Procedimientos para Pruebas de Evaluaci Çon Estándar de Clones Avanzados de Papa

Procedimientos para pruebas de evaluacin estndar de clones avanzados de papa
Gua para Colaboradores Internacionales
Centro Internacional de la Papa (CIP)
PROCEDIMIENTOS PARA PRUEBAS DE EVALUACIN ESTNDAR DE CLONES AVANZADOS DE PAPA
Procedimientos para pruebas de evaluacin estndar de clones avanzados de papa

Gua para Cooperadores Internacionales
Centro Internacional de la Papa (CIP)
Centro Internacional de la Papa (CIP). 2010. Procedimientos para pruebas de evaluaciones estndar de clones avanzados de papa. Gua para Cooperadores Internacionales. Propiedad intelectual 2009 Centro Internacional de la Papa ISBN: 978-92-9060-381-8 Hecho el Depsito Legal en la Biblioteca Nacional del Per N0 2010-06208 Las publicaciones del CIP contribuyen al desarrollo de informacin importante para el dominio pblico. Los lectores estn autorizados a citar o reproducir este material en sus propias publicaciones. Se solicita respetar los derechos de autor del CIP y enviar una copia de la publicacin donde se realiz la cita o public el material al Departamento de Comunicaciones y Difusin, a la direccin que se indica abajo Centro Internacional de la Papa Apartado 1558, Lima 12, Per cip@cgiar.org www.cipotato.org Mayo 2010 Crditos: Editores: Merideth Bonierbale, Stef de Haan, Anne Forbes, Carolina Bastos Preparacin y correccin de pruebas: Linda Crissman Diseo y diagramacin: Thomas Zschocke, Alfredo Puccini Fotografas: Centro Internacional de la Papa (CIP) Traduccin al espaol: Teresa Ames, Jessica Mc Lauchlanz Marcas registradas Microsoft es una marca registrada de la Corporacin Microsoft Nota Hasta donde sabemos, la informacin contenida en esta publicacin es exacta. Sin embargo, los autores no asumen ninguna responsabilidad sobre la exactitud, perfeccin o consecuencias que puedan surgir de tal informacin. Esta publicacin solo tiene propsito informativo. La mencin de productos qumicos por los autores no constituye un endose o recomendacin para su uso.
Tabla de contenido
Agradecimientos Introduccin Planificacin de las pruebas de evaluacin Introduccin Conduccin de pruebas de evaluacin Registro y anlisis de datos Evaluacin del rendimiento de tubrculos de clones de papa Pruebas de evaluacin del rendimiento Registro y anlisis de datos Evaluacin de la calidad de post cosecha de papa y su almacenamiento Evaluacin de post cosecha Evaluacin del contenido slido de los tubrculos Evaluacin del comportamiento de papa para hojuelas fritas Evaluacin del comportamiento en el procesamiento y la coccin Evaluacin del comportamiento en almacn Evaluacin de la resistencia de campo al tizn tardo en clones de papa Introduccin Pruebas de evaluacin de tizn tardo con exposicin intencional Registro y anlisis de datos Clculo del AUDPC con Microsoft Excel Evaluacin de la resistencia de campo a la marchitez bacteriana en clones de papa Introduccin Pruebas de evaluacin de la marchitez bacteriana con exposicin intencional Registro y anlisis de datos Evaluacin en campo de la resistencia a la mosca minadora en clones de papa Introduccin Manejo de los ensayos con exposicin intencional a la mosca minadora Registro y anlisis de datos 5 9 11 11 11 16 19 19 22 23 23 25 29 35 39 41 41 45 48 53 57 57 62 66 71 71 75 76
Evaluacin de la resistencia a enfermedades por virus en clones de papa Introduccin Pruebas de evaluacin de la resistencia relativa a PVX y PVY Registro y anlisis de datos Evaluacin de resistencia extrema (RE) al PVX y PVY Registro y anlisis de datos Pruebas para evaluar la resistencia relativa a PLRV Registro y anlisis de datos Evaluacin de la madurez del llenado de tubrculos en clones lite y avanzados de papa Introduccin Materiales y mtodos Registro de datos Anlisis de datos Interpretacin de datos GMD: Gua para el manejo de datos Principios Directrices Acerca de los Nmeros CIP Referencias Glosario Anexos Anexo 1 Breve descripcin de los diseos de bloques incompletos comnmente usados Anexo 2 Plantillas para los libros de campo Anexo 3 Hoja de Calificacin de Papas Fritas Anexo 4 Hoja de Calificacin para papa sancochada Anexo 5 Sntomas de virus en papa
79 79 84 87 88 93 94 97 101 101 107 109 111 111 121 121 121 124 125 131
133 139 149 150 151
Agradecimientos
La publicacin de esta Gua para Cooperadores Internacionales ha sido un esfuerzo de colaboracin. Varios cientficos del CIP han contribuido con el desarrollo de los protocolos recomendados en este documento: Pedro Aley, Walter Amors, Carlo Carli, Felipe de Mendiburu, Fabiola del Villar, Jorge Espinoza, Gregory Forbes, Elisa Mihovilovich, Norma Mujica, Wilmer Prez, Silvie Priou y Ednar Wulff. Se recibi informacin adicional de Oscar Hidalgo, Enrique Chujoy, Roger Cortbaoui, Reinhard Simon, Merideth Bonierbale, Vilma Hualla y Elisa Salas. Tambin se tomaron sugerencias tiles y modelos del manual en ingls Estrategia y Libros de Campo para la Evaluacin del Germoplasma de Papa en Butn, Nepal y Pakistn (Strategy and Field Books for Potato Germplasm Evaluation in Bhutan, Nepal and Pakistan, CIP (CIP/SDC), Islamabad, 2000).
Sugerencias
Son bienvenidas las sugerencias para mejorar los procedimientos para hacer pruebas normales de evaluacin, descritas en esta publicacin. Si los procedimientos nacionales para el registro de variedades requieren de evaluacin adicional, se pueden aadir a esta gua los protocolos y escalas de evaluacin para la coleccin de datos. Srvase enviar sus sugerencias a la Divisin de Incremento de Germoplasma y Mejoramiento de Cultivos a la siguiente direccin: Centro Internacional de la Papa Apartado 1558, Lima12, Per cip@cgiar.org www.cipotato.org
Base de datos del CIP

El Centro Internacional de la Papa (CIP) mantendr una red de mejoramiento y seleccin sobre intercambio de informacin (CIPPEX) de clones avanzados de papa. El CIP establecer una base de datos geogrficamente referenciados para apoyar el almacenamiento e intercambio de la informacin resultante. Srvase enviar sus datos al Centro Internacional de la Papa a alguna de las direcciones siguientes:
Direcciones de contacto con el CIP Centro Internacional de la Papa (CIP) Oficina Central del CIP
Apartado Postal 1558 Lima 12, Per cip@cgiar.org
Latinoamrica y el Caribe (LAC)

Ocina Regional del Per Apartado 1558 Lima 12, Per cip@cgiar.org Ocina de Coordinacin Ecuador Apartado l7-21-1977 Quito, Ecuador cip-quito@cgiar.org
frica Sub-Sahara (SSA)

Ocina Regional Kenia c/o ILRI P.O. Box 25171 Nairobi 00603 cip-nbo@cgiar.org
Ocina de Coordinacin Uganda c/o PRAPACE P.O. Box 22274 Kampala, Uganda prapace@prapace.co.ug
Asia Sur, Oeste y Central (SWCA)

Ocina Regional India Complejo NASC DPS Marg, Pusa Campus Nueva Delhi 110012, India cip-delhi@cgiar.org Ocina de Coordinacin Uzbekistn c/o ICARDA-CAC P.O. Box 4564 Tashkent 700000, Uzbekistn c.carli@cgiar.org
Este y Sudeste Asia & El Pacfico (ESEAP)

Ocina Regional Indonesia Kebun Percobaan Muara Jalan Raya Ciapus Bogor, Jawa Barat 16610 Indonesia cip-eseap@cgiar.org Ocina de Coordinacin China c/o The Chinese Academy of Agricultural Sciences Zhong Guan Cun South Street 12 West Suburbs of Beijing Beijing, Peoples Republic of China cip-china@cgiar.org Ocina de Coordinacin Vietnam Nha so 10, ngo 283 Doi Can, Ba Dinh Hanoi, Vietnam tnguyen@cgiar.org
Ocina de Coordinacin Filipinas CIP-UPWARD c/o IRRI DAPO 7777 Metro Manila, Filipinas cip-manila@cgiar.org
Introduccin Gua para Cooperadores Internacionales (GCI)

Qu es la GCI?
La Gua para Cooperadores Internacionales proporciona protocolos a los cientficos involucrados en la recoleccin e intercambio de datos sobre germoplasma avanzado de papa. La gua fue diseada para facilitar y uniformar procedimientos, as como recolectar y compartir un mnimo de datos bsicos.
Objetivos de la GCI
Estimular y facilitar el uso de procedimientos estandarizados en la evaluacin del germoplasma avanzado de papa. Promover el intercambio uniforme de datos entre las instituciones dedicadas al desarrollo y evaluacin del germoplasma avanzado de papa.
Usuarios de la GCI
Esta gua ha sido desarrollada para usuarios diversos, desde personas no especializadas hasta especialistas involucrados en la evaluacin de germoplasma avanzado de papa para futuras liberaciones de variedades regionales o nacionales. Entre los usuarios potenciales estn mejoradores, agrnomos o estudiantes comprometidos con la evaluacin de clones avanzados -desarrollados localmente o proporcionados por el CIP- variedades locales o germoplasma de papa proveniente de otras fuentes.
Contenido de la GCI
Esta gua contiene indicaciones y protocolos relacionados con la planificacin de pruebas de evaluacin (captulo 1), la evaluacin del rendimiento de tubrculos (captulo 2), la evaluacin de la calidad de post cosecha de papa y su almacenamiento (captulo 3), la evaluacin de la resistencia al tizn tardo (captulo 4), la evaluacin de la resistencia a la marchitez bacteriana (captulo 5), la evaluacin de resistencia a la mosca minadora de la hoja (captulo 6), la evaluacin de resistencia a los virus (captulo 7), la evaluacin de madurez en llenado de tubrculos (captulo 8) y la Gua para manejo de datos (captulo 9). Adems, los captulos de esta gua proporcionan informacin detallada para consultas y formatos de hojas estndar para la recoleccin de datos.
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Planicacin de las pruebas de evaluacin

Introduccin
La planificacin cuidadosa es un paso previo esencial para la instalacin de las pruebas de evaluacin. Es necesario elegir el lugar y la temporada representativa, tener suficiente material sano de siembra y un diseo apropiado. La preparacin del terreno y las labores de campo debe adecuada, con provisin de suficiente mano de obra. Se deben registrar los datos esenciales, tales como el tipo de clones usados y un mapa del rea. La planificacin tambin es necesaria para el mantenimiento de la prueba y la recoleccin de datos durante el ciclo de desarrollo del cultivo. Desde la instalacin de la prueba hasta la cosecha, debe haber suficiente mano de obra para deshierbe, aporque, manejo de plagas y enfermedades e irrigacin, realizadas de acuerdo a prcticas locales, comerciales o recomendadas. Se debe planificar el proceso de recoleccin y registro de datos. Los planes para el uso y el manejo de datos de post cosecha deben ser instalados tomando en cuenta el anlisis, interpretacin, participacin y retroalimentacin.
Conduccin de pruebas de evaluacin Lugar(es)

El lugar(es) debe ser determinado por el objetivo(s) de la prueba. Las pruebas de rendimiento deben ser instaladas en regiones representativas de produccin comercial de papa, mientras que las pruebas de exposicin intencional deben ser instaladas donde la presin de enfermedades o plagas es alta. Por otra parte, las pruebas de genotipo por medio ambiente (G x MA) requieren de lugares mltiples.
Materiales
Muchos de los materiales necesarios pueden ser fcilmente obtenidos con anticipacin, pero algunos mayormente dependen del tipo de prueba. La siguiente es una lista general:

Semilla de clones de papa y variedades testigo Libreta de campo, mapa y lapicero
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Fertilizantes, pesticidas y otros materiales Equipo para medicin del clima Mallas o bolsas para tomar muestras y/o cosechar Balanza y calculadora
Produccin de semilla
Debido a que la tecnologa de produccin de semilla debe adaptarse al medio ambiente local, existen muchos mtodos para producir semilla sana. En ambientes montaosos se pueden obtener tubrculos semilla de alta calidad para las pruebas de evaluacin a partir de plantas sanas identificadas en el campo durante la campaa anterior (seleccin positiva). La semilla tambin puede ser producida en tinglados utilizando sistemas de alta tecnologa, tales como la hidropona y aeropona, y multiplicando plantas derivadas de cultivos in vitro o tubrculos prebsicos. Si no existiera experiencia local en la produccin de semilla, se recomienda ponerse en contacto con un especialista nacional o consultar un manual (Loebenstein et al., 2001).
Ubicacin de la parcela de multiplicacin

Cuando se necesita semilla sana, se puede producir en una parcela de multiplicacin en el lugar. La produccin de semilla debe hacerse anticipadamente a todas las pruebas por un periodo de tres aos, y se debe desarrollar un esquema de produccin de semilla que satisfaga esta demanda. La parcela de produccin de semilla debe estar localizada en un rea libre de vectores de virus, con presencia mnima de enfermedades o plagas y preferentemente aislada de campos de produccin de papa. La parcela de semilla no debe haber estado sembrada con solanceas en los dos aos anteriores, ni debe usarse para evaluacin durante el desarrollo del cultivo porque frecuentemente aumenta el riesgo de diseminar enfermedades.
Materiales de la parcela de multiplicacin

En las pruebas de evaluacin de la campaa anterior se debe seleccionar la fuente de plantas sanas de cada clon de cultivos in-vitro, de campo y tinglados. Para planificar el nmero de plantas madre que se debe utilizar en cada ciclo de multiplicacin, se usa una tasa conservadora de cinco tamaos de tubrculo semilla por planta. En la Tabla 1 se presenta el mnimo de requerimientos para diferentes tipos de evaluacin.
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Tabla 1. Mnimo de semilla sana por clon para las pruebas de evaluacin Pruebas de evaluacin 1 Rendimiento de tubrculos Tizn tardo Marchitez bacteriana Perforador de la hoja Virus PVX/PVY (campo) Virus PLRV (campo) Virus PVX/PVY (invernadero) Evaluacin de la madurez del llenado de tubrculos 40 20 20 20 20 20 7 45 Ao 2 240-400 40 100 90 3 >400
Vale notar que no es necesario semilla sana para los ciclos 2 y 3 de las pruebas para resistencia a virus. Al final de cada ciclo se guarda la semilla para que sea usada en la prxima siembra. El propsito es obtener al final de dos temporadas de cultivo por lo menos 100 semillas con altas tasas de infeccin por virus, que permitirn la implementacin de la prueba intencional durante la tercera temporada.
Manejo de campo de la parcela de multiplicacin

Se deben aplicar las prcticas agronmicas estndar y los procedimientos estrictos para proteger la parcela de semilla de plagas, enfermedades y vectores. Las plantas atpicas y las que muestran infeccin a virus deben ser eliminadas por raleo entre los 45 y 55 das despus de la siembra, antes que se cierre el follaje. La sanidad se confirma usando un ndice serolgico (ELISA u otros). Despus de la cosecha, se etiquetan los tubrculos y se guardan en un almacn de ambiente bien protegido y separado de las papas para consumo.
Diseo Experimental
Las pruebas de evaluacin de rendimiento y las de exposicin intencional presentes en esta gua requieren de la comprensin del diseo de bloques completamente al azar (DBCA), del diseo completamente al azar (DCA) y de las pruebas multilocalizadas.
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Diseo de bloques completamente al azar (DBCA)

Para la mayora de las evaluaciones estndar se recomienda el uso de un diseo de bloques completamente al azar (DBCA) con cuatro repeticiones, lo cual incluye la evaluacin de rendimiento. En el diseo DBCA, todos los tratamientos (clones/ variedades avanzadas) son agrupados en bloques uniformes de igual tamao. El propsito principal de hacer bloques es reducir el error experimental por eliminacin de las fuentes de heterogeneidad, tales como la fertilidad del suelo o campos con pendiente. Se puede escoger cuidadosamente un patrn predecible de variabilidad del suelo, la forma de la parcela y orientacin del bloque, de tal manera que las condiciones experimentales dentro de cada bloque sean lo ms uniforme posible. Cuando el patrn de la variabilidad del suelo es unidireccional, se deben usar bloques largos y angostos. Cuando el patrn de variabilidad no es predecible, los bloques deben ser lo ms cuadrado posible. En un diseo DBCA se aplica el proceso de azar a cada uno de los bloques. La distribucin al azar se puede hacer con un conjunto de nmeros al azar, dibujando los lotes o usando MS Excel. El anlisis de variancia (ANOVA) se usa para analizar los datos colectados en un diseo DBCA. Las tres fuentes de variabilidad usadas en el modelo estadstico son el tratamiento (variedad/clon de papa), los bloques (repeticin) y el error experimental.
Diseo completamente al azar (DCA)

El diseo completamente al azar (DCA) es considerado apropiado para pruebas con unidades experimentales homogneas, donde los efectos del medio ambiente son relativamente fciles de controlar, tales como los invernaderos y otros ambientes controlados. Este diseo es mayormente usado en pruebas para evaluar la respuesta al patgeno durante la exposicin intencional, donde la distribucin del patgeno es al azar y no sigue ningn patrn de distribucin debido a inclinaciones del terreno, cultivos vecinos, agua de regado, etc. En un diseo completamente al azar, los tratamientos son aplicados completamente al azar, de tal manera que cada unidad experimental tiene la misma oportunidad de recibir cualquiera de los tratamientos. El proceso de azar de un DCA es aplicado a toda la prueba. La distribucin al azar se puede hacer con una tabla de nmeros al azar, dibujando lotes o usando MS Excel. El anlisis de variancia (ANOVA) se usa para analizar los datos recogidos en un DCA. En este modelo estadstico solamente se usan dos fuentes de variabilidad: el tratamiento (variedad/clon de papa) y el error experimental.
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Pruebas de variedad multilocalizadas (PVML)

Por lo general, las pruebas de variedad multilocalizadas (PVML) se realizan para confirmar el comportamiento y evaluar la estabilidad o adaptacin general de clones que ya han mostrado buenas perspectivas en pequea escala. Las PVML consisten en una serie de cuatro o ms pruebas similares, generalmente DBCA, lo cual incluye los mismos tratamientos (genotipos) y testigos. Las pruebas generalmente se realizan en lugares (ambientes) que representan una amplitud de condiciones de produccin y que se han previsto para una variedad candidata. Un anlisis de variancia combinado en los lugares solamente puede ser usado despus de probar la homogeneidad de la variancia experimental en todos los lugares. Los experimentos con coeficientes altos de variacin son generalmente eliminados del anlisis. Las fuentes de variabilidad usadas en el modelo estadstico son el medio ambiente (MA) o lugar, los bloques dentro de cada ambiente, el tratamiento (variedad/clon de papa) o genotipo (G), la interaccin de lugar y tratamiento, llamada tambin interaccin G x MA (genotipo x medio ambiente), y el error experimental. Un anlisis ms profundo de las PVML a travs del Efecto Principal Aditivo y el anlisis de la Interaccin Multiplicativa (EPAIM) (Ebdon y Gauch, 2002; Varela et al., 2006) o el anlisis biplot GGE (Yan, 2002) proporcionarn informacin ms precisa acerca del comportamiento general de los cultivares, los ambientes y el comportamiento de los cultivares bajo una gama de ambientes.
Otros
El diseo de bloque incompleto balanceado (descrito en el anexo 1) se usa tambin para evaluar la calidad de los clones en post cosecha utilizando un panel de evaluadores. Dependiendo del tipo de prueba y sus objetivos, se pueden aplicar diseos adicionales (tales como los de parcela dividida y Ltice). En el anexo 1 se encuentra una breve descripcin y el proceso de arreglo al azar. Se puede obtener informacin adicional de los manuales tcnicos que tratan sobre diseos experimentales (Gmez y Gmez, 1984).
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Manejo de Campo
El manejo de campo depende del tipo de prueba. Una prueba de rendimiento debe manejarse preferiblemente de acuerdo con las prcticas comerciales normales. Sin embargo, las pruebas de resistencia demandarn una exposicin intencional, una alta presin del patgeno y un limitado uso de medidas de control. En cada captulo se describirn las prcticas de manejo adecuadas.
Registro y anlisis de datos Registro de datos

Este manual est acompaado por un libro de campo diseado en MS Excel especficamente para cada prueba. Las primeras hojas de trabajo del libro de campo son para registrar el lugar de la prueba, el manejo y los materiales vegetales utilizados. Otras dos hojas de trabajo se destinan para recolectar los datos relativos al monitoreo de pestes y del clima. Las hojas de trabajo adicionales son especficas para cada captulo de la gua y se usan para la recoleccin de datos de la prueba. Algunas de estas hojas de trabajo contienen frmulas que ayudan al clculo de variables complementarias. Las hojas de trabajo facilitan el almacenamiento del comportamiento de datos dentro de las instituciones cooperantes al estar estandarizadas, y pueden ser fcilmente bajadas en CIPPEX. Este software desarrollado por el CIP facilita el almacenamiento, el anlisis y el informe, y el compartir datos entre el CIP y las instituciones cooperantes.
Anlisis de datos
Para definir los mtodos apropiados para el anlisis de datos e identificar las entradas a excluirse del anlisis, es importante comprender el tipo de datos recolectados durante el experimento y realizar una primera exploracin de los datos por medio de estadsticas simples. Las mediciones del peso, tamao y cantidad son variables cuantitativas continuas/ discretas y son analizadas utilizando estadstica paramtrica cuando la distribucin de datos es normal. Sin embargo, no se pueden medir datos numerosos; estos son catalogados o adjuntados a una escala de tasa. Por ejemplo, las variables cualitativas ordinales se usan para caracterizar el sabor, el aroma o la apariencia de un clon. El porcentaje de infeccin de la planta -usado para evaluar la resistencia del clon a una
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enfermedades tambin una variable cuantitativa ordinal (seudo cuantitativa). Esta variable, la cual representa el estimado de dao por parte del evaluador, es ms que un grado, una medida. Las variables ordinales se analizan y comparan utilizando mtodos de anlisis no paramtricos. Cada captulo en esta gua proporciona orientacin para el anlisis de datos y su interpretacin. Los datos deben ser analizados con un programa estadstico apropiado (CIPSTAT 1). La Unidad de Investigacin Informtica del CIP (RIU) puede proporcionar ayuda con estos programas.
(1) Actualmente en revisin.
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Evaluacin del rendimiento de tubrculos de clones de papa

Pruebas de evaluacin del rendimiento Lugar
Temporada 1: durante el primer ciclo de cultivo, los experimentos de rendimiento se establecen en un lugar representativo del rea sealada de produccin. Sin embargo, el nmero y la calidad de la semilla usada podran obligar a localizar esta primera evaluacin en el terreno seguro del centro de investigacin. Temporada 2: las pruebas de rendimiento se establecen en un lugar representativo del rea sealada de produccin. Temporada 3: las pruebas de rendimiento se establecen en cuatro o ms lugares representativos del rea sealada de produccin, para evaluar la estabilidad o adaptabilidad de la mayora de clones promisorios identificados en aos anteriores.
Materiales: clones, variedades testigo, semilla

Se pueden evaluar clones o variedades del CIP y de programas locales de mejoramiento. Se deben usar como testigo por lo menos dos de las variedades comnmente utilizadas. Si se va a determinar el comportamiento del procesamiento, se debe incluir en la prueba por lo menos una variedad local importante para hojuelas fritas, con fines de comparacin. Debe usarse semilla de alta calidad de variedades y clones del mismo origen como testigo. En la primera temporada, la prueba de rendimiento de tubrculos requiere por lo menos 40 semillas por entrada, que deben sembrarse en un solo lugar con cuatro repeticiones. Durante la siguiente temporada, el tamao de la parcela y el nmero de lugares debern incrementarse de acuerdo a la disponibilidad de semilla.

