MANUAL DE PRACTICAS DE FISIOLOGIA VEGETAL

Facultad de Ciencias Agropecuarias - UNER Autores: Lallana, V.H. y Lallana, Ma. del C. (2001)

HORMONAS VEGETALES

Contenido:

A. Auxinas A.1. Dominancia apical A.2. Abscisin A.3. Enraizamiento de estacas B. Giberelinas B.1. Accin del cido giberlico sobre los vegetales B.2. Bioensayo del crecimiento del arroz enano C. Citocininas C.1. Efecto de las citocininas sobre el desarrollo y senescencia de las hojas de haba. D. Etileno D.1. Maduracin de frutos

HORMONAS VEGETALES
Normalmente las plantas crecen y se desarrollan de una manera ordenada y organizada. Los distintos rganos deben coordinar entre s sus acciones bioqumicas nicas, de manera que se mantengan integradas en un todo, estructural y funcional. A las influencias mutuas entre los distintos rganos, se las llama "correlaciones". Son numerosos y complejos los mecanismos por los que se lleva a cabo el control interno del crecimiento en las plantas. Uno de los ms importantes sistemas de control del crecimiento lo proporcionan las llamadas "hormonas reguladoras del crecimiento vegetal" u "hormonas vegetales". Un ejemplo aclarar mejor lo expuesto: la formacin de races en la base de una estaca es una manifestacin de crecimiento por morfognesis, regulada fundamentalmente por sustancias de tipo hormonal que producidas en las yemas, se trasladan hacia la base fisiolgica de aquellas. En dicha regin y en asociacin con otros factores de crecimiento (nutricionales, metablicos) se producen procesos de desdiferenciacin y rediferenciacin celular que conducen a la formacin del meristema primario precursor del primordio. Las hormonas se pueden definir como sustancias orgnicas que, producidas en una parte u rgano de la planta, se trasladan a otro y, en muy bajas concentraciones inducen efectos fisiolgicos definidos. Esta definicin incluye todos lo requisitos que una sustancia orgnica debe reunir para ser considerada una hormona: que se origine en el organismo; que generalmente se traslade del sitio de sntesis o liberacin al sitio de accin; que acte en muy pequeas dosis; que induzca o afecte procesos fisiolgicos definidos. En general todas las partes de la planta en activo crecimiento son centros de produccin hormonal, como los pices meristemticos radicales y caulinares, los meristemas secundarios, las hojas, las flores y los frutos en crecimiento; tambin las zonas de regeneracin inducidas por heridas o lesiones, los tumores, etc. Las plantas adems sintetizan inhibidores: sustancias que inhiben o retardan el crecimiento, oponindose directa o indirectamente, y en forma total o parcial, a la accin de las hormonas. Por otra parte tambin se incluyen como factores de crecimiento y diferenciacin a las vitaminas y otras sustancias denominadas co-factores (actan como coenzimas), como por ej.: tiamina, cido nicotnico, piridoxina. Desde el punto de vista hormonal se puede definir el crecimiento y desarrollo como fenmenos fundamentales integrados por mltiples procesos vitales ordenados en cierta secuencia y regidos por un complejo hormonal. Las hormonas mejor conocidas por sus efectos y accin fisiolgica, pertenecen a cinco grupos: auxinas, giberelinas, citocininas, cido abscsico y etileno. Otras hormonas de aparicin ms contempornea son el cido jasmnico, cido saliclico, poliaminas (espermina, cadaverina, putrescina, espermidina). Por ltimo existen otros reguladores que poseen accin hormonal y que se utilizan en la agricultura como: la hidrazida maleica; cloruro de cloromequat (Cycocel), cloruro de clorofonio (Fosfn-D); los derivados del cido picolnico (Picloram), carbamatos, tiocarbamatos que poseen accin herbicida; las sales cuaternarias del dipiridilo (Diquat, Paraquat); el cido naftitalmico (TIBA).

