Carotenoides: distribuci on en el mundo vegetal y animal

Ma r g a r it a S a la z a r Go n z a le z D e p t o . d e B io t e c n o lo g a . U A M-I. A p d o . P . 5 5 -5 3 5 .Me xic o .D . F. 0 9 3 4 0 .

Distribuci on en el mundo vegetal Los carotenoides, son sintetizados de \novo" por todos los organismos fotosint eticos, incluyendo las cianobacterias, y ocasionalmente por las bacterias nofotosint eticas y los l quenes. En el medio marino, la s ntesis se lleva a cabo esencialmente por el toplancton: microalgas, cianobacterias y otros organismos aut otrofos; as como por las microtas y macrotas b enticas. Ha sido reportado que las enzimas espec cas de la s ntesis de carotenoides se encuentran codicadas en el material gen etico contenido en el n ucleo, sintetizadas en los ribosomas citopl asmicos y transportados hacia los cloroplastos, o bien, pueden ser sintetizados in situ si est an presentes las mol eculas precursoras iniciales. El cloroplasto, ha sido considerado como un organelo completamente aut onomo, capaz de realizar directamente la s ntesis de carotenoides (Young y Briton, 1993). La distribuci on y dominancia de los pigmentos carotenoides en los organismos fotosint eticos puede variar de un g enero a otro, en funci on de las enzimas participantes, tal aspecto ha sido considerado para establecer la taxonom a, as como las teor as de evoluci on de las algas a partir de organismos primitivos (Klein, 1967). La dominancia de algunos pigmentos carotenoides: carotenos ( y ) y xantolas (xantinas: violaxantina, astaxantina, zeaxantina, etc.) en los diferentes grupos de algas, se presenta en la tabla 1. Los carotenoides est an ampliamente distribuidos en las diferentes divisiones de algas, sin embargo, la mayor diversidad se presenta en las clorotas (Tabla 2), en las cuales la localizaci on de la astaxantina, como metabolito de alto valor agregado, est a en funci on de las condiciones de cultivo, espec camente temperatura e intensidad luminosa. De esta manera, bajo condiciones favorables se localiza en los cloroplastos, mientras que en condiciones desfavorables (altas intensidades luminosas) se acumula en los gl obulos extracloropl asticos. Los pigmentos caracter sticos, en el caso de las cianobacterias, son la equinenona, la zeaxantina y la astaxantina, y estos se presentan en las especies repre60 sentativas del g enero Oscillatoria sp, adem as de los g eneros Phormidium foveolarum, Anabaena aerulosa, Nostoc commune, Tolypothrix tennuis, Aphanizomenon osaquae, Synechococcus elongatus, Calothrix parietina y Microcystis aeruginosa. En el caso de los hongos, no considerados como vegetales, la presencia de la astaxantina ha sido reportada en diferentes g eneros como Phaa rhodozyma y Rhodotorula rubra (Longo, et al., 1992; Nelis, et al., 1991). En el caso de los vegetales superiores, existen reportes unicamente en 5 especies de ores: Adonis aestivalis, la cual presenta adem as -caroteno; Adonis annua, Adonis ammeus, Adonis turkestanica y Viola tricolor , la cual contiene adem as lute na, -caroteno, avoxantina, violaxantina y licopeno (Goodwin, 1965; Goodwin,1980). Distribuci on en el mundo animal En el reino animal, los pigmentos carotenoides se presentan en forma de lipocromos solubles, unidos por medio de enlaces proteicos. Merejkowsky (1883), en sus primeras investigaciones, mostr o que la hidr olisis de estos compuestos liberaba un pigmento rojo, al cual llam o zooeritrina, el cual debido a estudios espec cos de puricaci on de prote nas, an alisis e identicaci on de espectros de absorci on adquiri o posteriormente el nombre de astaxantina. Como resultado del avance de estos estudios, se pudieron establecer listas de distribuci on de carotenoides en los organos de las diferentes especies de invertebrados (Tabla 3). As tambi en, se lleg o a la determinaci on de dos grandes grupos de pigmentos: el primero que comprende los verdaderos carotenoides, es decir aquellos pigmentos que se encuentran unidos en proporci on estequiom etrica con las prote nas por enlaces no covalentes, mientras que el segundo grupo est a constituido por carotenoides que se encuentran disueltos en compuestos lip dicos. Zagalski, (1976) y Briton et al., (1982), utilizando t ecnicas de bioqu mica avanzada de prote nas y de espectroscop a de masas, contribuyeron a la armaci on de estos resultados. En general, los animales no presentan la capacidad de sintetizar pigmentos carotenoides, sin embargo,

