenta con la
temperatura y la exposicin a la luz solar. La principal excepcin corresponde a
los derrames, en los que la degradacin slo se produce al cabo de muchos
aos, siendo la principal ruta de transformacin la fotolisis (Spectrum
Laboratory, 2003; FAO, 2000).
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Los principales procesos empleados para eliminar el compuesto del agua son
la biodegradacin y la fotlisis. En un perodo de 2 a 4 semanas tiene lugar el
100 por ciento de la degradacin. La hidrlisis se produce (del 5 al 11 por
ciento) en 4 das en ros y ms lentamente en sistemas marinos. El Metil
Paratin se degrada mediante fotlisis directa en aguas naturales
(semidesintegracin de 8 das en verano y de 38 das en invierno) (FAO, 2000;
EPA, 1984).
La degradacin ocurre ms rpidamente en 1) suelos poco permeables que en
suelos permeables, y 2) en suelos hmedos que en suelos secos (Spectrum
Laboratory, 2003). La degradacin en suelos poco permeables ocurre
principalmente por la reduccin del grupo nitro. La hidrolisis ocurre en mayor
medida bajo condiciones de buena permeabilidad (WHO, 1993).
El Metil Paratin puede ser degradado en el ambiente por hidrlisis a p-
nitrofenol y cido dimetil tiofosfrico, o por reduccin del grupo nitro a Metil
Amino-paratin. Otro producto de degradacin, generado por la desulfuracin
oxidativa, es el Metil Paraoxn; el cual es el subproducto de mayor actividad en
la inhibicin de la actividad de la acetilcolinesterasa (New Jersey Department of
Health and Senior Services, 1999; WHO, 1993).
3.4.2 Movilidad del Metil Paratin en el ambiente
Se considera que el Metil Paratin es moderadamente mvil en el suelo. La
adsorcin no parece estar relacionada con el contenido orgnico del suelo,
pero el contenido de arcilla puede ser importante (FAO, 2000).
Debido a que el Metil Paratin tiene una adsorcin moderada en el suelo, y es
rpidamente degradado, es poco probable que se presente lixiviacin a aguas
subterrneas. Sin embargo podra tener lugar la lixiviacin a aguas
subterrneas en suelos expuestos a grandes cantidades del pesticida, tal como
en un derrame accidental o la acumulacin de desechos, en particular, en
suelos con baja capacidad de adsorcin (EPA, 1984).
Se considera que la volatilizacin y la evaporacin no son procesos de
transporte importantes (Spectrum Laboratory, 2003).


3.5 BIORREMEDIACIN
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La biorremediacin de suelos es una estrategia biotecnolgica de carcter
ambiental, la cual utiliza la biodegradacin acelerada, desarrollada por
sistemas biolgicos tales como bacterias, hongos, algas, consorcios
microbianos, entre otros, para degradar contaminantes como hidrocarburos o
plaguicidas y/o sus productos de degradacin que se acumulan en los suelos.
Esta tcnica puede emplear microorganismos autctonos o alctonos para
llevar a cabo la transformacin de los contaminantes (Universidad de
Extremadura, 2004). Este proceso puede presentarse en los agro-ecosistemas
naturalmente como consecuencia del uso extensivo y repetido de un pesticida
para el control de plagas y enfermedades sin rotacin de cultivos (Vidali, 2001).
sta es una tcnica amigable con los ecosistemas y es mucho ms especfica,
por lo que las rutas de degradacin y la eficiencia varan de acuerdo al tipo de
pesticida, concentracin y tipo de formulacin empleado (DEQ, 1998).
De acuerdo con (Vidali, 2001) y Atlas & Unterman (1999), los parmetros
crticos a considerar en un tratamiento biolgico son: el tipo y concentracin
de contaminante, la concentracin de microorganismos, la concentracin
de nutrientes, la aireacin, las condiciones macroambientales, la presencia
de inhibidores y la biodisponibilidad del contaminante.
A continuacin se explican los efectos de algunos de los factores mencionados,
sobre la bio-degradacin de los contaminantes en el suelo.
3.5.1 Efecto de la actividad microbiana en el proceso de biorremediacin
Los microorganismos pueden degradar hidrocarburos y otras sustancias
contaminantes en forma de cultivos puros (especie nica) o cultivos mixtos
(varias especies que mantienen una relacin simbitica). Cuando se trata de
este ltimo caso, el tratamiento biolgico implica una compleja interaccin de
especies microbianas (DEQ, 1998). La velocidad de crecimiento y la utilizacin
de sustratos es generalmente superior en cultivos mixtos que en cultivos puros
(Interstate Technology and Regulatory Council, 2002).
En los ambientes naturales, los microorganismos poseen una notable capacidad
de adaptacin, lo que se favorece por su integracin en poblaciones dentro de
una comunidad. La base de este fenmeno est, por una parte, en la adquisicin
de nuevas capacidades metablicas mediante mecanismos de variacin
gentica convencionales (mutacin, conversin gnica, duplicacin,
transposicin) o intercambio de genes y, por otra, en la posibilidad de
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complementacin de las actividades metablicas de los distintos grupos
microbianos (Snchez & Rodrguez, 2004; DEQ, 1998).
En una mezcla de poblaciones, los consumidores primarios inician el proceso
de degradacin y los consumidores secundarios utilizan los productos
metablicos de los primeros para degradarlos (Singer & Crohn, 2002). Adems
pueden facilitar el crecimiento de los primarios, suministrndoles productos
metablicos (como factores de crecimiento), eliminando txicos mediante
cometabolismo y produciendo intercambio de material gentico (Ercol, et al.,
2001).
El primer paso suele ser realizado por bacterias hetertrofas y actinomicetos,
seguidos de bacterias auttrofas, hongos, incluidos basidiomicetos, y protozoos
especficos.
De acuerdo con Mosquera (2007) y la Universidad de Extremadura (2004), los
pesticidas en el suelo son principalmente degradados por la actividad
microbiana, a mayor actividad microbiana ms rpido ocurrir la degradacin
del compuesto contaminante.
Sobre la degradacin de contaminantes por cultivos puros, Walter (1997) y
Atlas & Unterman (1999), mencionan el uso de tcnicas de biorremediacin en
las que se suelen utilizar microorganismos aclimatados modificados
genticamente, con el fin de mejorar la biodegradacin, proceso tambin
llamado: Bioaumentacin. Segn Alexander (1999), estas tcnicas
generalmente funcionan bien en condiciones de laboratorio o biorreactores,
pero en ambientes externos su implantacin depende de una serie de
inconvenientes que pueden volver complicada la aplicacin de estas tcnicas,
entre los inconvenientes se encuentran:
La capacidad de carga de muchos ambientes, viene determinada por
factores tales como la presencia de toxinas, nutrientes y condiciones
ambientales, movilidad y/o distribucin de los microorganismos y la
presencia de abundante materia orgnica. Por lo que los microorganismos
introducidos debern tener capacidad para adaptarse a estas condiciones.