A. AUXINAS Manual de Prcticas de Fisiologa Vegetal - Edicin digital - Lallana, V.H. y Lallana Ma. del C. (2003)Pg. 47

Es un grupo de reguladores caracterizado esencialmente por provocar la elongacin de las clulas. Por ello, se las denomin "hormonas de crecimiento". Hasta 1994 se consideraba que el cido indol actico (AIA) era la nica auxina natural que exista, y que las dems eran producto de la sntesis del hombre, como por ejemplo el cido indol butrico (IBA). Hoy se considera que ste existe naturalmente en las plantas por conversin del cido indolactico (AIA). Las auxinas regulan una gran cantidad de funciones fisiolgicas, como: mitosis (cariocinesis), alargamiento celular, formacin de races adventicias, dominancia apical, gravitropismo, abscisin, diferenciacin de xilema, regeneracin de tejido vascular en tejidos daados. Se encuentran en pequeas cantidades en las plantas, con mayores concentraciones en los meristemas caulinares, laterales, yemas en actividad, rganos en activo crecimiento. Se debe tener en cuenta que la aplicacin de una auxina sobre una planta normal no estimula su elongacin, dado que el nivel interno existente es ptimo.

A.1. DOMINANCIA APICAL Introduccin: Es uno de los fenmenos de correlacin, en el que la yema apical ejerce la dominancia sobre el crecimiento de las yemas axilares subyacentes. Es la inhibicin o control del crecimiento que ejerce la yema apical sobre las yemas axilares o ramificaciones laterales. Segn las diferentes especies se pueden observar las siguientes manifestaciones de la dominancia apical: - Inhibicin del crecimiento de las yemas axilares (dominancia total) - Influencia del crecimiento de la yema apical sobre las yemas laterales (dominancia parcial) - Control angular de las ramificaciones El efecto inhibitorio de la yema apical sobre las yemas laterales se puede demostrar fcilmente si se procede a la remocin o eliminacin de la yema apical; al poco tiempo de eliminada sta se observar que las yemas laterales comienzan a brotar y a producir la ramificacin del vegetal. El fenmeno de dominancia apical se debe fundamentalmente a la accin de dos hormonas: auxinas y citocininas, responsables ambas de la divisin celular. Mientras existe la yema apical se concentran en sta para producir el alargamiento del eje caular. Mientras las auxinas se sintetizan fundamentalmente en el meristema apical y hojas en crecimiento; las citocininas se sintetizan en los pices radicales. As, las auxinas tienen un traslado polar baspeto, las citocininas se transportan por va xilema hacia los pices en forma acrpeta. Cuando existe el pice vegetativo, las auxinas sintetizadas en l, en su transporte, ejerceran un efecto orientativo (efecto sumidero) en el traslado de las citocininas sintetizadas en la raz, dirigindolas hacia el pice, alcanzando all una relacin de concentracin auxina/citocinina ptima, para la divisin y diferenciacin celular. Esto se comprueba ya que si se remueve el pice y en su lugar se coloca un bloque de agar con AIA, se mantiene la dominancia apical. Una caracterstica de las citocininas es que se transportan al lugar de accin y una vez en l, quedan inmovilizadas. Si se aplican citocininas exgenamente sobre una yema en la insercin Manual de Prcticas de Fisiologa Vegetal - Edicin digital - Lallana, V.H. y Lallana Ma. del C. (2003)Pg. 48

con el tallo, queda inmovilizada en l y juntamente con las auxinas provenientes del pice y las hojas, se alcanza el nivel ptimo de concentracin para la brotacin. As las yemas laterales brotan sin necesidad de remover la yema apical. En algunas especies que exhiben dominancia apical, no existen conexiones vasculares entre las yemas laterales y el xilema. Cuando se remueve la yema apical se redistribuyen las auxinas y citocininas, producindose la conexin vascular a nivel de yema, permitiendo que llegue el agua y los nutrientes necesarios para la brotacin. Las auxinas sintetizadas en el pice vegetativo tambin ejerceran un efecto sumidero en el traslado de los nutrientes, determinando as la llegada de un flujo limitado o nulo de nutrientes a los brotes laterales. En algunas especies al remover el pice brotan las yemas de la base del tallo, sto se debe a que son las de edad cronolgica mayor, las ms cercanas al pice an no han completado su desarrollo. En cambio en las plantas leosas, generalmente esto no ocurre, al remover los pices, brotar la yema subsiguiente, la cual en la mayora de los casos retoma la dominancia ejercida por la primera. La dominancia apical constituye la base fisiolgica de la poda de rboles frutales (ya sea de formacin o de fructificacin) y el desbrote de tubrculos y rizomas. El objetivo del trabajo ser comprobar el efecto que ejerce la yema apical sobre el crecimiento de las yemas laterales.

