TEMA 1.

INMUNIDAD CONTRA BACTERIAS

1. Infeccin y respuesta inmune 2. Concepto de patogenicidad bacteriana 3. Tipos de pared bacteriana celular a. Bacterias grampositivas b. Bacterias gramnegativas c. Micobacterias d. Espiroquetas 4. Mecanismos inmunopatognicos 5. Respuesta inmune a. Innata b. Adaptativa 6. Mecanismos de evasin a. Variacin antignica b. Orientacin de la respuesta inmune c. Mecanismos de escape de la fagocitosis

1. INFECCIN Y RESPUESTA INMUNE La primera defensa frente a las infecciones constituye la barrera fsico-qumica formada por la piel y las mucosas. La mayora de los patgenos entran al organismo a travs de roturas de dicha barrera epitelial. Una vez que los organismos han penetrado en el organismo, las primeras clulas que actan contra ellos son las clulas fagocticas (neutrfilos y macrgafos). Adems, las barreras epiteliales y las cavidades serosas contienen linfocitos T intraepiteliales y linfocitos B1 que reconocen los microbios de contacto ms habituales y responden contra ellos. Cuando las clulas dendrticas captan el antgeno, migran a los ganglios regionales, donde lo presentan a los linfocitos para que tenga lugar la respuesta inmune.

Fases de la respuesta inmune Inmunidad innata (0-4 h): Aporta la primera lnea de defensa frente a los microbios. Se llama as porque el individuo nace con ella. Es inmediata, est ya dispuesta a luchar contra el patgeno ya que no requiere sensibilizacin previa del individuo para que esta respuesta se desencadene. Es muy rpida y no tiene memoria inmunolgica, con lo que la respuesta siempre es del mismo tipo y de la misma intensidad. Los componentes de la inmunidad innata reconocen estructuras caractersticas de los patgenos microbianos que no estn presentes den las clulas de los mamferos. Los productos microbianos que estimulan la inmunidad innata reciben el nombre de patrones moleculares asociados a patgenos: PMAP ( PAMP: Pathogen Associated Molecular Pattern). Los microorganismos de diversas clases (p.ej, virus, bacterias, hongos) expresan PMAP distintos (ac. Nucleicos exclusivos de microbios, secuencias de ADN CpG sin metilar). Debido a esta especificidad hacia las estructuras microbianas, el sistema inmunitario innato es capaz de diferenciar lo propio de lo ajeno, pero de un modo diferente al adaptativo. Respuesta inducida temprana (4-96 h): tiene lugar el reclutamiento de clulas efectoras y la activacin de las mismas Respuesta adaptativa tarda (>96 h): Transporte del antgeno a los rganos linfoides, donde son reconocidos por las clulas naive B y T. Tiene lugar la expansin clonal y la diferenciacin a clulas efectoras que llevarn a cabo la eliminacin del patgeno Inmunidad protectora: Tras una reinfeccin, el agente patgeno puede ser reconocido por anticuerpos y clulas T efectoras preformadas que lo eliminarn. Memoria inmunolgica: Al haber una reinfeccin el patgeno tambin puede ser reconocido por los linfocitos T y B de memoria. Tiene lugar una expansin rpida y/o una diferenciacin a clulas efectoras que eliminarn el patgeno de una forma mucho ms rpida y eficaz que la primera vez que tuvo lugar la infeccin.

2. DEFINICIN DE PATOGENICIDAD MICROBIANA Un microorganismo patgeno es aquel capaz de causar enfermedad en otro organismo (hospedador). La relacin patgeno-hospedador es dinmica. Su resultado depender de la virulencia del primero y de la repuesta inmune del hospedador. Los mecanismos inmunitarios dependern de la estructura de la superficie bacteriana y de sus mecanismos de toxicidad. La capacidad invasiva es la capacidad de las bacterias (y otros patgenos) para invadir los tejidos. Comprende mecanismos de colonizacin (adherencia y multiplicacin inicial), produccin de substancias extracelulares que facilitan la invasin (invasinas) y la habilidad para sobrepasar los mecanismos de defensa del sistema inmune. La toxigenicidad es la capacidad de las bacterias de producir toxinas. Estas pueden ser de dos tipos: Exotoxinas: son liberadas al exterior Endotoxinas: son substancias asociadas a la bacteria (forman parte de su membrana celular). Clasicamente se conoce como endotoxina al LPS (lipopolisacrido) de las bacterias Gram negativas. Los lipopolisacridos (LPS) son polmeros complejos con restos de cidos grasos como parte lipfila y cadenas caractersticas de oligosacridos y polisacridos, que forman la parte mayoritaria de la capa externa de la membrana externa de bacterias Gram negativas. En su conjunto, forman una capa protectora hidrfila en torno a la clula bacteriana que no puede ser atravesada por molculas lipfilas. El lipopolisacrido consta de varias partes, lpido A, ncleo (tambin llamada Core, o regin "R") y el antgeno O. o El lpido A est formado por un disacrido compuesto por dos unidades de N acetilglucosamina unidas por enlace a los carbonos 1 y 6, al que se le unen cidos grasos mediante enlace ster; los cidos grasos que se encuentran asociados comnmente en el lpido A son el cido caproico, cido lurico, cido mirstico, cido palmtico y cido esterico. o A continuacin se dispone la regin R, formado por una serie de monosacridos de seis carbonos (hexosas) como la glucosa, ramnosa y galactosa, entre otros, y tambin formado por monosacridos poco usuales como los didexosiazcares, entre los que destacan la abecuosa, clitosa, paratosa o tivelosa; despus hay una serie de cuatro azcares especficos de cada bacteria que se repiten; en el caso de Salmonella son (Man-Rham-Gal-Abe)n; esta secuencia de azcares es lo que se denomina antigeno "O". o El antgeno O se dispone fuera de la clula como una endotoxina, actuando como receptor para muchos bacterifagos, y siendo tambin el que desencadena, junto con el lpido A, la respuesta inmunitaria por parte del individuo infectado. Mientras que el lpido A produce fiebre, el antgeno O provoca un amplio espectro de efectos fisiopatologicos: cuando la cantidad en sangre es suficiente, el lipopolisacarido produce la muerte en una o dos horas, debido a shock irreversible y colapso cardiovascular.