Temporada 1: 40 semillas / clon Temporada 2: 240-400 semillas / clon Temporada 3: ms de 400 semillas / clon
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Diseo experimental
Para evaluar el material clnico avanzado, es necesario incorporar un nmero mnimo de repeticiones en el diseo de la prueba. Para pruebas de evaluacin estndar, se recomienda el uso de un diseo de bloque completo al azar (DBCA), con un mnimo de cuatro repeticiones. Es preferible utilizar parcelas de surcos dobles o mltiples, que parcelas largas de un solo surco. Segn las condiciones del experimento, se pueden usar otros diseos experimentales, tales como el diseo completamente al azar (DCA), el de parcela dividida y el de bloques incompletos. Por lo general, las pruebas en localidades mltiples se realizan durante la tercera temporada, cuando se dispone de suficiente semilla. En cada lugar se realiza una prueba repetida aparte, utilizando un diseo comn y clones y controles selectos comunes. Para evitar la diseminacin de enfermedades transmitidas por la semilla, se debe dar especial atencin a la calidad de la semilla utilizada.
Manejo de campo
Una vez que se ha establecido la prueba, se deben recolectar durante la temporada de desarrollo del cultivo los siguientes datos:
Parmetros de evaluacin
Una vez que ha sido establecida la prueba se deben colectar los siguientes datos durante la temporada de desarrollo del cultivo:

Nmero de plantas/parcela: este dato se recoge 45 das despus de la siembra. Hbito de la planta: este dato se recoge 45 das despus de la siembra. Vigor de la planta: este dato se recoge 45 das despus de la siembra. Estado de floracin: este dato se recoge 60 das despus de la siembra. Estado de senescencia: este dato se recoge 90 das despus de la siembra.
El hbito de la planta y los estados de floracin y de senescencia se miden con las escalas descritas por Gmez (2006). El vigor de la planta puede ser evaluado con
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una escala de 1 a 9, en donde 1 corresponde a las plantas menos vigorosas y 9 a las muy vigorosas. Al mismo tiempo se puede registrar la presencia de daos por enfermedades y plagas. El porcentaje de plantas infectadas puede medirse con material resistente al tizn tardo. Al ser el propsito de la prueba evaluar el rendimiento bajo condiciones ptimas de manejo del cultivo, se debern usar fungicidas contra el ataque severo de tizn tardo para proteger el cultivo. Se debe hacer una evaluacin especfica de la resistencia de los clones contra las enfermedades y plagas locales, usando pruebas de exposicin intencional, las cuales se describen en los siguientes captulos. A momento de la cosecha, se clasifican los tubrculos en tres categoras. Se registra el peso y el nmero de tubrculos en cada categora. En el CIP se usan las siguientes categoras: Categora I: comercial Tubrculos con un peso de 200-300g o que midan ms de 60mm Categora II: Comercial Tubrculos con un peso de 80 a 200 g o que midan entre 30 y 60 mm Categora III: no comercial Tubrculos de menos de 80 g o que midan menos de 30 mm Tubrculos con defectos externos. Estas categoras son arbitrarias y varan de acuerdo al pas y regin en los cuales se realiza la evaluacin. Cada evaluador es libre de usar el criterio localmente pertinente; sin embargo, cada categora debe ser definida con precisin a fin de facilitar la comparacin de datos entre pases. Para el clculo de la calidad del procesamiento, es muy importante sealar los defectos internos al momento de la cosecha. Se debe cortar transversalmente una muestra de 10 tubrculos comerciales a fin de inspeccionar los posibles defectos externos, tales como grietas, crecimiento secundario y verrugas, y problemas internos, como corazn vaco, mancha negra, necrosis por calor y pudricin. Para cada entrada, se registra en la hoja de datos de rendimiento el nmero de tubrculos afectados. Se calcula el porcentaje de tubrculos afectados.
Nota: Los tubrculos cosechados de una prueba de rendimiento pueden usarse para una posterior evaluacin de calidad de post cosecha, comportamiento de procesado y coccin y almacenamiento.
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Todos los datos recogidos se registran en la hoja de datos de rendimiento de tubrculos. Ver anexo 2. Con el objeto de facilitar la comparacin entre pruebas y localidades, los datos de evaluacin de rendimiento (tales como el peso total o el peso comercial) deben expresarse en t/ha, y los datos del tamao de la parcela cosechada deben ser registrados con cuidado en la hoja de trabajo de informacin sobre la prueba.
Anlisis de datos
Para explorar los datos, debe usarse estadstica simple como la mediana, el error estndar, la distribucin de frecuencias y el diagrama de caja. Los datos de rendimiento se evalan usando anlisis de variancia (ANOVA) y las medianas se comparan con pruebas estadsticas de comparacin, tales como LSD, Tukey, WallerDuncan y Bonferroni. Para comparar los clones avanzados con el testigo, se pueden utilizar las pruebas de contraste ortogonal y de Dunnett. Se recomienda el anlisis de residuales para probar la validez del modelo y analizar el comportamiento de la variancia (homognea o no). Todos los anlisis pueden ser efectuados usando R o cualquier otro paquete estadstico. CIPSTAT, que usa el paquete R, facilita el anlisis e informa sobre los resultados.
Interpretacin de datos Validacin del experimento

Se considera que una prueba experimental para la evaluacin de rendimiento ha sido llevada a cabo bajo condiciones apropiadas, si el coeficiente de variacin del experimento no excede el 30%.
Criterio de seleccin
Se compara el desempeo de cada clon avanzado con el comportamiento del testigo(s). Es importante considerar el rendimiento comercial de la entrada, en lugar del rendimiento total. En la mayora de los casos, se considerar que la propensin de un clon a formar numerosos tubrculos pequeos es una caracterstica negativa.
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Evaluacin de la calidad de post cosecha de papa y su almacenamiento

El objetivo principal de la evaluacin del comportamiento post cosecha es obtener informacin acerca del potencial de los clones avanzados para diversos usos finales, que varan desde el consumo fresco hasta el procesamiento. Estas evaluaciones proporcionan importante informacin que sirve de gua a los programas de mejoramiento y seleccin, y cuyos resultados pueden ser tiles para recomendar nuevas variedades para usos especficos. El presente protocolo detalla los procedimientos para determinar:

El contenido de materia seca y gravedad especifica El comportamiento como hojuela frita El comportamiento como papa frita La calidad de coccin, incluyendo la textura y los componentes del sabor El comportamiento en almacn, con inclusin del brotamiento y la prdida de peso, as como enfermedades y pudricin.
Evaluacin de post cosecha

Las caractersticas de conservacin en el almacn despus de la cosecha pueden ser evaluadas utilizando tubrculos sanos cosechados para las pruebas de rendimiento del tubrculo.
Condiciones
Los factores medioambientales (sobre todo temperaturas fluctuantes, lluvias, altitud y fertilidad del suelo), el manejo y las interacciones de genotipo x medio ambiente tienen influencia en el comportamiento de post cosecha. Por lo tanto, el clima del lugar y las condiciones de manejo de los materiales de produccin debern ser anotados en la hoja de datos apropiada del libro de campo. Para determinar la estabilidad varietal de las pruebas, las evaluaciones deben realizarse en materiales producidos en ambientes contrastantes (por ejemplo, en dos o mltiples lugares), particularmente si la altitud o la poca de cultivo es relevante a la ecologa particular del rea sealada para el desarrollo de variedades.
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Materiales: clones y variedades testigo

En cada repeticin, se toman muestras de uno o ms tubrculos sanos por planta de tamao comercial, hasta obtener un mnimo de 25 tubrculos por clon. Los tubrculos del muestreo deben ser uniformes y representativos del tamao y forma del clon. Si se va a determinar la calidad del procesamiento, se debe incluir para fines de comparacin por lo menos una variedad para hojuela/papa frita que sea localmente importante. El nmero de tubrculos y la eleccin del momento de la prueba de evaluacin recomendados se muestran a continuacin:
Diagrama de flujo: Evaluacin de post cosecha
Cosecha de campo (Prueba de rendimiento) Muestra de 50 tubrculos/Repeticin
24 horas
Materia seca y/o gravedad especfica 5-10 tubrculos (0.5-1.0 kg)
2 semanas Hojuela / papa frita 3-5 tubrculos
Prueba de coccin 3-6 tubrculos
Almacenamiento a temperatura ambiente y fra 10 tubrculos
Almacenamiento en oscuridad 5 tubrculos
Cada 15 das 2 meses Evaluacin de hojuelas
Nmero de brotes
3 meses
Prdida de peso
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Evaluacin del contenido slido de los tubrculos Materiales

Se debe evaluar el contenido de materia seca, si fuera posible, dentro de las 24 horas de producida la cosecha con el fin de evitar cambios debido a mermas. Los tubrculos deben estar libres de enfermedades y daos. No es necesario pelarlos. Para la medicin de todos los parmetros se requiere una balanza de precisin de 0.1g.
Contenido de materia seca Para determinar el contenido de materia seca se necesita adems de la balanza, un horno. Paso 1: Picar cinco tubrculos (un total de 500 g aproximadamente) en cubos pequeos de 1 a 2 cm, mezclar bien y tomar submuestras de 200 g cada una. Es importante que la muestra sea de todas las partes del tubrculo, porque el contenido de materia seca no es uniforme. Determinar el peso exacto de cada submuestra y registrarlo como peso fresco. Paso 2: Colocar cada submuestra en una bolsa de papel o recipiente abierto y ponerla en el horno a 80 C por 72 horas, controlando el peso de las muestras a intervalos regulares hasta que se tenga un peso constante. Pesar de inmediato cada submuestra y anotarlo como peso seco. Paso 3: Calcular el porcentaje del contenido de materia seca de cada submuestra con la siguiente frmula:
Materia seca = (peso seco /peso fresco) x 100
Paso 4: Calcular la media de la materia seca de dos de las submuestras. Gravedad especfica La gravedad especfica tambin puede usarse para evaluar indirectamente el contenido de materia seca de un clon. Para determinar la gravedad especfica del tubrculo se pueden usar dos mtodos: el de peso en aire/peso en agua (ms preciso) y el del hidrmetro. Determinacin de la gravedad especfica con el mtodo de peso en aire/peso en agua Este mtodo requiere del uso de una balanza equipada con un gancho en la parte inferior con el objeto de sostener un cubo o balde, el cual ser sumergido en agua.
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El mtodo de peso en aire/peso en agua se puede realizar de la siguiente manera: Paso 1: Paso 2: Paso 3: Colocar un vaso de precipitacin o canasta de metal sobre una balanza y recalibrar la balanza a cero. Colocar 4 kg de papa de tamao comercial en la canasta y pesar; registrar el dato como peso en aire. Sumergir en agua el vaso de precipitacin o canasta de metal con las papas y pesar nuevamente; registrar los datos como peso en agua. Calcular la gravedad especfica con la siguiente frmula:
Paso 4:
Gravedad especfica = (peso en aire) / (peso en aire - peso en agua)
Determinacin de la gravedad especfica con el mtodo del hidrmetro Con un hidrmetro calibrado, hacer lo siguiente: Paso 1: Paso 2: Colocar un vaso de precipitado de plstico o cubo de metal sobre una balanza y recalibrar la balanza a cero. Colocar el peso exacto de 3629 gramos de papa de tamao comercial dentro del vaso o cubo (se tendr que cortar una papa para obtener el peso exacto). Los 3629 gramos son la cantidad estndar a usarse si el hidrmetro est calibrado. Sumergir en agua el cubo con las papas y conectarlo al hidrmetro. La gravedad especfica se puede leer directamente del hidrmetro.
Paso 3:
Nota: Asegurarse siempre de que el hidrmetro est calibrado (para una informacin detallada consultar el manual del fabricante).
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Registro de datos
Para registrar y calcular los datos, se debe usar la hoja de datos de evaluacin de la calidad de post cosecha: materia seca-gravedad especfica (Calidad de post cosecha,).
Anlisis de datos
Los datos, el porcentaje de materia seca y/o la gravedad especfica pueden analizarse de acuerdo al diseo (entrada, repeticin) usado en el campo, cuando se toman las muestras de cada unidad experimental de la prueba. Para explorar los datos, se debe utilizar estadsticas simples tales como la media, el error estndar, la distribucin de frecuencias y el diagrama de cajas. Los datos continuos expresados en porcentaje (como el de materia seca) no necesitan ser transformados antes del anlisis. Los datos se analizan utilizando R u otros paquetes estadsticos. Los datos de porcentaje de materia seca y/o gravedad especfica son analizados usando LSD, Tukey, Duncan-Waller, Bonferroni o/y otras pruebas. El contraste ortogonal es usado para comparar los clones con el testigo local (prueba de Dunnett). CIPSTAT (actualmente en revisin), que usa el paquete R, facilita el anlisis e informa sobre los resultados. Se recomienda el anlisis de residuales para probar la validez del modelo y analizar el comportamiento de la variancia (sea homogneo o no).
Interpretacin de los datos

El porcentaje de materia seca y de gravedad especfica estn altamente correlacionados y son dos maneras alternativas de estimar el contenido slido de los tubrculos. Ambas variables dan una indicacin de la calidad de procesamiento y coccin.
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En general, se consideran aceptables un contenido de materia seca de ms del 20% y una gravedad especfica de 1.080 o mayor. Estos valores corresponden a un contenido slido de ms o menos 18%. Los tubrculos que se ajustan a este criterio producen un buen rendimiento de hojuelas fritas que absorben menos aceite y tienen mejor textura. Valores ms bajos indican una calidad inaceptable para la mayora de propsitos de procesamiento.
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Evaluacin del comportamiento de papa para hojuelas fritas

Materiales Los tubrculos deben estar a temperatura ambiente (estabilizados) por 10 das antes de evaluar su comportamiento para hojuelas. Parmetros de evaluacin Las variables a medirse son el grado de oscurecimiento durante la fritura y la cantidad de aceite absorbido durante el proceso. Oscurecimiento de las hojuelas Los tubrculos deben estar libres de enfermedades y daos. No es necesario pelarlos. Cada muestra consta de seis tubrculos. Para evaluar el grado de oscurecimiento, se usa la Cartilla estndar de color de hojuela de papa. Paso 1: Paso 2: Paso 3: Paso 4: Cortar el tubrculo perpendicularmente al eje ms largo y tomar tres rebanadas de 0.5 mm del centro de cada mitad. Enjuagar en agua las rebanadas, sacudirles el agua y esperar a que la superficie se seque. Frer las rebanadas a 176180 C hasta que el aceite termine de burbujear (aproximadamente 3 minutos). Evaluar el color de las hojuelas con la Cartilla estndar de color de hojuela de papa, en una escala de 1 a 5, donde 1 es crema claro o amarillo y 5 es marrn oscuro.
Absorcin del aceite Adems de la caracterstica fsica innata de una variedad (por ejemplo, su gravedad especfica), el contenido de aceite se ve afectado por varios otros factores, por lo que es importante usar procedimientos uniformes.
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Determinacin del grado de absorcin de aceite con el mtodo de presin Este mtodo requiere una cuchilla para prensar, una balanza y papel toalla.
Paso 1:
Paso 2: Paso 3:
Paso 4: Paso 5:
Paso 6:
Paso 7: Paso 8:
Paso 9: Paso 10:
Triturar de 20 a 30 g de hojuelas fritas de papa recin enfriadas en un mortero u otro aparato conveniente y mezclar con meticulosidad la muestra. Colocar papel toalla en el fondo del tambor para que absorba el aceite exprimido. Pesar una muestra de aproximadamente 10 g de hojuelas trituradas (anotar los datos como peso inicial) y colocarla dentro del tambor. Colocar la porcin de mezcla restante, en el mbolo sobre el tambor. Colocar todo el conjunto en la prensa y comprimir a razn de un golpe por dos segundos hasta que la presin llegue a 15 000 libras por pulgada cuadrada (psi, en ingls). Dejar 20 segundos para que baje la presin en la prensa, y vuelva a bombear hasta que llegue a 15,000 psi. Ajustar el temporizador a tres minutos. Al final de los tres minutos, soltar la presin y retirar de la cmara la muestra en forma de pastilla. Tener cuidado de no dejar ningn fragmento de la muestra y de no recoger ni un poco de aceite con la pastilla. Pesar la pastilla (anotar el dato como peso final). Determinar el contenido de aceite en una muestra de 10 g con la siguiente frmula:
Absorcin de aceite = peso inicial-peso final
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Lista de colores estndar para hojuelas de papa
Grado 1
Grado 2
Grado 3
Grado 4
Grado 5
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Registro de datos
La hoja de datos de Evaluacin de la calidad de post cosecha: hojuelas, papa frita y coccin (Calidad de post cosecha) debe usarse para registrar y calcular datos de oscurecimiento de hojuelas y absorcin de aceite.
Anlisis de datos
Los datos de oscurecimiento de hojuelas son considerados datos cuantitativos ordinales y se analizan con anlisis no paramtricos. Los valores de las entradas se comparan utilizando las pruebas de Friedman, Durbin o Kruskal Wallis (Conover, 1999). La variable aceite absorbido en 10 g de muestra es analizada (cuantificada) usando anlisis de variancia (ANOVA), y las medias son comparadas con pruebas de comparacin estadstica como LSD, Tukey o. Duncan-Waller Se pueden emplear contrastes ortogonales (obtenidos usando las pruebas de Dunnett) para comparar el rendimiento del clon con el del testigo(s). Estos anlisis se pueden realizar usando R u otros paquetes estadsticos. CIPSTAT (actualmente en revisin), que usa el paquete R, analiza e informa sobre los resultados.
Las hojuelas de color claro son las preferidas y son generalmente aceptadas por la industria hasta el grado 3 de oscurecimiento. El aceite empleado en la manufactura de hojuelas u otros productos fritos de papa puede ser uno de los ingredientes ms costosos. Un excesivo contenido de aceite en productos fritos indica no solamente una mala calidad del producto sino la prdida de un ingrediente caro. El aceite en exceso da lugar a hojuelas grasosas, una caracterstica indeseable para el consumidor. La absorcin de aceite mayor a un 40% es considerada inaceptable.
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Evaluacin del comportamiento en el procesamiento y la coccin Condiciones de la evaluacin

La evaluacin del comportamiento en papa frita y coccin requiere de la percepcin sensorial de equipos de degustadores.
Materiales
Degustadores La confiabilidad de la informacin obtenida depende de la habilidad de los evaluadores para reconocer diferencias entre las muestras que estn evaluando. Por ello, los degustadores no deben tener impedimentos fsicos mayores que puedan reducir su capacidad de reconocer caractersticas organolpticas y no deben tener ningn tipo de infeccin respiratoria (como gripe) que menoscabe sus sentidos. Para seleccionar a los candidatos, se puede realizar una prueba simple de degustacin con soluciones de azcar, sal, cido ctrico en diferentes concentraciones. Los degustadores deben ser entrenados, y la degustacin debe realizarse tomando en cuenta los siguientes errores psicolgicos ms comunes que ocurren durante la evaluacin sensorial:

Error de habituacin: el evaluador contina dando las mismas respuestas a pesar de que se le presentan muestras en orden creciente o decreciente. Error de expectativa: el evaluador ansioso encuentra diferencias donde no las hay. Error inducido: el evaluador sabe cmo hacer la prueba, pero factores externos le sugieren diferencias cuando en realidad no las hay. Error de benignidad: el evaluador es amigo del investigador y por esa razn le da mayor evaluacin a la muestra. Error de tendencia central: el evaluador duda en usar los valores extremos de la escala. Error de contraste: una muestra mala o desagradable se presenta despus de una muestra buena agradable. Error de posicin de la muestra: diferentes muestras son evaluadas en la misma forma porque haber sido presentadas en el mismo orden. Error de asociacin: tendencia a repetir la impresin previa.
En la evaluacin sensorial de los alimentos, los errores ms importantes son la tendencia central, la posicin de la muestra y el contraste.
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Diseo experimental
Puesto que un mismo degustador no debe evaluar ms de 10 muestras, la evaluacin se organiza de acuerdo a un diseo de bloque incompleto balanceado (DBIB). Cada muestra ser evaluada el mismo nmero de veces y cada degustador evaluar un diferente conjunto de clones. La lista de muestras a ser evaluada por un degustador debe definirse e informarse en la hoja de puntaje de papa frita antes del inicio del experimento. Las indicaciones para establecer el diseo estn proporcionadas en el Anexo 1.
Manejo de la evaluacin
Durante la evaluacin se deben aplicar las siguientes reglas:

Antes de realizar la evaluacin, un tcnico debe explicar claramente los procedimientos a los degustadores, incluyendo la manera de registrar los datos. La degustacin debe realizarse en un cuarto libre de olores, preferiblemente entre las 10 a.m. y 2 p.m. Los panelistas no deben comer ni fumar por lo menos una hora antes de las evaluaciones. Los panelistas no deben evaluar ms de 10 muestras por sesin. Las muestras no deben ser tragadas, y debe haber un vaso con agua para cada panelista, a fin de que se enjuaguen la boca entre muestra y muestra. Las muestras deben mantenerse a la temperatura correcta. Los nombres u otros rasgos conocidos identificables de las variedades a ser probadas deben ser ocultadas y debe asignarse un cdigo a cada entrada. Los panelistas no deben discutir sobre su evaluacin hasta que la sesin haya concluido. Ninguna persona debe tener la responsabilidad por s sola de juzgar una caracterstica sensorial; el juicio combinado de varias personas minimizar cualquier sensibilidad individual, variacin o fluctuacin.
Comportamiento de la papa frita Esta prueba esta diseada para simular el proceso comercial usado para elaborar papa frita. Un panel compuesto de cuatro degustadores entrenados evala la papa frita.
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Cada muestra consta de tres tubrculos, libres de enfermedades y sin daos. Paso 1: Cortar los tubrculos en tiras transversales de 1 cm de ancho. Tomar tiras de tres diferentes partes del tubrculo: cuatro del centro, cuatro de la parte externa y cuatro de la parte intermedia (3x3x4 = 36 tiras). Arreglar cuatro muestras para degustacin (una para cada miembro del panel), consistentes en tiras escogidas al azar de cada una de las tres partes de los tres tubrculos, es decir, un total de 9 tiras por miembro del panel. Frer en sartn con aceite de cocina a 193 C durante un minuto. Retirar el exceso de aceite y dejar enfriar entre uno y dos minutos. Continuar friendo a 193 C durante un minuto y medio ms. Distribuir las tiras de las tajadas interiores y exteriores. Presentar las muestras a los miembros del panel y evaluar de acuerdo a su apariencia externa, color, color interno y textura (harinosidad) y de la pulpa.
Paso 2:
Paso 3: Paso 4: Paso 5:
Nota: Una materia seca buena (y por lo tanto, una buena textura) no es uniforme en todo el tubrculo y a menudo se limita al centro del mismo).
Calidad de coccin Un panel de degustadores compuesto de seis a 12 miembros entrenados evala la calidad de coccin/comida de tubrculos hervidos o cocidos al microondas. Se debe usar como testigo variedades locales con buena y mala calidad de coccin. Cada muestra incluye entre tres y seis tubrculos de aproximadamente 7.5 cm de dimetro, libres de enfermedades, sin daos y lavados, para quitarles la tierra y detritos. Paso 1: Envolver cada tubrculo en un papel toalla hmedo y cocinarlos en un horno microondas (7001000 w) al mximo por 10 minutos y medio, o colocar los tubrculos en agua hirviendo hasta que un alfiler/probador penetre el tejido. Registrar el promedio de tiempo necesario para la coccin del extremo apical y el de los brotes en la Hoja de datos de la evaluacin de la calidad de post cosecha: hojuelas, papa frita y coccin (Calidad_post cosecha). Inmediatamente despus de la coccin, envolver los tubrculos en papel aluminio delgado para mantenerlos calientes hasta que sean presentados al panel. Cortar un tubrculo por la mitad para cada panelista e inmediatamente proceder con la evaluacin de color, textura y sabor.
Paso 2:
Paso 3:
Paso 4:
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Registro de datos
Los degustadores registran sus puntajes en la hoja de calificacin de papa frita (Anexo 3) y/o en la hoja de calificacin de coccin (Anexo 4). Luego se procesan los datos. Cada punto de la hoja de puntaje individual es convertido en un nmero ponderado, dando mayor peso a las caractersticas que reflejan mayor calidad. En cada hoja de puntaje se presenta una sugerencia del peso (columna oculta). La impresin general de los panelistas es calculada sumando todos los nmeros ponderados, que luego se registra en la hoja de datos Evaluacin de la calidad post cosecha: hojuela, papa frita, coccin (Calidad de post cosecha).
Anlisis de datos
Los datos totales de puntaje de calidad de papa frita y coccin son analizados como variables no paramtricas en un diseo de bloque incompleto balanceado. Se puede usar la prueba de Durbin para comparar el comportamiento de cada entrada. Las caractersticas adicionales, como textura y sabor, pueden ser correlacionadas con el contenido de materia seca.
La prueba de Durbin permite la identificacin de genotipos con la mejor calidad de procesamiento para papa frita y/o coccin.
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Evaluacin del comportamiento en almacn Condiciones: almacenaje

El material es almacenado en un cuarto fresco, oscuro y ventilado.
Materiales
Para determinar el comportamiento en el almacn se usan los tubrculos cosechados en las pruebas de rendimiento. Solamente se almacenan y evalan los tubrculos sanos y limpios (libres de exceso de tierra y deshechos, pero no lavados).
Variables de la evaluacin
Brotamiento y prdida de peso Paso 1: Paso 2: Paso 3: Para cada entrada, pesar una muestra de 10 tubrculos comerciales en buenas condiciones y registrar el peso inicial. Guardar los tubrculos en contenedores a temperatura ambiente en un almacn oscuro y ventilado. Cuarenta y cinco das despus de la cosecha, sacar cinco tubrculos al azar de cada entrada y anotar el grado de brotamiento por tubrculo. Despus del examen, guardar los tubrculos cuidadosamente en el contenedor. Noventa das despus de la cosecha, para cada entrada sacar al azar cinco tubrculos y registrar el grado de brotamiento por tubrculo. Noventa das despus de la cosecha, desbrotar los tubrculos y pesar separadamente los brotes extrados y los tubrculos.
Paso 4: Paso 5:
Enfermedades y pudricin Despus de tres meses del periodo de almacenaje, se evala el nivel de enfermedad y pudricin anotando el nmero de tubrculos afectados y cualquier otra observacin.
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Registro de datos
Las condiciones generales de almacenaje deben ser registradas en la hoja de trabajo Datos_clima de la plantilla de Evaluaciones_calidad_ postcosecha. Todos los resultados y observaciones son registrados en la hoja de datos correspondiente a la evaluacin de la conservacin en almacn (Calidad_postcosecha).
Anlisis de datos
El peso final se analiza con un anlisis de covariancia(ANCOVA), tomando en cuenta el peso anterior al almacenaje. Las pruebas comparativas sobre las medianas de covariancia ajustadas sern usadas para comparar el comportamiento de los clones en almacenaje.
Los resultados permitirn la caracterizacin de la conservacin en almacn de los clones y la comparacin con los testigos locales. Las variedades con largo periodo de dormancia y mnima prdida de peso sern las preferidas para procesamiento.
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Evaluacin de la resistencia de campo al tizn tardo en clones de papa

Introduccin Phytophthora infestans, agente causal del tizn tardo
El tizn tardo es una enfermedad policclica causada por el hongo Phytophthora infestans. Un esquema reciente de clasificacin basado en el anlisis molecular del ARN ribosmico y en datos ultra estructurales de la pared celular incluye al gnero Phytophthora dentro del reino Cromista (Stramenopila), junto con las algas pardas y las diatomeas. El gnero Phytophthora pertenece al phylum Oomycota, el cual se caracteriza por tener zoosporas propulsadas por flagelos heterocontas (uno tipo ltigo y el otro tipo plumilla), pared celular compuesta por celulosa, micelio de hifas cenocticas (sin septas) y reproduccin por contacto gametangial (Dick, 1995). El micelio del P. infestans no puede sobrevivir en ausencia de la clula hospedante, mientras que los esporangios pueden sobrevivir en el suelo por das o semanas, y la oospora, resultante de la reproduccin sexual, meses o aos (Drenth et al., 1995). Migracin reciente de P. infestans Durante mucho tiempo, se consider que las poblaciones de P. infestans eran asexuales, pero un informe en 1984 dio cuenta de tipos de apareamiento A2 en Europa Occidental, lo cual constituy la primera indicacin de nuevos y dramticos cambios en la poblacin del patgeno (Hohl e Iselin, 1984). Los anlisis de un gran nmero de poblaciones locales dispersas sorprendieron al indicar que los cambios no estaban restringidos a Europa Occidental, sino que se daban en todo el mundo (Fry et al., 1993; Goodwin y Sujkowsky, 1995). La diversidad gentica generada por la reproduccin sexual puede conducir a genotipos ms agresivos.
Tizn tardo
El tizn tardo es una enfermedad policclica, con varios ciclos de infeccin y de produccin de inculo durante la campaa de cultivo. As, se espera que la infeccin se incremente proporcionalmente tanto en el inculo inicial como en el inculo nuevo producido durante la etapa de desarrollo del cultivo. La cantidad de inculo producido depende del husped, el patgeno, el medio ambiente y las condiciones de manejo.
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Sntomas del tizn tardo

Sntomas en las hojas La enfermedad se presenta en un principio como manchas hmedas irregulares de color verde claro, mayormente cerca del pice y los mrgenes de las hojas. Estas lesiones crecen rpidamente hasta formar manchas grandes de color marrn oscuro (Foto 1). Durante las primeras horas de la maana, se puede observar en la cara inferior de las hojas infectadas, especialmente en los mrgenes de las lesiones necrticas, una eflorescencia blanca formada por esporangios del patgeno. Las lesiones jvenes son pequeas (entre dos y 10 mm) y de forma irregular, y pueden estar rodeadas por un pequeo halo (tejido verde claro alrededor de la lesin necrtica oscura). A medida que crecen, las lesiones se vuelven ms circulares hasta que son limitadas por los mrgenes del foliolo. Por lo general, no estn delimitadas por nervaduras, y las lesiones viejas estn rodeadas por un halo clortico. Sntomas en los tallos Cuando el tizn tardo ataca al tallo puede causar estrechamiento y las hojas que estn por encima del punto de infeccin se marchitan. Las lesiones de color pardo claro o pardo oscuro en los tallos o los peciolos se alargan y circundan el tallo (Foto 2). Las lesiones se vuelven quebradizas y el tallo a menudo se quiebra en ese punto (Foto 3). Sntomas en los tubrculos Los tubrculos infectados muestran reas irregulares de una coloracin entre rojizo pardusca y prpura y ligeramente hundidas que se extienden profundamente en el tejido interno (Foto 4). Los tubrculos infectados son inicialmente duros, secos y compactos, pero pueden ser invadidos por otros patgenos, principalmente bacterias, que llevan a una pudricin blanda. A menudo se asocia un olor penetrante y ptrido con los campos muy infectados; sin embargo, dicho olor se debe a la pudricin de tejido muerto y no es consecuencia directa del tizn tardo.
Resistencia al tizn tardo

Hasta hace poco, haba consenso general de que la mayor resistencia a P. infestans poda clasificarse en dos tipos. El primero, gobernado por un solo gen dominante con efectos mayores y una clara segregacin de progenie; el segundo, gobernado por varios o muchos genes, llamados genes menores, con pequeo efecto acumu-
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Figura 2: Tallo quebradizo causado por tizn tardo
Figura 1: Esporulacin de patgeno en el envs de la hoja de papa
Figura 4: Estras necrticas que van de la superficie del tubrculo hacia el interior
Figura 3: Lesiones alargadas marrn oscuro en el tallo
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lativo y una continua distribucin de genotipos resistentes. La resistencia de genes mayores tambin ha sido descrita como resistencia vertical, resistencia de genes R, resistencia especfica, resistencia especfica de raza, resistencia inestable y resistencia completa. La resistencia conferida por genes menores ha sido descrita con nombres contrastantes como resistencia horizontal, resistencia polignica, resistencia cuantitativa, resistencia general, resistencia no especfica de raza, resistencia estable, resistencia parcial, resistencia de campo y resistencia reductora del grado de infeccin.
Pruebas de evaluacin de tizn tardo con exposicin intencional Ubicacin: lugares de tamizado
Las condiciones medioambientales de los lugares de tamizado deben ser favorables al tizn tardo. El conocimiento acerca del aislamiento del patgeno de los lugares de tamizado es til para futuras consideraciones de manejo de la enfermedad.
Materiales: clones, variedades testigo, semilla

Se pueden evaluar clones o variedades de los programas locales de mejoramiento o del CIP. Testigos: Se debe incluir en la prueba de evaluacin un pequeo nmero (1 a 5) de genotipos de papa (clones o variedades) con niveles de resistencia conocidos, desde susceptible hasta altamente resistente. El CIP generalmente usa como testigos la variedad peruana muy susceptible Chata Blanca (CIP701209), la variedad peruana susceptible Yungay (CIP720064), la variedad colombiana moderadamente resistente Monserrate (CIP720071) y la variedad mexicana resistente a moderadamente resistente Atzimba (CIP720045) con genes mayores y el clon resistente del CIP LBr-40 (CIP387164.4). Recientemente, Yuen y Forbes (2009) propusieron una escala simple para clasificar la susceptibilidad (resistencia) en genotipos de papa. La escala es calculada a partir del AUDPC y puede aplicarse con solo un genotipo susceptible. Actualmente el CIP est promoviendo dicha escala como una manera de estandarizar la evaluacin de resistencia. Semilla: Se deben usar tubrculos uniformes, sanos y del mismo origen tanto para los clones avanzados como para los testigos. La prueba de evaluacin de tizn tardo
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requiere 40 tubrculos, aunque durante el primer ao de evaluacin se puede usar un mnimo de 20 tubrculos de cada clon.
Diseo experimental
La evaluacin de clones avanzados debe hacerse en una prueba con cuatro repeticiones. Se recomienda 10 tubrculos por repeticin. Cuando la resistencia al tizn tardo es el nico factor de evaluacin en la prueba es preferible un diseo completamente al azar (DCA). Sin embargo, cuando la evaluacin del tizn tardo se combina con una evaluacin del rendimiento, lo cual sucede a menudo, es preferible un diseo de bloques completamente al azar (DBCA).
Variabilidad de la enfermedad en el campo

Para reducir o controlar la variabilidad de la severidad de la enfermedad en el campo se pueden tomar diferentes medidas. Una de ellas es la inoculacin, la cual es especialmente til en reas donde el inculo no es grande. Los protocolos para la inoculacin en el campo estn disponibles en la bibliografa (Forbes et al., 1993). Otra medida frecuentemente utilizada es la siembra de una variedad susceptible o un genotipo de papa susceptible y uno moderadamente resistente a intervalos regulares con el objeto de producir continuas fuentes de inculo. Estos genotipos adicionales son a menudo denominados surcos diseminadores. Los surcos diseminadores pueden introducir otros sesgos. Si el genotipo usado como diseminador es muy susceptible, har que sus vecinos inmediatos se vean ms susceptibles debido a la gran cantidad de inculo difundido por el diseminador. Para evitar esto, se pueden sembrar los genotipos diseminadores entre cada clon, de tal manera que todos los clones reciban igual cantidad de inculo; pero esto duplica el tamao del experimento. Si la resistencia de un genotipo vegetal particular est basada principalmente en la esporulacin, el uso de surcos diseminadores que esporulan demasiado puede conducir a la subestimacin de la resistencia de este genotipo.
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Manejo de campo: proteccin de las plantas con fungicidas

En muchos lugares tropicales y subtropicales, el tizn tardo se presenta desde los primeros estados del cultivo Si la infeccin se presenta cuando la planta es an muy pequea, puede ser difcil apreciar la diferencia entre genotipos resistentes y susceptibles. Bajo estas condiciones, es aconsejable proteger las plantas con fungicidas hasta que sean suficientemente grandes para la evaluacin; esto es, cuando alcancen un 30% de crecimiento del rea foliar.
Por lo general, se registra el desarrollo de la planta (vigor), adems de la severidad de la enfermedad. Lectura del porcentaje del rea infectada Se registra el porcentaje de infeccin de la hoja durante toda la poca de cultivo. Para ello se ha de usar la plantilla Evaluaciones (ver Anexo 2). Se recolectan los datos de cada unidad experimental (cada clon o variedad dentro de cada repeticin). Las lecturas de la enfermedad se toman en base al porcentaje de rea de hoja infectada por el tizn tardo. La primera lectura se realiza entre los 30 y 40 das despus de la siembra y 10 das despus de la ltima aplicacin del fungicida. Es importante comenzar las lecturas tan pronto como aparezcan los sntomas; por ello, se debe observar cuidadosamente el campo para detectar el inicio de la enfermedad. Al usarse los porcentajes de rea de hoja para calcular el AUDPC, la frecuencia de lectura no es realmente importante. Si la enfermedad avanza rpidamente en genotipos susceptibles, se deben efectuar las lecturas con frecuencia (cada siete das). Si el avance de la enfermedad es lento, pueden realizarse a intervalos ms largos (cada 14 das). El objetivo es tener lecturas a niveles bajo, medio y alto de todos los genotipos, incluyendo los susceptibles. Una de las ventajas del AUDPC es que las lecturas no tienen que seguir un programa regular.
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Al evaluar el tizn tardo, la mayora de investigadores toma el total del rea de la hoja afectada por la enfermedad. Esto se hace simplemente comparando porciones verdes con las no verdes (asumiendo que el tizn tardo es la nica enfermedad dominante del follaje). De este modo, se estima mentalmente el porcentaje de follaje infectado en la parcela. Este procedimiento estndar (Forbes y Korva, 1994) funciona bien, sobre todo cuando las lecturas se integran en una medida como el AUDPC. Fuentes de error al estimar el porcentaje de infeccin La estimacin del porcentaje de infeccin est sujeta a diversas fuentes de error. 1. Puede haber una subestimacin del porcentaje, cuando se evala slo la porcin de enfermedad con sntomas visibles que todava est en la planta. Los foliolos enfermos finalmente caen y el momento de la cada probablemente depende del cultivar. El tejido enfermo puede estar verde y no presentar sntomas, y por lo tanto pasar inadvertido durante la evaluacin. El tejido verde infectado puede estar incluso esporulando, pero no siempre es visible, a menos que uno est muy cerca del foliolo. Por lo general, no se emplea este nivel de examen en la evaluacin de cultivares. 2. Puede haber error humano cuando se evalan diferencias proporcionales. La investigacin ha demostrado que la enfermedad se estima con mayor precisin a los niveles alto y bajo de severidad que a niveles intermedios. El uso de escalas logartmicas no corrige necesariamente esta tendencia. En general, es mejor que todas las lecturas sean tomadas por el mismo evaluador. Asimismo, es mejor hacer las lecturas de manera independiente (esto es, sin conocer el valor dado en lecturas previas), y con alguna persona acompaante que registre los valores en la hoja de datos o mediante una grabadora.

rea bajo la curva de progreso de la enfermedad (AUDPC) Debido a que el tizn tardo es una enfermedad policclica, el CIP recomienda el uso del rea Bajo la Curva de Progreso de la Enfermedad (AUDPC) para medir la resistencia (Fry, 1978). El AUDPC es una medida de resistencia calculada a partir de los porcentajes estimados de rea de hoja afectada registrados en diferentes momentos durante la epidemia.
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El AUDPC es fcil de calcular, usa la evaluacin mltiple y no depende de la transformacin. El AUDPC tambin presenta algunas desventajas, las cuales sern discutidas al final de este captulo. El AUDPC es frecuentemente calculado usando la siguiente frmula (Campbell y Madden, 1990):
n-1
AUDPC =
i=1
( y +2y )
i i+1
( ti + 1 - ti )
Donde t es el tiempo de cada lectura, y el porcentaje de follaje afectado en cada lectura y n el nmero de lecturas. La variable f puede representar los das julianos, los das despus de la siembra o los das despus de la emergencia. En la Figura 1, se presenta la representacin grfica de la ecuacin. Asimismo, muestra al AUDPC como una suma de las reas trapezoidales. Al final del captulo, se brinda un ejemplo de clculo del AUDPC con Microsoft Excel. La plantilla de evaluacin para el tizn tardo est incluida en el libro de campo de la GCI, lo cual facilita el registro de datos y el clculo del AUDPC (mayor detalle en Anexo 2).
Nota: Como se menciona al final del captulo, cuando se ha presentado condiciones adversas y ha sido prevenido el buen desarrollo de la enfermedad, las lecturas a incluirse en el clculo del AUDPC deben ser cuidadosamente seleccionadas.
Anlisis de datos
Se puede hallar el AUDPC o porcentaje de valores de infeccin usando el anlisis de variancia (ANOVA) despus de una exploracin de datos a travs de estadstica simple como media, error estndar, distribucin de frecuencias y diagrama de cajas. La prueba de Dunnett se puede aplicar para comparar el AUDPC o la mediana del porcentaje de infeccin de los clones evaluados con las medianas de los testigos. Se recomienda el anlisis de residuales para probar la validez del modelo y analizar el comportamiento de la variancia (homognea o no). El AUDPC y porcentaje de infeccin son considerados variables seudo cuantitativas con jerarqua y pueden ser analizados sin transformacin y comparados usando mtodos no paramtricos de anlisis con el uso de las pruebas de Friedman (DBCA) o de Kruskall Wallis (DBCA).
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Figura 1. Representacin grfica del AUDPC

100 80
A1 = Porcentaje de infeccin 40 60
(80 + 90) (28 - 21) 2 A1 = 595
h = 80
h = 90
A1 = 20 h = 40
(40 + 80) (21 - 14) 2
AUDPC = 1015 1015 1400
A1 = 420 0
AUDPC.rel =
14
21 Das de evaluacin
28
Tambin son tiles las pruebas no paramtricas para comparar el comportamiento de resistencia de los clones a travs de pruebas diferenciales, o en pruebas en las cuales el coeficiente de variacin es alto (> 30%). Estos anlisis pueden realizarse usando R u otros paquetes estadsticos. El CIPSTAT, el cual usa el paquete R, facilita el anlisis e informa los resultados. Si, adems del AUDPC, se ha evaluado el rendimiento, se puede calcular la correlacin entre el rendimiento y la resistencia del genotipo con el mtodo Spearman. El mtodo Spearman cataloga cada observacin dentro de cada repeticin, y calcula la correlacin de los valores por rangos. Un valor del coeficiente cercano a 1, indica una buena correlacin entre rendimiento y resistencia.
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Interpretacin de datos
El AUDPC es una variable que calcula el rea bajo la curva de infeccin real. Se expresa en % por das (o sea, la acumulacin diaria del porcentaje de los valores de infeccin) y se interpreta directamente sin transformacin. Cuanto ms alto es el AUDPC, ms susceptible es el clon o variedad. Para tener una mejor idea de cmo se comportan los clones o variedades del experimento, a menudo es til hacer un grfico del porcentaje de rea de hoja infectada frente a la fecha de evaluacin (Figura 2). Bajo condiciones favorables para la prueba de exposicin intencional, el coeficiente de variacin del experimento no debe exceder del 30%.
Figura 2. Curvas de severidad de la enfermedad de tres clones de papa
Clon A 100
Clon D
Clon F
% afectado del rea foliar
80
60
40
20
35
42
49
55 64 71 Das de evaluacin
78
85
90
52
Manejo de problemas comunes asociados con el AUDPC