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Tabla 1. Principales pigmentos dominantes en las algas. (Gorenot y Guern, 1989; Richmond, 1986; Cohen, 1999). Algas Pigmentos Rodotas Neoxantina, luteina, zeaxantina, violaxantina, -caroteno, criptoxantina. Dinoceas Dinoxantina, diadinoxantina, peridina, -caroteno. Euglenotas Astaxantina, neoxantina, -caroteno, diatoxantina, dianoxantina. Diatomeas Fucoxantina, diadinoxantina, diatoxantina, -caroteno. Crisoceas Fucoxantina, diadinoxantina, lute na -caroteno, zeaxantina, violaxantina, diatoxantina. Xantoceas Diadinoxantina, heteroxantina, vaucheriaxantina, -caroteno, neoxantina, diatoxantina. Feoceas Fucoxantina, diatoxantina, luteina, -caroteno Clorotas Astaxantina, lute na,zeaxantina,neoxantina, violaxantina, -caroteno, anteraxantina, neoxantina. Tabla 2. Presencia de carotenoides en las Clorotas, bajo condiciones de alta intensidad luminosa (Goodwin, 1980). Especie Pigmento Ankistrodesmus spp. Equinenona, cantaxantina, astaxantina Brachiomonas simplex astaxantina Chlamydomonas nivalis Equinenona, cantaxantina, astaxantina Chlorella fusca (pyrenoidosa) Equinenona, astaxantina Chlorella fusca var rubescens Equinenona, cantaxantina, astaxantina Chlorella zongiensis Equinenona,cantaxantina, astaxantina Clorococcum infusionium Equinenona,cantaxantina, astaxantina Clorococcum multinucleatum Equinenona, cantaxantina, astaxantina Clorococcum olefaciens Equinenona, cantaxantina, astaxantina Clorococcum wimeerii Equinenona, cantaxantina, astaxantina3,4,4-trihidroxi--caroteno Coelastrum proboscideum Equinenona, cantaxantina, astaxantina vardilatatum Crucigenia apiculata Equinenona, cantaxantina, astaxantina Dictyococcus cinnabarinus Equinenona, cantaxantina,3,4-diketo- -caroteno Fritschiella tuberosa Equinenona, cantaxantina, astaxantina fritschiellaxantina Gymnozya moniliformis equinenona Haematococcus droebakensis Equinenona, cantaxantina, astaxantina Haematococcus lacustris Equinenona, cantaxantina, astaxantina -caroteno Haematococcus pluvialis Equinenona, astaxantina, crustaxantina Foenicopterona,3,4,4-trihidroxi--caroteno Hydrodictyonreticulatum Equinenona, astaxantina Nannocloris atomus astaxantina Protosiphonbotryoides Equinenona, cantaxantina, astaxantina, 4-hidroxiequinenona, 4-hidroxi-3,4-diketo-44 -caroteno Scenedesmus brasiliensis equinenona Scenedesmus spp. Equinenona, cantaxantina, astaxantina Scotiella spp. Equinenona, cantaxantina, astaxantina Trentepholia aurea -caroteno

