Bioactivos de Uva: Uso y Actividad Antioxidante

Camila de Martini Bonesi

Universidade de Caxias do Sul UCS, Caxias do Sul RS, Brasil

Morgane Passini Franzoni

Vinotage Cosmticos Ltda., Garibaldi RS, Brasil

Cludia Alberici Stefenon

Laboratrio Randon Ltda., Caxias do Sul RS, Brasil

Valeria Weiss Angeli

Universidade de Caxias do Sul UCS, Caxias do Sul RS, Brasil

Benecios para la salud, como la actividad antioxidante, se han atribuido a los compuestos fenlicos presentes en la uva (Vitis vinifera), por lo que sus compuestos bioactivos tienen benecios similares. Este artculo presenta la composicin fenlica y la actividad antioxidante de la uva, bioactivos utilizados como materia prima en la industria cosmtica. Vrios efeitos bencos para a sade, como a atividade antioxidante, tm sido atribudos aos compostos fenlicos presentes na uva (Vitis vinifera); com isso, seus bioativos apresentam benefcios similares. Neste artigo, so apresentadas a composio fenlica e a atividade antioxidante dos bioativos da uva utilizados como matria-prima na indstria cosmtica. Several health bene ts such as antioxidant activity, have been attributed to phenolic compounds present in grape (Vitis vinifera), thus their bioactive compounds have similar benets. This article presents the phenolic composition and antioxidant activity of grapes bioactive used as raw material in the cosmetic industry.

nnumerables son los benecio a la salud humana asociados al consumo de frutas que puedan en su composicin tener compuestos fenlicos, capaces de actuar como queladores de iones metlicos y/o, secuestradores de especies reactivas, lo que justica la actividad antioxidante de esos compuestos.1 Entre las frutas ricas en compuestos fenlicos se destaca la uva, que puede ser consumida in natura o utilizada como materia prima en la fabricacin de vinos, jugos y jaleas.2 En un estudio, se determin el potencial antioxidante de las frutas, en el cual a uva present la mayor actividad antioxidante cuando se compar a la naranja, a la manzana y a la fresa.3 Muchas investigaciones han sido realizadas para la evaluacin de los efectos antioxidantes de los compuestos fenlicos presentes en el vino, mientras que, algunos autores vericaron, en jugos de uva, una actividad antioxidante similar a la encontrada en vinos tintos.4,5 El proceso de fabricacin del vino genera una cantidad de subproductos
Vol. 2, mayo-junio 2011

(semilla, cscara, bagazo) que corresponde al 20% del peso inicial de la uva, del cual las semillas representan en torno de 15%. A partir de las semillas, de las cscaras y del bagazo pueden ser extrados/ preparados: el aceite de semilla de uva, el extracto de semilla de uva, la leche de uva y el extracto de vino, el cual es obtenido despus de la preparacin del vino, que pueden ser procesados y reutilizados como materias primas por las industrias farmacutica y cosmtica.6 El extracto de semilla de uva es un constituyente natural de la uva y con-

tiene lpidos, protenas, carbohidratos y polifenoles. El aceite extrado de las semillas de uva contiene los cidos palmtico, palmitoleico, esterico, oleico y linoleico, as como los cidos alfa-linoleicos, icosanoico y docosanoico, suministrando a ese producto alta actividad hidratante y emoliente.6 Tanto el extracto como el aceite de semilla de uva de la especie Vitis vinfera poseen bioavonoides, un complejo conocido como oligmeros de procianidinas (OPC) que contribuye para la amplia utilizacin de esos compuestos en la industria cosmtica, siendo encontrados en cremas hidratantes, shampoos, aceites de bao, y jabones entre otros productos. Las procianidinas son polmeros de alto peso molecular compuestos de dmeros o trmeros de (+)-catequina y (-)-epicatequina (Figura 1).7 Esa familia de molculas polifenlicas es capaz de combatir los radicales libres que contribuyen a la formacin de las lneas de expresin, manchas y otras seales del tiempo. Esa actividad antioxidante est relacionada a la capacidad donadora de