3. TIPOS DE PARED CELULAR BACTERIANA Los mecanismos inmunitarios dependen de la estructura de la superficie bacteriana. Hay cuatro tipos principales de pared celular bacteriana correspondientes a los siguientes tipos de bacterias: Bacterias grampositivas Bacterias gramnegativas Micobacterias Espiroquetas

La bicapa lipdica externa de las gramnegativas es especialmente importante, ya que suele ser sensible a los mecanismos capaces de lisar las membranas, como el complemento y determinadas clulas citotxicas. Por el contrario, para destruir el resto de los tipos de bacterias suele ser necesaria la ingestin por parte de los fagocitos. Todos los tipos de paredes constan de una membrana celular interna y de una pared de peptidoglucano. Las bacterias gramnegativas poseen adems una bicapa lipidica externa a la que se encuentra amarrado el lipopolisacarido (LIPS). Las enzimas lisosomicas y la lisozima son activas frente a la capa de peptidoglucano, mientras que las proteinas cationicas y el complemento son eficaces contra la bicapa lipdica externa de las bacterias gramnegativas. La pared bacteriana compuesta de las micobacterias es extraordinariamente resistente, y es probable que solo pueda ser destruida con la colaboracion de enzimas internas de la propia bacteria. Algunas bacterias poseen tambien fimbrias o flagelos, que pueden constituir dianas para los anticuerpos. Otras poseen una capsula externa que las hace ms resistentes frente a la fagocitosis y el complemento. Los componentes marcados con un asterisco (*) poseen propiedades adyuvantes, es decir, son reconocidos por el sistema inmunitario y actan como seales inespecficas que amplifican la actividad inmunitaria.

4. MECANISMOS INMUNOPATOGNICOS Los mecanismos inmunitarios dependen de los mecanismos bacterianos de patogenicidad. Los dos extremos dentro del espectro de posibles mecanismos patognicos son: Toxicidad sin invasin: Algunas bacterias provocan enfermedades debido exclusivamente a la produccin de una toxina (como, Corynebacterium diphteriae o Clostridium tetani) o a su capacidad para unirse a superficies epiteliales, sin necesidad de que invadan los tejidos del huesped. La inmunidad frente a este tipo de organismos puede estar garantizada mediante un nico Ab que sea capaz de neutralizar ese mecanismo patognico esencial. Invasin sin toxicidad: Cuando los organismos invaden las clulas solo pueden ser destruidos y degradados mediante respuestas inmunitarias mediadas por clulas. Sin embargo, la mayora de las bacterias se comportan de una forma intermedia entre estos dos extremos, presentando propiedades invasivas y produciendo al mismo tiempo algunas toxinas o factores de diseminacin (enzimas degradantes de los tejidos) que actan a nivel local.

Ejemplo de bacteria que no invade: EPEC ( Escherichia coli Enteropatgena). Se distinguen actualmente 6 categoras de E.coli diarreicas. No invade, sino que desde la superficie modifica las clulas formando pedestales. Ejemplo de bacteria que invade: Shigella. Es capaz de infectar tanto a la clula M como al macrfago, atravesarlos y salir intacta. El mecanismo de adherencia puede ser: -NO especfico: docking (fuerzas hidrofbicas, electrostticas, etc.) -Especfico: lock and key (receptores complementarios) Ejem. Staphylococcus aureus tiene una protena en su superficie que une el extremo aminoterminal de la fibronectina de manera muy especfica. A su vez, la fibronectina tambin es reconocida por las integrinas de forma especfica.

5. RESPUESTA INMUNE 5.1. Inmunidad innata Las primeras lneas de defensa son mecanismos antibacterianos que no precisan el reconocimiento de un antgeno: 1. Barreras fsicas: piel, mucosas, etc. 2. Barreras qumicas: pH, lisozima 3. Organismos comensales: produccin de protenas antibacterianas denominadas colicinas ( Clostridium difficile.-colitis y diarrea inducida por antibiticos). Las colicinas son liberadas al medio para reducer la competicin por parte de otras bacterias. Se unen a los receptores de la membrana externa, usndolos para translocarse al citoplasma o a la membrane citoplasmtica, donde llevan a cabo su accin citotxica, incluyendo despolaricacin de la membrana citoplasmtica, actividad DNasa, RNasa o inhibicin de la sntesis de murena. 4. Defensinas.-pptidos catinicos de defensa del husped en la respuesta inmunitaria frente a bacterias y hongos (se integran en la membrana lipdica interrumpiendo su estructura y funcin). Las defensinas son un ejemplo de AMPs: ( antimicrobial peptides o pptidos antimicrobianos). Son protenas de origen natural con propiedades antibiticas que actan como medio de defensa en contra de enfermedades producidas por diversos microorganismos, presentan actividad contra bacterias tanto gram positivas como gram negativas, hongos y virus. Adems de matar las bacterias directamente, se comportan como inmunomoduladores, ya que actan sobre muchas clulas, unas veces activando y otras inhibiendo determinadas respuestas. Tienen la habilidad de alterar la expresin gnica del hospedador, actuar como quimioquinas o inducir la produccin de las mismas, inhibir la produccin de citoquina proinflamatoria 5. Complemento*. El complemento es un conjunto de protenas sricas (ms de 30) que complementan la accin ltica de los anticuerpos. Se ven activadas por microbios y favorecen su destruccin, as como la inflamacin. Se encuentran en niveles bajos pero cuando se produce infeccin aumentan estos niveles considerablemente. Son producidas por hepatocitos y macrfagos. 6. Fagocitosis