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la mayor a son capaces de asimilarlos en forma selectiva, una vez obtenidos de su r egimen alimenticio pueden ser biosintetizados o metabolizados ya sea por oxidaci on o reducci on de los precursores primarios, dando por consecuencia la diversidad de pigmentos carotenoides en los organismos del medio ambiente marino. Em algunos animales marinos, los procesos metab olicos que intervienen en la transformaci on de los carotenoides son muy especializados debido a la importancia que tienen estos en el camuaje, en las actitudes de cortejo, de guerra o de defensa (LiaaenJensen, 1990). Un ejemplo de la v a de bios ntesis se presenta en el crust aceo Panulirus japonicus, en el cual a partir del -caroteno o isocriptoxantina, por medio de reacciones de oxigenaci on e hidroxilaci on, dan origen a la mol ecula de la astaxantina, lo cual ha sido conrmado por utilizaci on de radiois otopos (Goodwin,1984; Katayama et al., 1973; Matsuno et al., 1974). La presencia de carotenoides en las esponjas, se ha detectado en sus estructuras debido a la acumulaci on de toplancton o de zooplancton rico en carotenoides; algunos pigmentos como la diatoxantina, astaxantina y zeaxantina pueden obtenerse a partir de la acumulaci on de diatomeas, hongos y bacterias fotosint eticas, o bien por el metabolismo de otros pigmentos (Johnson,1991b). En los hidrarios, la astaxantina se presenta bajo una forma muy caracter stica, como una carotenoprote na azul llamada aloporina contenida en el esqueleto. En los crust aceos, la astaxantina, se presenta en casi todas las clases como pigmento caracter stico, ya sea en forma libre o como xantola estericada o no, o bien como carotenoprote na. El principal sitio de acumulaci on es el exoesqueleto y caparaz on, en el cual puede llegar a contener el 90 % de la astaxantina en forma libre, encontrandose en los cromat oforos de la epidermis astaxantina estericada. Teniendo lugar procesos metab olicos importantes, en relaci on con el transporte y la transformaci on qu mica de este pigmento de la epidermis al exoesqueleto. El papel de los carotenoides en estos organismos, es muy importante en los aspectos biol ogicos del dimorsmo sexual, ya que las hembras presentan en general una mayor proporci on de carotenoides con respecto a los machos. En el caso de los insectos, la distribuci on de carotenoides va a determinar en la mayor a de los casos, modelos de pigmentaci on que pueden contribuir al estudio y explicaci on de mutaciones, as como de mecanismos de sobrevivencia, como por ejemplo el camuaje. Estas variaciones en la distribuci on

y funci on van a estar reguladas por diferentes factores como son: la luz, la temperatura y la humedad (Tabla 4). Dentro de los reptiles, podemos mencionar en las tortugas la presencia de astaxantina en el caparaz on, en combinaci on con el -caroteno y la lute na, asi tambi en existe astaxantina en la retina de la especie Clemmys insculpa. En los anbios, la distribuci on de carotenoides es muy amplia, ya que se puede detectar en diferentes sitios de acumulaci on, tales como la piel, el h gado, los ovarios, los oviductos, las g onadas, los ri~ nones, los m usculos, el p ancreas, los ojos, el nervio ci atico y medular. El or gen de estos pigmentos no es todav a muy claro, sin embargo sus funciones est an claramente denidas, ya que ha sido reportado que durante las variaciones estacionales se producen cambios en el metabolismo y transporte de estos carotenoides que se maniesta en el periodo de hibernaci on tanto en los machos como en las hembras. En los peces la presencia de astaxantina se encuentra ampliamente distribuida, ya que se ha reportado al menos en 86 especies, las cuales la contienen entre otros pigmentos carotenoides (Tabla 5). Esta distribuci on est a en funci on del r egimen alimenticio, as como de la epoca de fresa tanto en el macho, como en la hembra, dependiendo adem as de la fase de desarrollo y crecimiento en la que se encuentren los organismos, ya que se puede llegar a manifestar la dominancia temporal de un pigmento espec co. De esta manera la funci on primordial de los carotenoides se da en la reproducci on, sin embargo tambi en desempe~ nan un papel muy importante en la visi on y como precursores de la vitamina A. Las aves acumulan v a alimentaci on, carotenoides en el cuerpo y en el plumaje, conriendoles una coloraci on que va desde tonalidades amarillas, hasta el color naranja, siendo posible la presencia de diferentes pigmentos en un mismo organismo. Se ha reportado que la acumulaci on de los carotenoides provenientes de la alimentaci on, est a programada gen eticamente, y que la transferencia de los pigmentos hacia las plumas est a regulada por control hormonal, induciendo adem as el dimorsmo sexual y favoreciendo el reconocimiento de la pareja, ya que los carotenoides, particularmente los que aportan la coloraci on roja y naranja, se presentan en mayor concentraci on en los machos a diferencia de las hembras, otorg andoles una coloraci on muy vistosa y llamativa para las hembras (Goodwin,1980 y Pomar ede, 1990) (Tabla 6). Conclusiones y perspectivas La presencia de los compuestos carotenoides, ha sido ampliamente reportada, ya que se han aislado

