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Axe " Gnie des Procds", centre SPIN, Ecole des Mines de Saint-Etienne
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METHODES SPECTROMETRIQUES D'ANALYSE ET DE CARACTERISATION
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SPECTROPHOTOMETRIE UV-VIS
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SOMMAIRE
1. DOMAINES DAPPLICATIONS.................................................................................................................... 5 1.1. LA COMPLMENTARIT AVEC LA SPECTROMTRIE IR ..................................................................................... 5 1.2. LES LIMITES DE LA SPECTROMTRIE UV-VISIBLE ........................................................................................... 6 1.2.1. Domaine spectral utilis...................................................................................................................... 6 1.2.2. Dviation de la loi de Beer-Lambert ................................................................................................... 7 1.3. LES APPLICATIONS ....................................................................................................................................... 7 1.3.1. Applications les plus courantes ........................................................................................................... 7 1.3.2. Exemples concrets............................................................................................................................... 8 1.4. SPECTROMTRIE OPTIQUE GUIDE .............................................................................................................. 9 1.4.1. Avantages et inconvnients ................................................................................................................. 9 1.4.2. Les diffrents types de sondes fibres optiques ................................................................................... 9 1.5. QUALIT DU SPECTRE ................................................................................................................................... 9 1.5.1. Influence sur le spectre de la largeur de la fente ............................................................................... 10 1.5.2. Influence sur le spectre des radiations parasites ............................................................................... 11 1.6. EXACTITUDE ET PRCISION DES RSULTATS ................................................................................................. 11 1.7. LES SOURCES LUMINEUSES IDALES ............................................................................................................ 12 1.7.1. Sources lumineuses au deutrium...................................................................................................... 13 1.7.2. Sources lumineuses avec filtre de verre en terre rare ........................................................................ 13 1.7.3. Sources lumineuses solutions aqueuses en sels de terres rares........................................................ 14 1.7.4. Sources lumineuses Nd YAG........................................................................................................... 14 1.8. LES MATRIAUX ABSORBANTS IDAUX ........................................................................................................ 14 2. PRINCIPE DE FONCTIONNEMENT.......................................................................................................... 15 2.1. TRANSITIONS LECTRONIQUES ................................................................................................................... 15 2.2. VIBRATIONS ET ROTATIONS ........................................................................................................................ 16 2.3. ABSORPTION SPCIFIQUE ............................................................................................................................ 17 2.4. ANALYSE QUANTITATIVE ........................................................................................................................... 18 2.5. APPAREILLAGE .......................................................................................................................................... 20 2.6. MTHODOLOGIE ........................................................................................................................................ 22 2.6.1. Cas de dosage dun seul lment....................................................................................................... 22 2.6.2. Cas dun mlange de plusieurs lments ........................................................................................... 22 3. MISE EN OEUVRE ....................................................................................................................................... 24 3.1. LES SOURCES ............................................................................................................................................. 24 3.2. MONOCHROMATEURS ET POLYCHROMATEURS ............................................................................................. 25 3.3. LES DTECTEURS ....................................................................................................................................... 26 3.4. LE RECUEIL DU SIGNAL ............................................................................................................................... 28 4. OFFRES COMMERCIALES ........................................................................................................................ 28 4.1. ZEISS....................................................................................................................................................... 28 4.2. HITACHI ................................................................................................................................................. 31 4.3. ATI UNICAM .......................................................................................................................................... 32 4.4. SAFAS ..................................................................................................................................................... 32 4.5. SHIMADZU. ............................................................................................................................................ 33 4.6. CIBA.CORNING...................................................................................................................................... 34 4.7. MILTON ROY. ........................................................................................................................................ 34 4.8. SPECTRA-PHYSICS. .............................................................................................................................. 35 5. CRITRES DE CHOIX................................................................................................................................. 36 6. BIBLIOGRAPHIE......................................................................................................................................... 36
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SPECTROMETRIE D'ABSORPTION MOLECULAIRE ULTRAVIOLETVISIBLE
1.