*Funciones del complemento: - Lisis: son capaces de producir poros en los patgenos. - Opsonizacin: recubrir la superficie de patgenos para que sean fcilmente englobados por los macrfagos para su eliminacin. - Participan en el proceso inflamatorio: participan algunos componentes actuando como activadores de clulas o como quimiotcticos. - Ayudan a la Eliminacin de inmunocomplejos: los inmunocomplejos son los complejos formados por el antgeno y el anticuerpo. Se conocen tres vas de activacin del complemento: - Va clsica: llamada as porque fue la primera en descubrirse. Recurre a una protena plasmtica denominada C1 para detectar los anticuerpos IgM, IgG1 o IgG3 ligados a la superficie de un microbio o de otra estructura. - Va alternativa: descubierta con posterioridad, pero ms antigua que la clsica desde el punto de vista filogentico. Se pone en marcha por el reconocimiento directo de ciertas estructuras presentes en la superficie microbiana y, por tanto, constituye un componente de la inmunidad innata. - Va de las lectinas: se dispara a partir de una protena plasmtica llamada lectina de unin a manosa (MBL), que reconoce las manosas terminales en las glicoprotenas y glicolpidos bacterianos. La MBL ligada a los microbios activa una de las protenas de la va clsica sin contar con la presencia de anticuerpos, debido a la accin de una proteasa de serina asociada a ella. Evolutivamente, la va ms primitiva sera la alternativa, seguida de la de las lectinas, ya que la va clsica depende de la presencia de anticuerpos, por tanto, slo se puede activar cuando ya se ha desarrollado la inmunidad innata (que apareci ms tarde a lo largo de la evolucin) Estas tres vas no son excluyentes, se pueden dar las tres a la vez y todas ellas convergen en la activacin de la protena C3, desencadenando en las fases finales de la activacin del complemento, la formacin del poro ltico. Por tanto, el acontecimiento central en la activacin del complemento es la protelisis de la protena del complemento C3 para generar productos biolgicamente activos y la posterior unin covalente de un producto de C3 (C3b), a las superficies de las clulas microbianas o a los anticuerpos unidos a antgenos. Las vas alternativa y de las lectinas son mecanismos efectores de la inmunidad innata, mientras que la va clsica es un mecanismo de la inmunidad humoral. 7

A las bacterias que no son lisadas en el suero por el complemento se les llama resistentes al suero. Muchas de las bacterias Gram negativas que causan infecciones sistmicas (septicemia o bacteremia) son de este tipo. Algunas bacterias destruyen uno ms componentes del C. Ejem. Pseudomonas aeruginosa produce una elastasa que inactiva componentes del C. La segunda lnea de defensa depende del reconocimiento de componentes bacterianos muy frecuentes. Una vez que los organismos penetran en los tejidos, pueden se r combatidos en primer lugar mediante otros componentes del sistema inmunitario innato. Hay muchos componentes bacterianos que son reconocidos sin intervencin de los receptores especficos de antgeno de las clulas B y T. Este tipo de reconocimiento est basado en mecanismos de amplio espectro , que permiten que los componentes bacterianos ms frecuentes desencadenen directamente respuestas inmunitarias y sean eliminados sin necesidad de que se produzca una respuesta inmunitaria adaptativa especfica. Estos componentes bacterianos son los PAMPS (Pathogen Associated Molecular Pattern). En los aos 80 Charles A. Janeway estableci el concepto de los PAMPS, proponiendo que eran patrones moleculares altamente distribuidos entre los patgenos que causan infecciones. Son estructuras caractersticas de los patgenos microbianos que no estn presentes en las clulas de los mamferos. Estas molculas adems, desempean funciones esenciales en los patgenos y por tanto dichos patrones son esenciales para la supervivencia de estos patgenos y de ah su conservacin.