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Tabla 3. Distribuci on, localizaci on y coloraci on de la astaxantina en los invertebrados (Goodwin, 1984). Especie Hidrozoarios Velella lata Velella sp. Porpita sp. Hidrarios Allopora californica Distichoporacoccinea Distichopora nitida Distichopora violacea Stylaster elegans Stylaster roseus Stylaster sanguineus Braqui opodos Artemia salina Branchinecta packardi Branchipus stagnalis Chirocephalusdiaphanus Tanymastix lacunae Localizaci on umbrela umbrela umbrela y tent aculos esqueleto esqueleto esqueleto esqueleto esqueleto esqueleto esqueleto sangre sangre sangre sangre Color violeta violeta violeta Pigmento astaxantina astaxantina astaxantina

violeta rojo amarillo rojo rojo, rosa violeta, rojo rosa verde verde azul azul azul-verde verde negro, gris, azul, violeta, verde azul azul azul verde naranja,rojo verde rojo, violeta violeta verde

astaxantina astaxantina astaxantina astaxantina astaxantina astaxantina astaxantina

zeaxantina zeaxantina zeaxantina zeaxantina

cantaxantina cantaxantina cantaxantina cantaxantina cantaxantina

Cop epodos Cyclops vernalis

huevos

astaxantina

Eudiaptomus amblyodon Cirripedios Lepas anatifera Lepas fascicularis Malacostr aceos Astacus astacus Callinectes sapidus Cambarus clarkii Cancer pagurus Carcinusmaenas Clibanarius erythropus Eriphia spinifrons Eupagurus bernhardus Galathea strigosa Homarus americanus (vulgaris) Homarus gammarus Idothea granulosa Idothea montereyensis

huevos huevos esqueleto esqueleto ovario, huevos caparaz on exoesqueleto esqueleto huevos esqueleto huevos, ovarios

astaxantina astaxantina

astaxantina -caroteno astaxantina astaxantina astaxantina astaxantina astaxantina ester de astaxantina astaxantina astaxantina

esqueleto epidermis, sangre, huevos huevos, sangre, exoesqueleto

azul, amarillo verde verde

astaxantina cantaxantina cantaxantina

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Orconectes limosus Pachygrapsus marmoratus Panulirus vulgaris Plesionica edwardsii Asteroideos Asterias rubens

Tabla 3. Continuaci on esqueleto amarillo, rojo esqueleto esqueleto, ovarios, huevos hipodermis piel azul, violeta rojo azul

astaxantina cantaxantina astaxantina astaxantina

azul violeta

astaxantina astaxantina, 7,8-didehydroastaxantina, 7,8,78tetradehydroastaxantina astaxantina astaxantina astaxantina astaxantina y adonirubina astaxantina, cantaxantina, adonirubina, zeaxantina. astaxantina astaxantina

Asterina pectinifera Crossater papposus Lysiasterias perrieri Marthasterias glacialis glacialis

piel piel piel piel

rojo violeta azul

Equinoideos Hemicentrotus pulcherimona Sterechinus neumayera

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Tabla 4. Distribuci on de astaxantina en los insectos (Goodwin, 1984). Especie Ort opteros Locusta migratoria Schistocerca gregaria Hom opteros Acysthosiphon pelargonii Aphis fabae Brachycaudus cardini Eriosoma languinosum Eriosomaulmi Longiunguis pyrarius Periphyllus lyropictus Tetraneura ulmi Cole opteros Leptinotarsa spp. Lilioceris lilii Dipteros Chironomus annularius Pigmento Astaxantina, -caroteno -caroteno,astaxantina,luteina astaxantina, isozeaxantina isozeaxantina, astaxantina, -zeacaroteno, toruleno astaxantina, 3,4,4-trihydroxi- -caroteno. astaxantina, cantaxantina astaxantina, cantaxantina, -caroteno. astaxantina Astaxantina,3,4-didehydrolicopeno astaxantina, isozeaxantina, isocriptoxantina astaxantina astaxantina, cantaxantina. astaxantina