Domaines dapplications
1.1. La complmentarit avec la spectromtrie IR
La lumire visible ne reprsente qu'une infime partie du spectre lectromagntisme; mais tant dtectable par l'oeil humain, elle fut donc un des premiers moyens de caractrisation des composs chimiques. Puis la spectromtrie UV-visible a longtemps t laisse de ct au profit de la spectromtrie IR. Elle ncessite en effet des composants modernes pour les instruments et des techniques de traitement des donnes assez pousses que seul loutil informatique permet dutiliser en temps rel. Ces mthodes mathmatiques seront tudies par la suite (cf .7.3). La spectromtrie IR utilise les seules nergies de rotation-vibration des atomes composant les molcules et les carts nergtiques mis en jeu restent assez rduits (de l'ordre de l'nergie thermique temprature ambiante): les rsultats sont donc clairs mais peu quantifiables, ils mnent surtout une caractrisation des composs chimiques. La spectromtrie UV-visible complte la prcdente. Outre la rotation-vibration, elle implique des transitions lectroniques avec des nergies leves qui subissent moins l'influence des conditions de mesures: les rsultats sont essentiellement quantitatifs. Les avantages sont nombreux:
un large domaine dapplication (chimie minrale,organique, biochimie, ...); 90%

des analyses mdicales reposent sur de la spectromtrie UV-visible,
une grande sensibilit: les limites de dtection atteignent couramment 10-410-5M et

jusqu 10-6M aprs certaines modifications,
une slectivit largement adaptable: il existe souvent une longueur donde que seul
le corps doser absorbe, ce qui dispense dune sparation chimique des composants,
une grande prcision: les erreurs ne dpassent pas 5% et peuvent tre rduites
quelques diximes de pour-cent sous certaines prcautions,
la simplicit et la rapidit dutilisation.
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1.2.
Les limites de la spectromtrie UV-visible
La spectromtrie UV-visible emploie le spectre compris entre 185 et 800 nm.
1.2.1. Domaine spectral utilis Pour obtenir des rsultats fiables, il faut sassurer que lon analyse bien lchantillon souhait. Cette remarque est une vidence: elle constitue pourtant une des principales limitations de la spectromtrie. Le faisceau incident peut en effet tre absorb par des lments intermdiaires:
par la cuve: le verre absorbe la plus grande partie du spectre IR et le lointain UV, par des fibres optiques (si lappareil en comporte) coeur silice, par loxygne de lair: en dessous de 190 nm labsorption par loxygne trouble
systmatiquement toutes les mesures,
par les impurets sur le trajet de la lumire : la vapeur deau, le CO2 atmosphrique
parasitent la mesure sur les appareils simple rayon,
par le solvant: le tableau ci-dessous indique les longueurs donde limites en dessous
desquelles le solvant absorbe le faisceau incident.
Actone 330 nm
tolune 290 nm
thyl actate 260 nm
chloroforme 250 nm
glycrol 230 nm
hexane 200 nm
mthanol 210 nm
thanol 220 nm
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1.2.2. Dviation de la loi de Beer-Lambert De nombreux paramtres peuvent provoquer une dviation de la loi de Beer-Lambert. Celle-ci nest plus vraie quand la concentration devient trop leve, quand une raction modifie la composition ou le pH, ou quand il reste des impurets. En outre elle doit tre adapte en cas de liaisons hydrogne avec le solvant, de solvatation, dinteractions molcule-molcule aux fortes concentrations, ou de fluorescence. Le calibrage doit alors faire appel des mthodes non linaires.
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1.3.