Clulas fagocticas Fagocitos mononucleares: Los monocitos se encuentran en la sangre de forma indiferenciada y pasan a los tejidos, donde se diferencian a macrfagos. stos reciben distinto nombre en funcin del tejido donde se encuentren: Hgado: clulas de Kupffer Hueso: osteoclastos Cerebro: microgla Pulmn: macrfagos alveolares (dendrticas Piel: clulas de Langerhans)

En cualquier caso, su funcin consiste en la fagocitosis y activacin de diversos mecanismos bactericidas. As como la presentacin antignica. Fagocitos polimorfonucleares (granulocitos): Neutrfilos: forman la poblacin ms abundante de leucocitos circulantes e intervienen en las primeras fases de las respuestas inflamatorias. Proceden de la mdula sea y nacen a partir de una estirpe comn con los fagocitos mononucleares. Pueden migrar hacia los focos de infeccin en un plazo de unas pocas horas desde la entrada de los microbios (son los primeros en llegar al foco infeccioso), sin embargo, si dentro de ese periodo, un neutrfilo circulante no se ve atrado hacia ningn foco inflamatorio, sufre un proceso de apoptosis y los macrfagos residentes en el hgado o en el bazo suelen fagocitarlo. Eosinfilos: Presentan un ncleo bilobulado y una gran cantidad de grnulos citoplasmticos ricos en protenas bsicas (ricas en arginina), que se tien con colorantes cidos, como la eosina. Funcin: eliminacin de parsitos, inflamacin, alergias. Parece que son capaces de fagocitar y destruir microorganismos, aunque esta no es su funcin principal. Expresan en su superficie el receptor de la IgE, el anticuerpo responsable de la eliminacin de parsitos. Tiene una gran importancia en las alergias. Basfilos: Contienen grnulos ricos en protenas que se tien con colorantes bsicos. Sus grnulos contienen heparina, histamina y peroxidasas. Tienen caractersticas similares a los eosinfilos y mastocitos. Participan en reacciones inflamatorias, frente a parsitos y en respuestas alrgicas. Expresan en su superficie el receptor de la IgE y receptores de complemento

Receptores de fagocitosis

*Una ops oni na es cua l qui er mol cul a que s e pega a l pa tgeno y a yuda a s u fa goci tos i s

El LPS (gramnegativas) es un potente activador de la inflamacin El fagocito ingiere y degrada bacterias gramnegativas y es activado por LPS para secretar citoquinas. Las citoquinas secretadas por los macrfagos en respuesta a los productos bacterianos incluyen OL-1, IL-6, IL-8, IL-12 y TNF. ste ltimo es un inductor de la respuesta inflamatoria local que ayuda a contener las infecciones. Tambin ejerce efectos sistmicos, muchos de los cuales son dainos. IL-1
Acti va el endotelio va s cular. Acti va l os l infocitos. Des truccin de teji do. Aumenta el a cceso de cl ulas efectoras

IL-8
Fa ctores qui miot cti cos pa ra l os neutrfi l os . Aumenta el a cceso de l a s clulas efectora s . Acti va l a uni n por i ntegri na s

TNF
Acti va el endotelio vascular y a umenta la perme a bi l i da d va s cular, l o cua l conduce a una entra da i ncrementa da de IgG, compl emento y cl ul a s a l os teji dos y un drena je elevado de fl ui do a l os ga ngl i os l i nf ti cos

IL-6
Acti va ci n de l i nfoci tos . Producci n i ncrementa da de a nti cuerpos

IL-12
Acti va cl ul a s NK. Induce la di ferenci a ci n de cl ul a s T CD4 a cl ul a s TH1.

Efectos sistmicos

Efectos locales

Fi ebre. Produccin de IL-6

Fi ebre. Movilizacin de meta bolitos. Choque

Fi ebre. Induce produccin de protenas de fase a guda.

Patologa: shock endotxico El shock endotxico (bacterimico) aparece cuando se produce una liberacin masiva de citosinas, generalmente debido a los productos bacterianos que se liberan durante los episodios de bacteriemia. El producto bacteriano que da lugar al shock endotxico con ms frecuencia es l a endotoxina (LPS) de bacterias gram negativas, si bien la bacteriemia por bacterias gram positivas puede desencadenar un sndrome parecido. Las bacterias grampositivas tambien pueden provocar shock, por ejemplo cuando se produce una liberacion masiva de citocinas tras la exposition a superantigenos Pueden aparecer diversos sntomas que ponen en riesgo la vida del paciente, entre los que se encuentran fiebre, insuficiencia circulatoria, coagulacin intravascular diseminada y necrosis hemorrgica, y que conducen finalmente a una insuficiencia multiorgnica. La liberacin de TNF- por macrfagos induce efectos protectores locales, pero la liberacin sistmica de dicho factor puede ser perjudicial. Los paneles de la izquierda muestran las causas y las consecuencias de la liberacin local del TNF-, mientras que los paneles de la derecha exhiben las causas y los efectos de la liberacin sistmica. En ambos casos, el TNF- acta sobre los vasos sanguneos, en especial vnulas, para aumentar el flujo sanguneo y la permeabilidad vascular a lquido, protenas y clulas, y para incrementar la adhesividad endotelial de leucocitos y de plaquetas (paneles centrales). De este modo, la liberacin local permite el flujo de lquidos, de clulas y de protenas hacia el tejido infectado, 10