Figura 1. Estructura de la epicatequina, catequina y procianidina12

Epicatequina

Catequina

Procianidina

www.cosmeticsonline.la

Cosmticos & Tecnologa Latinoamrica/25

electrones de esa substancia a los radicales libres, neutralizndolos e inactivndolos.8,9 La actividad antioxidante de las procianidinas es 20 veces ms potente que la del cido ascrbico y 50 veces ms potente que la actividad del tocoferol.7 Las procianidinas pueden proteger y reestructurar a la piel, estimulando la formacin de las bras de colgeno y de elastina, previniendo la degradacin por medio de la inactivacin de los radicales libres formados.7,10,11 El envejecimiento celular es provocado por factores endgenos (cadena respiratoria, mala alimentacin, fagocitosis) y, o, factores exgenos (contaminacin, radiacin solar, entre otros), que causan manchas en la piel, enfermedades dermatolgicas, cncer y perjudican el aspecto de las bras capilares.13,14 Durante ese proceso, ocurre la disminucin de la solubilidad y la alteracin de las propiedades fsicas del colgeno. Existe acumulacin en el nmero de ligaciones covalentes cruzadas, provocando aumento en la rigidez y en la prdida de la elasticidad del tejido conjuntivo.11 Adems de eso, la elastina muestra disminucin progresiva en su contenido de lisina y de cido glutamnico, acarreando la prdida de la elasticidad cutnea. Tambin ocurre disminucin en la produccin de elastina debido a la reduccin de la actividad metablica y del nmero de broblastos.11 Los antioxidantes, presentes en los bioactivos de la uva (polifenoles), tienen un papel vital en este proceso, ya que auxilian en la minimizacin de esos daos, protegiendo a la piel y mantenindola saludable a lo largo del tiempo. Estudios demostraron que los polifenoles de la uva actan de forma expresiva, inhibiendo los daos oxidantes causados por la radiacin solar, y previniendo, de esa forma, el envejecimiento precoz y el cncer de piel causados principalmente por la exposicin exagerada al Sol.11,15 Tambin existe otra preparacin proveniente de subproductos de la uva, la leche de uvas, que consiste en una emulsin conteniendo extracto de semilla de uva y aceite de semilla de uva de Vitis vinfera y, adems de eso, lpidos, protenas y azcares de la uva. Ese producto combina los efectos beneciosos del extracto con el aceite de semilla de uva, pudiendo presentar actividad antioxidante, y a su vez, ser incorporado a cosmticos.16 Ya el extracto de vino no puede ser considerado como subproducto, porque es obtenido despus de la elaboracin del vino. Por medio del vino francs (Vitis vinfera), se retira el alcohol y se concentra el producto garantizando el contenido de compuestos fenlicos.17 El extracto de vino contiene los cidos mlico y tartrico, sales minerales y compuestos fenlicos, como cidos, fenoles, catequina y tirosol. Estudios demuestran la capacidad de esa materia prima de combatir el envejecimiento capilar, regenerando las hebras y manteniendo el color natural o articial de los cabellos por ms tiempo, siendo utilizada en shampoos, mscaras capilares, acondicionadores, entre otras formulaciones para el cabello.17 Existe grande apelo para productos cosmticos con antioxidantes y, para eso, deben ser realizadas pruebas para comprobar la actividad propuesta por esos productos. Las pruebas para la evaluacin de la actividad antioxidante tienen como objetivo detectar productos o alteraciones siolgicas
26/Cosmticos & Tecnologa Latinoamrica

provocadas por estrs oxidante. Diferentes metodologas han sido desarrolladas para obtener una medicin, cualitativa o cuantitativa, de la capacidad antioxidante de substancias, con base en pruebas qumicos (sin cultivos celulares/in vitro) o utilizando-se pruebas biolgicos (cultivos celulares/in vivo).1 De entre los pruebas in vitro existentes, la medida de capacidad de barredura del radical DPPH (1,1-difenil-2-picrilhidrazil) viene siendo bastante utilizada.1,18 Los ensayos in vitro generalmente son pruebas rpidas, sensibles, econmicas, reproducibles, de fcil ejecucin y presentan resultados conables en la identicacin de la actividad biolgica.18,19 En este contexto, este trabajo tiene por objetivo determinar y cuanticar compuestos fenlicos presentes en el extracto y en el aceite de semilla de uva, en la leche de uva y en el extracto de vino, as como evaluar la actividad antioxidante de esas materias primas.

Materiales y Mtodos Muestras Las muestras utilizadas para el desarrollo de este trabajo fueron: extracto de semilla de uva (ESU) (Vital Especialidades, Brasil), aceite de semilla de uva (OSU) (Lipo, Brasil), extracto de vino francs (EV) (Brasquim, Brasil) y leche de uvas verdes y rojas (LUV) (Provital, Brasil). Reactivos DPPH adquirido de la Sigma-Aldrich (Alemania), metanol PA (Vetec, Brasil), etanol PA (Synth, Brasil), acetona (Vetec, Brasil), cido clorhdrico (Vetec, Brasil), cido cafeico (Merck, Alemania), catequina (Merck, Sigma-Aldrich, Alemania) y amortiguador acetato de sodio (Vetec, Brasil). Extraccin de compuestos fenlicos Para la determinacin de compuestos fenlicos y de la actividad antioxidante in vitro en las muestras de aceite de semilla de uva y leche de uva, ellas fueron sometidas a un tratamiento previo, lo que hizo posible la separacin de los componentes. De esa forma, se pesaron 20 g de cada muestra, a las cuales fueron adicionados 10 ml de acetona, 20 ml de metanol/agua (60:40, v/v) y 1 ml de cido clorhdrico, se agit en vrtice por 10 minutos y, enseguida, se centrifug la mezcla por 10 minutos a 5366 g (aceleracin de la gravedad). La fase metanlica fue separada y se repiti la extraccin dos veces ms, y para los anlisis fue utilizada esa misma fase.20,21 Para las muestras de extracto de semilla de uva y extracto de vino no fue necesaria la realizacin de este tratamiento. Para vericar si la extraccin de los compuestos fenlicos en las muestras fue efectiva, se realiz esa misma metodologa con el aceite de semilla de uva y la leche de uva adicionada de 0,02 g de estndar catequina. Determinacin de compuestos fenlicos Polifenoles totales (PT) y hidroxicinamatos totales (HCT) fueron cuanticados en los bioactivos de la uva por medio de la medida de las absorbancias a 280 nm y 320 nm (espectrowww.cosmeticsonline.la Vol. 2, mayo-junio 2011