Les applications 1.3.1. Applications les plus courantes
La spectromtrie sutilise principalement dans deux cas:
en laboratoire afin dtablir un trac quantitatif dun spectre dabsorption ou de

rflexion en fonction de la longueur donde,
en analyse industrielle soit pour dterminer la composition dun chantillon, soit

pour mesurer des paramtres (couleur, turbidit, ...). Parce que la majorit des molcules organiques complexes est transparente au radiation de longueur donde suprieure 180nm, la mesure dun pic dabsorption entre 200 et 400nm indique clairement la prsence de molcules instaures ou de groupes datomes tels les sulfures ou les halognes. Ce genre de donnes complte parfaitement dautres mthodes en particulier la spectromtrie IR et de masse, la rsonance magntique nuclaire, la solubilit et le point dbullition. En outre de nombreuses substances inorganiques ou organiques qui nabsorbent pas les UV ou le visible, ragissent avec des chromophores dont on peut aisment suivre lvolution.
Lanalyse monocomposants : on utilise directement la loi de Beer-Lambert (cf.

thorie). A la limite, dans le cas dune solution limpide sans recouvrement des spectres dabsorption des composs, il suffit dune seule longueur donde pour effectuer la mesure. La qualit de la mesure dpend directement du calibrage initial. (cf. 7.3 Mise en uvre)
Lanalyse multicomposants : elle demeure plus rpandue dans le spectre IR. Turbidit et analyse granulomtrique : la turbidit est un paramtre qui caractrise
les suspensions de particules solides dans un liquide. Celles-ci provoquent une diffusion de la lumire incidente. On accde ainsi leur concentration, leur taille, leur indice de rfraction, ... La mesure de la turbidit prsente un grand intrt dans
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le domaine agro-alimentaire: limpidit de leau, efficacit de filtres par exemple. Elle peut se faire in situ laide de fibre optique. (cf. utilisations des fibres optiques)
Mesure des couleurs : on analyse la lumire rflchie par une surface. La couleur
correspond au complmentaire du spectre rflchi.
Mesure de lpaisseur des films : cette mesure, que lon peut mener en IR comme
en UV-visible, se fait sur lchantillon sans avoir recours des mthodes mcaniques qui pourraient lendommager. Elle intervient par exemple dans ltudes des semi-conducteurs. On envoie le faisceau sur le film pour plusieurs longueurs donde et on observe les interfrences entre les lumires rflchie par le film et par le substrat. Lintensit totale du rayonnement rflchie est une sinusode fonction du nombre donde. Par transforme de Fourier, on en dduit lpaisseur du film dpos sur le substrat. Il est aussi possible de travailler en transmission: le film se comporte comme un interfromtre de Fabry-Prot. 1.3.2. Exemples concrets
La mesure du phnol pur dans leau en continu est possible dans la bande 200300nm. Le spectromtre est cal sur cette bande et effectue une mesure slective en corrigeant la turbidit de leau analyse et la prsence ventuelle dinterfrants tels que nitrates, matires organiques. La gamme de mesure stend de 0 500mg/L avec une plage de pleine prcision de 0 200mg/L. Comme il ny a pas de contact physique entre leau analyse et le capteur de mesure, le vieillissement prmatur de lorgane de dtection plac dans une eau agressive nest pas possible. Les seules parties en contact avec leau sont les tuyaux de raccordement de lanalyseur et de la cuve en quartz travers laquelle passe la lumire ultraviolette. Les dpts ventuels sur cette cuve sont les seuls obstacles au passage de la lumire. Un systme automatique de nettoyage garantit la fiabilit des mesures sur de longues priodes sur un site isol.
L'analyse de chlorures se pratique en mode UV 185nm suivant la loi de BeerLambert; Deux cellules de mesure complmentaires compensent automatiquement la prsence ventuelle de nitrates ainsi que la turbidit de l'chantillon ou l'crasement de la cuve d'analyse. L'analyse s'opre dans une gamme de 0 300 mg/L avec une prcision de 2% et de 300 1000mg/L avec une prcision de 10%.
La matire organique contenue dans l'eau et les effluents, les matires en

suspension et les nitrates possdent un spectre d'absorption dans le domaine UV. On peut ainsi estimer la demande chimique en oxygne (DCO), la demande biologique en oxygne (DBO), les nitrates et les dtergents.