Registro de las lecturas Problema: Como ya se ha mencionado, el AUDPC es slido, en el sentido de que permite diferentes intervalos entre lecturas. Sin embargo, puede estar sesgado si las lecturas comienzan mucho despus de iniciada la enfermedad. En este caso, no debe considerarse en el AUDPC parte de la curva de progreso de la enfermedad de los materiales susceptibles. En la misma forma, el AUDPC puede estar sesgado si se toman las lecturas mucho tiempo despus de que los cultivares susceptibles alcanzan niveles altos de enfermedad. Cuando ocurre esto, la diferencia entre materiales resistentes y susceptibles puede ser subestimada. Solucin: Es importante iniciar las lecturas cuando comienza la enfermedad. Por lo general, no es relevante continuar con las lecturas cuando los materiales susceptibles estn severamente infectados. Sin embargo, se pueden calcular otros AUDPC, uno incluyendo todos los materiales y un reducido nmero de lecturas, y otro incluyendo ms lecturas pero excluyendo los materiales ms susceptibles. Manejo de la falta de uniformidad en la enfermedad En el campo Problema: El AUDPC es sensible a la falta de uniformidad de la enfermedad en el campo. Solucin: Los diseos experimentales para controlar este tipo de error ya han sido discutidos arriba. En el tiempo Problema: Se presentan condiciones adversas que previenen el buen desarrollo de la enfermedad. Solucin: Las lecturas a ser incluidas en el clculo del AUDPC pueden ser cuidadosamente seleccionadas. Por ejemplo, cuando un clima seco sbito detiene la normal diseminacin de la enfermedad, se deben excluir las primeras lecturas del cmputo del AUDPC.
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Manejo de la incomparabilidad entre experimentos Problema: Por lo general, el AUDPC no es comparable entre experimentos. Solucin: En un esfuerzo por estandarizar el AUDPC, los investigadores suelen usar el AUDPC relativo (AUDPCr), el cual se calcula dividiendo el AUDPC entre el AUDPC de potencial mximo. El AUDPC de potencial mximo es simplemente el AUDPC que tendra una variedad o clon si tuviera 100% de infeccin en todas las lecturas. El AUDPC de potencial mximo est representado por la lnea punteada en la Figura 1 y se calcula multiplicando el nmero total de das entre la primera y ltima lectura por 100.
Se compara el AUDPC de los clones con el de los testigos susceptibles y resistentes.
Clculo del AUDPC con Microsoft Excel

Se puede calcular el AUDPC usando anlisis estadstico o programas de tabulacin de datos. He aqu un ejemplo usando una plantilla de Evaluacin de Microsoft Excel. Para calcular el AUDPC y el AUDPCr se puede utilizar la plantilla de evaluacin para tizn tardo, la cual est programada para hallar estos valores, siendo necesario nicamente colocar las fechas de evaluacin.
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Paso 1: Colocar las fechas de evaluacin y la fecha de plantacin.
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Paso 2: Seleccionar las variables a utilizarse y hacer clic sobre el recuadro Generar Plantilla, lo cual generar de manera automtica una hoja de evaluacin.
Paso 3: Llenar la informacin requerida en la plantilla, y colocar el nmero de registros de la tabla en el ejemplo Record=2.
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Paso 4: Hacer clic en AUDPC y luego en AUDPCr, y automticamente se generar los clculos requeridos.
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Evaluacin de la resistencia de campo a la marchitez bacteriana en clones de papa

Introduccin Ralstonia solanacearum (Smith), agente causal de la marchitez bacteriana
La marchitez bacteriana (MB) o pudricin parda es causada por la bacteria Ralstonia solanacearum (Smith), anteriormente llamada Pseudomonas solanacearum. Esta enfermedad es un gran problema para la produccin de papa en la mayora de las regiones tropicales y subtropicales y una amenaza para la industria de semilla de papa en los pases europeos (EPPO/CABI, 1997; Elphinstone, 2005). La bacteria afecta a ms de 200 especies, sobre todo de cultivos tropicales y subtropicales, siendo los ms susceptibles los cultivos de papa, tomate, tabaco, berenjena, aj, man y pltano. En reas ms elevadas (hasta de 3400 msnm), la papa es afectada mayormente por variantes adaptadas a temperaturas frescas, variantes de R. solanacearum (raza 3/biovar 2A) con rango restringido de hospedantes, que son principalmente transmitidas a travs de tubrculos con infeccin latente. A bajas elevaciones en los trpicos, prevalecen variantes de la raza 1 (biovar 1,3 4), las cuales afectan una amplitud de cultivos y malezas (Hayward, 1991; Priou et al., 1999b; Priou et al., 2004).
Sntomas de marchitez bacteriana

Entre los sntomas areos de marchitez bacteriana estn la marchitez, la atrofia y el amarillamiento del follaje. Cuando se extrae la corteza se puede advertir el oscurecimiento de los haces vasculares. Tambin es un sntoma caracterstico la marchitez inicial de una parte del tallo, o de un lado del tallo o de la hoja (Foto 1). Si el desarrollo de la enfermedad es rpido, la planta ntegra se marchita rpidamente sin ponerse previamente amarilla (Foto 2). El tallo afectado puede tambin marchitarse completamente y secarse, mientras el resto de la planta parece sano (Hayward, 1991; Priou et al., 2004). Cuando la infeccin es severa, los sntomas externos del tubrculo son visibles al momento de la cosecha. La exudacin de bacterias se acumula en los ojos de los tubrculos y hace que se adhiera tierra a las secreciones (Foto 3). Los sntomas en los tubrculos a menudo se describen como pudricin parda. Los tubrculos
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cortados muestran una viscosidad con apariencia de pus que sale del anillo vascular cuando se aprieta ligeramente. En estados avanzados de infeccin, los tubrculos exhiben una decoloracin parda del anillo vascular (Fotos 4 y 5) (Hayward, 1991; Priou et al., 2004). La infeccin latente de los tubrculos no muestra sntomas visibles, pero contiene la bacteria R. solanacearum, que puede ser responsable de la diseminacin de la enfermedad.
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Foto 1. Marchitez de la planta debido a marchitez bacteriana
Foto 2. Marchitez de la planta debido a marchitez bacteriana
Foto 3. Exudaciones debido a marchitez bacteriana
Foto 4. Anillo vascular del tubrculo debido a marchitez bacteriana
Foto 5. Dao al tubrculo debido a marchitez bacteriana
Figura 1.Escala de severidad de marchitez bacteriana
Escala 1: Planta sana
Escala 2: < 50% planta marchita
Escala 3: > 50% planta marchita
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Figura 2.Prueba del flujo de marchitez bacteriana
2. Seccionado del tallo
1. Identificacin de sntomas
4. Materiales
3. Lavado de la muestra
5. Suspensin en agua 6. Observacin
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Resistencia a la marchitez bacteria

No existe un nivel alto de resistencia a la marchitez bacteriana en cultivares de papa, aunque algunos son menos susceptibles y pueden tener altos rendimientos en presencia de la enfermedad. La semilla sana de una variedad moderamente resistente puede tener un gran impacto en reas de produccin de papa donde los suelos estn altamente infestados (French et al., 1998). Los cultivares tales como la variedad Cruza 148 (CIP 720118) no muestran marchitez en condiciones fras, pero pueden diseminar la enfermedad a travs de su progenie, con un alto grado de infeccin latente. En los aos 90, se obtuvieron en el CIP clones de papa de un programa de resistencia a la MB de 14 aos. Estos clones se produjeron despus de varios cruzamientos con:
clones derivados de genotipos colombianos de Solanum phureja producidos en la Universidad de Wisconsin alrededor de los aos 70. Estos clones han demostrado ser especficos de variantes sensibles a altas temperaturas. la variedad AVRDC-1278, derivada de Solanum chacoense y Solanum Raphanifolium. la variedad Cruza 148 de origen desconocido, resistente a la MB y al tizn tardo. poblaciones diploides derivadas de especies silvestres de S. chacoense y Solanum sparsipilum y especies nativas de Solanum stenotomum, S. phureja y S. goniocalyx. genotipos de Solanum tuberosum subsp. tuberosum que tengan precocidad, adaptacin al calor, resistencia al tizn tardo y al nematodo del nudo o a ambos, inmunidad a los virus X e Y, alto rendimiento y buenas caractersticas agronmicas (Schmiediche, 1966, French et al., 1998).
En el CIP, el mejoramiento para resistencia a la MB ha resultado en niveles moderados de resistencia a la marchitez; sin embargo, la alta frecuencia de infeccin latente en tubrculos es todava un problema (Prior et al., 2001, 2005). La infeccin latente es responsable de la diseminacin de la enfermedad y de vencer la resistencia (French et al., 1998). Debido a que las variantes de la raza 3 de Ralstonia solanacearum pertenecen a un grupo genticamente homogneo, se espera que la resistencia a la raza 3 sea ms estable que la resistencia a las variantes de zonas bajas (raza 1) (French et al., 1998). Ms an, la infeccin latente del tubrculo y la susceptibilidad de la parte area de la planta a la MB no estn correlacionadas, y la infeccin latente del clon no depende solamente de la incidencia de marchitez sino de otros factores como el medio ambiente (Priou et al., 2001).
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Pruebas de evaluacin de la marchitez bacteriana con exposicin intencional

Condiciones: clima y suelo Las condiciones climticas son importantes para el desarrollo de la MB y la respuesta de la planta al patgeno. En tierras altas de la regin tropical, donde se presenta con ms frecuencia la raza 3/biovar de las variantes 2A de R. solanacearum, las condiciones ptimas para evaluacin son las altitudes de entre 1,500 y 2,500 msnm con un promedio de temperatura de 20 a 22 C. En reas ms bajas y ms calientes, hay mayor posibilidad de que se presente MB en los biovares de la raza 1, 3 y 4 y que los sntomas sean ms severos. Es preferible sembrar en un suelo arcilloso que en uno arcillo-arenoso.
Materiales: clones, variedades testigo y semilla

Se pueden evaluar clones o variedades de los programas locales de mejoramiento o del CIP. Se usan como testigo variedades locales susceptibles y moderadamente resistentes. Se recomienda la variedad Cruza 148 (CIP 720118) como un testigo moderadamente resistente; sin embargo, se debe tener especial cuidado con la calidad de la semilla porque esta variedad puede presentar ndices altos de tubrculos con infeccin latente. Se deben usar tubrculos uniformes, sanos y del mismo origen tanto para clones avanzados como para testigos. Para la primera evaluacin es necesario un conjunto mnimo de 25 tubrculos por clon. Se necesitan hasta 100 tubrculos por clon de los clones seleccionados para confirmar la resistencia en la siguiente temporada. Inculo Se pueden evaluar clones o variedades en campos naturalmente infestados por R. solanacearum o, si estos no existen, se pueden inocular los campos. Campos naturalmente infestados. El tamizado para resistencia requiere de un campo con un nivel uniforme, razonable y moderado de infestacin (entre 30 a 50% de incidencia de marchitez en el cultivo anterior de papa). En caso de una infestacin de suelo heterognea, el campo de evaluacin se siembra con una variedad de papa
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que haya presentado susceptibilidad en la campaa anterior. Al momento de la cosecha, los tubrculos podridos deben ser uniformemente distribuidos en el campo y enterrados para homogenizar y aumentar los niveles de inculo del suelo. Inoculacin del campo. Un mes despus de la emergencia de las plantas se inocula cada una de stas, incluyendo los testigos, enterrando un pedazo de cultivo en agar que contenga aproximadamente 3 x 109 bacterias al nivel de la raz (20 centmetros de profundidad) usando una pala mediana. Se debe tener especial cuidado de no daar las races de las plantas jvenes. Un plato de agar de 9 cm de dimetro con cultivo de 48 h de R. solanacearum (aislamiento local) sobre medio Kelman modificado sin cloruro de tetrazolium sirve para inocular alrededor de ocho plantas (French et al., 1995). Otra posibilidad es inocular el campo antes de establecer la prueba de evaluacin. Tres meses antes de la siembra de papa, se trasplantan plantas de tomate al campo y se inoculan dos semanas despus por aspersin o goteo de una suspensin bacteriana (3 x 109 bacterias) en la base del tallo. Unas seis semanas despus, cuando el 80% de las plantas de tomate est marchita, se entierran en el campo.
Diseo experimental
En un terreno plano donde el inculo est distribuido al azar se puede aplicar un diseo completamente al azar (DCA). Sin embargo, cuando el terreno presenta pendiente debe aplicarse un diseo de bloques completamente al azar (DBCA), porque la poblacin de R. solanacearum en el campo no estar distribuida al azar, sino que ser desplazada por el movimiento del agua en el suelo que sigue despus de una lluvia o riego por surcos. El movimiento del inculo puede minimizarse construyendo zanjas de drenaje entre los bloques. El nmero de repeticiones usado depender de la uniformidad de la distribucin del inculo dentro del campo. En un campo con distribucin uniforme de inculo, se debe sembrar un mnimo de cinco repeticiones con cinco plantas cada una para obtener resultados confiables. Si hubiera suficiente cantidad de tubrculos semilla, se puede elevar el nmero de plantas hasta 20 o 25 por unidad experimental.
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En el caso de una distribucin heterognea de inculo dentro del campo, el mnimo de repeticiones es el doble (10), de tal manera que las parcelas testigo estn distribuidas por todo el campo y la resistencia falsa puede ser detectada por falta de infeccin como resultado de la ausencia de poblacin de patgeno.
Manejo de campo
Las prcticas agronmicas son idnticas a aquellas recomendadas localmente para un cultivo de papa comercial. Adicionalmente, para evitar la propagacin del inculo, hay que tomar las siguientes precauciones sanitarias:

Los zapatos de los trabajadores y las herramientas deben ser lavados y desinfectados con 1% de hipoclorito de sodio cuando se abandona el campo. Considerando las pendientes en el campo, se debe construir una poza de dos metros de profundidad en la parte baja del campo, para colectar el agua que escurre. La poza debe ser regularmente desinfectada con 1% de hipoclorito de sodio. Los tubrculos podridos que quedan en el campo despus de la cosecha deben ser recogidos. Los tubrculos cosechados que no han sido llevados al laboratorio para su evaluacin deben ser quemados o usados exclusivamente para consumo como alimento.
Antes de la etapa de desarrollo del cultivo Identificacin de biovares / razas de R. solanacerum. En el campo se pueden encontrar tanto la raza 1 como la 3 de R. solanacearum; por ello se recomienda rotundamente caracterizar las variantes presentes en suelos naturalmente infestados. Se aslan los patgenos del suelo, y se identifican las plantas enfermas o tubrculos y los biovares siguiendo los procedimientos descritos por French et al. (1995). Durante la etapa de desarrollo del cultivo Severidad de la marchitez de la planta La emergencia de la planta debe producirse 45 das despus de la siembra. El campo debe ser observado regularmente a partir de los 45 das de la siembra para inspeccionar la aparicin de los primeros sntomas en las variedades que se usan como
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testigos susceptibles. La primera evaluacin se llevar a cabo ya sea 60 das despus de la siembra, un mes despus de la inoculacin o tan pronto como se observen los primeros sntomas en el testigo susceptible. Las siguientes observaciones se harn cada 15 das, hasta dos semanas antes de la cosecha. Se evala la severidad de la marchitez de cada planta con una escala de tres puntos (Figura 1): 1= planta sana 2= planta con marchitez del 50% o menos 3= planta con marchitez mayor del 50% o finalmente muerta.
La diagnosis de plantas marchitas por la bacteria debe ser confirmada en el campo utilizando la prueba de flujo vascular. La prueba consiste en cortar una porcin de 2 a 3 cm de largo y suspenderla en un recipiente de vidrio lleno de agua. El tallo cortado se mantiene en posicin vertical con la ayuda de un sujetador de papeles abierto. Despus de algunos minutos se puede ver una exudacin en forma de hilos lechosos emanando del pedazo de tallo cortado (Figura 2), lo cual confirma la infeccin por R. solanacearum. Al momento de la cosecha Tubrculos sintomticos Al momento de la cosecha, se registra en forma separada el peso de los tubrculos aparentemente sanos de los tubrculos que presentan sntomas evidentes de MB (por ejemplo, exudacin visible por los ojos o exudacin vascular visible al cortar tubrculos podridos). Tambin se puede registrar el rendimiento comercial (eventualmente por categoras del mercado). Se calcula el porcentaje de tubrculos sintomticos mediante el registro del nmero de tubrculos con sntomas y el nmero de tubrculos aparentemente sanos en las cinco plantas de la unidad experimental durante el primer ao de evaluacin, o en 10 plantas de los dos surcos centrales de la unidad experimental durante los siguientes aos. Tubrculos infectados en forma latente Para la infeccin latente por R. solanacearum, solo se analizan los tubrculos asintomticos de los clones seleccionados (ver abajo el criterio de seleccin). Para cada clon y en todas las repeticiones se selecciona al azar en el campo un mnimo de 30 tubrculos de cualquier tamao sobre los 30 mm y sin sntomas visibles (Priou et al., 2005).
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Una vez en el laboratorio, los tubrculos de la muestra se lavan, se desinfectan y se comprueba nuevamente. En esta fase, se sacan los tubrculos que tienen sntomas y se anota el nmero de tubrculos afectados. Los tubrculos asintomticos son luego sometidos a la prueba de ELISA. El kit del CIP para realizar la prueba post enriquecimiento en membrana de nitrocelulosa (NCMELISA) es usada de acuerdo al protocolo indicado en el manual del kit1 (Priou et al., 1999a).
Registro y anlisis de datos Registro y clculo de datos

Promedio de la severidad de la marchitez Se calcula el promedio del puntaje de la severidad de la marchitez para cada unidad experimental y la ficha de evaluacin de acuerdo a la frmula:
puntaje de marchitez de plantas evaluadas

Promedio del puntaje severidad de marchitez = Nmero total de plantas evaluadas
Luego se calcula el promedio de los puntajes de severidad de marchitez para cada clon/variedad sobre las 5 repeticiones.
Nota: En caso de plantas muertas por otras causas que no sean MB, los datos de las plantas deben ser anotados en la hoja de datos y no se incluyen en clculos futuros.
Porcentaje de tubrculos sintomticos Para cada unidad experimental, el porcentaje de tubrculos sintomticos est expresado como un peso, valor til para determinar la prdida de rendimiento (Kg/ha), y como un nmero de tubrculos infectados, valor usado para el clculo de la tasa de tubrculos infectados.
Srvase mirar en la pgina Web CIP BW para informacin sobre el kit: http://www.cipotato.org/potato/pests_diseases/bacterial_wilt/ detection_kits.asp
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% del Peso de tubrculos sintomticos x 100 Porcentaje del peso de tubrculos sintomticos = Peso de tubrculos aparentemente sanos + peso de tubrculos sintomticos Nmero de tubrculos sintomticos x 100 Porcentaje de tubrculos sintomticos = Nmero de tubrculos aparentemente sanos + Nmero de tubrculos sintomticos
El porcentaje promedio de tubrculos sintomticos para cada clon/variedad se calcula sobre cinco repeticiones. Porcentaje total de tubrculos con infeccin latente El porcentaje de tubrculos con infeccin latente para cada unidad experimental se calcula como sigue:
N de tubrculos sintomticos en el lab.+ N de tubrculos positivos a NCM -ELISA x 100 N de tubrculos dentro de la muestra
% de tubrculos con infeccin latente =
x 100
El porcentaje promedio de tubrculos con infeccin latente por cada clon/variedad se calcula sobre cinco repeticiones. Porcentaje del total de tubrculos infectados para cada unidad experimental El porcentaje del total de tubrculos infectados se calcula teniendo en cuenta el porcentaje de tubrculos sintomticos hallados en cada unidad experimental y el porcentaje de tubrculos latentemente infectados hallados en una muestra, por lo general, de 30 tubrculos asintomticos. El porcentaje del total de tubrculos infectados se calcula como sigue:
% de tubrculos sintomticos + (% tubrculos aparentemente sanos + % de tubrculos con infeccin latente) 100
% total de tubrculos infectados=
Ejemplo: Si el porcentaje de tubrculos sintomticos es 10 y el porcentaje de tubrculos aparentemente sanos es 90, y de estos el 30% fueron detectados en el laboratorio, el porcentaje de tubrculos infectados ser 10+ (90 x 30/100) = 37 El porcentaje promedio del total de tubrculos infectados para cada clon/variedad se calcula en las cinco repeticiones.
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Para el registro de datos usar la plantilla: Evaluaciones MB (ver Anexo 2).
Anlisis de datos
Se puede analizar la ltima evaluacin sobre el promedio de puntaje de marchitez, el porcentaje de infeccin de los tubrculos y el porcentaje de tubrculos infectados despus de la exploracin de datos mediante un anlisis estadstico simple como la media, el error estndar, la distribucin de frecuencias y el diagrama de cajas. Los promedios de puntaje de marchitez se analizan usando estadstica no paramtrica, y las medianas se comparan usando las pruebas de Friedman (DBCA) o Kruskall Wallis (DCA). El anlisis de variancia (ANOVA) se realiza con datos de porcentaje y las medianas se comparan con la prueba de Duncan-Waller Duncan. El porcentaje de las variables no necesita ser transformado antes del anlisis. Para probar la validez del modelo y analizar el comportamiento de la variancia (homognea o no) se recomienda el anlisis de residuales. Estos anlisis pueden realizarse usando R u otros paquetes estadsticos. El CIPSTAT (actualmente en revisin), que usa el paquete R, facilita el anlisis e informa sobre los resultados.