Los microorganismos aadidos deben sobrevivir a los depredadores y
competir con xito con la poblacin autctona antes de ocupar los nichos
potenciales.
3.5.1.1 Efecto de consorcios microbianos
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El cometabolismo es una actividad importante desde el punto de vista
medioambiental, con matices complejos. Implica esencialmente, el
metabolismo "gratuito", es decir, no til para el crecimiento u obtencin de
energa, de un substrato secundario (compuesto contaminante) por medio de la
generacin de enzimas, generndose nuevos productos, con caractersticas
diferentes en comparacin con los compuesto iniciales (Vidali, 2001; DEQ,
1998).
La existencia de diversidad microbiana en el suelo hace factible la degradacin
posterior de esos productos mediante reacciones sintrficas y, en ltima
instancia, su mineralizacin (descartando la posibilidad, a tener en cuenta, de
que dichos productos sean txicos, y/o persistentes) (Wackett & Hershberger,
2001; Alexander, 1999). El trmino de cometabolismo sintrofa, por tanto,
implica la accin concertada de diferentes microorganismos sobre un sustrato
mediante la combinacin de sus actividades metablicas, lo que permite su
degradacin (Snchez & Rodrguez, 2004).
Este proceso no sera posible en presencia de microorganismos aislados. De
acuerdo con Snchez & Rodrguez (2004), poblaciones mixtas (que a veces se
denominan consorcios) presentan gran importancia para la degradacin ms
efectiva de los contaminantes orgnicos; reflejndose esto, en el creciente
aumento de datos experimentales, en los que la biorremediacin, tanto a nivel
de laboratorio como en campo, est produciendo resultados esperanzadores.
3.5.2 Efecto del pH en los procesos de biorremediacin
El pH afecta significativamente la actividad microbiana. El crecimiento de la
mayor parte de los microorganismos es mximo dentro de un intervalo de pH
situado entre 6 y 8. As mismo, el pH tambin afecta directamente en la
solubilidad del fsforo y en el transporte de metales pesados en el suelo. La
acidificacin o la reduccin del pH en el suelo, se puede realizar adicionando
azufre, aluminio, cal, entre otros compuestos (Maroto & Rogel, 2000).
3.5.3 Efecto de la materia orgnica en la biorremediacin
La materia orgnica tiene una importante participacin dentro del suelo en la
retencin y mineralizacin de plaguicidas. Estas caractersticas junto con la
humedad, aireacin y temperatura adecuadas, convierten a la materia orgnica
en el volumen de suelo donde las condiciones para la actividad biolgica son
ms favorables para la disipacin e inactivacin de los xenobiticos (Hang,
Destino de los Plaguicidas en el Ambiente Suelo, 2003).
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En la superficie del suelo, las condiciones favorecen las vas de mineralizacin
y de estabilizacin de un xenobitico. En el subsuelo, el contenido de materia
orgnica decrece, y esto se refleja en menor degradacin y menor retencin,
de modo que aumenta la persistencia y los riesgos de contaminacin por
transporte a aguas subterrneas (Hang, Destino de los Plaguicidas en el
Ambiente Suelo, 2003).
Segn Bollag et al. (1992), la materia orgnica del suelo es la fraccin ms
activa en la formacin de residuos ligados. La efectividad de este mecanismo
est estrechamente vinculada con las transformaciones de la materia orgnica,
con las que interacta el compuesto. La distribucin de la materia orgnica en
el perfil, con distintos grados de transformacin, es otro factor que modifica
estas interacciones (Barriuso & Koskinen, 1996).
Se han determinado diferencias en la capacidad de formacin de residuos
ligados de atrazina dentro de un mismo suelo entre las distintas fracciones
granulomtricas, como tambin entre suelos con distinto manejo, lo que afecta
la distribucin del carbono orgnico (Hang, 2002). Esto provoca modificaciones
en la capacidad de formacin de residuos ligados, y se considera que tambin
modifica la estabilidad en el tiempo de los residuos ligados formados (Hang,
Destino de los Plaguicidas en el Ambiente Suelo, 2003).
3.5.4 Efecto de los nutrientes en la biorremediacin
Los nutrientes son substancias qumicas necesarias para el desarrollo de los
microorganismos y se pueden dividir en cuatro grupos: fuentes de Carbono,
Fsforo, Nitrgeno y oligoelementos o elementos minoritarios (micronutrientes)
(Interstate Technology and Regulatory Council, 2002; Vidali, 2001).
La dosificacin de Nitrgeno y Fsforo se realiza en funcin de la concentracin
de contaminante de acuerdo a una relacin que vincula la relacin C:N:P, que
vara segn los autores entre 100:10:1 a 100:2:0,2, de acuerdo con: 1) la tcnica
con que se mida la concentracin del contaminante, y que aporta un 80 % de su
masa como carbono al proceso, 2) la velocidad de degradacin esperada y 3)
un balance de masa del material en tratamiento y del aporte de cada fertilizante
con los nutrientes presentes considerados (Ercol, et al., 2001).
El metabolismo microbiano est orientado a la reproduccin de los organismos,
y stos requieren que los constituyentes qumicos se encuentren disponibles
para su asimilacin y sintetizacin (Maroto & Rogel, 2000).
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En la Figura 10 se muestran los requerimientos y productos generados por
microorganismos.


3.5.4.1 Carbono
En el caso de la biodegradacin de un contaminante, la fuente principal de
carbono es el mismo contaminante, y proporciona el carbono necesario para
producir compuestos celulares, productos metablicos (CO
2
, agua, enzimas) y
nuevos microorganismos (Carillo, 2003; Ercol, et al., 2001).
3.5.4.2 Nitrgeno
El Nitrgeno es el elemento necesario para la produccin de aminocidos y
enzimas. Dado que la utilizacin de estos compuestos es muy rpida, los suelos
no alcanzan a cubrir todas las necesidades del proceso, y debe ser incorporado
bajo la forma de fertilizantes de uso agrcola como urea o sulfato de amonio.
Tambin se pueden utilizar fertilizantes de origen orgnico como estircol
(Ercol, et al., 2001).
3.5.4.3 Fsforo
El fsforo interviene en la formacin de compuestos energticos dentro de la
clula, que se utilizan en los procesos de reproduccin y degradacin.
