UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS (Universidad del Per, fundada en 1551) FACULTAD DE MEDICINA Escuela Acadmica Profesional

de Tecnologa Mdica REA: RADIOLOGA

Curso Bioqumica y Nutricin Informe de Laboratorio N1 ESPECTROFOTOMETRIA METODO GRFICO Y ANALITICO DETERMINACION DE LA CONCENTRACION DE UNA MUESTRA GrupoB Mesa N 2 INTEGRANTES: Dueas Ayayanque Arturo Ray Gutirrez Ttito Ursula Maribel Santisteban Valencia Oscar Douglas Fecha de entrega: 29/08/2012 Docente responsable: Blgo, Marco Antonio Nuez Fonseca

2012

2. INTRODUCCION La espectrofotometra se refiere a los mtodos cuantitativos, de anlisis clnico, que utiliza la luz para medir la concentracin de las sustancias qumicas. Como instrumento se utiliza el espectrofotmetro, que es un instrumento que permite comparar la radiacin absorbida o transmitida por una solucin que contiene una cantidad desconocida de soluto, y una que contiene una cantidad conocida de la misma sustancia. La intensidad de la luz o UV transmitida por una solucin disminuir en relacin con el aumento del nmero de molculas que se interpongan entre la fuente luminosa y el observador. Este nmero vara de acuerdo con la concentracin del soluto, el espesor del recipiente que contiene la solucin. Estos factores estn considerados en la ley de Lambed y Beer, ley que rige los principios de la Colorimetra. Las aplicaciones principales de la espectrofotometra son: Determina la cantidad de concentracin en la solucin de algn compuesto. Para la determinacin de estructuras moleculares. La identificacin de unidades estructurales especificas ya que estas tiene n distintos tipos de absorbancia (grupos funcionales o isomeras).

Las ventajas de la espectrofotometra sobre otros mtodos analticos de laboratorio son varias: rpida, precisa, verstil, fcil de usar y eficiente en costo. Los espectrofotmetros se han mejorado en precisin y versatilidad en los ltimos aos con los avances de la tecnologa, y hoy se consideran indispensables en un laboratorio de qumica analtica.

3. OBJETIVOS:
Explicar y comprender en que consiste la espectrofotometra Determinar la Longitud de onda de mxima absorcin para el clculo de la concentracin de la muestra problema. Determinar el Factor de Calibracin de una solucin Standard. Determinar grficamente y analticamente la concentracin de una muestra problema. Conocer el funcionamiento del Espectrofotmetro.

4. PROCEDIMIENTOS:
PASO N1

Rotular los 4 tubos de ensayo del (1- 4) ms un tubo para la muestra problema.

Utilizaremos permanganato de potasio (KMnO4) de concentracin 5mg/dl. Administraremos una dosis especfica para cada tubo de ensayo.

Para el tubo N1 1ml de KMnO4 mas 9ml de H2O [ ] st1 = 0.5 mg/dl C1 x V1 = C2 x V 2 5mg/dl x 1ml =[ ] st1 x 10ml [ ] st1 = 0.5mg/dl Para el tubo N2 2ml de KMnO4 mas 8ml de H2O [ ] st2= 1.0 mg/dl C1 x V1 = C2 x V 2 5mg/dl x 2ml = [ ] st1 x 10ml [ ] st2= 1.0mg/dl Para el tubo N3 3ml de KMnO4 mas 7ml de H2O [ ] st3 = 1.5 mg/dl C1 x V1 = C2 x V 2 5mg/dl x 3ml = [ ] st3 x 10ml [ ] st3= 1.5mg/dl Para el tubo N4 4ml de KMnO4 mas 6ml de H2O [ ]st4 = 2.0 mg/dl C1 x V1 = C2 x V 2 5mg/dl x 4ml = [ ] st4 x 10ml [ ] st4 = 2.0mg/dl Paso N2: Llevamos al cada tubo de ensayo al espectrofotmetro para medir la absorbancia a diferentes longitudes de onda (425nm, 525nm y 625nm).

Para ello preparamos la siguiente tabla experimental:

TUBOS N mL KMnO4 5mg/dL mL Agua Destilada Concentracin de KMnO4 mg/dL Absorbancia a = 425nm Absorbancia a = 525nm Absorbancia a =625nm Longitud de Onda optima ( ) Factor de Calibracin (Fc) Factor de Calibracin (Fc) Promedio

1 1.0 9.0 0.5

2 2.0 8.0 1

3 3.0 7.0 1.5

4 4.0 6.0 2.0

0.024 0.097 0.011

0.029 0.198 0.015

0.045 0.310 0.030

0.043 0.398 0.032

Longitud de onda = 525nm

5.15

5.05

4.83

5.02

Fc= 5.02mg/dL

La longitud de onda ptima determinada del KMnO4 es 525nm. La absorbancia de la Muestra Problema (MP) en la longitud de onda ptima entregada por el profesor de prctica es 0.352

Paso N3 Con los datos obtenidos: construir en un papel milimetrado las grficas de absorbancia versus concentracin de permanganato de potasio para las longitudes de onda y en una sola grfica. Con estas graficas de elegir la longitud de onda ptima.

Paso N4: Determinar la concentracin de la muestra problema por el Mtodo de la Curva de Calibracin.