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1.4.
Spectromtrie optique guide 1.4.1. Avantages et inconvnients
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Le dosage de produits de faibles concentrations est de plus en plus impos en matire de normes antipollution : lozone dans lair des villes, les mtaux lourds ou les nitrates dans leau peuvent tre tudis par spectromtrie UV-visible. Cependant, si lon dsire procder un suivi en continu, lappareil doit saffranchir de diffrentes contraintes: les lments doptique trop fragiles (rseaux, collimateurs,... ) ne peuvent rester en permanence sur le site de mesure (oxydation, apparition dune couche organique sur les surfaces de la cuve, ...). Le problme est deffectuer une mesure sans que lappareil soit sur place. Cest pourquoi les fibres optiques ont tendance se dvelopper dans ce domaine: elles amnent linformation optique jusqu' lappareil. Elles saccompagnent toutefois dinconvnients notables. Les fibres en silice prsentent les mmes dfauts que les verres classiques : la bande passante est limite au spectre visible et proche UV, descendre plus bas dans la gamme spectrale exige un traitement spcifique (et coteux) de la fibre, avec du fluor par exemple. En outre le cur de la fibre o transite la lumire est un milieu plus dense que lair : la moindre impuret prsente dans le cur absorbe la lumire. La difficult de fabriquer des fibres de grande puret se rpercute dans leur prix. En spectroscopie il est donc prfrable de les rserver la connexion avec des sondes et dutiliser la plus courte longueur possible.
1.4.2. Les diffrents types de sondes fibres optiques
Les sondes passives: cf. Guide de choix - Spectromtre fibre optique Les sondes actives: cf. Guide de choix - Spectromtre fibre optique
1.5. Qualit du spectre
La qualit du spectre obtenu par utilisation dun instrument dispersif est une fonction de la monochromaticit du rayon incident. Celle-ci dpend de la largeur des fentes du monochromateur ainsi que de la quantit de lumire parasite.
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1.5.1. Influence sur le spectre de la largeur de la fente Lorsque la largeur des fentes diminue, la forme de la courbe spectrale se modifie jusqu ce quune image plus ou moins nette apparaisse (cf le spectre du benzne ci-aprs).
Absorbance
259.0 259.6 260.1
1.2
1.0
0.8
0.6
0.4
0.2
1
0.0 250 260 270 Longueur d'onde (nm)
Effet de la largeur de fente spectrale sur le spectre du benzne (largeur de fentes: 1 :2 2 :1 3 :0.5nm)
Cependant, pour des fentes trs troites, une faible quantit dnergie atteint le dtecteur photomultiplicateur, et du bruit peut altrer la qualit spectrale comme on peut le voir sur le schma suivant :
0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 1 0.1 0.1 (a) (b) 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 5
4 3 2
480
520
560
600 ( nm)
480
520
560
600 (nm)
Effet de la largeur de la fente spectrale sur le spectre du cytocrome (largeur de fentes: 1 :20 2 :10 3 :5 4 :1 5 :0.08nm)
La largeur des fentes dtermine la largeur de bande du spectre du rayon mergeant du monochromateur.
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1.5.2. Influence sur le spectre des radiations parasites Le spectre peut galement tre modifi par le rayon mergeant du monochromateur qui possde une lumire assez diffrente de celle que lon devrait obtenir thoriquement. On appelle cette lumire la lumire parasite, due aux rflexions involontaires dispersives dans le monochromateur. Si linstrument est rgl une longueur donde correspondant un maximum dabsorption connu (max) pour un chantillon, la lumire parasite sera en gnral moins absorbe par lchantillon que celle dautres longueurs donde. Soit S, lintensit de radiation parasite non absorbe la longueur donde 0, et I0 et I, les intensits de la lumire incidente et transmise 0. Labsorbance apparente Aapp est donne par : I + S A app = log 0 I +S Ainsi, si S vaut 1% de I0, la valeur maximale de Aapp vaut 2, et si S vaut 0,1% de I0, la valeur maximale de Aapp vaut 3. Cela donne alors une courbe incurvant la loi de Beer-Lambert
A 3.0
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Concentration
1.6.
