Tema 7.- Enzimas. Necesidad de catlisis en el medio biolgico. Conocer la definicin de enzima como biocatalizador. Cofactores. Grupos protsicos.

Holoenzimas. Conocer definiciones de cofactor, grupo protsico, holoenzima. Clasificacin de los enzimas. Forma de nomenclatura. Comprender la forma en que se nombra a los enzimas. Modo de funcionamiento de los enzimas. Efecto sobre estado de transicin. Conocer el mecanismo molecular de funcionamiento de los enzimas. Cintica enzimtica. Conocer cmo se relacionan velocidad de catlisis enzimtica y concentracin de substrato: cintica tipo Michaelis-Menten. Constante de Michaelis: conocer definicin, as como de velocidades inicial y mxima. Efecto de pH y temperatura sobre la actividad enzimtica. Enzimas no michaelianos. Enzimas reguladores. Modos de regulacin: enzimas alostricos y de regulacin covalente. Comprender qu tipos de regulacin se dan y qu caractersticas tienen y cmo se pueden visualizar en representaciones grficas de v frente a S. Modo de operacin de los enzimas reguladores de una ruta y concepto de retromodulacin. Inhibidores enzimticos: reversibles e irreversibles. Conocer los tipos de inhibidores.

Los seres vivos han de oxidar molculas orgnicas: procesos muy lentos de por s: se han de utilizar catalizadores. Las protenas enzimticas son catalizadores muy eficientes y especficos. Las alteraciones enzimticas estn implicadas en numerosos procesos patolgicos. Importancia en diagnstico. Algunas aparecen asociadas a cofactores o coenzimas, o grupos protsicos: -cofactores: iones o elementos metlicos. -coenzimas: molculas orgnicas. -grupo protsico: cofactor o coenzima fuertemente enlazado. -holoenzima: protena mas coenzima y/o cofactor inorgnico. -apoenzima o apoprotena: la parte proteica solamente.

NOMENCLATURA Y CLASIFICACIN DE LOS ENZIMAS Sufijo asa. Peptidasa, ureasa. Otros tienen un nombre no relacionado con el sustrato: tripsina, pepsina. Cdigo internacional: E.C.4 dgitos.

Ejemplos: 1. Oxidorreductasas: Citocromo c oxidorreductasa: 4 citocromo c (Fe2+)+ 8 H++O2 4 citocromo c (Fe3+)+2H2O 2. Transferasas:carnitina-acil-transferasa Palmitil-Coenzima A+carnitina palmitil-carnitina+coenzimaA 3.Hidrolasas: ATPasa (retculo sarcoplsmico) ATP+H2O+Ca2+ (fuera) ADP+Pi+Ca2+ (dentro) 4. Liasas: Isocitrato liasa: Isocitrato succinato+glioxilato 5. Isomerasas: Triosa isomerasa Dihidroxiacetona-fosfatoGliceraldehdo 3-fosfato 6. Ligasas: DNA-ligasa ----OH + ADP----- ---O---PO2-O---- +AMP

Ejemplo de nomenclatura enzimtica

ATP+glucosaglucosa-6-fosfato+ADP ATP: glucosa fosfotransferasa E.C. 2.7.1.1 2: clase, transferasa 7: subclase fosfotransferasa 1: fosfotransferasa con un grupo hidroxilo como aceptor. 1: glucosa como aceptor del grupo fosforilo. Sin embargo el nombre ms usado es hexoquinasa.

Forma de funcionamiento de los enzimas

En el sitio activo la reaccin se favorece energticamente y transcurre ms rpidamente. Los enzimas afectan a las velocidades de reaccin y no al equilibrio. Se reduce la energa de activacin

Enlace de un sustrato en el centro activo

Energa de activacin

El catalizador hace disminuir la energa de activacin

Ejemplo ilustrativo: Sacarosa+12 O212 CO2+11H2O Tiene un Go muy negativo, pero la sacarosa es qumicamente estable. La barrera energtica es grande. Sin embargo, en la clula se oxida rpidamente: catlisis enzimtica.

Forma en que se realiza la catlisis

La catlisis se realiza mediante interacciones dbiles entre enzima y substrato, de tipo no covalente: diferente de catalizadores inorgnicos. El centro activo tiene gran especificidad para el sustrato: 1.-Teora llave-cerradura. 2. -Teora ajuste inducido: sustrato y enzima se adaptan para dar el estado de transicin. Es lo que se ha observado en la mayora de los casos.

Comparacin de los dos modelos propuestos para interaccin enzima-substrato

hexoquinasa

Ajuste inducido en hexoquinasa

Glucosa+ATPglucosa 6-fosfato+ADP

-Cintica enzimtica: determinacin de las velocidades de catlisis. Curva de progreso de una reaccin enzimtica clsica: Dependencia hiperblica saturacin Velocidad inicial: Vo

Velocidad de catlisis

[S]

Michaelis-Menten: enzima con un solo substrato:

E+SESE+P Se supone que el producto no se une al enzima y que el sistema se encuentra en estado estacionario: se forma tanto de ES por unidad de tiempo como se destruye a E+S. Tambin que la concentracin de sustrato es mucho mayor que la de enzima. Vmax[S] Vo=----------------Km+[S] Vmax y Km son caractersticas de cada enzima

Vmax[S] Vo=----------------Km+[S] -Si Vo=Vmax, entonces Vmax Vmax[S] ------ = ---------2 Km+[S] Km+[S]=2[S] y por tanto Km=[S] en estas condiciones. -Cuando [S] >>Km se cumplir que Vo=Vmax -Cuando Km>>[S] se cumplir que: Vmax[S] Vo= -------------Km en estas condiciones la Vo es directamente proporcional a la concentracin de sustrato: estas son las condiciones en que debe medirse la actividad enzimtica.

Efectos de pH y temperatura sobre los enzimas.

Efectos de pH y temperatura sobre los enzimas.

Efectos de pH y temperatura sobre los enzimas. desnaturalizacin 45C

temperatura

Enzimas no -michaelianos
No siguen una cintica hiperblica. Muchos enzimas importantes en la regulacin del metabolismo suelen ser de este tipo: reguladores alostricos. Sufren cambios conformacionales en respuesta al enlace de moduladores en sitios diferentes del activo.

Enzima alostrico: aspartato transcarbamilasa Subunidades reguladoras: amarillo y rojo

Subunidades catalticas: azul y prpura

Enzima regulador alostrico en va metablica

Cintica sigmoidal

Cambia Vmax, pero no K0,5

Modificaciones moduladoras de los enzimas

No covalentes: alostricas. Covalentes. Degradativas: se hidroliza el enzima. Concepto de zimgeno y prozimgeno.

Diferentes tipos de modificaciones covalentes

Caso de la glucgeno fosforilasa

prozimgeno

zimgeno

Inhibiciones enzimticas
1.-Reversibles: E+IEI Los inhibidores reversibles pueden ser competitivos, incompetitivos y no competitivos. A) Los competitivos son compuestos similares en estructura al sustrato: las estatinas (como la simvastatina) inhiben un enzima de la sntesis del colesterol. B) Los incompetitivos son substancias que se enlazan a sitios diferentes al activo, y solamente al complejo ES. C) Los no competitivos o mixtos son compuestos que se unen al enzima en un sitio diferente al centro activo, y lo pueden hacer a E o a ES. Los tipos B y C se dan exclusivamente en enzimas con 2 o ms substratos.

2.-Irreversibles: E+IEI Pueden operar sobre el centro activo o sobre otro lugar. Se presenta abajo el ejemplo de la cicloxigenasa (COX)