CONCENTRACIN DE UN EXTRACTO DE CELULASAS DE TRAMETES TROGII POR FERMENTACIN EN ESTADO SLIDO. Cruz -Caamao Y1. Epitacio -Fernndez K1.

Jurez-Luna M. I1.
1

DEIS Zootecnia, Universidad Autnoma Chapingo, Km .38.5 Carretera Mxico Texcoco C.P 56230 Zootecnia_4d@hotmail.com

RESUMEN

INTRODUCCIN La estructura morfolgica del tejidos de los forrajes puede ser uno los principales factores que limitan el consumo, la digestibilidad y la energa disponible en los rumiantes. Estos cubren la mayor parte de sus requerimientos energticos a travs de la fermentacin de las paredes celulares realizadas por microorganismos ruminales (Jung y Allen, 1995). La celulosa es el principal componente de la membrana celular de la mayor parte de las plantas, est constituida por moles de D-glucosa unidas por los enlaces -1-4 glucosdicos y es el ms abundante en la biosfera. Las celulasas son enzimas hidrolticas que participan en el rompimiento de los enlaces glicosdicos -1,4 presentes en los polisacridos de la celulosa. Bacterias y hongos pueden producir enzimas celulasas para la hidrlisis de material lignocelulsico. Por ello se ha propuesto la utilizacin de enzimas fibrolticas exgenas (EFE) como xilanasas, celulasas, enterasas y lacasas de origen fngico o bacteriano (Bhat Hazlewod, 2001; Beauchemin et al., 2003; Niamke y Sun, 2004; Adenosogan et al., 2007; Marquez- Araque et al., 2007; Kruger y Adesogan, 2007; Graminha et al., 2008) para incrementar la hidrolisis de las paredes celulares principalmente de los forrajes. Los hongos de los gneros Pleurotus y Trametes tienen habilidad para degradar fibra, ya que producen diferentes complejos enzimticos lignocelulolticos (Marzullo et al., 1995; Levin y Forchiassin, 1997), el tipo y actividad de las enzimas producidas puede variar dependiendo del microorganismo y de la cepa, del sustrato de crecimiento y de las condiciones de cultivo, as como del tiempo empleado para la produccin de las enzimas (Lee et al., 1998; Nsereko et al., 2000; Park et al., 2002). La cepa trametes trogii podr ser una alternativa para obtener extractos enzimticos con el fin de ser utilizados como fuentes de enzimas fibroliticas exgenas para su uso en la alimentacin de rumiantes, planteando el objetivo en el presente trabajo, se analiz la actividad de enzimas celulasas, caracterizado en un medio de fermentacin slida, utilizando rastrojo de maz como sustrato en dos tratamientos, con maz y sin maz, para posteriormente realizar el comparativo con los extractos concentrados para as saber cul de ellos sintetiza mayor cantidad de celulasas.

MATERIALES Y MTODOS CULTIVO DEL HONGO El experimento se basa en el cultivo de hongos de pudricin blanca que producen celulasas a partir del sustrato, para esto se utiliz Trametes trogii una especie donada por la Universidad Autnoma de Aguascalientes. Este hongo se cultiv en PDA, para propiciar su crecimiento durante 7 das y posteriormente se inocularon 4 discos de 1 cm de dimetro a dos tipos de tratamientos; uno consista en sustrato conformado por rastrojo de maz con grano , y otro en rastrojo de maz sin grano, en una mezcla de 80%rastrojo y 20% salvado de trigo al 80% de humedad. Y se incub en una estufa a 30C, al tener dos tratamientos se realizaron tres repeticiones en 7 tiempos (0, 3, 6, 9, 12, 15,18 das). OBTENCION DEL EXTRACTO ENZIMATICO La extraccin enzimtica se realiz cada 3 das, siguiendo el proceso de obtencin de extracto acuoso de hongos fibroliticos, tomando 1.6 ml de esta muestra se colocaron en micro tubos de 2ml. Y se realizaron cuatro sub repeticiones para cada tratamiento. MEDICIN ENZIMATICA Para la medicin enzimtica se tomaron 800l del extracto obtenido y se agreg 100L de buffer con un pH de 5,100L de extracto enzimtico y por 20 minutos de incub a 50C, posteriormente se agreg reactivo DNS y se hirvieron las muestras durante 5 minutos, despus las muestras se colocaron en un bao de agua con hielo y se leyeron en el espectrofotmetro UV-VIS LAMBDA 35 PERKIN ELMER a una longitud de onda de 595 nanmetros. CONCENTRACION ENZIMATICA Los extractos enzimticos se concentraron en el aparato Vacufuge plus de la marca Eppendorf a temperatura ambiente (22o C) y a 30 0 C durante 2 horas 30 minutos, se tomaron 100L de extracto enzimtico concentrado y se realiz la medicin de actividad enzimtica. El diseo que se utiliz fue un completamente al azar con arreglo factorial 2x3. Los datos se analizaron con el procedimiento GLM de SAS 9.

RESULTADOS Y DISCUSIN

celulasas
1.6 1.4 1.2 1 0.8 0.6 0.4 0.2 0 CM SM

Axis Title

SC 0.76866667 0.349

30C 1.41933333 0.563

TA 1.49797767 1.25075567

Los sustratos analizados en este estudio fueron diferentes entre s (p<0.05), siendo el mejor tratamiento el rastrojo con maz. Hubo diferencias significativas entre las temperaturas de la concentracin, ya que la temperatura ambiente (22C) permiti una mayor actividad enzimtica (p<0.05).No se present interaccin entre los sustratos y los tratamientos de concentracin del extracto enzimtico. REFERENCIAS Alis T.M.Araque, G. D. M., S S. G. Muoz, S. E. B. Dios y Octavio L. Corral, 2007, ACTIVIDAD FIBROLTICA DE ENZIMAS PRODUCIDAS POR Trametes sp. EUM1, Pleurotus ostreatus IE8 YAspergillus niger AD96.4 EN FERMENTACIN SLIDA, INTERCIENCIA VOL:32 NUM 11 CONSULTADO EL DIA 27 DE AGOSTO DE 2013 DE: http://www.redalyc.org/pdf/339/33901110.pdf

Torres Salado Nicolas, 2013, EXTRACTOS ENZIMTICOS FIBROLITICOS DE fomes sp .EUM1 Y cellulomonas flavigena EN LA ALIMENTACIN DE CORDEROS, consultado el 27 de agosto de 2013 de la direccin: http://www.biblio.colpos.mx:8080/jspui/bitstream/handle/10521/1903/Torres_Salado_N_DC_Ga naderia_2013.pdf?sequence=1