Interviene en diferentes sistemas enzimticos, y es particularmente importante
en la fermentacin de los carbohidratos estructurales, principalmente de la
celulosa (Durand et al., 1983 citado por Ramirez & Meschy, 2005). Forma parte
del material celular, como cidos nucleicos, ATP, fosfolpidos de la membrana
celular y cido teicoico de las paredes celulares de las bacterias Gram+
(Ramirez & Meschy, 2005). Dado que la utilizacin de este compuesto es muy
rpida, algunos suelos no alcanzan a cubrir todas las necesidades del proceso y
debe ser incorporado bajo la forma de fertilizantes de uso agrcola como fosfato
diamnico o fosfato triclcico. Tambin se pueden utilizar fertilizantes de
origen orgnico como estircol. Este parmetro es de importancia crtica para
el buen desarrollo del proceso biolgico (Vidali, 2001).
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Figura 10. Interaccin de los microorganismos con su ambiente (Rodrguez &
Snchez, 2004)
3.5.4.4 Micronutrientes
La fuente de oligoelementos constituye un conjunto variado de elementos como
hierro, cobre, zinc, azufre, cobalto, manganeso, magnesio, calcio y otros
compuestos; que dependen del tipo de microorganismo y del proceso que se
realiza. Las concentraciones de los mismos son muy pequeas (menos de 1
ppm en total). Normalmente no se incorporan en los procesos de campo ya que
el suelo provee estos elementos en cantidades suficientes, aunque en algunos
casos se han debido incorporar algunos gramos por hectrea para tratar algn
contaminante muy especfico o en los que el suelo no posea ese elemento
(Ercol, et al., 2001).
El efecto de la adicin de nutrientes ha sido evaluado por varios autores para la
degradacin de compuestos derivados del petrleo (Sublette et al., 2007;
Juhasz et al., 2005; Npoles et al., 2005), centrando su atencin principalmente
al hallazgo de un balance adecuado en la relacin C:N:P, que permita mayores
eficiencias de degradacin de estos compuestos y se pueda aplicar a
condiciones de campo. Esta relacin es alterada por los altos contenidos de
carbono y las bajas concentraciones de nutrientes que presentan los
compuestos derivados del petrleo, lo que ocasiona limitaciones en la
biorremediacin de suelos contaminados con dichos hidrocarburos.
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En los estudios citados por (Singh & Ward, 2004), se han reportado diferentes
relaciones C:N:P que han generado resultados exitosos en procesos de
biorremediacin, entre los cuales se encuentra la relacin 100:10:1 para la
degradacin de diferentes compuestos orgnicos (Frankenberger, 1992), la
relacin 60:1 (C:N) y 800:1 (C:P) para la degradacin de petrleo (Dibble &
Bartha, 1979) y un rango entre 9:1 y 200:1 (C:N) para degradacin de residuos
de aceites y lodos (Morgan & Watkinson, 1989).
Entre los estudios reportados, se encuentran el de Anwar et al. (2009), quienes
estudiaron el efecto de la adicin de extracto de levadura y caldo nutritivo en la
degradacin de Clorpirifos por una bacteria aislada de la especie Bacillus
pumilus strain C2A1, adems, evaluaron la Glucosa como fuente adicional de
carbono. Encontrando una mayor velocidad en la degradacin del Clorpirifos
en el medio que contena glucosa como fuente adicional de carbono. Los
medios que contenan nutrientes mostraron una capacidad para degradar el
Clorpirifos menor que el medio con glucosa, pero mayor que el medio que
contena Clorpirifos como nica fuente de carbono y energa.
Xie et al. (2007) evaluaron el efecto de la adicin de fertilizantes a base de PK,
NK y NPK, adems de una enmienda orgnica en la degradacin de
Cipermetrin, un pesticida piretroide, y encontraron que el tratamiento con NK
gener un aumento en la persistencia del pesticida en el suelo, mientras que
los dems tratamientos no presentaron diferencia alguna con el control.
Por su parte, Akhtar et al. (2004) estudiaron la persistencia de Clorpirifos y
Fenpropatrin en un suelo, adicionados solos o con los fertilizantes sintticos:
Urea, DAP, SOP y fertilizante foliar Polidol, durante dos meses, y encontraron
que la adicin de fertilizantes no mostr efecto alguno sobre la persistencia de
estos compuestos.
Senapati y Padhihari (2002), evaluaron un suelo de Bhubaneswar, india tratado
con Urea (46% Nitrgeno), Superfosfato simple (16% P
2
O
5
) y muriato de potasio
(60% de K
2
O) como fertilizantes inorgnicos, y con estircol de corral como
enmienda orgnica (adems de la adicin de limo), para la degradacin de
Phorate, un insecticida y acaricida organofosforado. Encontrando mayores
tasas de degradacin de Phorate en el tratamiento con enmienda orgnica, por
encima de todos los fertilizantes inorgnicos, los cuales degradaron el
insecticida en el orden: fsforo, potasio, nitrgeno. La adicin de limo mostr
aumento de la degradacin de phorus en todos los tratamientos (en
comparacin con el control).
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Rajagopal et al. (1983), encontraron que la adicin de amonio a un medio
mineral retard la degradacin del pesticida Carbaril por culturas microbianas
enriquecidas con micro-flora del suelo. Rajaram et. al (1978), encontraron que
la aplicacin de nitrato de potasio o sulfato de amonio a un suelo inundado e
inoculado con culturas enriquecidas capaces de hidrolizar Paratin, inhibieron
la hidrlisis del insecticida. Agnihotri (1978) coment que la degradacin de
Disulfon y Forato en suelo fue ligeramente menor que con la adicin de
fertilizante. Sin embargo, en condiciones in situ la degradacin fue mucho
mayor con la adicin de fertilizantes, pero esto fue atribuido al efecto que el
fertilizante tuvo sobre el crecimiento y desarrollo de las plantas que potenci la
degradacin. Por ltimo, Siddaramappa & Seiber (1979), evidenciaron que la
aplicacin de sulfato de amonio y urea tuvo muy poca influencia en la
degradacin de Carbofuran en un suelo de arroz en Filipinas.
Castaeda (2005), evalu la adicin de Nitrgeno a diferentes dosis (6, 24 y 32
ppm) en la degradacin de Clorpirifos en un suelo agrcola, y encontr que a
dosis de nitrgeno de 6 ppm no se observ efecto alguno en la degradacin de
este compuesto, pero a una concentracin de 24 ppm o superior, se evidenci
un aumento notorio en la velocidad de degradacin del Clorpirifos.
Perrin et al. (2001), evaluaron el efecto del uso de lodo generado a partir de un
proceso de tratamiento de aguas residuales como enmienda orgnica y de un
fertilizante inorgnico a base de nitrgeno y fosfato en la degradacin del
herbicida Isoproturon, obteniendo mejores porcentajes de degradacin con el
tratamiento a base de nitrgeno y fsforo que con el tratamiento basado en el
lodo.