donde participan en la defensa del hospedador. Ms tarde, se forman cogulos de sangre en los vasos de pequeo calibre (panel inferior izquierdo), lo que evita la diseminacin de la infeccin a travs de la sangre, y el lquido y las clulas acumulados drenan hacia ganglios linfticos regionales, donde se inicia una respuesta inmunitaria adaptativa. Cuando hay una infeccin sistmica, o septicemia, provocada por bacterias que desencadenan la produccin de TNF-, ste es liberado en la sangre por macrfagos localizados en el hgado y en el bazo, y acta de una manera similar sobre todos los vasos sanguneos de pequeo calibre (panel inferior derecho). El resultado es choque, coagulacin intravascular diseminada con agotamiento de factores de la coagulacin y sangrado consecuente, insuficiencia de mltiples rganos y a menudo la muerte. 5.2. Respuesta inmune adaptativa Los anticuerpos proporcionan un mecanismo protector especfico de antgeno. La importancia de las interacciones entre las bacterias y los anticuerpos con respecto a la proteccin del husped depende del mecanismo de patogenicidad. Est claro que los Ac desempean un papel esencial en las respuestas frente a las toxinas bacterianas. Neutralizan la toxina diftrica impidiendo que se una a sus clulas diana. De la misma forma puede bloquear toxinas que actan a nivel local y enzimas degradantes de la matriz extracelular, as como interferir en la movilidad unindose a los flagelos. La funcin ms importante de los anticuerpos en las respuestas inmunitarias frente a las bacterias que no producen toxinas es dirigir al complemento para que acte contra ellas. Incluso los organismos capaces de resistir la va alternativa sufren lesiones inducidas por el complemento en presencia de anticuerpos, o al menos quedan recubiertos con productos de C3 que facilitan la fijacin y la ingestin por parte de los fagocitos.

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Fagocitos: Mecanismos antibacterianos Si un microorganismo cruza una barrera epitelial y empieza a replicarse en los tejidos del hospedador, casi siempre es reconocido de inmediato por los fagocitos mononucleares, o macrfagos, que residen en estos tejidos. Los macrfagos maduran de modo continuo a partir de monocitos que abandonan la circulacin y emigran hacia tejidos de todo el cuerpo. La segunda familia importante de fagocitos, los neutrfilos, o leucocitos neutroflicos polimorfonucleares (PMN) son clulas de vida breve que abundan en la sangre, pero que no estn presentes en tejidos sanos normales. Estas dos clulas fagocticas tienen una funcin clave en la inmunidad innata porque pueden reconocer, ingerir y destruir muchos patgenos sin la ayuda de una respuesta inmunitaria adaptativa. Puesto que la mayor parte de los microorganismos entra al cuerpo a travs de la mucosa del intestino y del sistema respiratorio, los macrfagos localizados en los tejidos submucosos son las primeras clulas que encuentran a casi todos los patgenos, pero pronto son reforzados por el reclutamiento de grandes nmeros de neutrfilos hacia sitios de infeccin. Los macrfagos y neutrfilos reconocen patgenos por medio de receptores de superficie celular que pueden distinguir entre las molculas de superficie desplegadas por patgenos y las del hospedador. Estos receptores comprenden el receptor de manosa de macrfago, que se encuentra sobre macrfagos pero no sobre monocitos o neutrfilos; receptores fagocticos, que se unen a muchos ligandos que tienen carga negativa, como los cidos lipoteicoicos, que son componentes de la pared celular de bacterias grampositivas, y CD14 que se encuentra de manera predominante sobre monocitos y macrfagos (fi g. 2-8). ste se une al lipopolisacrido presente sobre la superficie de bacterias gramnegativas, y permite que sean reconocidas por otros receptores llamados receptores tipo Toll. En muchos casos, la unin de un patgeno a estos receptores de superficie celular conduce a fagocitosis, seguida por la destruccin del patgeno dentro del fagocito. La fagocitosis es un proceso activo, en el cual el patgeno unido queda rodeado primero por la membrana del fagocito y luego es internalizado en una vescula encerrada por membrana conocida como un fagosoma o vacuola endoctica. El fagosoma a continuacin se acidifica, lo cual destruye a casi todos los patgenos. Adems de ser fagocticos, los macrfagos y los neutrfilos tienen grnulos delimitados por una membrana, llamados lisosomas, que contienen enzimas, protenas y pptidos que pueden atacar al microbio. El fagosoma se fusiona con uno o ms lisosomas y genera un fagolisosoma en el cual se libera el contenido lisosmico para destruir al patgeno. Al momento de la fagocitosis, los macrfagos y los neutrfilos producen una variedad de otros compuestos txicos que ayudan a destruir al microorganismo fagocitado. Los ms importantes de stos son los pptidos antimicrobianos y el xido ntrico (NO), el anin superxido (O2) y el perxido de hidrgeno (H2O2) que son directamente txicos para las bacterias.

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De este modo, los mecanismos antibacterianos o microbicidas son los siguientes: Los fagocitos activados producen varias enzimas proteolticas que aparecen contenidas en los fagolisosomas y sirven para destruir los microbios. En los neutrfilos, una de las ms importantes es la elastasa. Los macrfagos y neutrfilos activados convierten el oxgeno molecular en especies reactivas del oxgeno (ROS) , que son unos oxidantes con un carcter muy reactivo para la destruccin de los microbios (y de otras clulas). La enzima principal encargada de la formacin de los radicales libres es la oxidasa fagoctica o NADPH-oxidasa. La NADPH oxidasa transfiere electrones desde en NADPH (cofactor, que se oxida) al oxgeno (que se reduce), formando ion superxido, que es muy intestable y reactivo, y este reacciona para formar agua oxigenada. La accin enzimtica de la dismutasa sobre el superxido produce agua oxigenada que recurre a la enzima mieloperoxidasa para convertir unos iones normalmente arreactivos como los haluros, en los cidos hipohalosos re activos, de carcter txico para las bacterias. El proceso por el que se producen las ROS se denomina estallido respiratorio, debido al elevado consumo de oxgeno que se da en las reacciones. El linfocito T helper va a favorecer que se produzca este estallido respiratorio. Tambin hay un proceso de formacin de especies reactivas del nitrgeno, en especial xido ntrico (NO), por accin de la Oxido ntrico sintasa (iNOS) . Esta enzima se activa como respuesta a los productos microbianos que activan los RTT, sobre todo en conjuncin con el IFN-. Su accin cataliza la transformacin de arginina en citrulina, con la liberacin del gas NO, de libre difusin.