Tabla 1. Compuestos fenlicos en el aceite de semilla de uva y leche de uva con y sin adicin del estndar catequina
PT DP (g/l de catequina) 4,860,015 4,890,014 5,590,004 5,610,006 FT DP (g/l de catequina) 0,8560,004 0,8580,002 0,6060,000 0,6030,003 HCT DP (g/l de cido cafeico) 0,3090,001 0,3080,001 0,2640,004 0,2650,003

Anlisis Estadstico Los datos fueron expresados en promedio desviacinestndar y sometidos al anlisis estadstico especco utilizando el programa SPS 16.0 for Windows. Resultados y Discusin Extraccin de compuestos fenlicos Para la identicacin y el aislamiento de compuestos bioactivos en fuentes naturales (como frutas, semillas y aceites) es necesaria la realizacin de la extraccin con solventes de polaridades diferentes,26 por lo tanto los solventes orgnicos son frecuentemente utilizados. El rendimiento de la extraccin y la determinacin de la actividad antioxidante de los extractos dependen del tipo de solvente utilizado, de los compuestos antioxidantes presentes en los bioactivos y de la polaridad de los compuestos.26,27 La extraccin de substancias antioxidantes con solventes orgnicos puede ser eciente para algunos casos, sin embargo se torna agresiva al ambiente debido a los residuos generados durante el proceso. Tambin exige control riguroso de factores, como la polaridad del solvente utilizado, el tiempo y la temperatura de extraccin, que, si no son controlados, pueden generar prdida o destruicin de los compuestos antioxidantes. La eficacia del mtodo de extraccin de los compuestos fenlicos a partir del aceite y de la leche de uva fue probada por medio de la adicin de cantidad conocida de estndar catequina a esos compuestos. Las mezclas formadas fueron evaluadas por la metodologa propuesta y se obtuvo recuperacin total de la catequina. En la Tabla 1, se puede verificar la recuperacin de 0,033 g de catequina en el bioactivo aceite de semilla de uva, y de 0,023 g en la leche de uva. Determinacin de compuestos fenlicos Los bioactivos de la uva tambin son fuentes de varias combinaciones de compuestos fenlicos que despiertan mucho inters, debido a sus propiedades antioxidantes y a sus efectos beneciosos para la salud humana.18,28
-Extracto de semilla de uva: la Figura 2 expresa la concentracin de compuestos fenlicos en el extracto de semilla de uva. Se puede observar que los compuestos fenlicos ms encontrados en el extracto son los polifenoles totales, presentando 5,3300,002 g/l de catequina. El extracto tambin present avonoides totales (0,3600,010 g/l de catequina) y hidroxicinamatos (0,0670,000 g/l de cido cafeico). Concentraciones similares a las encontradas en nuestro estudio fueron obtenidas en un reciente trabajo, en el cual fue realizada la caracterizacin qumica de extractos de semilla y de cscara de uva, y se obtuvieron 4 g/l de compuestos fenlicos expresados en cido glico.29 Otro estudio realizado con el extracto de semilla de uva obtuvo cerca de 1 a 4 g/l de cido glico.30 Esa similitud entre los resultados comprueba la presencia de esos compuestos fenlicos en el extracto de semilla de uva. En la literatura, existen innumerables estudios relacionados al extracto de semilla de uva que conrman la presencia
Cosmticos & Tecnologa Latinoamrica/27

Bioactivos OSU OSU + C LUV LUV + C

DP = desviacin-estndar FT = avonoides totales OSU = aceite de semilla de uva LUV = leche de uva

PT = polifenoles totales HCT = hidroxicinamatos totales C = catequina

fotmetro Shimadzu UV-1700, Japn), respectivamente. Los resultados de polifenoles totales fueron expresados en g/l de catequina y los de hidroxicinamatos en g/l de cido cafeico, basados en una curva-estndar de las respectivas substancias. Los avonoides totales (FT) fueron calculados utilizando la siguiente frmula:
Flavonoides totales = [A280 4] (0,66) x [A320 1,4]22

y expresados en g/l de catequina. Para determinar la cantidad total de oligmeros de procianidinas (OPC) y antocianinas totales (AT) en los bioactivos de la uva, se realiz inicialmente a hidrlisis cida. Mientras que, para el aceite de semilla de uva y la leche de uva, se hizo este procedimiento despus del tratamiento previo descrito arriba, y, en seguida, se midi la absorbancia a 520 nm en espectrofotmetro (Shimadzu UV-1700) y los resultados fueron expresados en g/l de antocianinas y oligmeros de procianidinas.23 Todos los anlisis fueron realizados por triplicado.