Tcnica operatoria Se trabajar con plantas de arveja crecidas en macetas (tutoradas si es necesario). Se realizarn los siguientes tratamientos: Maceta N 1: Testigo Maceta N 2: Cortar el tallo por debajo del primer nudo que lleve una hoja Maceta N 3: Cortar el tallo por debajo del primer nudo que lleve una hoja y aplicar lanolina sola. Maceta N 4: Cortar el tallo como en el caso anterior. Utilizar una pequea hebra de algodn para envolver la zona de corte, impregne el algodn con 200 ppm de AIA para evitar su escurrimiento. Al cabo de dos semanas registre el nmero de brotes desarrollados en cada maceta y su longitud. Saque conclusiones y redacte el informe correspondiente.

A.2. ABSCISION Introduccin: La abscisin es la separacin natural de flores, frutos, hojas, u otras partes de la planta. Es un proceso fisiolgico influenciado por factores internos y externos, que en muchos casos est asociada a un fenmeno de senescencia (envejecimiento) coincidente con cambios degenerativos ocurridos al acercarse el fin de la vida de un rgano. Por otra parte, la abscisin puede ser considerada como un fenmeno de correlacin, ya que es afectada por otros rganos de la planta, donde se sintetizan los reguladores. Los cambios anatmicos que acompaan a la abscisin son: la formacin de una capa o zona de abscisin en la base del rgano o del pecolo, que en muchas plantas precede a la abscisin de hojas o frutos. Esta zona consiste en un grupo de clulas de paredes finas formadas por divisiones anticlinales (transversales al eje del rgano) y que a menudo ocurren mucho antes Manual de Prcticas de Fisiologa Vegetal - Edicin digital - Lallana, V.H. y Lallana Ma. del C. (2003)Pg. 49

que la hoja haya completado su crecimiento. En el momento de la abscisin se producen a nivel de dicha zona, alguno de los siguientes procesos: - Disolucin de la laminilla media, - Disolucin de la laminilla media y pared celular, - Disolucin total de la clula. Las hojas quedan un tiempo ms retenidas por los haces fibrovasculares, pero stos se rompen por la accin del viento o la gravedad, producindose su cada. Precediendo o inmediatamente de ocurrida la abscisin, se producen nuevas subdivisiones celulares en la zona, a la par que se depositan suberinas y otras sustancias en las paredes y espacios intercelulares que protegen a la planta de una prdida excesiva de agua y de la entrada de microorganismos patgenos. El mecanismo de la abscisin, est regulado fundamentalmente, por la formacin de un gradiente de concentracin de auxinas a lo largo de la zona de abscisin. Cuando la hoja es joven y produce auxinas, la relacin entre la concentracin de auxinas en la regin distal (zona del pecolo ms alejada del tallo) y la concentracin de auxinas en la regin proximal (zona del pecolo ms cercana al tallo) es alta, el rgano permanece adherido a la planta. Cuando sobreviene la senescencia del rgano, decae su produccin de auxinas, la relacin decrece y el rgano cae. [Aux.] R. Distal ---------------------------- 1 No abscisin [Aux.] R. Proximal [Aux.] R. Distal --------------------------- 1 Abscisin [Aux.] R. Proximal

An cuando la existencia del gradiente de auxinas es un fenmeno importante para la abscisin, hay otros compuestos hormonales que intervienen en menor medida en dicho proceso: el etileno y las abscisinas. Se pueden citar las auxinas sintticas: 2,4 D (cido 2,4 diclorofenoxiactico) y ANA (cido naftalenactico), que actan de acuerdo a lo explicado para el AIA (cido indolactico). El etileno y el cido abscsico (ABA), promueven la abscisin; y las citocininas la retardan, junto con las giberelinas por un efecto indirecto, al actuar aumentando el nivel de auxinas. Aplicacin e importancia: El conocimiento de ste fenmeno ha permitido la posibilidad de regular la cada de hojas, flores y frutos por medio de pulverizaciones con hormonas sintticas; esto implica tanto evitar la cada (generalmente con concentraciones de auxinas relativamente altas) como provocarla (raleo), fenmenos importantes sobre todo en frutales. En ciertos cultivos se puede provocar la desfoliacin previa a la cosecha para facilitar la operacin, principio que se aplica a la recoleccin de fibras de algodn, semillas de alfalfa, etc. En stos casos se utilizan entre otros, productos como la cianamda clcica, clorato de magnesio, amitrol, etc., que en principio, aceleran el proceso de senescencia de las hojas. La efectividad de un determinado regulador depende de la especie, del momento de aplicacin, de la naturaleza del compuesto y de su concentracin. Por consiguiente no pueden establecerse reglas generales, siendo necesario experimentar previamente en cada caso. El objetivo de este trabajo ser verificar el efecto de la concentracin de auxinas en el fenmeno de abscisin. Tcnica operatoria: Manual de Prcticas de Fisiologa Vegetal - Edicin digital - Lallana, V.H. y Lallana Ma. del C. (2003)Pg. 50