Exactitude et prcision des rsultats
Lexactitude dtermine la faon dont sapproche la valeur spectroscopique mesure (A ou ) de la vraie valeur. La prcision des rsultats servant obtenir la valeur moyenne (qui correspond la meilleure estimation du rsultat rel que les expriences ont trouv) est donne par leur dispersion.
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"Vraie" Valeur
Valeur moyenne, A
Exactitude
A Dispersion
concepts d'exactitude et de dispersion On trouve la valeur moyenne A pour lensemble des rsultats A1, A2, ..., An grce la formule : A= A1 + A2 +...+ An n
La prcision des rsultats A1, A2, ..., An sexprime mathmatiquement par la dviation standard SA des rsultats. Elle est dfinie par lquation : SA =
(A
A) 2
n1
1.7.
Les sources lumineuses idales
Londe idale mise doit avoir des pics trs troits et trs bien dfinis, afin quil y ait trs peu de doutes sur la vritable valeur de la longueur donde.
Absorbance
Etalon d'absorbance
Etalon de longueur d'onde
Longueur d'onde
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1.7.1. Sources lumineuses au deutrium On peut obtenir une onde pratiquement idale en se servant des raies de la source dmission. Les sources les plus pratiques sont hydrogne, deutrium ou mercure, bien que dautres soient tout aussi valables. En fait, plusieurs des instruments modernes qui sautocalibrent utilisent les raies dmission du deutrium pour rgler les chelles de longueur donde (le plus souvent les raies 486,0 ou 656,1 nm). Ce qui ne signifie pas que ces instruments soient toujours bien calibrs. 1.7.2. Sources lumineuses avec filtre de verre en terre rare Il existe, en outre, des instruments pour lesquels lutilisation des raies de deutrium nest pas valable. Aussi quelles autres options existe-t-il ? Une des possibilits les plus simples est dajouter un filtre standard constitu de verre en terre rare, par exemple de la silice mlange avec un oxyde terreux. On utilise en gnral lholmium qui donne des bandes dabsorption comprises entre 241 et 637 nm, ou le didymium (573 803 nm). On peut observer des spectres typiques de ces filtres sur les figures suivantes :
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Beckmann:spectre filtre Holmium

1.40 1.20
Absorbance
446 nm
1.00 0.80 0.60 0.40 0.20 0.00
280 nm 460 nm 288 nm 362 nm
536 nm 637 nm
300
400
500
Longueur d'onde (nm)
600
700
800
1.40 1.20
Spectre filtre Holmium-Spectroflux
470 nm
1.00
Absorbance
0.80
384 nm
0.60 0.40 0.20 0.00 300
443 nm
559 nm
662 nm
400
500
600
700
800
Longueur d'onde (nm)
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Les bandes sont en gnral troites, et si le verre est coup aux dimensions correctes, le filtre est trs facile dutilisation. Malheureusement, ces verres souffrent dun problme majeur : ils ne sont pas vraiment reproductibles. Alors que les longueurs donde varient par paquets, il est possible quun paquet ne soit pas tout fait homogne et les positions des pics peuvent dpendre de lpaisseur de la fente. Mais, ces verres conviennent pour des instruments avec des largeurs de fente spectrale suprieures 5 nm et peuvent tre utiliss pour vrifier au jour le jour la reproductibilit des autres instruments dans les mmes conditions dutilisation. 1.7.3. Sources lumineuses solutions aqueuses en sels de terres rares Une approche meilleure mais moins pratique consiste prendre des solutions aqueuses de sels de terres rares. Si elles sont convenablement prpares, ces solutions ne souffrent pas des problmes de variabilit des verres, et de surcrot, elles donnent des bandes dabsorbance plus pointues. Le perchlorate dholmium dans de lacide perchlorique dilu est la solution la plus couramment utilise, certainement parce quelle est aisment disponible dans le commerce et quelle est recommande dans les pharmacopes. On peut galement se servir de petites botes scelles contenant du perchlorate de samarium dans de lacide perchlorique. Les spectres de ces solutions sont donns ci-dessous : 1.7.4. Sources lumineuses Nd YAG Rcemment, est apparu un nouveau matriau solide cristallin donnant des bandes trs troites. Dvelopp par McCrone Research Associates, il est constitu de Nd YAG (neodymium yttrium aluminium garnet) qui servait initialement au travail sur les lasers. La figure ci-aprs en montre un spectre caractristique : 1.8. Les matriaux absorbants idaux
Si lon adopte la mme approche que pour les longueurs donde, le matriau absorbant idal du monochromateur devrait avoir une absorbance constante avec la longueur donde (cf fig ci-aprs).