Determinacin de la actividad antioxidante in vitro Para determinar la capacidad de barredura del radical libre estable (DPPH) en bioactivos de la uva, fueron misturados 200 l de las muestras con 800 l de solucin-amortiguador de acetato de sodio 100 mM, pH 7,0. A esa mezcla fueron adicionados 1000 l de la solucin etanlica de DPPH (250 M) para el extracto de semilla de uva y para el extracto de vino, o solucin metanlica de DPPH (250 M) para el producto de extraccin derivado del aceite de semilla de uva y de la leche de uva, y los tubos fueron mantenidos durante 20 minutos al abrigo de la luz. La medida de la absorbancia fue realizada en espectrofotmetro UV visible a 517 nm. Para el blanco, las muestras fueron sustituidas por agua destilada. Fueron realizadas tres repeticiones para cada concentracin (100%, 50%, 25%, 10%, 5% y 2,5%) y los resultados fueron expresados en IC50 (concentracin porcentaje capaz de reducir 50% del radical libre DPPH).24,25 Para hacer la comparacin entre los resultados, se utiliz como estndar el cido ascrbico y la catequina, que fueron sometidos a la misma metodologa descrita anteriormente.
Vol. 2, mayo-junio 2011

www.cosmeticsonline.la

Figura 2. Compuestos fenlicos en el extracto de semilla de uva

Extracto de semilla de uva
6 5 4 3 2 1 0 PT FT HCT

Figura 3. Compuestos fenlicos en el aceite de semilla de uva

Aceite de semilla de uva
6

a*
Compuestos fenlicos (g/l)

a*
5 4 3 2 1 0 PT FT HCT AT OPC

Compuestos fenlicos (g/l)

b c d d

c
AT

c
OPC

PT FT HCT AT OPC PT = polifenoles totales (g/l de catequina) FT = avonoides totales (g/l de catequina) HCT = hidroxicinamatos totales (g/l de cido cafeico) AT = antocianinas totales (g/l) OPC = oligmeros de procianidinas (g/l) *Letras distintas dieren entre s signicativamente por la post-prueba de Tukey (para p 0,001)

PT = polifenoles totales (g/l de catequina) FT = avonoides totales (g/l de catequina) HCT = hidroxicinamatos totales (g/l de cido cafeico) AT = antocianinas totales (g/l) OPC = oligmeros de procianidinas (g/l) *Letras distintas dieren entre s signicativamente por la post-prueba de Tukey (para p 0,001)

de alto contenido de compuestos fenlicos en esta materia prima.31,32 Los principales compuestos fenlicos encontrados en extracto de semilla de uva son: catequina, epicatequina, epicatequina-3-El-galato y cido cafeico.33 En un estudio realizado con extracto de semilla de uva Vitis vinifera provenientes del sur de Grecia, fue obtenida una concentracin similar a la de las muestras probadas en este trabajo, en relacin a los hidroxicinamatos, 0,083 g/l de cido cafeico.32 Con eso, podemos conrmar la presencia de hidroxicinamatos en el extracto de semilla de uva. Adems de los compuestos fenlicos citados anteriormente, el extracto present 0,0910,002 g/l de antocianinas totales y 0,0980,003 g/l de oligmeros de procianidinas. El estudio realiz la obtencin del extracto de semilla de uva por medio de ultrasonido.34 Con la ayuda de este equipo y del lquido extractor (etanol), se obtuvieron cerca de 2 g/l de antocianinas. Esa diferencia puede haber ocurrido debido a los diferentes mtodos utilizados para obtener el extracto de semilla de uva, siendo que el extracto utilizado en este trabajo fue obtenido por medio de la extraccin en frio, con semillas de uva molidas, y fueron utilizados, como solventes, agua y propilenoglicol. En otro estudio, tambin fue realizada la obtencin del extracto de semillas de uva usando etanol como lquido extractor y, enseguida, se realiz la cuanticacin de oligmeros de procianidinas por medio de cromatografa lquida de alta eciencia (CLAE), obtenindose 2,83 g/l de oligmeros de procianidinas, un resultado elevado cuando se compara al que fue obtenido en este trabajo, debido a diferentes metodologas de obtencin del extracto de semilla de uva.35 En los artculos anteriores, adems de que la obtencin del extracto de semilla de uva haya sido realizada con metodologas diferenciadas, no se puede descartar la posibilidad de que los extractos obtenidos puedan presentar esa diferencia por ser provenientes de uvas de la misma especie (Vitis vinifera), sin
28/Cosmticos & Tecnologa Latinoamrica

embargo cultivadas en solos, climas y variedades diferentes, y que eso puede inuenciar tanto a la composicin fenlica como a la mineral. -Aceite de semilla de uva: la Figura 3 presenta las concentraciones de los compuestos fenlicos en el aceite de semilla de uva, siendo los ms abundantes los polifenoles totales, con 4,8600,015 g/l de catequina, seguidos por los avonoides totales, con 0,8560,004 g/l de catequina, y por los hidroxicinamatos, con 0,3090,001 g/l de cido cafeico. Adems de esos compuestos, presentaron 0,0880,000 g/l de antocianinas totales y 0,1440,000 g/l de oligmeros de procianidinas. Existen innumerables artculos sobre aceite de semilla de uva, presentes en este bioactivo, obtenindose 0,74 g/l de catequina y 0,0169 g/l de cido cafeico.6 Esos resultados demuestran que el proceso de extraccin es importante en lo que respecta al contenido extrado. Con eso, se puede decir que el mtodo de extraccin utilizado en este trabajo fue ecaz, habiendo posibilitado la extraccin de un contenido ms elevado de compuestos fenlicos que el otro estudio, realizado en el 2009, en el cual fueron utilizados diferentes solventes para la extraccin, el metanol: cido clorhdrico 0,1% (v/v) y el etanol: agua (3:1 v/v).6 -Leche de uva: la Figura 4 demuestra la cantidad de compuestos fenlicos presentes en la leche de uva. El compuesto fenlico que present el mayor contenido fue el de polifenoles totales, con cerca de 5,5900,004 g/l de catequina, seguido por los avonoides totales, con 0,6060,000 g/l de catequina, y por los hidroxicinamatos, con 0,2640,004 g/l de cido cafeico. Adems de eso, present 0,0970,001 g/l de antocianinas y 0,1870,001 g/l de oligmeros de procianidinas. Hasta el momento, la bibliografa a es bastante escasa sobre la leche de uva, siendo este el primer trabajo realizado, en las condiciones probadas, para esa materia prima. La leche de uva
www.cosmeticsonline.la Vol. 2, mayo-junio 2011