Sobre una planta joven de Coleus sp., cortar el pecolo en la base de la lmina de cada hoja de tres pares sucesivos, comenzando con el tercer par visible a simple vista a partir del pice vegetativo. Medir la longitud de los pecolos inmediatamente despus de cortados. Identificar un pecolo de cada par con un anillo de papel y aplique sobre la superficie cortada, lanolina con 1.000 ppm de AIA. A los pecolos opuestos a cada uno de los tratados aplicar lanolina sola. A las 72 hs. revisar la planta observando la formacin de la zona de abscisin. A los 7 - 10 das verificar la cada de los pecolos tratados con lanolina sola y anotar la longitud de los tratados con lanolina ms AIA, comparar con la medida inicial. En base a los datos obtenidos, saque conclusiones y elabore el correspondiente informe.

A.3. ENRAIZAMIENTO DE ESTACAS Introduccin Partes aisladas de muchos vegetales (tallos, hojas, races) tienen la capacidad de producir una nueva planta al encontrarse en condiciones adecuadas. Esta propiedad regenerativa es la utilizada por los viveristas, horticultores y floricultores como una prctica corriente de multiplicacin asexual, contando con los beneficios de la estabilidad gentica y mayor rapidez en la obtencin de nuevas plantas. El proceso de formacin de races adventicias implica tres pasos: 1- Diferenciacin de clulas iniciales de races. 2- Formacin de primordios. 3- Crecimiento macroscpico. Desde el punto de vista fisiolgico ste proceso es el resultado de la presencia o ausencia de un conjunto de factores determinantes (hormonas e inhibidores) y de "cofactores" de variada naturaleza qumica (vitaminas, aminocidos, purinas, sales minerales, etc.) que, actuando en una determinada relacin de concentracin, dirigen la morfognesis radical. El comportamiento de las estacas es diferente segn la poca en que se obtienen. Tiene importancia: a) Edad y crecimiento de las ramas que se toman para estacas (herbceas, semileosas, leosas). b) Estado de desarrollo de la planta madre (en floracin es cuando menor capacidad de enraizamiento muestran). c) Su ubicacin en la rama (topfisis). d) Presencia de yemas u hojas. e) Estado de nutricin de la planta madre. f) Longitud del da en el momento de la obtencin de las mismas (fotoperodo) etc. La presencia de inhibidores sera responsable de muchas contradicciones observadas en el comportamiento de estacas, de diversas especies. Muchos son solubles en agua y los buenos resultados obtenidos cuando se lava un nmero de horas (12-24-48 hs.) la base de las estacas con agua corriente, pueden atribuirse a la eliminacin de tales sustancias. El tratamiento de los diversos tipos de estacas con sustancias reguladoras de carcter hormonal (cido indol 3 butrico, cido naftalen actico, cido indol propinico, cido indol 3 actico) es de amplia difusin en la actualidad para asegurar y acelerar la formacin y desarrollo de races en las mismas.