Absorbance
Etalon d'absorbance
Etalon de longueur d'onde
Longueur d'onde
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En outre, il devrait vrifier les proprits suivantes, listes par Irish de lUniversit de Cambridge : 1. tre facile dutilisation 2. avoir une absorbance indpendante de la longueur donde 3. ne pas tre affect par la lumire parasite 4. ne pas tre fluorescent 5. ne pas avoir ses proprits optiques trop affectes par la temprature 6. ne pas tre modifi par des expositions la lumire et pressions normales 7. tre facile fabriquer et calibrer 8. ne pas dpendre du pH 9. tre de grande puret 10.obir la loi de Beer-Lambert Les points 8, 9 et 10 sappliquent exclusivement aux matriaux liquides, alors que les points 1 7 sont pour les solides et les liquides. Malheureusement, le matriau absorbant idal qui vrifie ces points nexiste pas. On a donc cherch sen approcher le plus possible par des matriaux absorbants solides, liquides ou bien filtres de verre.
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2.
Principe de fonctionnement
La spectromtrie dabsorption molculaire dans le domaine ultraviolet (UV), de 185 380 nm environ, et visible (VIS), de 380 800 nm environ, est une technique courante de contrle et danalyse de composs chimiques. Elle sapplique des groupements datomes (ex : molcules, ions, polymres) qui absorbent le rayonnement lectromagntique (cf. 1.2.) dans le domaine UV-VIS. 2.1. Transitions lectroniques
Labsorption de la lumire UV-VIS par les molcules se produit, comme pour les atomes, du fait de transitions lectroniques entre diffrents niveaux dnergie (cf. 1.5.). Un lectron ltat fondamental absorbe des radiations dune nergie E suffisante pour llever un niveau dnergie suprieur, ltat excit, (ce qui dtermine la longueur donde , par la relation E = h c / , o h est la constante de Planck et c la vitesse de la lumire). Le retour au plus bas niveau dnergie, ltat fondamental, se produit par perte dnergie sous forme de chaleur ou, occasionnellement, par rmission de radiation (fluorescence ou phosphorescence, cf. 1.5.).
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Sil ny avait quun seul type de transition (figure 1), le spectre dabsorption UV-VIS (figure 2) naurait quune seule raie la longueur donde correspondant lnergie ncessaire la transition. Dans ce cas idal, la spectromtrie UV-VIS serait un outil immdiat danalyse qualitative : la longueur donde exacte dabsorption serait parfaitement caractristique de la molcule. 2.2. Vibrations et rotations
Cependant, de nombreux autres niveaux dnergie (dus des vibrations, des rotations et des transitions molculaires) se superposent aux niveaux dnergie lectroniques, et plusieurs transitions sont possibles (figure 3). Le spectre rsultant prend alors la forme dune bande large sans caractristique trs marque (figure 4).
E
tat excit
Absorbance
tat fondamental
excitation 1/E Figure 2 Absorbance

tat excit
Figure 1 E
tat fondamental
1/E Figure 3 Figure 4
En effet, comme les diffrences de niveaux dnergie associs aux vibrations et aux rotations sont bien plus petites que celles mises en jeu dans les transitions lectroniques, lexcitation surviendra des plus grandes longueurs donde correspondantes.