Figura 4. Compuestos fenlicos en la leche de uva

Leche de uva
6

Figura 5. Compuestos fenlicos en el extracto de vino

Extracto de vino
6

a* Compuestos fenlicos (g/l)

Compuestos fenlicos (g/l)

5 4 3 2 1 0 PT FT HCT AT OPC

5 4 3 2 1 0

a*

b c
PT FT HCT

d
AT

d
OPC

PT = polifenoles totales (g/l de catequina) FT = avonoides totales (g/l de catequina) HCT = hidroxicinamatos totales (g/l de cido cafeico) AT = antocianinas totales (g/l) OPC = oligmeros de procianidinas (g/l) *Letras distintas dieren entre s signicativamente por la post-prueba de Tukey (para p 0,001)

PT = polifenoles totales (g/l de catequina) FT = avonoides totales (g/l de catequina) HCT = hidroxicinamatos totales (g/l de cido cafeico) AT = antocianinas totales (g/l) OPC = oligmeros de procianidinas (g/l) *Letras distintas dieren entre s signicativamente por la post-prueba de Tukey (para p 0,001)

presenta, en su composicin, tanto el aceite como el extracto de semilla de uva, y puede decirse que los resultados obtenidos fueron satisfactorios, comparndolos a los resultados obtenidos en el aceite y en el extracto. La leche de uva puede ser ampliamente utilizada en el rea cosmtica por tener agregadas, en la misma base, caractersticas del extracto y del aceite. Adems, constituye un sistema estable (emulsin), que puede ser observado debido a la dicultad de desarrollo de un mtodo de extraccin capaz de romper/ desorganizar ese sistema. Ese sistema emulsionado tambin podr garantizar/proteger el aceite de un proceso de oxidacin, principalmente si ese sistema es una emulsin del tipo El/A, donde el aceite estar englobado por una fase acuosa, por lo tanto, si es comparado al aceite puro, ese aceite podr ser ms estable. Para la industria cosmtica, el uso de este tipo de materia prima es viable, ya que la leche de uva ofrece fcil incorporacin de diferentes bases cosmticas. La emulsin se presenta ms estable, pudiendo adems facilitar mayor hidratacin y penetracin de los principio activos en la piel.11 -Extracto de vino: la Figura 5 expresa la cantidad de compuestos fenlicos presentes en el extracto de vino, polifenoles totales con 4,6600,005 g/l de catequina. Adems de eso, el extracto present avonoides totales de 0,9620,002 g/l de catequina y de 0,2060,003 g/l de hidroxicinamatos expresados en cido cafeico. Adems de esos compuestos, se obtuvieron 0,0060,000 g/l de antocianinas y 0,0400,002 g/l de oligmeros de procianidinas. El extracto de vino contiene gran cantidad de compuestos fenlicos, especialmente polifenoles, avonoides y cidos hidroxibenzoicos y hidroxicinmicos.36 En un estudio realizado con extracto de vino fue posible determinar, por medio de CLAE, 0,79 g/l de compuestos fenlicos, 0,0054 g/l de cido cafeico, 0,066 g/l de catequina y 0,084 g/l de antocianinas
Vol. 2, mayo-junio 2011

totales, habiendo sido demostrados valores menores del que los de nuestro estudio, lo que puede ser justicado por las seis concentraciones que fueron realizadas con el extracto de vino utilizado en este trabajo.37 De acuerdo con el laudo del proveedor, la cantidad de hidroxicinamatos tiene de ser mayor del que 0,12 g/l de cido cafeico, lo que conere con lo que fue encontrado en nuestro trabajo, siendo de 0,206 g/l.17 Con la observacin de la Tabla 2, se puede concluir que, en relacin a los polifenoles totales, la leche de uva present mayor contenido de catequina (5,5900,004 g/l). El extracto de vino present la mayor concentracin de flavonoides totales (0,9620,002 g/l de catequina), para los hidroxicinamatos; el aceite de semilla de uva present la mayor cantidad (0,3090,001 g/l de cido cafeico). Adems, la materia prima que present el mayor contenido de antocianinas y oligmeros de procianidinas fue la leche de uva, con 0,0970,001 g/l y 0,1870,001 g/l, respectivamente.