3.5.5 Efecto de la humedad del suelo en la biorremediacin
El agua es importante para el desarrollo y crecimiento de los microorganismos,
el agua forma parte del protoplasma bacteriano y sirve como medio de
transporte de compuestos orgnicos, nutrientes y oxgeno a la clula. Es
conveniente mantener una humedad del orden del 70 % de la capacidad de
campo
1
, Un exceso de humedad produce inhibicin del proceso al reducir la
concentracin de oxgeno, o incluso generarse condiciones anaerbicas. Por su
parte, un dficit de humedad impide el desarrollo de los microorganismos
(Vidali, 2001; Ercol, et al., 2001; Maroto & Rogel, 2000).

1
Masa de agua que admite el suelo hasta la saturacin, depende de cada tipo de suelo.
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45

Schroll et al. (2006), cuantificaron el efecto de la humedad del suelo en la
mineralizacin de pesticidas y encontraron que: 1) en suelos con un potencial
de agua -20 MPa, ocurri una mnima mineralizacin del pesticida; 2) existe
una correlacin linear entre el incremento de la humedad del suelo, y el
incremento relativo de la mineralizacin del pesticida; 3) La optima
mineralizacin del pesticida se obtuvo en un suelo con un potencial de agua de
-0.015 MPa, y 4) cuando la humedad del suelo se aproxim a la capacidad de
campo, la mineralizacin del pesticida fue considerablemente reducida.
Debido a que, tanto los pesticidas como los suelos elegidos variaron en un
amplio rango, los autores proponen que la relacin observada en este estudio
puede tambin ser vlida para la degradacin aerbica de otros compuestos
orgnicos en suelos nativos y artificiales.
3.6 BIORREMEDIACIN CON COMPOST
La tecnologa de Biorremediacin con Compostaje se fundamenta en la
estimulacin de la actividad biodegradadora de las poblaciones microbianas
presentes en un suelo contaminado, mediante la adicin de compost, segn las
caractersticas y requerimientos de cada suelo contaminado a tratar y
enriquecido con poblaciones microbianas degradadoras de los contaminantes
presentes en dicho suelo (Singer & Crohn, 2002; EPA, 1998; INKOA SISTEMAS
S.L., S.F.).
Los suelos contaminados suelen tener una actividad microbiana baja,
bsicamente debido a condiciones ambientales desfavorables, tales como una
baja concentracin de materia orgnica, oxgeno, nitrgeno y/o fsforo, etc
(Mora, 2006). As, la adicin de compost, durante el proceso de tratamiento in-
situ de los suelos contaminados, con poblaciones microbianas biodegradadoras
y con un alto porcentaje de materia orgnica biodegradable, provocar un
aumento de la capacidad biorremediadora intrnseca de cada suelo
contaminado, acelerando as el proceso de recuperacin del emplazamiento
(EPA, 1998; INKOA SISTEMAS S.L., S.F.).
Otras tecnologas de remediacin estn basadas en la inoculacin de
microorganismos exgenos, siendo extremadamente dificultosa la
adaptabilidad de estos microorganismos a un medio tan hostil como es un suelo
contaminado. Adems, estos microorganismos exgenos deben competir por
los escasos recursos con los microorganismos autctonos, perfectamente
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adaptados a las condiciones ambientales de un suelo contaminado (INKOA
SISTEMAS S.L., S.F.; Snchez & Rodrguez, 2004).
Adems de reducir los niveles de contaminacin, el compost adelanta la tarea
de mejoramiento de las condiciones del suelo para el crecimiento y
fortalecimiento vegetal. En este rol, el compost provee acondicionamiento del
suelo, y tambin provee nutrientes a una amplia variedad de vegetacin (EPA,
1998; BIOAGRO, S.F.).
Segn EPA (1998), en un estudio, en el cual se remedi un suelo que contena
3000 partes por milln (ppm) de herbicida dicamba a niveles no detectables en
50 das mezclando chips de madera y compost maduro en el suelo en una
relacin compost:suelo contaminado (10:90). De acuerdo con los autores, el
dicamba se degrada eventualmente en el suelo, pero el proceso lleva aos en
vez de das.
Otras ventajas del uso de compost, en comparacin con otros procesos de
biorremediacin son (Singer & Crohn, 2002):
Consigue niveles finales de descontaminacin ms altos, debido a la
presencia de un inculo bioaumentado de microorganismos degradadores
en el compost, acelerando, as, el proceso de remediacin.
El tratamiento tiene una duracin menor, comparado con otros procesos de
remediacin.
Es una tecnologa verstil, puesto que se desarrolla a medida, segn los
requerimientos especficos de cada contaminante.
Necesita menores requerimientos de manipulacin y mantenimiento, lo que
reduce los costos de tratamiento.
3.7 ORIGEN DEL SUELO DE MORAVIA
Moravia es un barrio ubicado en la Comuna 4, al nororiente de la ciudad entre
las estaciones del Metro: Universidad y Caribe. Es una de las zonas con
procesos de ocupacin espontnea ms arraigados desde los aos 60,
influenciados principalmente por la presencia de la Estacin del Ferrocarril: El
Bosque, y la extraccin de materiales del ro Medelln. Cuenta con una
superficie de 43.7 hectreas y est conformado por los sectores de El Bosque,
Moravia, El Morro, El Oasis Tropical y La Herradura (G4moravia, 2007; Alcalda
de Medelln, 2006).
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En 1976 el alcalde de la poca, debi resolver el problema del depsito de
basuras de la ciudad y dado que en este lote haba un gran hueco dejado por la
extraccin de material de playa que all tena lugar de tiempo atrs, decidi
disponerlas all con carcter provisional (El Mundo, 2006). Moravia entonces, se
convirti en el depsito de basuras de Medelln y de sus municipios vecinos. Y
fue muy reconocido en la ciudad por tres cosas: desechos, recicladores y por
ser cuna de uno de los botaderos de cadveres ms tradicionales de Medelln
(Medina, 2006).
Este uso del suelo motiv a la invasin del predio aledao por parte de familias
sin hogar de muy bajos ingresos, quienes vieron all la oportunidad para
resolver su problema de vivienda. Hoy en da Moravia es un barrio de invasin
habitado por gran cantidad de gente que tiene sus casas construidas sobre una
montaa de cenizas, desechos industriales, y acumulacin de metano (Medina,
2006).