Paso N5:

Obtener el Factor de Calibracin (Fc) Promedio con las Soluciones Standard utilizadas para construir las Curvas de Calibracin, utilizando las Absorbancias de la longitud de onda mxima absorcin de luz. Por el Mtodo analtico- Factor de Calibracin (Fc): Fc= [Standard] / [Absst] Fc1= [ ]st/ Absst= Fc2= [ ]st/ Absst= Fc3= [ ]st/ Absst= Fc4= [ ]st/ Absst= Fc = 5.07 Paso N6: Determinar la concentracin de la muestra problema por el Mtodo del Factor de Calibracin. [ ] MP= Abs MP x Fc x Fd [ ] MP= 0.352 x 5.07 x 10 [ ] MP = 17.85 mg/dl = 5.15 = 5.05 = 4.83 = 5.02

5. RESULTADOS: En el paso numero 1 al rotular y calcular las diferentes concentraciones por el mtodo Ci x Vi = Cf x V f en los tubos de ensayo 1, 2, 3 y 4. Se obtuvo las siguientes concentraciones: 0.5, 1, 1.5 y 2mg/dL respectivamente. En el paso nmero 2 se analizo las absorbancias a las diferentes longitudes de onda.

Absorbancia a = 425nm Absorbancia a = 525nm

0.024

0.029

0.045

0.043

0.097

0.198

0.310

0.398

Absorbancia a = 625nm

0.011

0.015

0.030

0.032

Al momento de medir la absorbancia de la muestra problema el fue resultado 0,352 Al realizar las grficas se obtuvo como resultado la longitud de onda optima = 525nm. En el paso nmero 4 en la grafica se obtuvo la concentracin que fue de: 17, 72 mg/dL. En el paso 5 se calcul el Factor de calibracin Promedio con las soluciones estndar se obtuvo Fc = 5,07 Al determinar la concentracin de la muestra problema por el Mtodo de Factor Calibracin se obtuvo [ ] MP = 17.85 mg/dl.

6. INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS: Al concluir el primer paso se dieron resultados satisfactorios. En el segundo paso se dio a conocer la longitud de onda optima que fue de = 525nm. Al momento de medir la absorbancia de la Muestra Problema nos dio un resultado de 0,352 que esta en el rango de absorbancias que se midi a la longitud de onda optima. En la grafica nos dio una concentracin de 17,72 mg/dL que esta prximo a la medicin hecha por el Mtodo de Factor Calibracin, esto nos quiere decir que hemos hecho una buena medicin al realizar los experimentos.

7. DISCUSIONES: Mesa N 2 Al momento de medir la absorbancia de la muestra problema, a una longitud de absorbancia mxima de 525nm, se obtuvo un resultado de 0,352. En nuestro caso dicho resultado esta dentro del rango de 0,097 0,398. Nuestra muestra problema estaba diluida 10 veces. Mesa N 1 En este caso no resulto dentro de rango medido, dicha solucin esta tambin estaba diluida 10 veces. Posibles errores:

- Al momento de usar la pipeta, no fue hecha con exactitud. Mesa N 2 Por qu tenemos que diluir la muestra problema dada por el docente? La muestra problema tenia una concentracin elevada. Si llevamos dicha muestra al espectrofotmetro, con la longitud de onda optima de 525nm,

saldra un valor fuera del rango de absorbancia medido 0,097 0,398. Por esta razn se diluyo 10 veces.

8. CONCLUSIONES: La espectrofotometra consiste utilizar la absorbancia de la longitud de onda mxima para la ver la absorcin de luz. Pudimos determinar la longitud de onda mxima de absorcin con el espectrmetro para esto fue necesario medir exacto la cantidad de solucin pedida en el manual. Determinamos el factor Fc = [Standard] / [Abs st]. de calibracin mediante la formula:

Determinamos con el mtodo analtico la concentracin problema.

de la muestra

Espectrofotmetro funciona de la siguiente manera: la luz de una fuente continua pasa a travs de un monocromador, que selecciona una banda estrecha de longitudes de onda del haz incidente. Esta luz monocromtica (luz incidente) atraviesa una muestra (solucin) el haz de luz absorbida por la solucin toma el nombre de absorbancia. Luego se mide la potencia radiante de la luz que sale (luz transmitida).

9. RECOMENDACIONES: En el uso de la pipeta se debe tratar de que la medicin del volumen de la solucin sea lo mas exacta posible. En esta prctica se han utilizado instrumentos de laboratorio de vidrio, como por ejemplo el tubo de ensayo y pipetas, por lo tanto se debe tener un especial cuidado. Al momento de realizar la grafica se debe tratar de que los nmeros sean proporcionales a la cantidad de cuadraditos del papel milimetrado, estos grupos de cuadros se recomienda que sean mltiplos de 10 o de 5 para as poder medir fcilmente.

10. BIBLIOGRAFIA Murray, Granner, Mayes Rodwell. Bioqumica de Harper 12 a v a . Edicin. Editorial. El Manual Moderno, S.A. de C.V. Mxico. 1992. Laguna J,PIA Bioquimica 6 edicin, Editorial: Manual Moderno S.A. de C.V. Mxico. 2009.