Evaluacin de la Actividad Antioxidante in vitro El radical DPPH es estable cuando est en contacto con una substancia antioxidante donadora de hidrgeno, y puede ser reducido en medio alcohlico/metanlico, formando difenil-picrilhidrazina.11 Esa reduccin es acompaada por la disminucin de la absorbancia en ancho de onda de 517 nm, ya que ocurre cambio de coloracin, del violeta (caracterstica del radical) para el marrn/amarillo, mientras la reaccin se procesa. La intensidad de la coloracin es proporcional a la concentracin de la substancia con potencial antioxidante.11,38 Los resultados presentados en la Figura 6 demostraron que los bioactivos de uva son capaces de reducir el radical DPPH. Los bioactivos de uva que presentaron la mayor actividad antioxidante fueron el extracto de vino (IC50 =
Cosmticos & Tecnologa Latinoamrica/29

www.cosmeticsonline.la

Tabla 2. Compuestos fenlicos presentes en los bioactivos de uva (Vitis vinifera)

Bioactivos ESU OSU LUV EV PT DP (g/l de catequina) 5,3300,002b 4,8600,015c 5,5900,004a* 4,6600,005d FT DP (g/l de catequina) 0,3600,010d 0,8560,004b 0,6060,000c 0,9620,002a HCT DP (g/l de cido cafeico) 0,0670,000d 0,3090,001a 0,2640,004b 0,2060,003c AT DP (g/l) 0,0910,002b 0,0880,000c 0,0970,001a 0,0060,000d OPC DP (g/l) 0,0980,003c 0,1440,000b 0,1870,000a 0,0400,002d

DP = desviacin-estndar PT = polifenoles totales FT = avonoides totales OPC = oligmeros de procianidinas ESU = extracto de semilla de uva OSU = aceite de semilla de uva LUV = leche de uva EV = extracto de vino *Letras distintas dieren entre s signicativamente por la post-prueba de Tukey (para p 0,001)

Figura 6. Actividad antioxidante in vitro de los bioactivos de la uva (Vitis vinifera)

DPPH
80

b
60

40

a
20

a*

0 ESU OSU LUV EV AA C

IC50= cantidad de muestra (%) capaz de reducir 50% del radical libre DPPH ESU = Extracto de semilla de uva OSU = aceite de semilla de uva LUV = leche de uva EV = extracto de vino AA = cido ascrbico C = catequina *Letras distintas dieren entre s signicativamente por la post-prueba de Tukey (para p 0,001)

un IC50 = 52, comprobando que el aceite presenta actividad antioxidante.11 Otra investigacin enfocando ese mismo tpico evalu la actividad antioxidante de los compuestos fenlicos presentes en subproductos de la uva (extracto de semilla y bagazo de uva). El resultado del IC50 fue de 62,5000,760, siendo similar al encontrado en este trabajo.39 Con eso, es posible concluir que los bioactivos presentan actividad antioxidante relevante y tienen potencial para ser incorporados a formulaciones cosmticas, con objetivo de minimizar los daos causados a la piel, por los radicales libres, protegerla y mantenerla saludable por ms tiempo. Sin embargo, realizar pruebas adicionales de vericacin de la actividad antioxidante de la formulacin como un todo, despus de la adicin de esas materias primas, es fundamental, ya que parmetros como incompatibilidades e inestabilidad del sistema pueden inuenciar la actividad del producto nal.

IC50

24,690,056) y la leche de uva (IC50 = 28,0400,017), presentando actividad similar a la del cido ascrbico (IC50 = 26,0901,050). Esa actividad puede ser explicada por el alto contenido de compuestos fenlicos que esas materias primas presentaron, siendo que el extracto de vino es seis veces ms concentrado para que, justamente, haya aumento de sus contenido fenlico y de su actividad antioxidante. La leche de uva, a su vez, presenta en su composicin dos de los bioactivos de la uva, el aceite y el extracto, lo que podr contribuir para aumentar la actividad antioxidante frente a las otras materias primas. El extracto de semilla de uva (IC50 = 60,6700,128) y el aceite de semilla de uva (IC50 = 58,6900,377) presentaron actividad antioxidante inferior a la de la leche de uva y a la del extracto de vino. Sin embargo, presentaron actividad antioxidante similar a la del estndar catequina (IC50 = 63,6801,420), el que no limita a aplicacin de esas materias primas en formulaciones cosmticas para obtencin de efecto antioxidante. Otro estudio realizado evalu a actividad antioxidante del aceite de semilla de uva utilizando como mtodo el DPPH. El resultado obtenido se aproxima al encontrado en este trabajo,
30/Cosmticos & Tecnologa Latinoamrica