En la fase inicial de operacin de este vertedero, se depositaban unas cien
toneladas diarias de basura, cantidad que con el tiempo fue aumentando
(AMVA, 2006); dando como resultado para 1983 la produccin de una montaa
de basuras con un rea de 10 hectreas. Hoy en da, an se presenta
generacin de lixiviados como producto de las aguas que se infiltran en el
terreno, arrastrando los componentes qumicos y txicos que se producen con
la descomposicin de la materia orgnica, que aunque es normal que se
presenten, en el caso de El Morro son altamente contaminantes porque all
tambin se depositaban residuos peligrosos, que poseen metales pesados
como el plomo (Agencia de Noticias UN, 2008; El Mundo, 2006; AMVA, 2000).
Esta rea ha sido catalogada como: de riesgo no recuperable y por tal motivo
se ha establecido su desalojo a travs de un plan de reubicacin de los
asentamientos humanos en los sectores con mayor potencial para la generacin
de efectos adversos a la salud (Oasis y El Morro), ests zonas quedaron a cargo
del rea Metropolitana del Valle de Aburr, como autoridad ambiental
competente, para su manejo y cuidado de forma tal que se evite una nueva
ocupacin (AMVA, 2007).
3.8 EFECTO CRUZADO DEGRADACIN CRUZADA
La habilidad de algunos microorganismos del suelo para metabolizar
estructuras qumicas relativamente similares, de compuestos introducidos al
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suelo ha sido reconocida y referenciada como adaptacin cruzada o
degradacin cruzada (Kearney & Kellogg, 1985).
Hoy en da hay varias evidencias que la adaptacin cruzada no es solo un
fenmeno presentado en condiciones idealizadas de laboratorio, o algo
exclusivo para los herbicidas ms biodegradables en ciertas condiciones de
suelo, sino que puede ser un problema agronmico con unas dimensiones poco
conocidas (Kearney & Kellogg, 1985).
En ciertas regiones geogrficas se ha evidenciado que diferentes pesticidas
aplicados a un mismo suelo, han fallando en su funcin de controlar las plagas
objetivo. Los suelos en los que ocurre este fenmeno, han sido llamados suelos
problema, y entre los parmetros responsables de esta caracterstica se
encuentran principalmente involucradas las poblaciones microbianas
extremadamente eficientes para degradar estos pesticidas.
Las variables que hacen que se produzcan estos problemas en el suelo
incluyen:
El uso repetido del mismo pesticida peridicamente sobre el mismo suelo.
Las similitudes qumicas de los pesticidas usados sobre el mismo cultivo.
Se ha sugerido que la similitud entre estructuras qumicas de diferentes
pesticidas, puede inducir a la produccin de enzimas capaces de degradar
estos compuestos qumicos, adicionados simultneamente o subsecuentemente
al mismo suelo (Kearney & Kellogg, 1985).
Por su parte en un estudio realizado por Karpouzas et al. (2005), se lograron
aislar dos bacterias capaces de degradar el nematicida Cadusafos de un suelo
tratado con este producto para el control de plagas durante varios aos.
Adems de lograr obtener una alta eficiencia de degradacin del nematicida
con estas bacterias, tambin se encontr que stas podan degradar Etoprofos,
otro nematicida con una estructura qumica similar a la del Cadusafos.
Los enlaces de pesticidas, que parecen ser susceptibles a la degradacin
cruzada en los suelos problema incluyen: Carbamato (NCOO), Urea
(NCON), amida (NCOC), ester (COOC), tiocarbamato (NCOS), y
ditiocarbamato (NCSS). Singh et al. (2005), agrega como pesticidas
susceptibles las dicarboxiamidas y los isotiocianatos.
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Una vez establecida la degradacin acelerada, los microorganismos
involucrados en este proceso pueden mantener esta capacidad por ms de un
ao (Singh et al., 2005; Karpouzas et al., 2005).
La degradacin cruzada ha llevado a investigar sobre prcticas agronmicas, o
inhibidores necesarios, para proteger el potencialmente gran nmero de
pesticidas de futuras perdidas de efectividad.
3.9 MTODOS PARA LA EXTRACCIN DE PESTICIDAS
La extraccin de los pesticidas hace parte del mtodo de evaluacin analtica
de los mismos y es un procedimiento complicado cuando se trabaja con
matrices complejas como el suelo (Babic et al., 1998). La finalidad de toda
tcnica de extraccin es permitir la transferencia cuantitativa de los pesticidas
que se encuentran en una muestra de suelo a una fase liquida (Tor et al., 2006);
utilizndose comnmente como fase lquida los solventes orgnicos; lo cual va
seguido, por lo general, de procedimientos para la limpieza y remocin de
interferencias (p. e. filtracin o decantacin) segn el mtodo de anlisis
empleado (Nollet y Signh, 2009).
Segn Tor et al. (2006), los mtodos de extraccin con solventes orgnicos ms
utilizados son: extraccin con agitacin (Kleibhmer, 2001), Soxhlet, Sonicacin
(Kleibhmer, 2001), extraccin asistida por microondas (MAE, por sus siglas en
ingls) (Kramer y Ryan, 2000; Onuska y Terry, 1993), extraccin con fluidos
supercrticos (SFE por sus siglas en ingls) (Gonalves et al., 2006; Reverchon y
De Marco, 2006) y extraccin con lquidos presurizados (PLE, por sus siglas en
ingls) (Antunes et al., 2008; Hussen et al., 2006). Siendo las tres primeras, las
tcnicas ms usadas (Babic et al., 1998) por su simplicidad, eficacia, amplio uso
y aprobacin por organizaciones como la U.S. EPA (United States Environmental
Protection Agency) (Saleh y Sanagi, 2009; Sanghi y Kannamkumarath, 2004).
3.9.1 Extraccin con agitacin
En esta tcnica de extraccin, las muestras slidas (ej.: suelo, sedimentos, etc.)
son dispuestas en un frasco junto con el solvente que atrapar el analito, el
sistema completo es agitado usando un agitador mecnico por un periodo
definido de tiempo, usualmente alrededor de una hora. Se pueden realizar
repetidas extracciones para remover cuantitativamente el analito desde la
muestra, y luego se combinan los extractos antes del anlisis. Como la muestra
est en contacto con el slido, la muestra puede requerir de procesos como la
filtracin para deshacerse del material partculado (Kleibhmer, 2001).
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3.9.2 Extraccin por sistema Soxhlet
La extraccin con Soxhlet se fundamenta en la ebullicin del solvente extractor,
que se condensa a reflujo y cae sobre un recipiente que contiene la muestra en
su interior, quedando en contacto con sta hasta que se alcanza el tiempo de
retencin (Tr) del recipiente y vuelve a caer el solvente (con el material
retenido) al baln, este proceso se repite la cantidad de veces necesaria para
que la muestra quede agotada del analito, el cual se va concentrando en el
baln del solvente (Nollet y Signh, 2009).