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Inmunidad mediada por linfocitos TCD4 (helper o colaboradores) El linfocito inmaduro (Th0) se diferencia a Th1 gracias a la accin de la IL-12 producida por macrfagos. Los Th1 van a secretar IFN, que va a actuar de forma autocrina (provocando la diferenciacin de ms Th0 a Th1) y paracrina (activando a macrfagos y otras clulas: promueve proliferacin de linfocitos T CD8+, promueven el cambio de isotipo de la Ig del BCR a IgG e inhibe la diferenciacin a Th2). Th1 tambin secreta IL-2 y TNF y . El linfocito Th1 puede activar al macrfago a travs de dos formas: Liberacin de IFN, reconocido por los receptores del macrfago. Interaccin de CD40L presente en el linfocito y su receptor CD40 presente en el macrfago.

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Recuerda: Hay distintos tipos de linfocitos T helper en funcin del patgeno que cause la activacin de la clula. De este modo, se diferencian 3 fenotipos de clulas T helper que se diferencian en el tipo de citoquina que liberan y por tanto, en sus funciones efectoras: o Th1: producen IFN. Activados por m icrobios intracelulares (patgenos pequeos y solubles). Estas citoquinas activan los macrfagos y la produccin de IgG. Tienen un papel importante en las enfermedades autoinmunes y en el dao de tejidos asociados a infecciones crnicas. Th2: activados por un parsito o un helminto (patgenos ms grandes), por la produccin de IgE. Produce IL-4, IL-5 e IL-13. Importante papel en alergias, en ausencia de inflamacin. Activa mastocitos y eosinfilos as como produccin de IgE. En presencia de IL-4 producida por mastocitos y basfilos el Th0 se diferencia a linfocitos Th2. En una situacin inflamatoria se produce IFN, el cual inhibe la diferenciacin a linfocitos Th2. Th17: Produce IL-17. Se activan en presencia de bacterias extracelulares y hongos. Relacionada con procesos de inflamacin crnicos, tiene un papel importante en la mucosa intestinal. Autoinmunidad.

Inmunidad mediada por linfocitos TCD8 (citotxicos) Los Linfocitos T citotxicos (TC) tienen un papel importante controlando infecciones por patge nos intracelulares que se multiplican en citoplasma celular (virus y bacterias, as como procesos tumorales) . Reconocen antgenos en las molculas de MHC-I activndose e induciendo la lisis y muerte celular por apoptosis. Para ello los linfocitos T CD8+ durante la diferenciacin a Linfocitos Tc Adquieren orgnulos citoplsmicos cargados de: o protenas citotxicas: perforina: forma poros en la membrana y permite la entrada de granzima en la clula daada) granzima: activa caspasas, induciendo apoptosis, e induce la expresin de genes proapoptticos de la familia Bcl ). o protenas de superficie (Fas L) Adems los linfocitos Tc secretan citoquinas diversas, principalmente INF- , linfotoxinas, TNF y (impiden replicacin viral).

Los linfocitos T CD8+ se activan (priman) por primera vez en los rganos linfoides secundarios por las clulas dendrticas que expresan el Ag unido a las mol MHCI requirie ndo para ello coestimulacin. Una vez diferenciados a linfocitos T citotxicos migran a los tejidos donde reconocen el mismo antgeno en las molculas MHCI, activndose esta vez sin requerimiento de coestimulacin.

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La interaccin entre el linfocito T citotxico y la clula daada es muy estrecha, se mantiene con la participacin de molculas de adhesin, formndose una sinapsis inmunolgica. Esto permite que la liberacin del contenido de los grnulos citotxicos se produzca slo sobre la clula infectada sin daar a la clula vecina. 6. MECANISMOS QUE EVITAN LA RESPUESTA INMUNE De la misma manera que los vertebrados desarrollaron muchas defensas diferentes contra patgenos, estos ltimos adquirieron por evolucin muchos modos de vencerlas. Estas varan desde resistir a la fagocitosis hasta evitar el reconocimiento por el sistema inmunitario adaptativo, e incluso suprimir de manera activa respuestas inmunitarias. 6.1. Tolerancia a los antgenos bacterianos. (stos no se reconocen como extraos) Mecanismos relevantes a bacterias Exposicin fetal al Ag Altas dosis persistentes de Ag circulante: se produce la sobreactivacin del sistema inmune, que deja de funcionar. Mimetismo molecular (Molecular mimicry): el patgeno se parece a una molcula propia

6.2. Otros mecanismos que evitan la respuesta inmune Camuflaje antignico (antigenic disguise): La bacteria se recubre de protenas del husped (fibrina, FN, Abs) o con polisacridos (cido silico, hialurnico). Variacin antignica: multiples serotipos de Salmonella typhimurium (variaciones en el antgeno O de la pared y el flagelar H). Mltiples cepas de streptococos segn los antgenos de su cpsula polisacardica. Mltiples serotipos de Vibrio, E coli etc 16

Muchos agentes infecciosos existen en una amplia variedad de tipos antignicos. Por ejemplo, hay 84 tipos conocidos de Streptococcus pneumoniae, una causa importante de neumona bacteriana, que difieren en la estructura de su capsula de polisacrido. Los diferentes tipos se distinguen al usar anticuerpos especficos como reactivos en anlisis clnicos serolgicos y, as, a menudo se conocen como serotipos. La infeccin por un serotipo puede llevar a inmunidad especfica para tipo, que protege contra reinfeccin por ese tipo, pero no por un serotipo diferente. De esta manera, desde el punto de vista del sistema inmunitario adaptativo, cada serotipo de S. pneumoniae representa un microorganismo distinto, con el resultado de que en esencia el mismo patgeno puede causar enfermedad muchas veces en el mismo individuo.