Conclusin Todos los bioactivos presentaron compuestos fenlicos en su composicin. El bioactivo de la uva que present el mayor contenido de polifenoles totales (expresados en g/l de catequina) fue la leche de uva, lo que puede haber ocurrido por causa de la presencia tanto del aceite como del extracto de semilla de uva en su composicin. El extracto de vino fue el que present mayor cantidad de avonoides totales (expresados en g/l de catequina). El aceite de semilla de uva present el mayor contenido de hidroxicinamatos (expresados en g/l de cido cafeico). En relacin a las antocianinas totales (g/l) y a los oligmeros de procianidinas (g/l) la leche de uva fue el que present a mayor concentracin. Todos los bioactivos presentaron actividad antioxidante; el bioactivo que present el mayor efecto fue el extracto de vino, seguido por la leche de uva, que present actividad antioxidante similar a la del cido ascrbico. Bajo este contexto, se puede inferir que las materias primas pueden ser utilizadas como componentes de formulaciones cosmticas con el objetivo de acentuar y prolongar la salud y la belleza natural de la piel y del cabello, protegindolos contra las agresiones diarias.
Agradecimientos Los autores agradecen al Laboratorio de Control de Calidad de Medicamentos y Cosmticos y al Laboratorio de Farmacognosia de la Universidad de Caxias do Sul, por los reactivos y por los estndares cedidos.

www.cosmeticsonline.la

Vol. 2, mayo-junio 2011

Referencias
1. CA Stefenon. Atividade antioxidante, composio fenlica e mineral de vinhos espumantes brasileiros (tese). Caxias do Sul, Faculdade/Universidade de Caxias do Sul, Rio Grande do Sul, 2006 2. LT Abe, RV da Mota, FM Lajolo, MI Genovese. Compostos fenlicos e capacidade antioxidante de cultivares de uvas Vitis labrusca L. e Vitis vinifera L. Cinc Tecnol Aliment 27:394-400, 2007 3. S Pieniz, E Colpo, VR Oliveira, V Estefanel, R Andreazza. Avaliao in vitro do potencial antioxidante de frutas e hortalias. Cin & Agrotec 33 (2):552-559, 2009 4. EN Frankel, CA Bosanek, AS Meyer, K Silliman, LL Kirk. Commercial grape juice inhibits the in vitro oxidation of human low-density lipoproteins. J Agric Food Chem 46:834-838, 1998 5. CR Malacrida, S Motta. Compostos fenlicos totais e antocianinas em suco de uva. Cin Tecnol Aliment 25(4):659-664, 2005 6. T Maier, A Schieber, DR Kammerer, R Carle. Residues of grape (Vitis vinifera L.) seed oil production as a valuable source of phenolic antioxidants. Food Chem 112:551559, 2009 7. ML Cho, YJ Heo, MK Park, HJ Oh, JS Park, Y Juwoo, JH Ju, SH Park, HY Kim, JK Min. Grape seed proanthocyanidin extract (GSPE) attenuates collagen-induced arthritis. Immunolog Letters 124:102110, 2009 8. PLA da S Porto. Estudo da Atividade Antioxidante de Catequinas e Procianidinas Oligomricas (tese). Faculdade de Cincias da Universidade do Porto, Portugal, 2002 9. D Bagchi, M Bagchi, SJ Stohs, DK Das, SD Ray, CA Kuszynski, SS Joshi, HG Pruess. Free radicals and grape seed proanthocyanidin extract: importance in human health and disease prevention. Toxicol 148:187197, 2000 10. LS Baumann. Less-known botanical cosmeceuticals. Dermatolog Therapy 20:330342, 2007 11. GG Pereira. Obteno de nanoemulses O/A base de leo de semente de uva e oliva aditivadas de metoxicinamatos de octila e estudo do potencial antioxidante e fotoprotetor das emulses (tese). Ribeiro Preto, Universidade de So Paulo/Faculdade de Cincias Farmacuticas de Ribeiro Preto, So Paulo, 2008 12. MEO Mamede, GM Pastore. Compostos Fenlicos do Vinho: Estrutura e ao antioxidante. Boletim do CEPPA 2:233252, 2004 13. ACS Nogueira. Efeito da Radiao Ultravioleta na cor, perda protica e nas propriedades mecnicas do cabelo (tese). Campinas, Universidade Estadual de Campinas, So Paulo, 2003 14. ICW Arts, PCH Holman. Polyphenols and disease risk in epidemiologic studies. The Am J Clinical Nutrition 81:3317-25, 2005 15. X Wei, Y Liu, J Xiao, Y Wang. Protective Effects of Tea Polysaccharides and Polyphenols on Skin. J Agric Food Chem 57:77577762, 2009 16. OH!. Leite de Uvas Verdes e Vermelhas. On Line. Disponvel em http://www.ohingredientes.com.br. Acesso em 9/10/2009 17. Gattefoss. Optivegetol Wine. On Line. Disponvel em http:// www.gattefosse.com. Acesso em 9/10/2009 18. MP Franzoni. Atividade antioxidante de extratos aquosos de sementes de variedades do gnero Vitis (uva) provenientes de resduos de vinicao (tese). Faculdade/Universidade de Caxias do Sul, Caxias do Sul RS, 2006 19. J Saf, L Sonego, QD Varela, M Salvador. Antioxidant Activity of L- ascorbic acid in wild-type and superoxide dismutase decient strains of Saccharomyces cerevisiae. Redox Report 4:179-184, 2006 20. M Bonoli, M Montanucci, TG Toschi, G Lercker. Fast separation and determination of tyrosol, hydroxytyrosol and other phenolic compounds in extra-virgin olive oil by capillary zone electrophoresis with ultraviolet-diode array detection. J Chromatog A 1011:163172, 2003 21. II Rockenbach. Compostos fenlicos, cidos graxos e capacidade antioxidante do bagao da vinicao de uvas tintas (Vitis vinifera L. e Vitis labrusca L.) (tese). Centro de Cincias Agrrias, Universidade Federal de Santa Catarina, Florianpolis SC, 2008 22. P Iland, A Ewart, J Sitters, A Markides, N Bruer. Techniques for 23.