De acuerdo con Nuez (2008), en esta tcnica los principales factores a tener en
cuenta son: 1) La cantidad de solvente a utilizar, la cual debe ser la necesaria
para que no quede seco el baln inferior porque de esa manera, se seca la
muestra y se quema se puede producir una explosin de los vapores cuando
caiga el lquido rebosado sobre el vidrio recalentado. 2) La seleccin del
solvente, hay una temperatura mxima y mnima de ebullicin en la que el
equipo funciona adecuadamente. En el extremo inferior se encuentran los 40 C
(muy cercano a la temperatura ambiente particularmente en los climas clidos).
Con respecto al extremo superior debe ternerse en cuenta que a medida que
aumenta el punto de ebullicin del solvente disminuye significativamente el
caudal que se evapora y por ende la velocidad de extraccin. 3) Tipo de
solvente, los de carcter no polar suelen tener alguna dificultad en drenar
puesto que no mojan el vidrio. Ello es frecuente con los derivados clorados
como el diclorometano y el cloroformo y los hidrocarburos superiores al
hexano.
Segn Nollet y Signh (2009) la extraccin con sistema Soxhlet es una tcnica
simple y econmica, en la que a menudo se obtienen buenas recuperaciones.
Pero sin embargo se presenta la degradacin trmica del analito y
adicionalmente el tiempo de la tcnica y la cantidad de solvente orgnico
empleada para la recuperacin son altos.
3.9.3 Extraccin con Ultrasonido
Las extracciones con ultrasonido se realizan con el sometimiento de la muestra
y el solvente en un bao de ultrasonido, o por medio de la insercin de una
sonda snica dentro del sistema solvente-muestra (Kleibhmer, 2001).
La energa ultrasnica impartida a las soluciones causa cavitacin acstica, la
cual consiste en la formacin de burbujas y su subsecuente implosin. El
colapso de las burbujas creado por la sonicacin de soluciones, genera
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temperaturas locales extremadamente altas y gradientes de presin, lo que
potencia el contacto entre el solvente y el analito contenido en la matriz slida.
Posteriormente el analito solubilizado puede ser medido por tcnicas
instrumentales (Ashley et al., 2001).
Babic et al., (1998) afirman que la extraccin por ultrasonido provee un mayor
contacto entre la matriz slida y el solvente orgnico que el logrado por el
mtodo de extraccin con agitacin, lo que usualmente resulta en una mayor
recuperacin del analito.
3.9.4 Extraccin de malatin
Segn la ASTDR (2003), la extraccin del malatin presente en muestras de
suelos y sedimentos se ha realizado principalmente por medio del sistema
Soxhlet, ya que es la tcnica de extraccin estndar usada en la mayora de los
mtodos de la EPA. A continuacin se presentan algunos estudios realizados a
matrices slidas contaminadas con Malatin.
Saenz et al (1995), cuantificaron la cantidad residual de los pesticidas malatin,
diclofuanid y fenitrotion en manzana, por medio del uso del sistema de
extraccin Soxhlet, utilizando 100 mL de Acetato de Etilo como solvente, con un
tiempo de extraccin de 90 minutos; con lo cual se obtuvo porcentajes de
recuperacin cercanos al 100% para los tres pesticidas.
Bavcon et al. (2003) Utiliz un mtodo de extraccin consistente en alcuotas de
10 g de suelo al cual se le adicion tres porciones de acetato de etilo (15 mL la
primera porcin y dos porciones de 10 mL cada una). La fase orgnica fue
colectada, evaporada y el residuo resuspendido en 1 mL de acetato de etilo
para su posterior anlisis.
Mosquera (2007) obtuvo porcentajes de recuperacin promedios de 89.4%
para un suelo agrcola contaminado con Malatin utilizando como tcnica de
extraccin agitacin mecnica rotativa durante 4 horas, y acetato de etilo como
solvente extractor.
Hernndez et al. (2009) realiz la extraccin de malatin de un suelo
mediterrneo por medio de la implementacin del mtodo MAE. Para lo cual
utiliz 5 g de suelo a los que adicion 25 mL de acetato de etilo en un tubo PTFE
cerrado, luego el sistema fue sometido a agitacin en vortex. La mezcla fue
extrada en un horno microondas (Mars Xpress) con un calentamiento de 10 a
132 C, y luego se mantuvo por 5 minutos. Posteriormente, la muestra fue
centrifugada a 3000 rpm y 15 C por 15 minutos y la fase orgnica fue
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concentrada hasta sequedad en un rota-evaporador (Laborota 4000, Heidolph)
a 40 C. El residuo seco fue resuspendido en 1 mL de acetato de etilo y
posteriormente fue analizado. Con el proceso descrito se obtuvo una
recuperacin de 94%.
3.9.5 Extraccin de clorpirifos
La extraccin por Soxhlet es comnmente empleado para evaluar residuos de
Clorpirifos en suelos y sedimentos (Fenske et al. 1990; Lewis et al. 1994 citados
por ATSDR, 1997). La extraccin con fluidos super-crticos (SFE) ha mostrado
buenos resultados para la recuperacin de Clorpirifos de matrices slidas
(ATSDR, 1997).
Chu (2008) realiz la cuantificacin de Clorpirifos en una muestra de suelo de
25 g depositandola en un erlenmeyer de 250 mL, posteriormente se adicion
100 mL de acetona:ter de petroleo (1:1, V:V) y se agit a 150 rpm por 2 horas
en un agitador mecnico. La mezcla fue decantada, y filtrada a travs de un
embudo buchner, el retenido fue lavado tres veces con 20 mL de la mezcla
acetona:ter de petrleo (1:1, V:V). El filtrado fue recolectado en un embudo de
separacin de 250 mL, conteniendo 50 mL de sulfato de sodio al 3%, y extrado
tres veces con 50, 40 y 40 mL de ter de petrleo. La fase orgnica fue recogida
en un matraz de fondo plano y fue concentrado en un rotaevaporador hasta
quedar casi seca. Luego fue resuspendida en ter de petrleo hasta un volumen
final de 10 mL, y posteriormente analizado.
Lopera et al. (2005) extrajo el clorpirifos de muestras de suelo agregando 35 mL
de una mezcla hexano:acetona en una relacin 1:1, y aplicando agitacin
mecnica a temperatura ambiente durante 12 horas a 240 rpm. Luego por
decantacin en probeta se separ la fase orgnica, se midi su volumen y se
tomaron 250 L de fase orgnica para su anlisis. Con este procedimiento se
lograron extracciones del 73.42% en los controles y 82.38% en los ensayos de
degradacin.