Validacin del experimento Para validar la prueba de evaluacin, el testigo moderadamente resistente debe presentar un puntaje menor o igual a 1.3 y el testigo susceptible un puntaje de marchitez mayor de 1.6. Si ambas condiciones no estuvieran presentes, la prueba de exposicin intencional tendr que ser repetida.
A continuacin se da una escala para describir los niveles de resistencia de los clones.
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Niveles de resistencia
Puntaje promedio de la severidad de marchitez 1 1 1.01 - 1.3 1.31 - 1.60 1.61 - 2.2 2.21 - 3.00
Altamente resistente Resistente Moderadamente resistente Moderadamente susceptible Susceptible Altamente susceptible
Porcentaje total de tubrculos infectados (visible + latente) 0 < 15 < 30 Variable Variable Variable
Se seleccionan solamente los clones con un promedio de puntaje de marchitez menor de o igual a 1.3 y se evalan nuevamente durante la siguiente campaa para confirmar su resistencia. Si la variedad Cruza 148 fue usada como testigo moderadamente resistente, se seleccionan los clones que muestran un puntaje promedio de marchitez significativamente igual o menor que el testigo. Las tasas de infeccin del tubrculo son altamente variables (pero no llegan a ser nulas) -entre clones moderadamente susceptibles y muy susceptibles- porque la infeccin a los tubrculos depende no solamente de la severidad de marchitez, sino tambin de la textura del suelo, la humedad y la temperatura. Por lo tanto, se seleccionan como resistentes solamente los clones que no tienen marchitez y cuyo porcentaje del total de tubrculos infectados (sintomticos + latentes) es menor o igual al 15%. Si la tasa de tubrculos infectados es mayor al 15%, los clones sern clasificados como moderadamente resistentes, y si es mayor del 30%, como moderadamente susceptibles.
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Evaluacin en campo de la resistencia a la mosca minadora en clones de papa

Introduccin Mosca minadora, Liriomyza huidobrensis
La mosca minadora es una de las principales plagas del cultivo de papa a nivel mundial. A diferencia de la mayora de especies de moscas minadoras de la hoja, la L. huidobrensis es altamente polfaga y desarrolla rpidamente tolerancia o resistencia a los insecticidas. La mosca minadora de la hoja ha mostrado niveles significativos de resistencia a la mayora de insecticidas como carbamatos, organofosforados y piretroides que se usan comnmente para matar larvas y moscas adultas. Esta especie se origin en la regin neotrpica y estuvo restringida a las Amricas hasta los aos 80. A partir de esa fecha se ha diseminado a otras partes del mundo, convirtindose en una plaga clave en todos los pases donde ha sido introducida. La mosca minadora es capaz de destruir completamente un campo de papa cuando no se controla (Foto 1). Ciclo de vida de la mosca La mosca minadora tiene cuatro estados de vida: huevo, larva, pupa y adulto. Todo el ciclo de vida puede durar entre tres y cinco semanas (Foto 2) y la tasa de reproduccin puede alcanzar 13 generaciones por ao. Los huevos ovalados y traslcidos son depositados dentro del tejido de la hoja (de 3 a 6 das). El periodo de larva tiene tres fases (de 5 a 8 das) diferenciados en la superficie de la hoja por el tamao y grosor de la mina. Las larvas se pueden encontrar abriendo las minas de las hojas. La larva madura abandona la mina y cae al suelo para formar la pupa (de 10 a 17 das) y permanece ah hasta que emergen los adultos bien desarrollados. Los adultos son pequeas moscas negras (de 1.7 a 2.3 mm de largo), con una mancha amarilla brillante en el trax. El apareamiento se realiza entre seis y 24 horas despus de la emergencia del adulto y la oviposicin, del da siguiente a tres das.
Dao ocasionado por la mosca minadora

Daos del adulto Las hembras adultas de L. huidobrensis usan su ovipositor para abrir pequeas perforaciones en las caras superior e inferior de las hojas, causando la produccin
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de exudados de los que se alimentan hembras y machos adultos. Este tipo de herida se conoce como picadura de alimentacin (Foto 3). Cuando la herida se hace para depositar huevos, se llama picadura de oviposicin. Daos de las larvas El estado de larva es el ms destructivo porque el minado reduce la capacidad fotosinttica de la planta (Foto 4). El dao larval en una planta en desarrollo sigue un patrn bien establecido: la larva ataca la planta desde la base y luego el resto de la planta tambin se infesta. Las primeras hojas en mostrar dao son las de la parte ms baja de la planta de papa. Las hojas de la parte media y superior muestran daos progresivos a medida que la planta crece y la infestacin contina. El dao en las hojas superiores ocurre cuando la planta deja de crecer. La necrosis de las hojas infestadas sigue el mismo patrn, hasta que toda la planta muere. Ejemplos de niveles de dao se muestran en la Foto 5.
Resistencia a la mosca minadora

El grado y nivel de infestacin de las plantas es afectado por diferencias varietales, edad y estado fisiolgico de la planta.
Variacin estacional de la poblacin de la mosca minadora

Las condiciones climticas tienen gran influencia en el desarrollo de la mosca minadora y pueden resultar en una clara tendencia estacional de los niveles de poblacin. El promedio mensual de temperatura favorable para el desarrollo de la mosca minadora est entre 13.2 y 18 C. Estas condiciones favorables estn presentes en el valle de Caete de Per, donde la alta infestacin de adultos ocurre entre el invierno y la primavera en los meses de junio a octubre, mientras que en los meses ms calurosos de diciembre a abril ocurre una moderada infestacin de adultos.
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Adulto Huevo
Pupa
Larva
Foto 1. Destruccin de plantas de papa
Foto 2. Ciclo de vida de la mosca minadora
Foto 3. Picaduras de alimentacin producidas por hembras adultas
Foto 4. Dao por larvas
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Foto 5. Niveles de dao en la variedad Revolucin
60 das despus de la siembra
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Manejo de los ensayos con exposicin intencional a la mosca minadora Condiciones: lugar de tamizado
El procedimiento para la evaluacin de la resistencia a la mosca minadora en clones avanzados de papa involucra la realizacin de pruebas en dos campaas en un rea de alta incidencia de la mosca. El cultivo de plantas hospedantes (tales como frijoles, habas y arvejas) en el rea que circunda la prueba, ayuda a elevar los niveles de poblacin de la mosca minadora. En caso de variacin estacional en los niveles poblaciones, la primera evaluacin debe hacerse al momento de una infestacin moderada de adultos. Para confirmar la resistencia, despus de eliminar los clones ms susceptibles, se debe volver a evaluar los clones selectos que quedan bajo una alta presin de infestacin de adultos en la siguiente campaa de cultivo.

Para comenzar las pruebas de evaluacin, se necesitan 20 tubrculos por cada clon. Un mnimo de 90 tubrculos se deben usar en la segunda campaa de cultivo, lo cual tambin permite la evaluacin de rendimiento de los clones. Todas las pruebas de evaluacin deben incluir una variedad local susceptible como testigo. Las variedades Canchn y Desire son a menudo utilizadas como testigos susceptibles. Sin embargo, en caso de evaluacin bajo una gran infestacin, se debe incluir tambin una variedad resistente como Mara Tambea. Es importante incluir testigos que maduran al mismo tiempo como material de prueba. Debido a la alta temperatura durante la campaa de cultivo, los tubrculos deben ser renovados para cada evaluacin.
Diseo experimental
Los clones son separados en grupos de 15 a 25 clones. El diseo experimental es el de bloques completos al azar (DBCA) con tres repeticiones, cuando la prueba incluye tambin la evaluacin de rendimiento o cuando el uso de bloques es necesario debido a la presencia cercana de plantas hospedantes que afectan la distribucin de la mosca minadora dentro de la prueba. Cuando no se presentan estas condiciones, se debe usar el diseo completamente al azar (DCA).
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Durante la primera evaluacin, las parcelas experimentales consistirn en un surco de 10 plantas. Para las siguientes evaluaciones, el tamao de la parcela experimental se incrementar hasta 3 surcos con 10 plantas por surco bajo una moderada infestacin de adultos y hasta 5 surcos con 5 a 10 plantas por surco bajo alta infestacin de adultos.
Manejo de la prueba de campo

Las prcticas agronmicas en el rea experimental sern similares a las de un campo de papa comercial local. La aplicacin de pesticidas puede llevarse a cabo para controlar el tizn tardo y los caros cuando sea necesario, pero no se deben aplicar otros pesticidas. Monitoreo de los niveles de poblacin El objetivo del monitoreo de la poblacin de mosca minadora es estudiar su dinmica poblacional. Los adultos son monitoreados usando trampas amarillas pegajosas (20 cm x 20 cm) colocadas encima del follaje en el centro del campo experimental. Las trampas se cambian semanalmente entre los 30 y 90 das despus de la siembra. La altura de la trampa se ajusta al crecimiento de la planta y cada vez que se instala una trampa nueva. El nmero de moscas minadoras que se pegan a la trampa, se registra en la hoja Monitoreo de plagas de la plantilla Evaluaciones_MM de la GCI.
Evaluacin del dao al follaje

Para cada unidad experimental, se harn tres lecturas al azar del porcentaje acumulativo de cinco plantas individuales. Se excluyen de la muestra las plantas de los bordes o de los surcos. Las lecturas se hacen a los 60, 75 y 90 das despus de la siembra para clones tempranos y a los 75, 90 y 105 das para clones de maduracin tarda.

Para cada planta muestreada, se puede registrar el dao con una escala de 1 a 5 o el porcentaje del rea afectada por la mosca minadora. La escala est descrita en la plantilla Evaluaciones_MM, en la cual se registran todos los datos del experimento (ver anexo 2).
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Anlisis de datos
El anlisis estadstico se realiza solamente cuando los testigos susceptibles muestran ms del 75% de dao en la hoja. El porcentaje de dao en la hoja se puede analizar usando anlisis de variancia (ANOVA), despus que se han explorado los datos a travs de un simple anlisis estadstico como la media, el error estndar, la distribucin de frecuencias y el diagrama de cajas. El porcentaje de dao en la hoja es una variable seudo cuantitativa con jerarqua. Tales datos se pueden analizar sin transformacin usando una prueba como la de Friedman (DBCA) o la prueba de Kruskall Wallis (DCA). Se pueden usar otras pruebas dependiendo de los datos. Estos anlisis se pueden realizar usando R (Librera Agricolae) u otros paquetes estadsticos. El CIPSTAT (actualmente en revisin), que usa el paquete R, proporciona el anlisis e informa sobre los resultados.
Validacin del experimento La evaluacin de resistencia a la mosca minadora es considerada vlida si los testigos susceptibles presentan un dao con puntaje sobre 3 (> 50% de la planta daada) bajo una moderada infestacin de mosca minadora y un puntaje sobre 4 (> 70% de planta daada) bajo condiciones de una infestacin alta de la mosca minadora.
Bajo condiciones vlidas, la resistencia de los clones probados puede ser evaluada por comparacin con los testigos. El material evaluado puede clasificarse como: altamente resistente (AR), resistente (R), moderadamente resistente (MR), susceptible (S) y altamente susceptible (AS). El criterio presentado en la Tabla 1 puede tambin ser usado despus de verificar que los testigos corresponden a sus categoras apropiadas.
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Tabla 1. Escala de evaluacin para tamizar la resistencia a la mosca minadora en clones de papa Dao del follaje (%) 0 1-25 26-50 51-75 >75 Nivel de resistencia Altamente resistente (AR) Resistente (R) Moderadamente resistente (MR) Susceptible (S) Altamente susceptible (AS) Puntaje 1 2 3 4 5
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Evaluacin de la resistencia a enfermedades por virus en clones de papa

Introduccin
El virus Y de la papa (PVY) y el virus de enrollamiento de la hoja de papa (PLRV) son las dos enfermedades causadas por virus ms importantes de la papa, responsables de serias prdidas de rendimiento en todo el mundo. El virus X de la papa (PVX), aunque menos importante por s solo, est comnmente presente en combinacin con otros virus, lo cual incrementa el efecto de la enfermedad. Este protocolo describe pruebas de exposicin intencional para la evaluacin de la resistencia a estos tres virus en programas avanzados de seleccin. Tambin describe una metodologa estandarizada para evaluar la presencia de resistencia extrema al PVX y PVY.
Patgeno / vector
Los virus de la papa son pequeos patgenos que utilizan componentes de las clulas de la planta para multiplicarse. El PVX es fcilmente transmitido por contacto por medio de cuchillos, podadoras o el movimiento de equipos, personas y animales a travs del campo. El PLRV es transmitido por diferentes especies de fidos colonizadores de papa, pero el Myzus persicae es considerado como el vector ms eficiente. Tanto los estados larvales como los adultos en sus formas de alado y no alado transmiten el PLRV. La transmisin por fidos del PLRV est descrita como persistente. El PLRV es adquirido y transmitido por un tiempo largo. Es necesario un periodo de latencia o incubacin entre la adquisicin y la inoculacin del virus, el cual puede persistir durante toda la vida del fido. Los fidos vectores de este virus pueden controlarse con aplicacin de aficidas, a pesar de que es comn la resistencia a ste. As como el PLRV, el PVY tambin es transmitido por fidos, incluyendo las especies colonizadoras y no colonizadoras de papa, y nuevamente el Myzus persicae es considerado como el vector ms eficiente (incluyendo a las larvas como el estado adulto en sus formas de alado y no alado). Sin embargo, ms de 30 especies de fidos no colonizadores pueden actuar como vectores del PVY. La transmisin del PVY es no
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persistente. La adquisicin e inoculacin de PVY requiere solamente segundos, pero los fidos pierden rpidamente su carga de virus despus de alimentarse brevemente en plantas sanas, y deben alimentarse nuevamente en una planta infectada para transmitir el PVY. Por lo general, no es posible controlar la diseminacin de PVY usando aficidas. Los tres virus se diseminan tambin vegetativamente por medio de tubrculos o esquejes de tallo, pero no se conoce que sean transmitidos por semilla botnica (verdadera).
Sntomas
En el proceso de infeccin de la papa, los virus a menudo trastornan el patrn normal de crecimiento de la planta, causando sntomas evidentes como el moteado de la hoja, la distorsin de la hoja y la atrofia de la planta. El crecimiento ms lento de la planta, el uso ineficiente de nutrientes y la reducida tolerancia a otras presiones pueden ser tambin causadas por la infeccin del virus. En papa, el mosaico de la hoja reduce el rea foliar disponible para la fotosntesis. Uno de los sntomas del PVX es el moteado suave o mosaico amarillo entre las nervaduras (Foto 1). Las plantas infectadas con el PVY presentan sntomas de aglomeracin, retorcimiento de las hojas y doblez hacia abajo del margen de los foliolos; mosaico suave o fuerte de las hojas, con rugosidad; nervaduras necrticas; manchas necrticas; rayado en el tallo; enanismo de la planta y cada de hojas (Foto 2). Los sntomas del PLRV varan segn el tipo de infeccin: primaria1 o secundaria2. En plantas con infeccin primaria, las hojas superiores muestran enrollamiento, especialmente en la base de los foliolos, y generalmente tienen un color amarillo plido. En muchos cultivares, stos pueden tomar una coloracin prpura, rosada o roja. Las hojas inferiores pueden o no mostrar sntomas. Las plantas con infeccin secundaria muestran enrollamiento de las hojas basales (Foto 3), con un aspecto rgido y coriceo al tacto. Las plantas frecuentemente muestran atrofia general y apariencia clortica. Algunas veces las hojas ms viejas toman una coloracin prpura (Foto 4). Las hojas superiores pueden no mostrar sntomas evidentes. La subespecie andigena presenta clorosis marginal e intervenal en las hojas superiores y crecimiento erecto marcado, no observndose el sntoma tpico de enrollamiento de las hojas basales.
(1) La infeccin primaria es aquella que se presenta en plantas sanas durante la campaa de cultivo. (2) La infeccin secundaria es aquella que se presenta en plantas provenientes de tubrculos infectados.
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Foto 1. Sntoma fuerte de mosaico, y rugosidad de la hoja
Foto 2. Necrosis en nervaduras y tallos
Foto 3. Sntoma de enrollamiento de las hojas y clorosis general de la planta
Foto 4. Sntoma de atrofia general de la planta y coloracin prpura de las hojas
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Resistencia al PVX y PVY Hasta ahora se han reconocido tres diferentes tipos de resistencia al PVX y al PVY: resistencia extrema, hipersensibilidad y resistencia relativa (Fernndez-Norcothe, 1991). La resistencia extrema es el ms alto nivel de resistencia, la cual es ms estable con respecto a variantes del patgeno y condiciones del medio ambiente. Los clones con resistencia extrema (RE), inhiben la multiplicacin del virus a tal extremo que la infeccin no logra detectarse por las pruebas de indexado3 de la planta. La resistencia extrema al PVX y PVY es controlada en cada caso por un solo gen dominante. Este tipo de resistencia es utilizada en el programa de mejoramiento del CIP. La hipersensibilidad (HS) es una variante de la resistencia especfica, caracterizada por una reaccin necrtica local en el lugar de la infeccin inicial, lo cual evita que el virus se disemine en la planta. Las temperaturas altas pueden regular la expresin de HS, reduciendo su eficiencia y resultando en el desarrollo de mltiples lesiones necrticas ms grandes en las hojas y en otras partes de la planta (necrosis sistmica). En el caso del PVX, la necrosis local que se observa despus de la inoculacin mecnica, es una reaccin deseable de hipersensibilidad gobernada por genes N para resistencia al virus (Fernndez-Northcote, 1991). Sin embargo, la reaccin de hipersensibilidad en la forma de necrosis apical (necrosis tpica de los brotes apicales), que se puede observar despus de la inoculacin por injerto, es considerada como una reaccin hipersensible indeseable y es clasificada como susceptibilidad extrema. La reaccin de hipersensibilidad al PVY es ms difcil de observar y se debe aparentemente a la interaccin de genes menores con genes Ny para hipersensibilidad (FernndezNorthcote, 1991). La resistencia relativa, que es de naturaleza polignica, confiere varios grados de resistencia a la infeccin por virus.
(3) Indexado se refiere a las pruebas utilizadas para identificar, verificar y confirmar la infeccin de una planta por un patgeno.
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Resistencia a PLRV La resistencia relativa es el principal y ms comn tipo de resistencia encontrada contra el PLRV. Generalmente, las fuentes de resistencia al PLRV presentan una herencia polignica, influenciada por factores del medio ambiente, tales como el vector y la presin de inculo. Se han identificado dos componentes de resistencia relativa al PLRV: resistencia a la infeccin y resistencia a la multiplicacin. El primero es el ms estudiado y ms frecuentemente utilizado en los programas de mejoramiento. Este tipo de resistencia se presenta en grados o frecuencia de plantas infectadas. El grado de infeccin depende del nivel de susceptibilidad de los clones y del grado de presin del vector durante la campaa agrcola.
Pruebas de evaluacin de la resistencia relativa al PVX y PVY Condiciones: lugar de tamizado

Las pruebas de evaluacin de campo para resistencia relativa al PVX y PVY requieren probar el material que va a ser expuesto durante dos campaas previas en un lugar y poca de alta poblacin de fidos e incidencia de virus. La evaluacin per se se hace durante la tercera campaa de cultivo bajo idnticas condiciones de exposicin al virus.

En la primera campaa debe disponerse por lo menos de 20 tubrculos sanos. En la cosecha, se recogen tres tubrculos al azar de cada planta y parcela, los que se utilizan en la implementacin de la segunda campaa. El proceso se repite en la segunda campaa, incrementando el nmero de semilla y el nivel de infeccin. Los tubrculos cosechados se utilizan en la tercera campaa de exposicin intencional. Las variedades testigo se usan para verificar la eficiencia del inculo; por lo tanto, en todas las pruebas se deben incluir tubrculos semilla de un cultivar local susceptible. El CIP usa las variedades Perricholi y Tomasa. Mientras que en Europa usan las variedades Atlantic y Bintje, susceptibles al PVY, y Granola, susceptible al PVX. El CIP no usa estas variedades porque no se adaptan bien a los trpicos. Generalmente no se requiere de inculo adicional, ya que el PVX y PVY pueden ser trasmitidos mecnicamente con facilidad por actividades humanas, tales como el roce de tallos y hojas de las plantas, asperjado, cultivo y dao a los tubrculos en los
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depsitos o cosechadoras. El PVY tambin se puede trasmitir por la visita inesperada de fidos. Tambin se pueden usar plantas infectivas para diseminar los virus. Las plantas infectivas provienen de tubrculos de un cultivar local susceptible infectado con el PVY y PVX. El tubrculo de una planta infectiva se puede sembrar al extremo de cada parcela.
Diseo experimental
En las dos primeras campaas de cultivo, se siembra el material en parcelas repetidas distribuidas al azar. En la primera campaa se usa un mnimo de dos repeticiones de parcelas de diez plantas, mientras que en las siguientes campaas se incrementa el nmero de repeticiones. Las pruebas de evaluacin se realizan durante la tercera campaa de cultivo y se usa el diseo de bloques completamente al azar (DBCA) con un mnimo de tres repeticiones en parcelas de 10 plantas. La reduccin de rendimiento debido al efecto de la infeccin del virus tambin se puede estimar durante la tercera prueba de exposicin, sembrando con propsito de comparacin una prueba idntica a la de exposicin (las mismas entradas (incluyendo los testigos), el mismo diseo y la misma localidad), utilizando como semilla, tubrculos sanos.
Manejo de campo
El manejo de campo se realiza de acuerdo a los procedimientos locales. Las plantas se deben espaciar a intervalos de 30 cm por surco. Durante las tres campaas de cultivo se evita hacer raleo de las plantas infectadas, porque su presencia es necesaria para la evaluacin de resistencia relativa en los ciclos de crecimiento subsiguientes. Monitoreo de la poblacin de fidos El primer recuento se hace 40 das despus de la siembra en una muestra al azar de 50 plantas. Al estar localizados los fidos en la cara inferior de las hojas, cada hoja debe ser volteada hacia arriba cuidadosamente para permitir el recuento exacto de los fidos alados y no alados. Se pueden realizar dos recuentos adicionales a intervalos de 20 das. Los datos se registran en la plantilla Evaluaciones_virus_PVX_ PVY de la GCI (ver Anexo 2).
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Se calcula el nmero promedio de fidos por planta. Estos datos proporcionan informacin de la densidad de poblacin del vector para transmisin del PVY. Los niveles de poblacin de fidos pueden ser evaluados poniendo en el campo bandejas de trampas amarillas (40x30x6cm) conteniendo agua (FernndezNorthcote, 1991). Los recuentos se realizan con la misma frecuencia arriba mencionada. Despus de cada recuento se renuevan las bandejas.
Parmetros para evaluar la infeccin por el PVX y PVY