Las diferentes cepas de S. pneumoniae tienen polisacridos capsulares distintos desde el punto de vista antignico. Los anticuerpos contra los polisacridos capsulares opsonizan el patgeno y permite que sea fagocitado. Los anticuerpos contra un tipo de S. pneumoniae no muestran reaccin cruzada con los otros tipos, de manera que un individuo inmune a un tipo carece de inmunidad protectora contra una infeccin subsiguiente por un tipo distinto. De manera que la segunda infeccin con un tipo distinto de S.pneumoniae slo puede ser eliminada por una nueva respuesta primaria. As, un individuo debe generar una nueva respuesta inmunitaria adaptativa cada vez que queda infectado por un tipo diferente de S. pneumoniae.

Bloqueo de los anticuerpos: Absorcin de los anticuerpos por antgenos bacterianos solubles. Algunas bacterias liberan componentes solubles que se unen los anticuerpos y los neutralizan. Por ejemplo, pequeas cantidades de LPS son liberadas por los microorganismos Gram neg. Inmunosupresin de la respuesta inmune : bloquear la va de los receptores. Principalmente virus (VIH) y protozoos, raramente las bacterias (que se sepa hasta ahora?, se est observando que tambin es cierto para bacterias). A veces se observa inmunosupresin tras infecciones bacterianas crnicas, tales como la lepra y la tuberculosis.

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*SEALIZACIN DEL TCR Lo primero que tiene lugar es el reconocimiento del pptido en la molcula de MHC y la molcula MHC per se. No se sabe muy bien que pasa con el TCR, si es un cambio conformacional, agregacin lo que produce los eventos iniciales de activacin de la cascada de sealizacin. Unin del CD4/CD8 al dominio de unin en el TCR. Hay una quinasa de la familia Sap kinasas ( Lck) que se asocia de forma dbil a la CD4 o CD8 y se activa tras el reconocimiento del pptido, es especfica de linfocitos T. Al igual que en el BCR, interviene la fosfatasa CD45 desfosforilando a Lck y activndola. (CD45 se encuentra en todos los linfocitos). La activacin de esta quinasa Lck va a permitir la fosforilacin de las cadenas y CD3 que forman el complejo /CD3, concretamente fosforilan tyr de los dominios ITAM. Esta fosforilacin de los ITAM permite el reclutamiento de una nueva Tyr-kinasa denominada ZAP-70, que tiene dominios SH2 que reconocen la Tyr fosforiladas de los ITAM. Lck fosforila ZAP-70, activndola, y a su vez sta fosforila a varias protenas adaptadoras que son capaces de unirse a molculas transmisoras de seales gracias a sus motivos SH2, SH3 (unen regiones ricas en Pro) y PTB (dominios de unin a fosfotirosina). As, ZAP -70 fosforila al adaptador LAT (una protena exclusiva de linfocitos T, que se expresa anclado a la membrana), que puede reclutar a otras protenas con motivos SH2, como PLC u otras molculas adaptadoras, como Grb2. Grb2 recluta a Sos (un GAP, que intercambia Ras-GDP a Ras-GTP, activndolo). Ras-GTP activa la cascada de las MAP kinasas que concluye con la fosforilacin y activacin de ERK, la cual se transloca al ncleo y fosforila una protena denominada Elk que, una vez activa, estimula la transcripcin de Fos, un componente del factor de transcripcin de la protena de activacin 1 (AP-1). En paralelo a la activacin de Ras tiene lugar la activacin de Rac. Rac-GTP activa la cascada de las SAP quinasas que concluye con la fosforilacin y activacin de JNK, la cual fosforila a c-Jun, el segundo componente del factor de transcripcin AP-1. La enzima LAT se une directamente a la PLC1, una enzima fundamental en la activacin de los linfocitos T, y coordina el reclutamiento de otras protenas adaptadoras, como SLP-76 y Grb-2, hasta el agregado del TCR y las protenas asociadas al TCR que con frecuencia se denominan sealosoma. As, LAT acta aproximando diversos componentes distales de las vas de transmisin de seales del TCR a los activadores proximales. Slo el reconocimiento del antgeno activa las vas de transduccin de seales que llevan a las respuestas funcionales de los linfocitos T. ZAP-70 tambin fosforila a la PLC (reclutada por LAT), activndola. Una vez activa, la PLC hidroliza el PIP2 en IP3 y DAG. A su vez, el IP3 y el DAG activan dos vas de transmisin de seales distales distintas en los linfocitos T. El IP3 produce un rpido aumento de calcio libre citoslico pocos minutos despus de la activacin del linfocito. La unin de Ca-Calmodulina a la calcineurina permite que esta desfosforile a NFAT, activndolo y permitiendo su translocacin al ncleo. NFAT es un factor de transcripcin necesario para la expresin de genes de IL2, IL4, TNF y otras citoquinas. El DAG activa la PKC anclada a la membrana, que activa a la IkB-kinasa, la cual fosforila el IkB marcndolo para su degradacin y liberando el factor de transcripcin NF-kB, que se transloca al ncleo.