aproximadamente 600 carotenoides en el mundo viviente. Dentro de los cuales la presencia de la astaxantina ha sido detectada en la mayor a de las especies de algas clorotas, en 130 especies de crust aceos, 27 de insectos, 86 de peces y 10 de aves. Los productores primarios tienen la capacidad de biosintetizar los carotenoides, ya que se encuentran gen eticamente codicados; considerando que los animales no tienen esta posibilidad, la transferencia y el metabolismo de los pigmentos se va a llevar a cabo a trav es de la alimentaci on, v a la cadena alimenticia. La transferencia de pigmentos carotenoides, as como la transformaci on metab olica a partir de varios precursores est a evidentemente regulada por las funciones biol ogicas: reproducci on, camuaje, dimorsmo sexual, etc.

La diversidad y naturaleza de las funciones de los carotenoides es muy amplia, tanto en el reino vegetal, reino fungi y reino animal; por lo que es importante resaltar la importancia que tienen en la funci on de fotoprotecci on y antioxidante en los vegetales, as como su papel como fuente metab olica de retinol y de provitamina A en los animales. El conocimiento de la presencia y amplia distribuci on de los carotenoides (particularmente astaxantina) en el reino vegetal, reino fungi y reino animal marca la pauta para la elaboraci on de planes de producci on y extracci on de estos a partir de una vasta fuente natural, como una potencialidad en la selecci on y desarrollo de una tecnolog a limpia, para el aprovechamiento y utilizaci on de metabolitos secundarios de alto valor agregado. Adem as de representar un proceso econ omico importante para el hombre debido al inter es a escala industrial, ya que existe una demanda insatisfecha de pigmentos a nivel mundial en los diferentes campos de aplicaci on, siendo en el caso de astaxantina de 30 toneladas al a~ no.

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Tabla 5. Distribuci on de la astaxantina en los peces (Goodwin, 1984). Especie Anguilla anguilla Barbourisia rufa Bartus nigrofasciatus Beryx decadactylus B. splendes Carassius auratus Cetostomus regans Chaenocephalus aeratus Chelidonichthtys kumu Chrysophrys major Clupanodon punctatus Coilia mystus Cololabris saira Coregonus autumnalismigratorius Coreoperca kawamebari Cyclopterus lumpus Cyprinus carpio Dissotichus eleginoides Doderleinia berycoides Engraulis japonica Entosphenus japonicus Epinephelus akaara E. fasciatus Esox lucius Etrumeus micropus Exocoetus volitans Fistularias petimba Gambusia holbrooki Gasterosteus aculeatus Gephyloberix japonicus Gyrinomismus sp. Harengula tunasi Helicolenus hilgendor Ilisha elongata Ischikauia steenackeri Lampetra planeri Latealabrax japonicus Lepidotrigla g untheri Lepomis megalotis Micropterus salmoides Moroco steindachneri Muraenolepsis microps Nerophis phidion Notothenia gibberifrons Oncorhynchus tschawytscha Oncorhynchus tschavoytscha Opsarichthys unicirostris Oryzias latipes Nombre vulgar anguila dorada rosa dorada esplendida carpa dorada pez ballena pez dorado perca japonesa anchoa lamprea mero lucio sardina pez volador pez auta guppy espinocha pez ballena sardina lamprea carpa orejona lobina negra salm on salm on Chinook Medaka

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Tabla 5. Continuaci on Paracottus kessleri Paracottus kessleri Paracottus kneri Parapristiopoma lineatum Percha uvitilis perca de agua Pimelometopon pulchhrum Platessa platessa lenguado Platichthys esus lenguado Priacanthus boops Pristimoides amoenus Pronichthys agoo pez volador Pseudochaenichthys gorgianus Pungitus pungitus Pungitus sinensis Raja georgiana raya Regalecus glesne Rhinogobius brunneus Roccus saxalitis Rondeletia bicolor pez ballena Salmo fario trucha Salmo gairdneri trucha arcoiris Salmo salar salm on del Atl antico Salmo trutta trutta trucha de mar Salmo trutta morpho fario Salvelinus sp. trucha Sardina pilchradus Sarotherodon mossambicius Scorpaena scrofa Sebastes baramenuke pez piedra Sebastes avidus Sebastes minitus Sebastes umbrosus Sebasticus marmoratus Sebastolobus macrochir Serrasalmo nattereri pira~ na Stolephorus japonicus Tinca tinca Trematomus hansoni Tribolodon hakonensis Zacco temmunke -