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Ainsi, les transitions lies aux rotations ncessitent seulement des micro-ondes (trs grandes longueurs donde), tandis que celles lies aux vibrations sont associes aux rgions infrarouges (IR). Les transitions de vibration sont souvent accompagnes par la structure fine rotationnelle , cest--dire des transitions de rotation entre les niveaux de vibration : les pics ne sont pas aussi fins que dans le cas de la rotation seule. De mme, dans lUV-VIS, les transitions lectroniques sont accompagnes par des transitions de vibration entre les niveaux lectroniques (cest la structure fine vibrationnelle ). Ainsi, les pics ont lapparence de bandes.
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absorbance
transitions lectroniques structure fine vibrationnelle transitions de vibration structure fine rotationnelle
transitions de rotation
UV-VIS
IR
micro-ondes
Il en rsulte que la spectromtrie UV-VIS donne relativement peu dinformations qualitatives si on la compare, par exemple, la spectromtrie infrarouge (cf. paragraphe 6). Dautres facteurs tels que lenvironnement chimique de lchantillon (par exemple le solvant) peuvent aussi affecter la position et la forme de la bande dabsorption. 2.3. Absorption spcifique
Toutefois, puisque chaque lectron dans une molcule a un unique tat dnergie fondamental et des niveaux excits bien spcifiques, les transitions possibles pour les lectrons dans une molcule donne sont prvisibles et en nombre fini.
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Chacune des transitions, ou saut dnergie, ncessite labsorption dun quantum dnergie et si cette nergie provient dune radiation lectromagntique, il y aura une relation directe entre la longueur donde et la transition particulire quelle gnre. On constate donc une absorption spcifique et, par un ensemble de points dabsorbance en fonction de la longueur donde, on obtient le spectre dabsorption de la molcule. Ce spectre permet la fois lidentification (analyse qualitative), mais dans certaines limites seulement (cf. prcdemment), et lestimation (analyse quantitative) dun compos. Les groupements chimiques qui influencent le plus fortement les caractristiques de labsorption molculaire sont appels des chromophores . Les chromophores qui peuvent tre dtects par des spectromtres UV-VIS comprennent toujours des liaisons doubles entre atomes de carbone (C=C) ou des liaisons doubles ou triples entre le carbone et certains autres atomes (C=O, CN notamment). Ils peuvent tre conjugus dautres groupes fonctionnels pour former des complexes chromophores. Un exemple typique est le benzne :
max = 254 nm
Ainsi, la spectromtrie dabsorption molculaire UV-VIS permet dtudier, ltat gazeux, liquide ou solide, des composs organiques principalement mais aussi des composs inorganiques. En effet, la mesure peut avoir lieu dans certains cas car latome mtallique forme un complexe color avec un autre agent. Par exemple, latome de manganse Mn est mesur sous la forme de lion permanganate MnO4-. 2.4. Analyse quantitative
Lanalyse quantitative par la spectromtrie UV-VIS est trs utilise (beaucoup plus que lanalyse qualitative) car labsorption est plus ou moins importante selon le nombre de groupements datomes placs sur le trajet de la lumire : des lois connues relient cette absorption
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ce nombre dans certaines conditions opratoires. Ce sont les lois de Lambert et de Beer (cf. 1.5.). Loi de Lambert La proportion de lumire incidente absorbe par un milieu transparent est indpendante de lintensit de la lumire (pourvu quil ny ait pas dautres changements physiques ou chimiques dans le milieu). Ainsi, des milieux successifs dgale paisseur transmettent une gale proportion de lnergie incidente. La loi de Lambert sexprime par : T = I / I0 avec : I0 = intensit de la lumire incidente I = intensit de la lumire transmise (I toujours infrieure I0) T = transmittance Il est commun dexprimer la transmittance par un pourcentage : % T = I / I0 Loi de Beer Labsorption de la lumire est directement proportionnelle la fois la concentration du milieu absorbant et lpaisseur de la cuve o se trouve le milieu. Une combinaison de ces deux lois (la loi de Beer-Lambert) donne la relation entre labsorbance (A) et la transmittance (T) : A = log (I0 / I) = log (100 / T) = c x avec : A = absorbance (sans unit) = coefficient dabsorption molaire ou dextinction (dm3 . mol-1 . cm-1) c = concentration molaire (mol . dm-3) x = longueur de la cuve (cm) ou trajet lumineux Il est important de noter que est une fonction de la longueur donde et donc que la loi de Beer-Lambert est seulement vraie en lumire monochromatique. La relation entre transmittance et concentration nest pas linaire (figure 5) mais la relation entre labsorbance et la concentration est linaire (figure 6), ce qui est la base de la plupart des analyses quantitatives.