Castaeda (2005) evalu diferentes soluciones extractoras para la recuperacin
del clorpirifos de un suelo agrcola tales como: acetronitrilo, acetronilito:agua,
acetona, acetonitrilo:acetona, metanol, metanol:acetato de etilo, acetato de
etilo:acetona y acetato de etilo. Con todos los solventes se aplic agitacin
rotativa usando diferentes volmenes de solvente (10, 20, 30, 40 mL), tiempo de
agitacin (1, 2, 3, 4, 6 y 8 h), velocidad de agitacin (200, 250, 300 y 360 rpm) y
nmero de extracciones (1, 2 o 3). Obteniendose los mejores porcentajes de
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recuperacin (100) utilizando 30 mL de acetato de etilo como solucin
extractora y aplicando agitacin rotativa a una velocidad de 360 rpm por 4 h,
luego se rotaevaporo el solvente a 30 C hasta un volumen final de 100 L y se
resuspendio en 7 mL de Acetonitrilo:Agua acidulada para su cuantificacin.
Karnchanasest et al. (2007) utiliz una mezcla de hexane:acetone en una
proporcin 8:2. 2 g de muestra fueron mezclados con 40 mL de solvente y 5 mL
de Triton x -100 al 15%. Las mezclas fueron agitadas a 250 rpm por 4 horas.
Despus de la agitacin los frascos fueron congelados a -4 C para solidificar la
pequea capa de agua y luego el solvente fue transferido a un vial donde se
adicion de 2-3 g de Na
2
SO
4
para deshidratar por completo la muestra. El
clorpirifos disuelto en la fraccin de solvente fue concentrado usando una
corriente de nitrgeno al 99.5% y posteriormente cuantificado.
3.9.6 Extraccin de metil paratin
Segn la ASTDR (2001) la extraccin y limpieza de muestras contaminadas con
metil paratin depende ampliamente de la matriz y el mtodo de deteccin.
De acuerdo con World Health Organization (1993) el metil paratin es extrado
del suelo con acetona, acetona:n-hexano o hexano/isopropanol. Luego se
realiza su particin en diclorometano en un segundo paso, posteriormente
puede o no realizarse limpieza de la muestra, utilizando para tal fin silica gel.
Logrndose as recuperaciones de metil paratin entre 70-85%.
Wang et al. (2008) evalu un Nuevo mtodo para la extraccin de pesticidas
utilizando acetona. La extraccin y la particin fueron combinadas en un solo
paso saturando el solvente extractor con NaCl y simultneamente retirando el
agua con diclorometano. La fase orgnica, es posteriormente secada con
Na
2
SO
4
y evaporada para su posterior anlisis.
3.9.7 Extraccin multiresiduos
El gran incremento en el nmero de pesticidas que presentes en el ambiente
requiere del desarrollo de mtodos analticos que permitan la determinacin
simultnea de diferentes pesticidas con un mnimo nmero de etapas para la
extraccin y limpieza de las muestras (Babic et al., 1998). Por tal razn, varios
autores han desarrollado en los ltimos aos mtodos flexibles para la
determinacin analtica de estos compuestos en diferentes muestras de suelo, a
continuacin se presentan algunos de estos mtodos.
Blasco et al. (2005), determine niveles traza de pesticidas (benzimidazoles y
azoles, organofosforados, carbamatos, neonicotinoides y acaricidas) en frutas.
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La extraccin de las muestras se realiz por medio de la tcnica PLE, a una
temperatura de 75 C y una presin de 1500 psi, usando acetato de etilo como
solvente extractor y almina acida como agente secante. Obteniendo un rango
de recuperacin de los pesticidas entre 58% a 97% y de desviacin estndar
relativa de 5% a 19%.
Gonalves et al. (2005) desarrollaron una metodologa para el anlisis de 44
analitos (pesticidas y algunos metabolitos de degradacin) en muestras de
suelos, la extraccin se bas en agitacin por ultrasonido (USE) en tres
periodos de 15 minutos cada uno (en total 45 minutos). Para esto, se tom una
muestra de suelo de 5 g, y se adicion 5 mL de solvente orgnico en cada
periodo de agitacin (15 mL en total).Se evaluaron los solventes: n-hexano,
acetato de etilo, acetonitrilo y diclorometano con el fin de optimizar el proceso
de extraccin, obtenindose los mejores resultados con el acetato de etilo. Los
pesticidas evaluados pertenecan a diferentes grupos (insecticidas
organoclorados, organofosforados, y piretroides; herbicidas trianzina y
acetanilida y otros pesticidas miscelneos). Los porcentajes de recuperacin
fueron buenos (69-118%, 88% en promedio) para la gran mayora de los
analitos. La evaluacin de los pesticidas fue realizada a tres profundidades y en
diferentes tipos de suelos con el fin de estudiar la influencia de las
caractersticas del suelo y su comportamiento travs del tiempo.
3.10 MTODOS DE ANLISIS DE PESTICIDAS
Los mtodos de anlisis de pesticidas deben suministrar resultados que sean
efectivos en costos, en tiempo, confiables y verificables. Segn con la
subdivisin O de la EPA, Pesticide Assessment Guidelines, los mtodos
aprobados para el anlisis de pesticidas deben: 1) tardar como mximo 24
horas, 2) Utilizar equipos y reactivos de fcil disponibilidad. 3) Identificar
residuos en presencia de otros residuos, y 4) detectar los residuos a los niveles
de tolerancia establecidos o por debajo de stos. Adems deben ser
inalterables por variaciones ambientales como humedad, temperatura, y
pureza del solvente (U.S. Congress, 1988).
Segn Nollet y signh (2009) para la medicin de pesticidas organofosforados
pueden utilizarse diferentes tcnicas de anlisis, dentro de las cuales se
encuentran: Bioensayos, Ensayos con enzimas, Inmunoensayos, radio ensayos,
Cromatografa en capa fina (TLC, por sus siglas en ingls), Cromatografa de
Columna, y Electroforesis capilar (CE, por sus siglas en ingls). Sin embargo la
metodologa ms utilizada es la cromatografa de gases (CG), debido a su
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disponibilidad y reproducibilidad, su amplio rango de detectores sensibles y
lineales y la compatibilidad con los espectrofotmetros de masas (Ludwig,
1994). Sin embargo, para varios compuestos que no pueden ser analizados por
esta tcnica como compuestos muy polares que no son fcilmente vaporizables,
con puntos de ebullicin por encima de los 200C y que son lbiles
trmicamente; la cromatografa lquida (CL) con detectores como: ultravioleta
(UV), de fotodiodos (PAD), de fluorescencia (FD) y Espectrometra de masas
(MS) ha sido una opcin muy utilizada (Ramrez, 2009).