Durante las dos primeras campaas de cultivo, la infeccin se confirma a travs de una cuidadosa observacin de todas las parcelas experimentales. En la primera campaa agrcola, la observacin de los sntomas se realiza entre los 60 y 70 das posteriores a la siembra, porque las plantas susceptibles adquieren la infeccin por primera vez (infeccin primaria) y los sntomas tardan en expresarse. Debido a la presencia de infeccin secundaria, las observaciones durante la segunda campaa se llevan a cabo ms temprano. Los clones infectados con el PVX y el PVY pueden identificarse por inspeccin cuidadosa de las plantas en las parcelas, temprano en la maana o bajo cielo nublado para visualizar mejor los sntomas. La prueba serolgica de ELISA se puede realizar sobre testigos susceptibles para poder determinar el nivel de infeccin. En la prueba de evaluacin, la observacin de los sntomas se realiza entre 45 y 50 das despus de la siembra para clones que maduran prematuramente y entre 60 y 70 das para los tardos. La prueba de ELISA se realiza en todas las plantas de cada parcela para detectar plantas asintomticas infectadas y para confirmar la infeccin de un virus dado. Para realizar la prueba serolgica de ELISA, se toman dos o tres foliolos, se los coloca dentro de bolsas pequeas de polietileno y se envan al laboratorio. Un resultado positivo en ELISA confirma la infeccin de la planta con el respectivo virus indexado. Los datos de rendimiento son tomados en cuenta en la tercera campaa agrcola e incluyen el nmero total de plantas cosechadas, el nmero total de tubrculos y el peso total para cada parcela. De haberse instalado, debern tambin colectarse los datos del experimento con semilla sana.
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En cada parcela se registra el nmero total de plantas, el nmero de plantas que presentan mosaico y/o sntomas de necrosis sistmica, y el nmero de plantas que dan positivo en la prueba de ELISA a un determinado virus. Los datos se registran en la plantilla: Evaluaciones_virus_PVX_PVY de la GCI. Se calcula el porcentaje de plantas infectadas en cada unidad experimental. Los datos de rendimiento de la prueba de exposicin intencional se registran en la misma plantilla.
Anlisis de datos
El porcentaje de plantas infectadas se puede analizar usando el anlisis de variancia (ANOVA), despus de la exploracin de datos por medio de anlisis estadsticos simples tales como medias, error estndar, distribucin de frecuencias y diagrama de cajas. Para analizar el efecto de la semilla infectada de virus sobre el rendimiento, se realiza un anlisis combinado de variancia de las dos pruebas (tubrculos semilla sanos frente a tubrculos semilla infectados) si existiera homogeneidad en la variancia del error en ambos experimentos. El cuadrado medio del error del ANOVA combinado se usa para realizar la comparacin estadstica entre los rendimientos de cada clon en las dos pruebas. Se usan pruebas apareadas de comparacin para comparar cada entrada. Los resultados se pueden presentar usando la siguiente tabla:
Identificacin % de plantas infectadas % prdida de rendimiento LSD Significado
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Validacin del experimento Para obtener resultados confiables sobre los niveles de resistencia relativa, los testigos susceptibles deben llegar a ms del 80% de infeccin en la tercera prueba de exposicin.
Los clones avanzados con 25% o menos de plantas infectadas con el PVX y/o PVY en la tercera prueba de exposicin son considerados relativamente resistentes al virus respectivo. Los clones que no sufren reduccin en el rendimiento a pesar de mostrar tasas altas de infeccin son considerados tolerantes. Los clones que no muestran ninguna planta infectada con el PVY y/o PVX pueden ser sometidos a inoculacin por injerto y mecnica en el laboratorio para determinar la presencia de resistencia extrema.
Evaluacin de resistencia extrema (RE) al PVX y PVY Condiciones: clima y suelo

Esta prueba se lleva bajo condiciones de invernadero durante campaas en las que la temperatura mxima oscila entre 19 y 24 C y el mnimo entre 15 y 21 C. Esta prueba se realiza durante el otoo y primavera en los trpicos y tierras bajas del Per. Se usan invernaderos separados para probar cada virus.
Materiales
Se necesitan los siguientes materiales para realizar las pruebas: A. Un conjunto de siete plantas por clon y por virus que ser sometido a la prueba. Las plantas se pueden obtener a partir de tubrculos, esquejes o brotes. B. Un conjunto de siete plantas de un cultivar susceptible al PVX y al PVY y extremadamente resistente para que sirva como testigo. La variedad peruana Costanera tienen resistencia extrema al PVX y PVY.
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Foto 5a. Planta de N. glutinosa infectada con el PVX
Foto 5b. Planta de N. occidentalis infectada con el PVY
Foto 7. Inoculacin mecnica de las plantas de los clones en prueba
Foto 6. Preparacin del inculo para inoculacin mecnica
Foto 8. Inoculacin por injerto de las plantas de los clones en prueba (esqueje de N. occidentalis infectado con PVY)
Foto 9. Molienda de foliolo para indexado
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C. Un conjunto de plantas jvenes de Nicotiana glutinosa infectadas con el PVX para inoculacin mecnica: 40 plantas infectadas son suficientes para inocular mecnicamente 100 plantas. D. Un conjunto de plantas infectadas con el PVX de un cultivar susceptible que desarrolle sntomas evidentes de mosaico cuando se inocula con el PVX por injerto. En el CIP, se usa el cultivar Rosita. Los cultivares que desarrollan necrosis no son recomendables, puesto que tienen menor xito para trasmitir el virus. Una planta es suficiente para inocular por injerto cuatro plantas. En cada planta, el nmero de pices (futuros esquejes) es multiplicado cortando el pice o punta de la planta entre 30 y 40 das despus de la siembra o cuando las plantas alcanzan 40 cm de longitud. E. Un conjunto de plantas jvenes de Nicotiana occidentalis infectadas con el PVY para inoculacin mecnica: 40 plantas infectadas son suficientes para inocular mecnicamente 100 plantas. F. Un conjunto de plantas jvenes de N. occidentalis infectadas con PVY para inoculacin por injerto: una planta es suficiente para inocular tres o cuatro plantas, si el nmero de pices (futuros esquejes) es multiplicado cortando el pice principal o punta de la planta entre 30 y 40 das despus de la siembra o cuando las plantas tienen 40 cm de altura. G. Un conjunto de plantas sanas de N. glutinosa y N. occidentalis para indexado. Se necesitan tres plantas por prueba. H. Un Kit de DAS-ELISA. Inculo Las inoculaciones se realizan usando una variante del PVX miembro del grupo 2 de Cockerham y la variante PVY del PVY, el cual induce un mosaico severo y necrosis. Estas variantes se mantienen en plantas de N. glutinosa y N. occidentalis respectivamente, por inoculacin mecnica (Fotos 5a y 5b). El inculo se prepara al 5% peso/volumen, es decir, se utilizan 5 g de hojas sintomticas (N. glutinosa para PVX y N. occidentalis para PVY) por cada 100 ml de agua fra. Las hojas se muelen en un mortero con agua destilada y la suspensin se hace pasar a travs de una gasa para eliminar los desechos (Foto 6).
Diseo experimental
No se usa ningn diseo en esta evaluacin. La nica restriccin en la organizacin del material es que los testigos han de crecer separadamente, mientras las plantas inoculadas (mecnicamente / injerto) se agrupan por entradas.
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Manejo del experimento

Inoculacin mecnica Se inoculan mecnicamente con el PVX y el PVY tres de cada conjunto de siete plantas, 15 das despus de la siembra; esto es, cuando las plantas estn todava jvenes o aproximadamente de 10 cm de altura. Se espolvorean ligeramente con carborundum 600 mesh dos o tres hojas de los clones testigo y se inoculan frotando las hojas con el dedo ndice (usar guantes) o con una gasa previamente sumergida en el inculo (Foto 7). Inoculacin por injerto Se inoculan por injerto tres plantas adicionales de cada conjunto, 25 das despus de la siembra o cuando alcanzan una altura de 25 a 30 cm. La inoculacin se realiza injertando los esquejes de plantas infectadas en las plantas individuales de papa que van a ser sometidas a la prueba (Foto 8). Los esquejes se obtienen de plantas infectadas con el PVX de un cultivar susceptible de papa y de plantas de N. occidentalis infectadas con el PVY. Los esquejes se extraen de las plantas 20 das despus que han sido injertadas para evitar la traslocacin pasiva del virus que podra ser detectado por ELISA. Testigo El resto de plantas (testigos sanos) se mantiene de manera separada en el mismo invernadero. Muestras para la prueba de ELISA La prueba de ELISA se realiza en muestras compuestas de foliolos de plantas inoculadas con el mismo virus y la misma tcnica de inoculacin; es decir, una muestra de foliolos de tres plantas del clon, inoculadas mecnicamente con el mismo virus. Los clones que desarrollan necrosis sistmica generalmente escapan de la deteccin del virus por ELISA; sin embargo, la deteccin es posible cuando se incluyen dentro de la muestra 2 cm de la seccin apical del tallo principal. Retroinoculacin en plantas indicadoras Los clones que resultan negativos en la prueba de ELISA son indexados sobre plantas indicadoras sanas de N. glutinosa para la deteccin del PVX o N. occidentalis para la deteccin del PVY.
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Preparacin del inculo. Dentro de una bolsa de plstico, se tritura con agua destilada fra (1:5) una muestra mixta de foliolos provenientes de todas las plantas del clon supuestamente susceptible. Para clones que desarrollan sntomas necrticos, debe incluirse un pedazo de la parte apical del tallo. Se usa un tubo de vidrio (25 cm3) para triturar y moler los foliolos, y se hace rodar el tubo sobre la bolsa de plstico, manteniendo doblada la parte abierta de la bolsa para evitar perder la suspensin (Foto 9). Inoculacin: Se espolvorean con carborundum 600 mesh dos plantas indicadoras jvenes para cada virus y se inoculan raspando suavemente con el dedo ndice (usar guantes) o con una gasa, previamente sumergida en el inculo. A las plantas indicadoras se les coloca una etiqueta con el cdigo o nombre del clon probado.
Parmetros para la evaluacin: lectura y evaluacin

Aunque la evaluacin se puede hacer tan pronto como aparecen los sntomas en las variedades susceptibles, se recomienda hacer las evaluaciones en las plantas despus de 25 das de realizada la inoculacin por injerto. Las plantas de cada clon son evaluadas individualmente para mosaico (M), necrosis sistmica (NS) y sntomas de necrosis local (NL). En la prueba de retroinoculacin, la evaluacin se realiza en las plantas indicadoras 15 das despus de la evaluacin. Las plantas son evaluadas para sntomas de mosaico. Se puede hacer una prueba de ELISA, para confirmar la presencia o ausencia del virus.
Registro y anlisis de datos

Los datos son registrados en la plantilla Evaluaciones_virus_PVX_PVY de la GCI.

Cualquier sntoma dudoso debe compararse con el respectivo testigo sano. Si los clones probados no muestran ningn sntoma y la prueba de ELISA es negativa y ninguna de las plantas indicadoras muestra mosaico, los clones probados pueden ser declarados como extremadamente resistentes.
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Pruebas para evaluar la resistencia relativa al PLRV Condiciones: clima, suelo y presin de fidos
La evaluacin para resistencia a la infeccin por el PLRV requiere de tres campaas de exposicin intencional a la infeccin en el campo. El lugar y poca de cultivo deben ser seleccionados basados en una alta incidencia del PLRV y de presin de fidos, debido a que la resistencia a la infeccin depende de la presin de fidos. La evaluacin en s se realiza durante la tercera campaa de exposicin intencional. Cuando la resistencia del material en prueba no es conocida pero se sospecha cierto nivel de resistencia, se recomienda un rea de moderada presin de fidos, y cuando se sabe que el material presenta un alto nivel de resistencia, se recomienda un rea con alta presin de fidos.

Clones de prueba Durante la primera campaa debe contarse con 20 tubrculos de cada clon, y por lo menos con 30 tubrculos para las siguientes campaas. Testigos Se deben incluir tubrculos semilla sanos de un cultivar local como testigos susceptibles. En el CIP se usan como testigo susceptible las variedades Perricholi y Ticahuasi. Las variedades Tomasa, Achirana-INTA y la lnea mejorada DW. 84-1457 se usan como testigos resistentes. Semilla Los tubrculos de los clones en prueba, testigos y plantas infectivas cosechados en cada campaa de exposicin intencional son utilizados como semillas para la siguiente prueba. Al momento de la cosecha se colectan tres tubrculos al azar de cada planta y parcela. Plantas Infectivas Las plantas infectivas deben estar presentes en cada campaa de exposicin intencional como fuente de inculo para la diseminacin de virus. Las plantas infectivas
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se obtienen de plantas infectadas con el PLRV de un cultivar susceptible que se desarrolla bajo condiciones naturales de infeccin en el campo por lo menos durante dos campaas agrcolas (para asegurar la infeccin) y en el mismo lugar donde las pruebas de infeccin se van a realizar. Sin embargo, una vez infectados los tubrculos, estos pueden propagarse vegetativamente sin ser expuestos a la infeccin por fidos, debido a la transmisin del virus a travs de los tubrculos. En el CIP, se obtiene la semilla infectiva multiplicando dos cultivares locales susceptibles, Perricholi y Ticahuasi, en un rea con alta incidencia del PLRV. Vectores En lugares donde la poblacin de fidos es baja, la multiplicacin de los stos puede ser planificada ms temprano. Los fidos de la especie Myzus persicae se multiplican en col china (Brassica pekinensis) un mes antes de comenzar la prueba. La propagacin de los fidos se realiza en un invernadero aislado con luz artificial, con temperatura que oscile entre 19 y 24 C y humedad relativa entre 65 y 80%.
Diseo experimental
Durante las dos primeras campaas agrcolas, se siembran parcelas repetidas de los materiales a ser probados, bajo un diseo al azar, con dos repeticiones de parcelas de 10 plantas en la primera campaa y tres repeticiones de 10 plantas por parcela en la siguiente. Durante la tercera campaa agrcola, las pruebas de evaluacin se realizan bajo el diseo de bloques completos al azar (DBCA), con un mnimo de tres repeticiones de 10 plantas por parcela. En un extremo de la parcela deben sembrarse dos o tres tubrculos de plantas infectivas (Figura 1). Los tubrculos para plantas infectivas deben sembrarse dos semanas antes que el material a probarse, con el objeto de permitir la adquisicin del virus por los fidos. La reduccin del rendimiento debido a la infeccin por virus tambin se puede estimar durante la tercera prueba de exposicin intencional, mediante el sembrado de una prueba idntica a la de exposicin intencional (iguales entradas, diseo y lugar) utilizando tubrculos-semilla sanos, para efectuar la comparacin
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Figura 1. Diseo de campo para una prueba repetida de exposicin (x= plantas infectivas; crculos redondos = plantas de clones probados)
Manejo de campo
El manejo de campo se hace de acuerdo a los procedimientos locales. Monitoreo de los niveles de poblacin de fidos El recuento de fidos se debe realizar regularmente en cada prueba con el objeto de determinar su nivel de presin (Tabla 1). El primer recuento se hace 40 das despus de la siembra de plantas infectivas. Se colecta una muestra al azar de 50 plantas infectadas. Al tender a estar localizados en la cara inferior de las hojas, cada hoja debe ser volteada cuidadosamente para contar los fidos alados y no alados. Se pueden hacer dos a tres recuentos adicionales a intervalos de 20 das. En cada ocasin se calcula el nmero promedio de fidos por planta. Inclusive, se puede evaluar la poblacin de fidos colocando trampas amarillas con agua (40x30x6 cm) en el campo (Fernndez- Northcote, 1991).
Tabla 1. Presin de fidos (Myzus persicae) Presin de fidos Alta Moderada Baja Nmero de fidos/ trampa/ mes 500 250 Nmero de fidos / planta 50 20-49 20
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Reduccin de la poblacin de fidos Si el promedio de fidos por planta es igual o mayor de 50, se recomienda la aplicacin de pesticidas de contacto (ingrediente activo: Pirimicarb, al 0.2%), para moderar la presin de fidos. Incremento de la poblacin de fidos Si el promedio de fidos por planta es igual o menor de 10, la poblacin necesita ser incrementada. Para ello se colocan hojas completamente infestadas del fido Myzus persicae sobre las plantas infectivas.
Durante la primera campaa de exposicin, se pueden observar los sntomas del PLRV 65 70 das despus de la siembra. Es importante saber que las plantas que adquieren el virus por primera vez (infeccin primaria), no muestran sntomas conspicuos a menos que se infecten muy temprano en la campaa de cultivo; esto es, durante los primeros 30 das despus de la siembra. Durante la segunda campaa de cultivo, el sntoma en las plantas infectadas es ms evidente. La evaluacin en la tercera campaa de cultivo se realiza en plantas individuales 45 o 50 das despus de la siembra. La prueba de ELISA se hace tanto a las plantas sintomticas como a aquellas asintomticas. Los datos de rendimiento se toman en consideracin en la tercera campaa de cultivo e incluyen el nmero total de plantas cosechadas, el nmero total de tubrculos y el peso total de cada parcela. Para el anlisis y pruebas de comparacin. se deben tomar las mismas medidas en la prueba con semilla sana sembrada en la misma campaa.

El nmero de plantas sintomticas y positivas en la prueba de ELISA se registra en la plantilla correspondiente a virus de la GCI, para cada clon y repeticin. Se calcula el
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porcentaje de plantas infectadas para cada unidad experimental. El clculo utiliza el nmero de plantas ELISA-positivas o el nmero de plantas sintomticas, en caso de no haberse realizado la prueba de ELISA. Los datos de rendimiento de la prueba de exposicin intencional se registran en la misma plantilla.
Anlisis de datos
Despus de la exploracin de datos a travs de simples anlisis estadsticos como media, error estndar, distribucin de frecuencias y diagrama de cajas se puede inferir el porcentaje de plantas infectadas con el PLRV utilizando el anlisis de variancia (ANOVA) Si existiera homogeneidad en el error de variancia de los dos experimentos, se hace un anlisis combinado de variancia de las dos pruebas (prueba tubrculo-semilla sana frente a prueba de tubrculos infectados), con el objeto de analizar el efecto de la semilla infectada en el rendimiento. Se usa el cuadrado medio del error del ANOVA combinado para hacer la comparacin estadstica entre el rendimiento de cada clon en las dos pruebas. Se usa la prueba de comparaciones de pares para comparar el rendimiento de cada clon en las dos pruebas. Los resultados pueden presentarse usando la siguiente tabla:
Identificacin % de plantas infectadas de PLRV % prdida de rendimiento LSD Significado

Validacin del experimento Los testigos susceptibles deben alcanzar ms del 80% de plantas infectadas en la tercera prueba de exposicin para obtener resultados confiables sobre el nivel de resistencia relativa.
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Los clones que exhiben el 50% o ms de plantas infectadas (plantas sintomticas) durante la segunda campaa de cultivo se declaran susceptibles a la infeccin por el PLRV y no pasan (no se siembran) a la tercera prueba de exposicin intencional. Los clones con el 30% o menos de plantas infectadas con el PLRV (ELISA- positivas) durante la tercera prueba de exposicin intencional (3ra. campaa de cultivo) pueden considerarse resistentes a la infeccin por el PLRV. Los clones que no sufren de reduccin en el rendimiento a pesar del alto grado de infeccin por el virus, son considerados tolerantes.
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Evaluacin de la madurez del llenado de tubrculos en clones lite y avanzados de papa1