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Tabla 6. Presencia de la astaxantina en las aves (Goodwin,1984). Especie Pigmentos Nombre vulgar Ajaia ajaia Astaxantina, cantaxantina esp atula rosa Bombycilla cedrorum astaxantina cotorro Guara guara Astaxantina, cantaxantina ibis escarlata Phoenicircus nigricollis Astaxantina, cantaxantinaadonirubina ave alhaja Phoenicoparrus andinus Astaxantina, cantaxantinaadonirubina amingo de los Andes Phoenicoparrus jamesi Astaxantina, cantaxantinaadonirubina amingo \James" Phoenicopterus antiquorum Astaxantina, cantaxantinaadonirubina Gran amingo Phoenicopterus chilensis Astaxantina,cantaxantinaadonirubina amingo chileno Phoenicopterus ruber Astaxantina, cantaxantina adonirubina amingo americano Rampochelus carbo astaxantina

Literatura citada 1. Britton, G., Armitt, G., Lau, S. Y. M., Patel, A. K., and Shone, C. C. 1982. In: Britton, G., and Goodwin, T. W. (Eds). Carotenoid Chemistry and Biochemistry. Pergamon Press. London. pp: 237. 2. Cohen, Z. (Ed). 1999. Chemicals from Microalgae. Taylor & Francis. U.K. 419. pp 3. Goodwin, T. W. 1965. The biosynthesis of the carotenoids. In:: Goodwin, T. W. (Eds). Chemistry and biochemistry of plant pigments. Academic Press. London. pp.143-173. 4. Goodwin, T. W. 1980. The biochemistry of the carotenoids. Vol. I Plants. 2nd. ed. Chapman and Hall. London and New York. 377 pp. 5. Goodwin, T. W. 1984. The biochemistry of the carotenoides. Vol. II Animals 2nd ed. Chapman and Hall. London and New York. 223 pp. 6. Gorenot y Guern, 1989. Organisation et Biologie des Thallophytes. Doin. Editeurs. Paris. 235 pp. 7. Johnson,A. E., An, G. H. 1991 Astaxanthin from microbial sources. Critical reviews in Biotechnology. 11(4):247-326. 8. Katayama, T., Miyahara, T., Kunisaki, Y., Tanaka, Y., y Imai, S. 1973. Carotenoides in the sea bream, Chrysophrys major, and the red sea bream, Evynnis japonica, and metabolism to astaxanthin. Kagoshima Daigaku Suisan Gakubu Kiyo. 22: 63-72. 9. Klein, R. M., y Cronquist, A. 1967. A consideration of the evolutionary and taxonomic signicance of some biochemical, micromorphological and physiological characters in the thallophytes. Quaterly Revue of Biology. 42: 105-296.

10. Liaaen-Jensen, S. 1990. Marine carotenoidsselected topics. New Journal of Chemistry 14: 747-759. 11. Longo, E., Sierro c. Vel azquez J., Calo, P Cansado J and Villa T. 1992 Astaxanthin production from Phaa rhodozyma. BFE 9: 565-567. 12. Matsuno, T., Katsuyama, M., Iwasaki, W., y Ishihara, Y. 1974. Carotenoid pigments in pond smelt. Bulletin of Japan Society 40: 409-412. 13. Merejkowsky, C. 1883. Histoire du d eveloppement de la m eduse Obelia. Bull. Soc. Zool. Fr. 8: 98-129. 14. Nelis,H. J., De Leenheer A: P: 1991. Microbial sources of carotenoid pigments used in foods and feeds. Journal of Applied Bacteriology. 70: 181-191. 15. Pomar ede, M.' 1990. Les couleurs des oiseaux et ses myst eres. Armand Colin. 16. Young, A., y Britton, G. 1993. Carotenoid in photosynthesis. 1st ed. Chapman and Hall. London. 498 pp. 17. Richmond,A. (Ed) 1986. Handbook of Microalgal Mass Culture. CRC Press, Inc. 528pp. 18. Zagalsky, P. F. 1976. Carotenoid protein complexes. Pure and Applied Chemistry. 47 (2-3): 103-120.

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