24.

25.

26. 27.

28.

29.

30.

31.

32.

33.

34.

35.

36.

37.

38.

39.

chemicals analysis and quality monitoring during winemaking. Patrick Iland Wine Promotions, Campbeltown, 2000 Wipo. Metodologia de Oligmeros de Procianidinas. On Line Disponvel em http://www.wipo.int/pctdb/en/wo.jsp?wo=20060116 40&IA=WO2006011640&DISPLAY=DESC. Acesso em 9/10/2009 T Yamaguchi, H Takamura, TC Matoba, J Tero. HPLC method for evaluation of the free radical-scavenging activity of foods by using 1.1-diphenyl- 2picrylhydrazyl. Biosci Biotech Biochem 62:1201-1204, 1998 LL Mensor, FS Menezes, GG Leito, AS Reis, TC dos Santos, CS Coube, SG Leito. Screening of Brazilian plant extracts or antioxidant activity by the use of DPPH free radical method. Phytother Res 15:127-130, 2001 D Andreo, N Jorge. Antioxidantes Naturais: Tcnicas de Extrao. Boletim do CEPPA 24(2):319-336, 2006 EM Marinova, NVI Yanishlieva. Antioxidant activity of extracts from selected species of the family Lamiaceae in sunower oil. Food Chem 58(3):245-248, 1997 MIS Vedana, C Ziemer, OG Miguel, AC Portella, LMB Candido. Efeito do Processamento na Atividade Antioxidante de Uva. Alim Nutr 19(2):159-165, 2008 LD Shirahigue. Caracterizao qumica de extratos de sementes e casca de uva e seus efeitos antioxidantes sobre carne de frango processada e armazenada sob refrigerao (tese). Escola Superior de Agricultura Luiz de Queiroz, Piracicaba SP, 2008. CB Cataneo, V Caliari, LV Gonzaga, EM Kuskoski, R Fett. Antioxidant activity and phenolic content of agricultural by-products from wine production. Cin Agr 29(1):93-102, 2008 NG Baydar, GO Ozkan, S Yasar. Evaluation of the antiradical and antioxidant potential of grape extracts. Food Control 18(9):11311136, 2007 A Chiou, VT Karathanos, A Mylona, FN Salta, F Preventi, NK Andrikopoulos. Currants (Vitis vinifera L.) content of simple phenolics and antioxidant activity. Food Chem 102:516522, 2007 S Banon, P Diaz, M Rodriguez, MD Garrido, A Price. Ascorbate, green tea and grape seed extracts increase the shelf life of low sulphite beef patties. Meat Science, 49:626633, 2007 K Ghafoor, YH Choi, JY Jeon, IH Jo. Optimization of UltrasoundAssisted Extraction of Phenolic Compounds, Antioxidants, and Anthocyanins from Grape (Vitis vinifera) Seeds. J Agric Food Chem 57:49884994, 2009 Z Peng, Y Hayasaka, PG Iland, M Sefton, P Hoj, EJ Waters. Quantitative Analysis of Polymeric Procyanidins (Tannins) from Grape (Vitis vinifera) Seeds by Reverse Phase High-Performance Liquid Chromatography. J Agric Food Chem 49:26-31, 2001 L Minuti, R Pellegrino. Determination of phenolic compounds in wines by novel matrix solid-phase dispersion extraction and gs chromatography/mass spectrometry. J Chromatog A 1185:2330, 2008 CM Klinge, KE Risinger, MB Watts, V Beck, R Eder, A Jungbauer. Estrogenic Activity in White and Red Wine Extracts. J Agric Food Chem 51:1850-1857, 2003 LL Hidrata. Avaliao da capacidade antioxidante de extratos de Bauhinia microstachya (Raddi) Macbride, Cesalpiniaceae, em serum (tese). Faculdade/Universidade Federal do Paran, Curitiba PR, 2004. TL Lafka, Sinanoglou, ES Lazos. On the extraction and antioxidant activity of phenolic compounds from winery wastes. Food Chem, 104:12061214, 2007.

Camila de Martini Bonesi es graduanda en Farmacia por la Universidad de Caxias do Sul UCS, Caxias do Sul RS, Brasil Morgane Pasini Franzoni tiene maestra en Biotecnologa y trabaja en Vinotage Cosmticos Ltda., Garibaldi RS, Brasil Cludia Alberici Stefenon tiene maestra en Biotecnologa y trabaja en el Laboratorio Randon Ltda., Caxias do Sul RS Valeria Weis Angeli es doctora en Ciencias Farmacuticas por la Universidad de Caxias do Sul UCS, Caxias do Sul RS Publicado en portugus, Cosmetics & Toiletries (Brasil) 23(1):58-68, 2011

Vol. 2, mayo-junio 2011

www.cosmeticsonline.la

Cosmticos & Tecnologa Latinoamrica/31