Introduccin
La velocidad y la duracin del llenado de tubrculos determinan el rendimiento del cultivo de papa. La velocidad del llenado de tubrculos es la pendiente de la curva descrita por el incremento del peso de los tubrculos en el tiempo, mientras que la duracin del llenado de tubrculos es el tiempo entre la iniciacin de la tuberizacin y la persistencia del follaje. En efecto, la disminucin del rea foliar por senescencia est seguida poco despus por el cese del llenado de tubrculos. Aunque ambos factores son importantes para dar cuenta de las diferencias de rendimiento entre cultivares, la duracin del llenado de tubrculos tiene mayor importancia en cuanto parece determinar el rendimiento final. Por ejemplo, una variedad precoz con una ventaja de rendimiento sobre una variedad ms tarda durante la fase lineal de llenado de tubrculos, podra mostrar un rendimiento menor que la segunda debido a una senescencia ms temprana, a menos que se realice una cosecha anticipada. El llenado de tubrculos es resultado de dos procesos bsicos: la iniciacin de la tuberizacin y el crecimiento de los tubrculos. El tiempo y la duracin dependen de la ubicacin geogrfica, los factores ambientales y el cultivar. Fase de iniciacin de la tuberizacin Esta fase ocurre entre los 20 y 30 das o ms (hasta 45 das, bajo condiciones de das largos) de la emergencia de la planta y dura entre 10 y 14 das. Aunque en etapas posteriores del desarrollo de la planta pueden continuar formndose tubrculos de estolones, en esta etapa se inician aquellos tubrculos que en una campaa larga se cosechan tarde. Durante la fase de iniciacin, en la cual los tubrculos se forman de estolones, la orientacin de la divisin de las clulas en la zona sub-apical del estoln cambia para producir una expansin radial, en vez de un crecimiento longitudinal. El nmero de tubrculos en desarrollo se incrementa a un mximo de 15 a 20, y luego disminuye a algn valor menor que estar lleno para el momento de la cosecha (Figura 1). Los tubrculos iniciados no cosechados sern reabsorbidos por la planta.
(1) Proyecto MTP 3, Producto 1, Objetivo 1 2009.
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Las pruebas tambin apuntan a que en algunos cultivares hay ms de un solo ciclo de formacin de tubrculos durante la campaa de crecimiento (Meredith, 1988). As, hay cultivares con ms de un solo evento de iniciacin de tuberizacin, mientras que otros parecen formar tubrculos solo una vez.
Figura 1. Nmero potencial de tubrculos producidos exitosamente por una planta (fase de iniciacin de tuberizacin). Tomado de Kleinkopf et al., (2003) Physiology of tuber bulking
Durante esta fase de iniciacin del crecimiento, el nmero potencial de tubrculos que puede ser producido exitosamente por una planta vara segn el genotipo (la mayora de los cultivares tienen un nmero constante de tubrculos por tallo), la edad fisiolgica de la semilla, el nmero de tallos por mata (poblacin de tallos) y las condiciones medioambientales. Las condiciones ambientales que afectan el inicio de la tuberizacin son la fecha de la siembra, la temperatura a inicios de la campaa, el manejo de la nutricin y del agua, y los extremos climticos como el clima caliente, el granizo o la helada. Si bien los agricultores tienen poco control sobre las condiciones ambientales anuales, s pueden tener algn control sobre esta fase mediante la seleccin del lote de semilla y mejores prcticas de manejo.
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Crecimiento del tubrculo Esta fase se basa en el nmero de das que transcurre hasta la maduracin o la duracin de la campaa de cultivo; es decir, de 60 a ms de 90 das. El agrandamiento del tubrculo que ocurre durante esta fase contina a medida que los fotosintatos son trasladados del follaje a los tubrculos. La duracin de esta fase est influenciada en gran parte por el nmero de horas de luz diurna disponible para la fotosntesis, y las temperaturas diurnas. A pesar de la observacin de que la mayor parte del crecimiento del tubrculo ocurre antes de que el rea foliar llegu a su mayor desarrollo (Figura 2), un mayor llenado se asocia con una mayor rea foliar siempre que no sobrepase el lmite a partir del cual disminuye la velocidad de desarrollo del cultivo debido a la sombra mutua de las hojas. Struik et al. (1990) sugieren que los mecanismos que controlan el crecimiento o la reabsorcin de los tubrculos pueden ser ms importantes en establecer la distribucin del tamao de los tubrculos en el momento de la cosecha, que los procesos que controlan la iniciacin de la tuberizacin. El nmero de tubrculos producidos son especficos a la campaa, la humedad del suelo y el cultivar. Luego del crecimiento del tubrculo sigue una fase de maduracin, que se caracteriza por la disminucin del rea foliar y velocidad de crecimiento del tubrculo. Puede ser que esta fase no ocurra en el campo cuando un cultivar de campaa mediana o larga crece en una campaa corta de produccin. Se puede obtener solo cerca de un 10 a un 15 por ciento del peso total del tubrculo entre el final de la etapa de crecimiento del tubrculo y las primeras dos semanas de maduracin. Para una produccin aceptable en reas en las que a menudo se cosecha la papa antes de su madurez fisiolgica, se necesita tanto una iniciacin precoz de tuberizacin como un crecimiento precoz del tubrculo.
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Figura 2. Curva de incremento del peso del tubrculo en el tiempo. Tomada de Radley et al., 1961 Tuber bulking in the potato crop
Fisiologa de la induccin de tubrculos Los procesos de tuberizacin de la papa son controlados por factores ambientales, sobre todo por el fotoperiodo y la temperatura, los cuales regulan los niveles de las sustancias endgenas de crecimiento. Las investigaciones informan que los das cortos y las temperaturas fras nocturnas (condiciones de induccin) favorecen la tuberizacin, mientras que los das largos y las temperaturas altas nocturnas retardan o inhiben el proceso (Gregory, 1956; Slater, 1968). La hoja es el principal lugar donde se percibe la seal fotoperidica. Bajo las condiciones favorables de das cortos, las hojas producen una seal inductiva mvil que es transportada a los estolones para inducir la formacin de tubrculos. Se han propuesto por lo menos dos rutas independientes de control de la formacin de tubrculos en la papa: una ruta dependiente del fotoperiodo y otra ruta dependiente de las giberelinas.
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La ruta del fotoperiodo que regula la induccin de tubrculos en das cortos comparte rasgos con la va del fotoperiodo de floracin, que incluye la participacin de las protenas fitocromo B (PHYB, en ingls), CONSTANS (CO) y FLOWERING LOCUS T (FT) (Amador et al., 2001; Martnez-Garca et al., 2002; Rodrguez-Falcn et al., 2006). De otra parte, tambin se ha reportado que las giberelinas (GA, en ingls) tienen un efecto inhibitorio sobre la induccin de tubrculos y se ha demostrado que su actividad disminuye cuando las hojas son expuestas a las condiciones de da corto (Ewing, 1995; Kumar y Wareing, 1974). Asimismo, se ha demostrado que el fitocromo PHYB (estable ante la luz), importante fotoreceptor, interviene en la regulacin de la induccin de la tuberizacin, inhibiendo este proceso bajo condiciones desfavorables. Este fotoreceptor controla la sntesis de una seal inhibitoria que tiene un papel en la transduccin de seales de las GA. Se ha encontrado que la protena PHOR1 (receptiva al fotoperiodo 1) tiene una funcin positiva en la cascada de seales de las GA, lo cual sugiere que la induccin de la tuberizacin est mediada por cambios en la sensibilidad de las GA. De all que los cultivares sensibles a altos niveles de GA bajo fotoperiodos largos pueden ser un problema en las regiones templadas, las cuales tienen fotoperiodos largos durante la campaa de cultivo habitual. Afortunadamente, hay cultivares neutrales a la longitud de da, que supuestamente han perdido sensibilidad al fotoperiodo de las GA. Factores ambientales que influyen en el llenado de tubrculos La papa es oriunda de las grandes alturas del trpico andino. De ah que el llenado del tubrculo sea mejor estimulado por fotoperiodos cortos, alta intensidad luminosa y climas fros con temperaturas promedio diarias de 15 a 18C, tal como en su centro de origen. Los factores metereolgicos que influyen en este proceso en un determinado lugar son bsicamente las temperaturas del aire y del suelo, la radiacin solar, el fotoperiodo, la humedad del suelo y el uso del agua para el cultivo. La sensibilidad a las condiciones medioambientales vara de manera considerable entre los distintos genotipos (Brown, 2007). Los factores medioambientales ms limitantes para la produccin de papa son el estrs hdrico y el estrs por calor. Los das cortos y temperaturas menores de 20C acortan el tiempo entre la emergencia y la iniciacin de la tuberizacin. Las temperaturas ms altas favorecen el desarrollo foliar y retardan la iniciacin de la tuberizacin. Las altas temperaturas tambin acortan la senescencia de la planta, sobre todo aquellas mayores de 30C (Midmore, 1990). El estrs por calor hace que haya un nmero ms alto de tubrculos pequeos por planta y una gravedad especfica de tubrculos menor, con un contenido reducido de materia seca (Haverkort, 1990).
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Ewing (1981) report que la secuencia de temperaturas que ms a menudo causan dao econmico a los cultivos de papa en muchas reas es aquella de temperaturas templadas a inicios de la campaa, seguidas de temperaturas fras que inducen a una fuerte tuberizacin, y luego otro periodo de altas temperaturas. Dichas oscilaciones trmicas promueven brotamientos por calor, tubrculos en cadena y el crecimiento secundario de tubrculos. Por lo visto, las fluctuaciones en los estmulos de la tuberizacin hacen que la formacin de tubrculos se alterne con un mayor desarrollo de crecimientos de tipo estoln. Los cultivares adaptados a condiciones de da largo, que producen bien en campaas de cultivo completos (5-6 meses), pueden madurar demasiado temprano y entrar en senescencia entre los 60 y 70 das despus de la siembra en las tierras altas ecuatoriales, y en consecuencia rendir menos (Haverkort, 1990). Por otro lado, los cultivares de buen comportamiento bajo condiciones de da corto en temporadas de crecimiento de 3 a 4 meses empiezan a tuberizar tardamente y maduran demasiado tarde en altitudes de 50oN. Sands et al. (1979) mostraron que los das largos retardan el inicio de la tuberizacin, aunque ello depende del cultivar. La ramificacin de estolones se incrementa tanto en temperaturas altas como en fotoperiodos largos, mientras que el nmero de estolones no se ve afectado por el fotoperiodo sino por la temperatura y la humedad. El estrs por sequa limita el desarrollo del follaje y reduce el nmero de tubrculos en las categoras de mayor tamao (Walworth y Carling, 2002). Sin embargo, no se ha observado ninguna diferencia en las fechas de iniciacin de la tuberizacin o comienzo del periodo de crecimiento (llenado de tubrculo) entre papas regadas y no regadas (Dwyer y Boisvert, 1990). Asimismo, el tiempo de senescencia del follaje de plantas estresadas por sequa no se ve comprometido, pero s el crecimiento de la parte area de la planta, desde inicios de la campaa hasta mediados de ella (Walworth y Carling, 2002) Los clones en mejoramiento deben compatibilizar con los sistemas de cultivo y duracin de la campaa de papa de una regin particular dentro de su rea agroecolgica de adaptacin. En este sentido, la informacin sobre el llenado de tubrculos de clones en una etapa avanzada de seleccin es de gran inters para su recomendacin en pruebas preliminares a la adopcin final. Esta informacin es valiosa para evaluar el comportamiento y la adaptacin, sobre todo en reas con campaas de cultivo cortas, donde la cosecha tiene que realizarse durante el periodo de llenado de tubrculos, es decir, antes de la senescencia de la parte area de la planta (hojas).
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El presente protocolo tiene el propsito de brindar un procedimiento prctico para la evaluacin y documentacin de la madurez del llenado de tubrculos de variedades potenciales. Tambin puede ser til en la seleccin de clones de llenado temprano. Puesto que las condiciones agro-meteorolgicas son crticas en el comportamiento del llenado de tubrculos, la descripcin del lugar de evaluacin (es decir, la latitud) y los patrones climticos deben acompaar siempre la informacin de la madurez del llenado de tubrculos.
Materiales y mtodos
Materiales Tubrculos-semilla brotados naturalmente de aproximadamente 80 g, procedentes de clones en prueba y variedades usadas comnmente. Tubrculos-semilla brotados para la siembra de los bordes. Tubrculos brotados de cultivares con piel roja, o piel crema o blanca. Estos cultivares se usarn de acuerdo al color de piel de los cultivares en prueba, como marcadores para separar dentro de una parcela las plantas que sern cosechadas en diferentes fechas. Mtodos Diseo experimental. Para este tipo de evaluacin es apropiado el diseo de bloques divididos (parcelas divididas). Los tratamientos del factor clones, es decir, los clones en prueba, se disponen en surcos verticales en un diseo de bloques completos al azar, mientras que aquellos del factor fecha de cosecha, se disponen en surcos horizontales dentro de la misma repeticin. Se recomienda por lo menos tres repeticiones.
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Figura 3. Diseo de parcelas dividida para la evaluacin del llenado de tubrculos. Muestra para dos repeticiones
Los surcos deben comprender al menos 15 golpes por parcela, sembrados de manera tal, que luego de cada cinco tubrculos-semilla del cultivar en prueba se siembre como marcador una papa de piel roja o blanca -segn el color de piel del clon en prueba-, seguida por cinco tubrculos ms del clon en prueba. Este patrn debe repetirse a lo largo de todo el surco. Tambin se siembra un tubrculo marcador al inicio y al final de cada parcela. Se debe sembrar un surco de borde en cada lado de todos los bloques (repeticin). La distancia entre las plantas debe seguir los estndares de la localidad, aunque se recomienda una distancia de 30 cm entre golpes. El manejo agronmico y el control de plagas y enfermedades deben seguir las prcticas estndar de la localidad. Fechas de cosecha: Se proponen tres fechas de cosecha, como tambin los intervalos de das para cosechar en cada una de ellas.
Temprana: Intermedia: Tarda: de 80 a 90 das despus de la siembra (DDS) de 100 a 120 DDS de 120 a 140 DDS
El momento de la primera cosecha y los intervalos de das para las cosechas subsiguientes se determinarn de acuerdo a la duracin de la campaa de cultivo de la localidad donde se realiza el ensayo. No son infrecuentes las campaas de cultivo cortas que solo permiten cosechas tempranas e intermedias.
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Las parcelas deben ser cosechadas de cinco en cinco plantas, desde un extremo de la parcela al otro, hasta la ltima fecha de cosecha. Principales puntos A. Detener el riego dos semanas antes del corte del follaje. B. Seguir la prctica de corte de follaje (con hoz o dndole muerte mediante qumicos (herbicidas). Esto facilitar la separacin de los tubrculos del estoln en la cosecha. C. Cosechar entre 10 a 15 das despus del corte del follaje. Despus de la cosecha: (Para anlisis de gravedad especfica) Secar los tubrculos cosechados en un cobertizo de almacenamiento, pues la exposicin a la luz causa el enverdecimiento de las papas. Suberizarlos a una temperatura de 10 a 20oC, con una humedad relativa de 95%, durante 15 a 20 das
Registro de datos
Datos meteorolgicos Deben registrarse los datos meteorolgicos en una estacin meteorolgica. Se recomienda registrar los siguientes datos: A. Fotoperiodo (horas de luz diurna) B. Temperaturas mxima y mnima diarias del aire (oC) C. Humedad relativa del aire (%) D. Precipitaciones (mm) E. Radiacin fotosintticamente activa (PAR, por su sigla en ingls) (Mide la intensidad de la luz entre las frecuencias 400 y 700 nm; es decir, el rango de luz que afecta la fotosntesis en umol/m2/seg) F. Temperatura del suelo (10 cm de profundidad) (oC)
Parmetros para la evaluacin

Datos a ser registrados de cada parcela durante la campaa de cultivo Fecha de emergencia: nmero de das desde la siembra hasta la emergencia del 70% de las plantas.
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Nmero de plantas por parcela: estos datos se registran 45 das despus de la siembra Vigor de la planta: 1=menos vigorosa, 9= muy vigorosa Floracin: a partir de los 60 das de la siembra, verificar los tratamientos en intervalos semanales y registrar el nmero de das transcurridos desde la siembra hasta la floracin del 50% de las plantas de cada clon en prueba. Senescencia: se registra diez das antes de cada fecha de cosecha. 1= 0% de las hojas amarilladas, 3=25% de las hojas amarilladas, 5=50% de las hojas amarilladas, 7=75% de las hojas amarilladas, 9= 100% de las hojas amarilladas. Datos a recolectarse en la cosecha Tamao de tubrculos comerciales: separar tubrculos comerciales, por ejemplo, aquellos de 50 mm (>80g). Luego, mediante inspeccin visual, estimar el porcentaje de tubrculos comerciales en cada una de las siguientes dos categoras: Categora 1: aquellos con ms de 70 mm Categora 2: aquellos entre 50 y 70 mm Nmero de tubrculos no comerciales: Contar aquellos con menos de 50 mm Rendimiento de tubrculos no comerciales (kg/parcela): hay que recordar que en cada fecha de cosecha se tendr que cosechar cinco matas de cada parcela, es decir, aquellas que se encuentran entre dos plantas marcadoras. Peso de tubrculos no comerciales (kg): Calcular el peso promedio de los tubrculos no comerciales dividiendo el rendimiento de tubrculos no comerciales por el nmero de tubrculos no comerciales. Nmero de tubrculos comerciales: Conteo Rendimiento de tubrculos comerciales (kg/parcela). Peso de tubrculos comerciales (kg): Calcular el peso promedio de los tubrculos comerciales dividiendo el rendimiento de tubrculos comerciales entre el nmero de tubrculos comerciales.
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Datos a registrarse despus de la cosecha Gravedad especfica (ver procedimiento en la Gua de Cooperadores Internacionales (CIP, 2007)
Gravedad especfica = (peso en el aire) / (peso en el aire peso en el agua)
Para el registro de todos los datos utilizar la plantilla: Evaluaciones de la madurez del llenado de tubrculos. (Ver anexo 2.)
Anlisis de datos
Los datos rendimiento de tubrculos comerciales, nmero de tubrculos comerciales y gravedad especfica se analizan de acuerdo al diseo. Se usa el anlisis de varianza (ANVA), pudindose realizar con el programa estadstico R. Se comparan las medias entre las fechas de cosecha de los clones en prueba, y las medias entre los clones en prueba en cada fecha de cosecha usando la prueba LSD.
Si la interaccin clones en prueba x fechas de cosecha es significativa (p<0.05) para una variable determinada, entonces existe por lo menos un clon en prueba que tiene un comportamiento significativamente diferente a lo largo de las fechas de cosecha. Otra manera de interpretar esta interaccin es que existen diferencias estadsticas entre los clones en prueba en una fecha de cosecha dada. La etapa de crecimiento del tubrculo es un determinante clave del componente comercial del rendimiento total, caracterizado por una tasa constante de incremento del tamao y peso del tubrculo. Por lo tanto, el comportamiento del peso del tubrculo comercial a lo largo de las fechas de cosecha es de gran importancia en la determinacin de la madurez del llenado de tubrculos. En el anlisis del ensayo de comparacin de los clones en prueba, el evaluador, para asignarle a un clon en prueba un grado de madurez de llenado de tubrculo, debe tomar en cuenta las siguientes situaciones:
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A. Clones que no presentan un comportamiento estadsticamente diferente respecto a peso y rendimiento de tubrculos comerciales entre fechas de cosechas. Estos clones pueden considerarse de madurez temprana. B. Clones que tienen un comportamiento estadsticamente mejor en la segunda fecha de cosecha, aunque no significativamente diferente a la tercera fecha de cosecha. Estos clones pueden considerarse de madurez intermedia. C. Clones que tienen un comportamiento estadsticamente mejor en la tercera fecha de cosecha. Estos clones pueden considerarse de madurez tarda. Puede darse el caso de clones que no muestran diferencias estadsticas en el peso de los tubrculos comerciales en dos fechas de cosecha consecutivas, sin embargo mostrar un incremento estadsticamente significativo en el rendimiento de tubrculos comerciales. Puesto que el rendimiento de tubrculos comerciales es una funcin del peso y nmero de tubrculos comerciales, un incremento significativo en el rendimiento de tubrculos comerciales puede atribuirse nicamente al mayor nmero de tubrculos comerciales. Este sera el caso de clones capaces de formar tubrculos adicionales durante etapas posteriores del desarrollo de la planta, o cultivares con ms de un ciclo de formacin de tubrculos. En tales casos, el evaluador debe verificar el porcentaje de tubrculos asignados a cada una de las dos categoras de tamao de tubrculos comerciales en cada fecha de cosecha, a fin de decidir la caracterstica de madurez de llenado de tubrculo del clon. Se puede recomendar clones de madurez de llenado intermedia o tarda para una fecha de cosecha ms temprana, siempre que el clon est entre aquellos con mejor peso y rendimiento de tubrculos comerciales en la fecha referida. De modo que para dar la recomendacin final de una fecha de cosecha del clon, es de suma importancia la prueba de comparacin entre clones en una fecha de cosecha determinada. Esto es de especial inters para las reas con campaa de cultivo cortas, donde se requiere cosechar temprano. En esta decisin tambin debe considerarse el criterio de gravedad especfica. Se considera aceptable una gravedad especfica de 1.080 o ms. La implementacin del protocolo de llenado de tubrculos En Tashkent (Uzbekistn) se realiz un ensayo para evaluar la madurez del llenado de tubrculos de 19 clones, entre ellos 15 clones avanzados y lites del CIP, y 5 variedades del INTA, Argentina. La campaa de cultivo fue de mediados de Marzo hasta la tercera semana de Junio, comenzando con fotoperiodos cortos y terminando con fotoperiodos largos. La campaa de cultivo en las tierras bajas de Tashkent dura menos de 100 das debido a las temperaturas extremadamente altas que se presentan poco despus. Se us un diseo de parcelas divididas con tres repeticiones
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y unidades experimentales de 5 golpes por parcela. Se cosech a los 80 y 100 das despus de la siembra.
Datos de identificacin Nombre y cdigo del proyecto Ao Regin de CIP Pas Localidad Medioambiente Altitud (msnm) Latitud Longitud
2009 SWCA (Sur de Asia, Asia Occidental y Central) Uzbekistn Tashkent Tierras bajas templadas 476 47 18 59.76 69 15 0
Los resultados de las pruebas comparativas entre clones en cada fecha de cosecha se muestran en las siguientes tablas:
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Al revisar las tablas, se puede observar que muy pocos tubrculos de cada clon alcanzaron el tamao o el peso comercial a los 80 das despus de la siembra (DDS), por consiguiente, se registraron bajos rendimientos comerciales. Los altos errores estndar para rendimiento comercial a los 80 DDS condujeron a una falta de diferencias estadsticas entre clones para esta variable, a pesar del amplio rango de valores de rendimiento: de 0 a 0.500 kg/m2. Por otro lado, a los 100 DDS, la mayora, si no todos, los clones en prueba haban producido un nmero significativamente mayor de tubrculos de tamao y peso comercial. Las diferencias estadsticas entre clones a los 100 DDS pueden ser explicadas por las diferencias de potencial de rendimiento y adaptacin, o de madurez de llenado de los clones. Segn la escala propuesta previamente, se puede considerar que todos los clones en prueba son de madurez intermedia bajo las condiciones de crecimiento de las tierras bajas de Tashkent. Sin embargo, si por alguna razn se debiera cosechar ms temprano (80 DDS), el clon CIP-388676.1 sera la mejor opcin. Las siguientes figuras muestran el comportamiento de dos clones avanzados (aquellos clones subrayados en turquesa y amarillo en las tablas) a lo largo de las dos fechas de cosecha.
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No se encontr diferencias estadsticas en el peso de tubrculos comerciales a lo largo de las fechas de cosecha para ninguno de los dos clones en prueba. Pero no sucedi as respecto al rendimiento y nmero de tubrculos comerciales, pues se observ un incremento significativo para ambos clones a los 100 DDS. Esto indica que cosechas ms tempranas rendiran papas inmaduras de tamao no comercial. Es evidente que el llenado de tubrculos fue interrumpido a los 80 DDS en todos los clones en prueba y es probable que algunos de ellos pudieran requerir ms de 100 das para alcanzar su madurez. Sin embargo, casi todos los clones mostraron un buen peso y nmero de tubrculos comerciales cuando fueron cosechados a los 100 DDS. El clon CIP-397099.4 evaluado en este ensayo, fue tambin evaluado para madurez de llenado de tubrculo durante el invierno, en la sede del CIP en La Molina (LimaPer). La campaa de cultivo fue de 140 das y se realizaron tres cosechas, a los 80, 110 y 140 DDS, respectivamente. Las siguientes dos figuras muestran el comportamiento de este clon en cada localidad.
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En Tashkent, el clon CIP-397099.4 present un rendimiento significativamente mejor a los 100 DDS, an cuando unos pocos tubrculos comerciales cosechados a los 80 DDS no pesaron significativamente diferente que aquellos cosechados a los 100 DDS. Sin embargo, un nmero significativamente mayor de tubrculos comerciales a los 100 DDS indica que el llenado estaba an en marcha a los 80 DDS; por consiguiente, se puede considerar que el CIP-397099.4 es un clon de madurez intermedia bajo las condiciones de las tierras bajas de Tashkent. En cambio, en La Molina no se encontr ninguna diferencia significativa respecto al rendimiento, el peso y el nmero de tubrculos comerciales a lo largo de las fechas de cosecha, lo cual indica que el CIP-397099.4 es un clon de madurez temprana bajo estas condiciones. Es probable que las altas temperaturas de Tashkent hayan demorado la iniciacin de la tuberizacin, y en consecuencia hayan afectado el periodo de llenado. Este supuesto resalta la necesidad de registrar la informacin meteorolgica durante la campaa de cultivo. Las siguientes figuras muestran el comportamiento de un clon avanzado de madurez temprana, intermedia y tarda proveniente de un ensayo de evaluacin de llenado de tubrculo efectuado en 54 clones avanzados en La Molina (Lima, Per), en el invierno del 2008.
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Datos de identificacin Nombre y cdigo del proyecto Ao Regin CIP Pas Localidad Medioambiente Altitud (msnm) Latitud Longitud
Ensayos de Evaluacin Estndar 310102 2008 Sede Per La Molina, Lima Tierras bajas subtropicales 101 msnm 1200S 7702O
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Entre los clones con mejor rendimiento a los 80 das estuvieron el clon de maduracin temprana CIP-397039.53, como tambin el clon de madurez tarda CIP386768.10. Ocuparon el primero y tercer puesto entre los 54 clones en prueba. No se encontr ninguna diferencia significativa en rendimiento comercial entre ellos, aunque el de madurez temprana mostr un peso comercial ligeramente mayor (137g/planta frente a 115g/planta). El clon de madurez tarda tiene una ventaja sobre el de madurez temprana pues puede esperarse rendimientos ms altos en una cosecha tarda. Esto es importante cuando los agricultores necesitan decidir la fecha de cosecha siguiendo la oferta y la demanda de los mercados. El clon de madurez intermedia CIP-394904.21 estuvo entre los clones con menor rendimiento a lo largo de las tres fechas de cosecha.
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GMD: Gua para el manejo de datos

