Definicin y conceptos bsicos (1)

Resonancia de espn electrnico (EPR)

2010 Terico 32 8 de Noviembre
Dra. Mnica Galleano mgallean@ffyb.uba.ar

EPR: Electronic Paramagnetic Resonance ESR: Electronic Spin Resonance

Rama de la espectroscopa de absorcin en la cual una radiacin de microondas produce transicin entre niveles de energa magntica de electrones desapareados.
Paramagnetismo Electrn desapareado - Espn Resonancia

Paramagnetismo (1)

Paramagnetismo (2)

DIAMAGNETISMO
Los materiales diamagnticos no son atrados por campos magnticos.

PARAMAGNETISMO
Los materiales paramagnticos son atrados por campos magnticos

DIAMAGNETISMO

PARAMAGNETISMO

Nitrgeno lquido

Oxgeno lquido

Electrones desapareados

Electrones desapareados (1)

Electrones desapareados (2)

QUE SIGNIFICA QUE UN ELECTRON ESTA DESAPAREADO?

CONFIGURACION ELECTRNICA N N N
Estructuras de Lewis

O O O

Usualmente, un orbital est ocupado por un par de electrones: dos electrones con espines opuestos

Un electrn desapareado es aquel que ocupa, solo l, un orbital.

Teora de los orbitales moleculares

Espn electrnico (1)

Espn electrnico (2) Los electrones tienen la propiedad denominada espn (girar sobre s mismos), que se indica mediante el nmero cuntico ms cuyo valor es uno de los dos posibles

Se requieren 4 nmeros cunticos para especificar el estado completo de un electrn.

n l ml ms nmero cuntico principal (energa del orbital) nmero cuntico del momento angular orbital (forma del orbital) nmero cuntico magntico (orientacin del orbital dentro del subnivel) nmero cuntico magntico de espn o momento angular del espn

ms + ms -

a b

Espn electrnico (3) Los electrones pueden invertir su espn.

Espn electrnico (4)

A diferencia de los electrones que comparten un orbital, el electrn desapareado no tiene restriccin para cambiar su espn.

Principio de exclusin de Pauli: dos electrones no pueden tener los mismos cuatro nmeros cunticos.

EPR solo detecta molculas con e- desapareados y no hay inteferencia de otro tipo de molculas

Resonancia

(1)

Resonancia

(2)

DE = g mB Bo
ge = Factor de desdoblamiento espectroscpico 2,00232 (para un e- libre) mB = Magnetn de Bohr, (momento angular magntico del e-) = 9,2741 10-24 J Tesla-1 Bo = Campo magntico aplicado
H=0 H = Bo
ms = -1/2
E = -1/2 g mB Bo

ms = +1/2

E = +1/2 g mB Bo

D E = h n = g mB B o

La diferencia (DE) de energa entre las poblaciones es proporcional al campo aplicado

S N

Resonancia

(3)

Instrumento (1)

La frecuencia de resonancia del sistema es directamente proporcional a la densidad del campo magntico B0.

ESPECTROSCOPA TRADICIONAL Y EPR

Absorcin

Para un e- libre: ge = 2,00232 mB = 9,2741 10-24 J T-1 B0 = 0,3354 T h = 6,626 10-34 Js

h n = g mB B0 n = g mB B0/h n = 9,4 GHz

Longitud de onda

Fuente

Radiacin Incidiente

Muestra

Radiacin no-absorbida

Detector
Absorcin

H Primera derivada MAGNETO

Instrumento

(2)

Aplicaciones (1)

QUE ESPECIES PUEDEN SER DETECTADAS POR EPR?

Metales de transicin con subniveles d- incompletos Fe, Mn Radicales libres Centrados en oxgeno (radical hidroxilo) Centrados en carbono Centrados en nitrgeno (NO) Centrados en azufre

Aplicaciones (2)

Aplicaciones (3)

QUE INFORMACIN SE PUEDE OBTENER DE UNA SEAL DE EPR?

Identification de especies g value, nmero y tipo de lneas . Cuantificiacin de las especies Informacin sobre el entorno de las especies

ESTRUCTURA HIPERFINA
Solo los ncleos con momento magntico modifican el nmero de lneas del espectro

Nmero de lneas= 2I + 1 Ejemplo: para 1H, I=1/2 I = momento mgntico nuclear Nmero de lneas = 2 1/2 + 1= 2 E = +1/2 g mB (Bo++ Bnu)
ms = +1/2
Absorcin

E = +1/2 g mB (Bo+ - Bnu)

H
Primer

E = -1/2 g mB (Bo++ Bnu)

ms = -1/2

Derivada

E = -1/2 g mB (Bo+ - Bnu)

H = Bo + Bnu
H

H=0

Aplicaciones (4)

Aplicaciones (5) DETECCION DIRECTA A TEMPERATURA AMBIENTE

RADICAL ASCORBILO

MOMENTO MAGNTICO NUCLEAR Y ESTRUCTURA HIPERFINA

Istopo
1H 2H 12C 13C 14N 15N 16O 17O

I
HO

6 5

OH O
4 3 1 2

O O

1/2 1 0 1/2 1 1/2 0 5/2

O Asc

aH = 1.8 G g = 2.0052
3476.0 Gauss 3482.0

Aplicaciones (6) RADICALES DE INTERS BIOLGICO

No se pueden detectar en forma directa a temperatura ambiente

Aplicaciones (7) TCNICAS DE ATRAPAMIENTO DE ESPN

Anin superxido Oxgeno Radical hidroxilo Peroxido de hidrgeno Oxgeno singulete

O2 . -

10-5 s 10-9 s

. HO
H2O2
1O 2

Atrapador
(especie no radical)

Radical libre en estudio

(vida media corta)

Aducto
(vida media larga)

Nitrgeno

Oxido ntrico Peroxinitrito

.NO
ONOO-

DIAMAGNETICO s

PARAMAGNETICO

VENTAJA Hace posible la deteccin de especies de vida media muy corta como para ser detectados en forma directa

Aplicaciones (8)
DESVENTAJAS DEL USO DE ATRAPADORES DE ESPN

Aplicaciones (9) DMPO ATRAPANDO ANION SUPEROXIDO Y RADICAL HIDROXILO

1- Cuantificacin de radicales formados: la cantidad de radicales atrapados es menor que la cantidad de radicales formados. 2- Los atrapadores pueden introducir perturbacin en el sistema: Inhibicin de enzimas, actuar como sustratos de enzimas. 3- El atrapador debe tener acceso al sitio de generacin de radicales, por lo que es necesario considerar las propiedades de particin. DIAMAGNETICO

O2-

O-O-H

OH

OH

Aplicaciones (10) DMPO ANION SUPERXIDO

Aplicaciones (11) DMPO-RADICAL HIDROXILO

Aplicaciones (12) NO Deteccin en sangre de rata sptica Complejo NOHemoglobina A 77 K Deteccin en sobreanadante de cultivos celulares Complejo MGD-Fe2-NO A temperatrua ambiente 2. Resonancia Paramagntica Electrnica. Material Complementario. Fsicoqumica.

Bibliografa:
1. Qumica Fsica, Atkins, 8va ed., Ed. MdicaPanamericana, Buenos Aires, 2008. Cap. 15. Resonancia de espn electrnico El factor g. Estructura hiperfina.