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El objetivo del trabajo ser verificar la eficacia de distintas dosis de ANA en el enraizamiento de estacas de clavel. Tcnica operatoria Estas sustancias se pueden preparar y aplicar en forma de: - Solucin: a) Mtodo lento: Se sumergen las bases de las estacas durante 24-48 hs. en una solucin de concentracin variable entre 10-200 ppm. b) Mtodo rpido: Se mojan las bases de las estacas en una solucin de concentracin variable entre 4.000-10.000 ppm durante no ms de 5 minutos. - Pasta: Se prepara una solucin como en el caso anterior y sta se emulsiona con lanolina mezclndola uniformemente. La concentracin puede variar entre 4.000-6.000 ppm. - Polvo: La sustancia hormonal se solubiza en alcohol, luego se mezcla con un polvo inerte (talco) hasta que la distribucin sea uniforme. Se deja secar a la sombra. Se deshacen los terrones formados. La concentracin final debe oscilar entre 4.000-6.000 ppm. Preparacin de las soluciones hormonales Se utilizar el mtodo de solucin lento. Para preparar la solucin hormonal, disolver el ANA en alcohol etlico al 50 % en la proporcin de 4 a 10 mg de droga por ml de alcohol; las disoluciones se hacen en alcohol para que las hormonas no precipiten. Preparar una solucin madre de ANA pesando 20 mg. Diluir la droga en 4 ml de etanol al 50%, llevndolo luego a volumen de 1 litro (proporcionalmente puede usar menos droga). Esta solucin le permitir obtener concentraciones crecientes de ANA, por ejemplo: Concentracin 5 ppm. Preparar 50 ml. a partir de una solucin madre de 20 ppm. Se necesitarn para una solucin de 5 ppm.: 1.000 ml. ............... 5 mg. 50 ml. ............... 50 x 5/1.000 = 0,250 mg. de cido Si la solucin madre tiene: 20 mg. ............... 1.000 ml. 0,250 mg. ............... 0,250 x 1.000/20 = 12,5 ml. Luego se toman 12,5 ml., de solucin madre y se completa a un volumen de 50 ml. con agua destilada. Preparar las restantes diluciones. Tomar cuatro (4) vasos de precipitado, de 150 ml y coloque en cada uno de ellos 50 ml de las siguientes concentraciones de cido naftalenactico (ANA), que se anotarn en el rtulo correspondiente: 1. Testigo. Agua destilada 150 ml 2. Solucin de 5 ppm de ANA. 3. Solucin de 10 ppm de ANA. 4. Solucin de 20 ppm de ANA. Colocar en cada vaso, lotes uniformes de estacas de clavel unidas por una banda de goma, de manera que las bases (1-2 cm.) desprovistas de hojas, permanezcan sumergidas en la solucin durante un lapso de 24-48 hs.. Cada lote constar de 10 estacas. Una estaca de clavel se puede preparar de brotes jvenes de 5-15 cm. de largo. Colocar los vasos en un lugar del laboratorio protegidos de la luz directa del sol. Manual de Prcticas de Fisiologa Vegetal - Edicin digital - Lallana, V.H. y Lallana Ma. del C. (2003)Pg. 52

Transcurrido el lapso indicado sacar las estacas de los vasos, lavarlas con agua corriente para remover cualquier solucin que pueda quedar en la base de la estaca e inmediatamente plantarlas en "terrinas" con vermiculita o perlita, humedecidas convenientemente pero no empapadas, porque los esquejes necesitan oxgeno para desarrollar las races y la excesiva cantidad de agua impide al aire penetrar en el medio. Colocar las "terrinas" en el invernculo y exponerlas a la luz solar difusa o a la luz artificial, de manera de facilitarles suficiente intensidad de luz para que las hojas se conserven. Durante el lapso de la experiencia controlar la humedad de las "terrinas", agregando agua si fuera necesario. A fin de discernir la eficacia del tratamiento, transcurrido el lapso de 3 semanas, ser necesario hacer observaciones sobre: a) aspecto del sistema radicular determinado por: 1. Nmero de races (de ms de 1 mm) por planta. 2. Nmero de primordios de races (menores de 1 mm) por planta. 3. Largo de las races en mm Promediar los resultados en cada categora. b) La ausencia de reacciones anormales tales como: excesivas hendiduras y engrosamiento del tallo, necrosis de la base de las estacas, detencin del crecimiento de las yemas y prdida del follaje.

Lecturas complementarias: - Gua de Trabajos Prcticos de Fisiologa Vegetal. 1995. Fac. Ciencias Agrarias, Univ. Nac. Nordeste. 42 p. - Montaldi, E. 1995. Principios de Fisiologa Vegetal. Cap. XI. Ediciones Sur. 298 p. - Svori, E., Montaldi, E.y Caso, O.1980. Fisiologa Vegetal. Cap.XV. Ed.Hemisferio Sur, 680 p. - Tizio, R.M., Stahlschmidt, O., Aguero, C. y otros. Gua Trabajos Prcticos Fisiologa Vegetal. Fac. Ciencias Agrarias (UN de Cuyo). 27 p. - Weaver, Robert. 1980. "Reguladores del crecimiento de las plantas en la agricultura". Cap. 10, p.359. Ed. Trillas. Mxico 622 p.

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