Principios
1. Vase el documento de la OECD y del CIP acerca de la administracin de la informacin en investigacin. Algunos de los principios presentados all, son descritos en la presente gua. 2. Los datos* deben ser guardados por un perodo que flucta entre los 10 y 15 aos. 3. Los datos deben ser comprensibles sin necesidad de consultar al personal. 4. Los archivos de datos deben ser estandarizados. 5. La forma de guardar y recuperar datos debe ser simple.
Directrices
Como regla de oro, un dataset refleja el trabajo de un equipo sobre cierto tpico. Por ejemplo, un grupo de germoplasma de determinada localidad, de un ensayo especfico con un objetivo particular. Para poder organizar dataset relacionados, se crea grupos de estudio. Por ejemplo, para varias caractersticas de germoplasma en diferentes medioambientes, se crea un dataset especfico. Para dataset muy relacionados, se usa un lenguaje estandarizado. Por ejemplo, todos los dataset de camote usan palabras claves estandarizadas en su documentacin. 1. Los datos de un grupo de archivos deben organizarse alrededor de un ensayo experimental para permitir su contribucin1. 2. Todos los archivos textuales y numricos deben ser guardados en formato ASCII, delimitado por tabs2. 3. Las extensiones de las imgenes deben ser conocidas y sin licencia. (Se recomienda no usar archivos comprimidos, como JPEG, PNG o TIFF.) 4. Los archivos binarios no deben ser utilizados para los datos originales, con la excepcin de los archivos de imgenes y sonido. Asimismo, las extensiones de los archivos publicables deben ser libres y conocidas. Por ejemplo, el formato PDF.
(*) El trmino datos significa organizar y documentar datos. Tambin es la definicin usual para informacin, pero por brevedad se usar el trmino datos. (1) Se puede aplicar las reglas ticas de autora. (2) Los archivos con formatos binarios cerrados o licenciados tienen el riesgo de no ser accesibles, siendo necesario efectuar cambios de formato o extensin, acciones que podran generar errores.
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5. Procurar que todos los contenidos sean tablas o listas simples. 6. Todos los contenidos y ttulos deben estar en espaol. Asimismo deben estar escritos en minsculas. 7. Todos los nombres (de carpetas, archivos y variables) deben usar solo caracteres alfanumricos y subguin (_)3. 8. Los nombres de los archivos deben ser concisos pero descriptivos. Deben tener una longitud entre 50 a 80 caracteres en promedio y un mximo de 250 caracteres. 9. El nombre del archivo debe resumir su contenido, como un titular de noticia. Este ttulo debe responder a las seis preguntas clsicas: quin, cundo, dnde, qu, por qu y cmo. El quin esta compuesto por la institucin patrocinadora y el autor. Las respuestas a las preguntas deben estar separadas por un subguin (_) y las palabras que describen la respuesta deben estar separados por un guin entre ellas (-)4. 10. Los elementos de los apellidos y nombres son conceptualmente uno. 11. Los primeros cuatro elementos (institucin, nombre, ao, objetivo) permiten organizar archivos de forma jerrquica. Esta jerarqua sirve como un pre-arreglo institucional para cualquier dataset. 12. Para ordenar los nombres de los archivos existentes, se debe usar primero los nombres estandarizados, cumpliendo los requisitos mnimos: espaol, as como caracteres alfanumricos, guin (-) y subguin (_). Luego se agregan los nombres del experimento o ensayo, los cuales deben separarse de los nombres estandarizados a travs de un doble subguin (__), para distinguirlos claramente. 13. La estructura para un archivo de dataset est basada en carpetas ordenadas de forma jerrquica y archivos estndares5. (a) Carpeta medidas: contiene datos originales sin ninguna modificacin para referencia. Esta carpeta tiene subcarpetas llamadas: imgenes, tablas, sonidos, etc. (b) Carpeta datos: contiene los datos finales que pueden ser publicados. Esta carpeta tiene subcarpetas llamadas: imgenes, tablas, sonidos y una carpeta adicional llamada metadata. Esta ltima debe contener un archivo llamado dubln-core.txt y access-rights.txt. Con respecto al primer archivo, dubln-
(3) No se permiten espacios en blanco o con otras caractersticas extraas. (4) El patrn es: institucin_apellido_letra inicial del primer nombre_ao en 4 dgitos_ localizacin _ objeto _ objetivo del ensayo o mtodo principal. Por ejemplo: cip_simon_r_2010__global_bioclimate-variables_site-characterization_gis-interpolation. (5) En las computadoras personales, el nivel superior comienza con database; el segundo nivel es dataset; el tercer nivel, la abreviatura de la institucin, seguida del apellido con la letra inicial correspondiente a cada autor, en funcin del usuario dado por ITU del CIP (para garantizar la singularidad); el siguiente nivel son las carpetas con el ao (cuatro dgitos) correspondiente.
123
core.txt, este debe contener informacin bsica del dataset como ttulo, ubicacin del experimento, lder, ao, dueo de la informacin, patrocinador, etc. (c) Carpeta reportes: contiene los reportes y las publicaciones. Los reportes deben ser fcilmente recreables a partir de los datos originales. (d) Dataset: debe estar basado en plantillas generadas por las propias instituciones. 14. Cada dataset tiene dos o tres directorios. 15. El concepto de un estudio est relacionado con un solo dataset. La tabla principal se presenta de una manera sistemtica y organizada. 16. En general, el contenido de la data y la metadata debera responder a las preguntas clsicas: quin, cundo, dnde, qu, por qu y cmo, con el fin de tener informacin ms detallada. Por ejemplo, el protocolo para hallar las diferentes medidas. 17. Una persona debe ser responsable de la calidad del dataset, tanto respecto a su registro como a su almacenamiento en los servidores institucionales. 18. Se debe adherir la informacin bsica bibliogrfica (como el Dublin Core), el diccionario de datos y la informacin mnima requerida por su propia institucin
124
Acerca de los Nmeros CIP6

1. El nmero de germoplasma debe estar precedido por la palabra CIP7/8. 2. Todas las referencias de germoplasma del CIP en cualquier publicacin -con inclusin de datasets, catlogos, anuncios en lnea, etc.-, debe utilizar el nmero CIP asignado. 3. El formato del nmero CIP es: CIPnnnnnn or CIPnnnnnn.nnn para los materiales mejorados. El nmero CIP no debe tener espacios.9/10
(6) Centro Internacional de la Papa, Base de Datos de recursos genticos del CIP. Sistema de numeracin para CIP Number 2003. (7) El propsito del CIP Number es la identificacin nica y el seguimiento del Germoplasma del CIP. (8) Para grupos internos de laboratorio o para los mejoradores es conveniente usar estos cdigos (9) Para ms detalle sobre el espacio en la numeracin, consultar el ltimo documento GADC, Centro Internacional de la Papa, Base de Datos de recursos genticos del CIP. Sistema de numeracin para CIP Number 2003. (10) Se debe debe tener en cuenta que el software de una hoja de clculo a veces puede alterar los nmeros, sobre todo en el caso de los materiales mejorados que conducen a falsos nmeros de CIP. Por lo tanto, se recomienda siempre escribir en la lista los nmeros CIP usando el formato completo
125
Referencias
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130
131
Glosario
Anlisis AEPAIM
Anlisis del efecto principal aditivo e interaccin multiplicativa.
AUDPC
Sigla en ingls; rea bajo la curva de progreso de la enfermedad.
DBBI
Diseo de bloques incompletos balanceados.
DBCA
Diseo de bloques completamente al azar.
DCA
Diseo completamente al azar.
MGE biplot
Mtodo grfico para analizar pruebas multiambientales.
IAF
Infeccin del rea foliar.
Indexacin
Prueba por mtodos serolgicos o por transmisin a plantas indicadoras usando inoculacin mecnica, por vectores o por injerto.
Indexacin por serologa

Deteccin de virus especfico de plantas usando la prueba de ELISA (anlisis enzimtico) o una similar.
PMA
Pruebas multiambientales.
PEE
Prueba de evaluacin estndar.
PVML
Prueba de variedades multilocalizadas
132
Raleo
Extraccin manual de plantas del campo. Tanto la parte area como la subterrnea de la planta infectada de virus deben ser colectadas del campo y destruidas para evitar su emergencia o el regreso de vectores virulferos que infectan las plantas sanas.
133
Anexo 1
Breve descripcin de los diseos de bloques incompletos comnmente usados Diseo de bloques incompletos balanceados (DBIB)
Caractersticas En un diseo de bloques incompletos balanceados, cada bloque no contiene todos los tratamientos, y la precisin de las comparaciones entre los tratamientos depende de si pertenecen al mismo bloque o no. El diseo es llamado balanceado cuando el experimento es planificado en tal forma que cada par de tratamientos se realiza igual nmero de veces. El diseo de bloques balanceados puede usarse cuando se evalan el desempeo en el procesamiento y la coccin de clones de papa usando un panel de evaluadores, en los que cada evaluador prueba o caracteriza un nmero limitado de clones. Cada evaluador representa un bloque y evala una diferente seleccin de clones o variedades de papa. Diseo El organizar un experimento con diseo de bloques incompletos balanceados requiere el uso de los siguientes parmetros:

t = nmero de tratamiento (ej. 15 clones) b = nmero de bloques (ej. 15 degustadores) k = nmero de unidades experimentales dentro de cada bloque teniendo k<t (ej. 10: cada degustador puede evaluar 10 clones) r = nmero de veces que cada tratamiento aparece teniendo r <b = nmero de bloques en los cuales el tratamiento i y el tratamiento j aparecen juntos ( es el mismo en todos los pares de tratamientos)
Los parmetros tienen que ser escogidos cuidadosamente, de tal manera que bk = tr y (t-1) = r(k-1). Todos los parmetros deben ser nmero enteros. Cochran y Cox (1957), proporcionan tablas que asignan valores convenientes a los parmetros. Por ejemplo, si un evaluador es capaz de probar hasta ocho clones (k=8), la prueba de 15 clones de papa (t=15) por 15 evaluadores (b=15) puede ser arreglada en un diseo de bloque incompleto balanceado. El diseo proporcionar ocho
134
repeticiones (r=8) para cada clon, y las mismas parejas de combinaciones de clones sern probadas por cuatro diferentes evaluadores (=4).
Arreglo al azar
El estar ligado el diseo a muchas restricciones, es apropiado usar el diseo generado por software o tablas pre establecidas (Cochran y Cox, 1959). Las hojas de calificacin con selecciones apropiadas de muestra que respetan el diseo pueden ser preparadas por adelantado, como se muestra abajo:
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Diseo de parcela dividida

Caractersticas La parcela dividida es una clase especial de diseo de bloque incompleto. Su principio fundamental es que el ntegro de las parcelas sujetas a uno o ms tratamientos (factor A) estn divididas en subparcelas, a las cuales se aplica uno o ms tratamientos adicionales (factor B). As, cada parcela ntegra puede ser considerada como un bloque para tratamientos de subparcelas (factor B), pero solo cuando se trata un bloque incompleto como si fuera el tratamiento del conjunto completo (factor A+B). Este diseo puede ser usado cuando se va a incorporar un factor adicional (tal como densidad de siembra o uso de fertilizante) en un experimento para incrementar sus alcances.
Arreglo al azar
El arreglo al azar es un proceso de dos etapas. Primero, los tratamientos del factor A son dispuestos al azar en toda la parcela; luego los tratamientos del factor B son ubicados al azar dentro de cada subparcela. El arreglo al azar en cada etapa puede hacerse con una tabla de nmeros de azar o el uso de MS Excel.
136
Diseo ltice parcialmente balanceado Caractersticas

El diseo ltice parcialmente balanceado se recomienda cuando el nmero de tratamientos es muy grande o cuando las unidades experimentales son muy heterogneas. Los diseos ltice son diseos de bloques incompletos. Cada bloque no contiene todos los tratamientos, de tal manera que la precisin de la comparacin entre tratamientos difiere, dependiendo de si el tratamiento pertenece al mismo bloque o no. El diseo ltice (llamado tambin ltice doble o ltice al cuadrado) es un diseo parcialmente balanceado, en el cual el nmero de tratamiento es un cuadrado perfecto (9, 16, 25, 36, 49, 64, 81, 121, etc.) y el nmero de tratamiento dentro de cada bloque es igual a la raz cuadrada del nmero total de tratamientos. El diseo necesita dos repeticiones o mltiples de dos. Las unidades experimentales dentro de cada bloque incompleto deben ser tan homogneas como sea posible. Arreglo al azar Los tratamientos son arreglados en la forma de un cuadrado (paso 1). Los tratamientos se agrupan por filas y luego por columnas. El agrupamiento por filas es conocido generalmente como agrupamiento X. Los grupos de los tratamientos en un surco forman un bloque. Todas las filas (bloques) constituyen una repeticin (paso 2). El agrupamiento en columnas es conocido generalmente como agrupamiento Y. El grupo de tratamientos en una columna constituyen otro bloque. Esta agrupamiento Y forma la otra repeticin (paso 3). El grupo X y el grupo Y aseguran que los tratamientos que se realizan juntos en el mismo bloque una vez, no aparezcan nuevamente juntos en el mismo bloque. Para cada repeticin, el arreglo al azar es un proceso de tres etapas: los bloques son dispuestos al azar, cada tratamiento es dispuesto al azar dentro de cada bloque (paso 4) y, finalmente, un tratamiento es asignado al azar a cada bloque.
137
138
139
Anexo 2
Plantillas para los libros de campo
Este documento hace referencia a una serie de hojas (desarrollado con Excel) para registrar la informacin y los datos del campo. Las hojas de datos individuales se enumeran a continuacin. A. Hoja Minimo: representa la informacin general del experimento, lder, lugar, etc., incluye informacin del Dublin core. Dublin core es un modelo de metadatos elaborado y auspiciado por la DCMI (Dublin Core Metadata Initiative), una organizacin dedicada a fomentar la adopcin extensa de los estndares interoperables de los metadatos y a promover el desarrollo de los vocabularios especializados de metadatos para describir recursos para permitir sistemas ms inteligentes del descubrimiento del recurso. B. Hoja de Lista_materiales: Lista de materiales (variedades, clones, etc.) C. Hoja de Monitoreo_plagas: Incluye el monitoreo de las plagas y enfermedades para mosca minadora, afidos, etc. D. Hoja de Datos_clima: datos de clima y temperatura/ humedad en almacenamiento o campo. E. Hoja de List_Var: Permite seleccionar las variables que se va a utilizar en campo, se puede incluir mas variables en el caso de que no estuviera registrada. Luego se debe hacer click en generar plantilla y automticamente se genera una hoja adicional con las variables elegidas. F. Plantilla_Evaluaciones: Permite realizar la evaluacin para el rendimiento del tubrculo y tizn tardo. La plantilla de resistencia a Tizn tardo permite realizar los clculos de AUDPC y AUDPC relativo. G. Plantilla_Evaluaciones_Post-cosecha: Se encuentra variables de materia seca, gravedad especifica, cualidades de fritura y coccin, as como capacidad de almacenamiento en los clones H. Evaluaciones_MB: Evaluaciones de Resistencia a Marchitez bacteriana para 10 plantas (Exposicin intencional) y evaluaciones en la cosecha. I. Evaluaciones_MM: Evaluaciones de Resistencia a Mosca Minadora (MM) (Exposicin intencional). J. Evaluaciones_Virus_PVX_PVY: Evaluacin de la resistencia a virus (Exposicin intencional) y las evaluaciones a PVX y PVY (Invernadero)
140
Las imgenes de las plantillas se muestran a continuacin: A. Hoja Minimo:
141
B. Hoja de Lista_materiales:
142
C. Hoja de Monitoreo_plagas:
D. Hoja de trabajo de datos del clima: Datos del clima en el campo y de temperatura / humedad en el rea de almacenaje.
143
E. Hoja List_Var:
144
F. Plantilla_Evaluaciones:
145
G. Evaluaciones Post-cosecha:
146
H. Evaluaciones_MB:
147
I. Evaluaciones_MM:
148
J. Evaluaciones virus_PVX_PVY:
149
Anexo 3
Hoja de Calificacin de Papas Fritas
150
Anexo 4
Hoja de Calificacin para papa sancochada
151
Anexo 5
Sntomas de virus en papa
Sntomas de virus Enrollamiento de hojas de la base (rgidas y correosas) Enrollamiento + clorosis Clorosis entre las nervaduras (hojas superiores) en S. tuberosum ssp. andigena Mosaico (severo / benigno) Rugosidad (asociada siempre con mosaico) Necrosis (hojas con manchas necrticas y/o tallos con estras) Enanismo Moteado (benigno o severo) Aucuba o clico (marcas amarillas brillantes en forma de V, anillos, manchas, moteado). Amarillamiento brillante de nervaduras, con excepcin de la nervadura central.
Abr. E E+Cl Cl M R N En Mt Ca AB
Virus PLRV PLRV PLRV PVY, PVX, PVS, PVA, PLRV PVY, PVA PVX, PVY PVY, PLRV APMV, APLV PMTV, AMV, TRSV, PBRSV Amarillamiento de nervaduras de la papa

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Gua para Colaboradores Internacionales

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PROCEDIMIENTOS PARA PRUEBAS DE EVALUACIN ESTNDAR DE CLONES AVANZADOS DE PAPA

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PROCEDIMIENTOS PARA PRUEBAS DE EVALUACIN ESTNDAR DE CLONES AVANZADOS DE PAPA

PROCEDIMIENTOS PARA PRUEBAS DE EVALUACIN ESTNDAR DE CLONES AVANZADOS DE PAPA

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133 139 149 150 151

PROCEDIMIENTOS PARA PRUEBAS DE EVALUACIN ESTNDAR DE CLONES AVANZADOS DE PAPA

PROCEDIMIENTOS PARA PRUEBAS DE EVALUACIN ESTNDAR DE CLONES AVANZADOS DE PAPA

Base de datos del CIP

Latinoamrica y el Caribe (LAC)

frica Sub-Sahara (SSA)

PROCEDIMIENTOS PARA PRUEBAS DE EVALUACIN ESTNDAR DE CLONES AVANZADOS DE PAPA

Asia Sur, Oeste y Central (SWCA)

Este y Sudeste Asia & El Pacfico (ESEAP)

PROCEDIMIENTOS PARA PRUEBAS DE EVALUACIN ESTNDAR DE CLONES AVANZADOS DE PAPA

PROCEDIMIENTOS PARA PRUEBAS DE EVALUACIN ESTNDAR DE CLONES AVANZADOS DE PAPA

Introduccin Gua para Cooperadores Internacionales (GCI)

PROCEDIMIENTOS PARA PRUEBAS DE EVALUACIN ESTNDAR DE CLONES AVANZADOS DE PAPA

PROCEDIMIENTOS PARA PRUEBAS DE EVALUACIN ESTNDAR DE CLONES AVANZADOS DE PAPA

Planicacin de las pruebas de evaluacin

Conduccin de pruebas de evaluacin Lugar(es)

Semilla de clones de papa y variedades testigo Libreta de campo, mapa y lapicero

PROCEDIMIENTOS PARA PRUEBAS DE EVALUACIN ESTNDAR DE CLONES AVANZADOS DE PAPA

Ubicacin de la parcela de multiplicacin

Materiales de la parcela de multiplicacin

PROCEDIMIENTOS PARA PRUEBAS DE EVALUACIN ESTNDAR DE CLONES AVANZADOS DE PAPA

Manejo de campo de la parcela de multiplicacin

PROCEDIMIENTOS PARA PRUEBAS DE EVALUACIN ESTNDAR DE CLONES AVANZADOS DE PAPA

Diseo de bloques completamente al azar (DBCA)

Diseo completamente al azar (DCA)

PROCEDIMIENTOS PARA PRUEBAS DE EVALUACIN ESTNDAR DE CLONES AVANZADOS DE PAPA

Pruebas de variedad multilocalizadas (PVML)

PROCEDIMIENTOS PARA PRUEBAS DE EVALUACIN ESTNDAR DE CLONES AVANZADOS DE PAPA

Registro y anlisis de datos Registro de datos

PROCEDIMIENTOS PARA PRUEBAS DE EVALUACIN ESTNDAR DE CLONES AVANZADOS DE PAPA

(1) Actualmente en revisin.

PROCEDIMIENTOS PARA PRUEBAS DE EVALUACIN ESTNDAR DE CLONES AVANZADOS DE PAPA

PROCEDIMIENTOS PARA PRUEBAS DE EVALUACIN ESTNDAR DE CLONES AVANZADOS DE PAPA

Evaluacin del rendimiento de tubrculos de clones de papa

Materiales: clones, variedades testigo, semilla

PROCEDIMIENTOS PARA PRUEBAS DE EVALUACIN ESTNDAR DE CLONES AVANZADOS DE PAPA

PROCEDIMIENTOS PARA PRUEBAS DE EVALUACIN ESTNDAR DE CLONES AVANZADOS DE PAPA

PROCEDIMIENTOS PARA PRUEBAS DE EVALUACIN ESTNDAR DE CLONES AVANZADOS DE PAPA

Registro y anlisis de datos Registro de datos

Interpretacin de datos Validacin del experimento

PROCEDIMIENTOS PARA PRUEBAS DE EVALUACIN ESTNDAR DE CLONES AVANZADOS DE PAPA

Evaluacin de la calidad de post cosecha de papa y su almacenamiento

Evaluacin de post cosecha

PROCEDIMIENTOS PARA PRUEBAS DE EVALUACIN ESTNDAR DE CLONES AVANZADOS DE PAPA

Materiales: clones y variedades testigo

Cosecha de campo (Prueba de rendimiento) Muestra de 50 tubrculos/Repeticin

Materia seca y/o gravedad especfica 5-10 tubrculos (0.5-1.0 kg)

2 semanas Hojuela / papa frita 3-5 tubrculos

Prueba de coccin 3-6 tubrculos

Almacenamiento a temperatura ambiente y fra 10 tubrculos

Almacenamiento en oscuridad 5 tubrculos

Cada 15 das 2 meses Evaluacin de hojuelas

PROCEDIMIENTOS PARA PRUEBAS DE EVALUACIN ESTNDAR DE CLONES AVANZADOS DE PAPA

Evaluacin del contenido slido de los tubrculos Materiales