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La respuesta mediada por las clulas T es crtica para la supervivencia de las clulas animales infectadas con Yersinia. Yersinia tiene la capacidad de suprimir la activacin de los linfocitos T a travs de una tirosina fosfatasa (YopH). Esta fosfatasa acta sobre diversos componentes de la ruta de sealizacin del TCR, entre ellos, las ms afectadas son la protena adaptadora LAT y SLP-76, que son cruciales en la sealizacin del TCR. Se observa una disminucin de la fosforilacin de estas protenas. Se produce de este modo un bloqueo de la sealizacin. Es un mecanismo de inmunosupresin. Orientacin de la respuesta inmune M. leprae prolifera en las vesculas de los macrfagos, y una defensa eficaz del hospedador requiere la activacin de macrfagos por clulas TH1. En pacientes con lepra tuberculoide , en la cual se inducen de manera preferente clulas TH1, se encuentran pocas bacterias vivas, se produce poco anticuerpo, y aunque la piel y los nervios perifricos son daados por las respuestas inflamatorias relacionadas con la activacin de macrfagos, la enfermedad avanza con lentitud y el paciente suele sobrevivir (se controla mejor la enfermedad y la infeccin es local). Sin embargo, cuando se inducen de manera preferente clulas TH2, la principal respuesta es humoral, los anticuerpos producidos no llegan a las bacterias intracelulares, y los pacientes desarrollan la lepra lepromatosa, en la que M. leprae abunda en los macrfagos, lo que causa una destruccin hstica masiva al final letal. (la actividad ltica es menos importante, hay un peor control de la enfermedad y se produce una infeccin diseminada).

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MECANISMOS DE ESCAPE DE LA FAGOCITOSIS 1.- Secrecin de sustancias repelentes o toxinas que inhiben la quimiotaxis. 2.-Inhibicin fagocitosis (bacterias encapsuladas): algunas bacterias poseen cpsulas o cubiertas externas que inhiben la unin al fagocito 3.-Inhibicin fusin lisosomas ( M. tuberculosis, Salmonella ): otras son ingeridas, pero liberan factores que bloquean la iniciacin de los mecanismos destructivos. Algunas, como M. tuberculosis secretan molculas que inhiben la fusin entre los lisosomas y el fagosoma tras la fagocitosis. Tambin inhiben la bomba de protones que acidifica el fagosoma, de forma que no disminuye el pH. 4.-Secretar catalasa, que elimina el perxido de hidrgeno 5.-Cubiertas resistentes a enzimas lisosomales: M. leprae est recubierto de un glucolpido fenlico que inactiva los radicales libres 6.-Micobacterias liberan LAM (lipoarabinomanano) que interfiere con el IFN-, importante en la activacin del estallido respiratorio 7.-Inhibicin presentacin Ags 8.-Escape del fagosoma al citoplasma ( M. leprae).

1) Estrategias para evitar el reconocimiento por el fagocito del microorganismo A. Invadir puntos ms inaccesibles a los fagocitos: el lumen de las glndulas. B. Producir una respuesta inflamatoria mnima (controlada), de modo que no llegan las seales para el reclutamiento de clulas. C. Inhibir la quimiotaxis de los fagocitos. Ejem. La streptolisina suprime la quimiotaxis de neutrfilos, incluso a bajas concentraciones. Fracciones de Mycobacterium tuberculosis inhiben la migracin de leucocitos D. Esconder su superficie antignica: camuflaje antignico (que el sistme inmune no desarrolle anticuerpo frente a ellos) Ejem. Treponema pallidum une fibronectina en su superficie. Streptococos del grupo A sintetizan una cpsula de cido hialurnico. 2) Estrategias para evitar la ingestin A. Produccin de cpsulas polisacardicas: S. pneumoniae, Haemophilus influenzae, Treponema pallidum y Klebsiella pneumoniae. (Las cepas de streptococos sin cpsulas no son patgenas) B. Antgeno K de E. coli C. Protena A de Staphylococcus aureus (en la superficie o soluble) 20

3) Supervivencia en el interior del fagosoma o escape del mismo al citoplasma Algunos organismos se pueden desarrollar en el interior de fagocitos del husped que se encuentran daados o presentan anomalas metablicas, o pueden evitar su muerte escapando del fagosoma al citoplasma, como Lysteria monocitogenes , que lo consigue liberando enzimas que rompen la membrana del fagosoma. Otros organismos, como M. leprae o Salmonella, pueden inducir su propia ingestin por parte de clulas que normalmente no actan como fagocitos y tienen escasa capacidad antibacteriana. Los organimso ingeridos de esta manera tienen que ser liberados de estas clulas para poder ser capturados por los fagocitos o ser expuestos a otros mecanismos bactericidas. Se considera que las bacterias que sobreviven en el interior de los fagocitos (neutrfilos y macrfagos) son parsitos intracelulares. A) Inhibicin de la fusin del fagosoma con el lisosoma. Ejem: Salmonella, M. tuberculosis, Legionella y Chlamydiae.

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