3.10.1 Cromatografa
La cromatografa es un trmino colectivo para separacin de mezclas basado en
la particin de las sustancias entre dos fases heterogeneas inmiscibles, una de
las cuales es estacionaria o fija, con una gran rea superficial; y la otra una fase
mvil, la cual fluye sobre la fase estacionaria (Ramrez, 2009; Nollet, 2009).
3.10.1.1 Cromatografa de gases
En la cromatografa gaseosa la fase estacionaria puede ser tanto slida (como
en cromatografa de adsorcin) como lquida (como en cromatografa de
particin). La fase mvil puede ser un gas, lquido, vapor o solido voltil
(Gutirrez y Droguett, 2002). Hay dos principios de separacin basados en la
naturaleza de la fase estacionaria: 1) Cromatografa Gas-slido (GSC, por sus
siglas en ingls), en la cual la fase mvil es un gas y la estacionaria es un slido
activo como la almina, silica gel, entre otros. 2) Cromatografa Gas-lquido
(GLC, por sus siglas en ingls) en la cual la fase mvil es un gas y la fase
estacionaria es un liquido distribuido en un soporte solido inerte. La GLC es
usada para la separacin de una variedad de compuestos, generalmente
orgnicos, mientras que GSC es usada para la separacin de gases (Brewer,
1973).
El principio de operacin se basa en la introduccin de pequeas cantidades
de una muestra (gaseosa o lquida) conteniendo nanogramos de compuestos
(gaseosos o vaporizables) de inters analtico, los cuales son transportados por
un gas inerte entre una columna (que contiene la fase estacionaria) bajo
condiciones controladas de temperatura. Los componentes son separados entre
distintas bandas (o zonas) de molculas, debido a diferencias en la absorcin,
solubilidad y enlace qumico de sus molculas (Gutirrez y Droguett, 2009;
Ramrez, 2009). Estas fracciones se mueven a travs de la columna a diferentes
velocidades y emergen como compuestos separados. El gas portador emerge
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de la columna y pasa a travs de un detector, el cual produce una seal
proporcional a la cantidad de cada compuesto arrastrado. La respuesta del
detector es amplificada y mostrada en un reproductor como un pico. El
cromatograma obtenido es una grfica del tiempo vs la intensidad de una serie
de picos, que representan los compuestos eluidos en la corriente portadora
(Brewer, 1973).
La cantidad de tiempo requerida para que cada pico aparezca en el grfico es
el tiempo de retencin (Tr), y es caracterstico de cada una de las sustancias
presentes para las condiciones cromatograficas establecidas. El tiempo de
retencin, por lo tanto, identifica la sustancia, y el rea del pico es una medida
cuantitativa, la cual es proporcional a la cantidad de cada compuesto presente.
Una apropiada seleccin del puerto de inyeccin, columna y temperatura del
detector determina la efectividad de las separaciones cromatograficas de los
compuestos en cada tipo de muestra (Brewer, 1973).
La cromatografa gaseosa se ha convertido en la tcnica analtica ms popular
debido a su simplicidad de operacin, alto poder de separacin y velocidad. La
gran variedad de columnas empacadas, detectores y controles de temperatura
permite su gran diversidad de aplicaciones, las cuales incluyen: anlisis
medioambientales, qumicos, procesos petroqumicos y alimentarios, as como
aplicaciones en la industria farmacutica (Nollet, 2009; Gutirrez y Droguett,
2002; Ludwig, 1994).
3.10.1.1.1 Detectores acoplables a cromatografa de gases
Los detectores deben medir continuamente, rpidamente y con gran
sensitividad los componentes, los cuales aparecen en el gas portador mientras
este emerge de la columna, por medio de cambios en una propiedad fsica o
qumica de la corriente de gas efluente. La correspondiente respuesta elctrica
es amplificada y alimenta el reproductor (Brewer, 1973).
Un buen detector es altamente sensible (sensibilidad), tiene una respuesta
lineal (linearidad) sobre un amplio rango de concentracin y es relativamente
insensible a variaciones de flujo y temperatura (rango dinmico lineal) (Olgun
y Rodrguez, 2004).
Los detectores ms utilizados para la deteccin de pesticidas organofosforados
son: el detector fotomtrico de llama (FPD), el detector de captura de
electrones (ECD) y el detector de Nitrogeno/Fsforo (NPD) (Ramrez, 2009;
Olgun y Rodrguez, 2004).
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Detector fotomtrico de llama (FPD)
De acuerdo con y Olgun y Rodrguez (2004), el detector fotomtrico de llama
consiste en una llama reductora que produce especies quimioluminiscentes, las
cuales emiten una luz caracterstica que es ptimamente filtrada por la longitud
de onda deseada que determina los componentes detectados en el foto-
detector.
Detector Nitrogeno/Fsforo (NPD)
El corazn del detector NPD es una perla de cermica recubierta por una sal de
un material fcilmente ionizable, generalmente rubidio. El calor crea una
plasma superficial sobre la perla. Los compuestos de nitrgeno y o fsforo se
ionizan y originan una corriente entre los polos cargados del dispositivo.
Ambos detectores poseen una gran selectividad para las molculas que
contienen fsforo y/o nitrgeno. Los analitos ms usuales que se estudian con
estos detectores son los plaguicidas fosforados, aunque algunos disolventes de
uso industrial muy frecuentes tambin se estudian con este sistema (Cardona y
Giraldo, 2008).
Detector de Captura de Electrones (ECD)
Este detector utiliza una cmara de iones conteniendo un gas (generalmente Ar
o N
2
) y electrones libres (partculas ) generados por una fuente radioactiva
(63Ni), con un potencial aplicado lo suficientemente grande para colectar por
completo los electrones libres. Las molculas de la muestra (las cuales tienen
una afinidad por los electrones libres) capturan los electrones libres y se
convierten en iones negativos, por lo que la corriente de electrones decrece,
siendo esta la base de la respuesta transmitida al sistema de datos del equipo
(Olgun y Rodrguez, 2004; Brewer, 1973).
Es altamente sensible a compuestos halogenados, nitrogenados y fosforados;
por lo tanto es muy til en la deteccin de pesticidas. Da un poco de respuesta
a hidrocarburos y otros carbonilos conjugados (Olgun y Rodrguez, 2004).
Esta tcnica ha sido utilizada para cuantificar residuos de pesticidas
organofosforados como el Malatin (ASTDR, 2003), Metil paratin (ASTDR,
2001) y Clorpirifos (ASTDR, 1997) o para determinar varios pesticidas
organoclorados (Abhilash y Singh, 2008; Sun et al., 2007; Zhang et al., 2005) y
organofosforados (Mohd, 2010; Murcia, 2008; Gonalves et al., 2005).

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