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transmittance
absorbance Labsorption de la lumire UVVIS est quantitativement exploitable car trs prcise. concentration concentration figure 6
En effet, concernant les transitions lectroniques, lcart dnergie entre ltat fondamental et ltat excit est relativement important. figure 5 A temprature ambiante, il est donc hautement probable que toutes les molcules soient ltat lectronique fondamental. De plus, labsorption et le retour ltat fondamental sont des processus rapides et lquilibre est rapidement atteint. Au contraire, en spectromtrie IR (cf. paragraphe 6), lcart dnergie entre ltat fondamental et ltat excit est relativement peu important, et donc une proportion significative des molcules peut tre ltat excit temprature ambiante. Labsorption IR est ainsi non seulement dpendante de la concentration, mais galement du nombre de molcules ltat excit. Cette dernire information tant difficile obtenir, les inexactitudes de mesure de labsorbance IR limitent lusage de la spectromtrie IR pour les analyses quantitatives. La simple relation linaire entre labsorbance et la concentration et la facilit relative de mesure de la lumire UV-VIS sont donc les raisons pour lesquelles la spectroscopie UV-VIS est la base dun grand nombre de mthodes danalyse quantitative. 2.5. Appareillage
Les spectromtres classiques comprennent les mmes lments (cf. 7.3.), quils soient utiliss dans le domaine UV-VIS que dans le domaine IR (cf. paragraphe 6) : une source, un porte-chantillons, un monochromateur, un dtecteur, un appareil de lecture. Toutefois, la disposition de ces lments diffre selon les deux domaines spectraux.
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En UV-VIS, le porte-chantillons est plac la sortie du monochromateur, et non pas juste aprs la source, afin dviter de dtriorer des molcules fragiles avec tout le rayonnement UV de la source et de provoquer des fluorescences (cf. 1.5.). En IR, on place le porte-chantillons entre la source et le monochromateur.
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Les sources les plus employes sont celle au deutrium qui met fortement dans lUV mais source monochromateur chantillon dtecteur lecture
UV-VIS peu dans le VIS et une lampe au tungstne qui met fortement dans le VIS mais peu dans la rgion basse de lUV. Elles mettent un spectre continu et quelques raies atomiques qui permettent de faire une calibrage en longueur donde par exemple. Le monochromateur est gnralement compos dune fente dentre, dun dispositif de dispersion (un prisme ou un rseau holographique par exemple) et dune fente de sortie. La lumire polychromatique de la source est focalise sur la fente dentre du monochromateur qui transmet slectivement une bande troite de lumire. Cette lumire, certaines longueurs donde, traverse lchantillon, et agit sur les molcules de la solution selon les principes noncs prcdemment (excitation des lectrons puis rmission de lumire), avant datteindre le dtecteur. Les dtecteurs couramment employs sont des tubes photomultiplicateurs et, plus rcemment, des photodiodes. Dans les spectromtres absorption, les dtecteurs mesurent lintensit I de la lumire non absorbe par llment doser. Cette lumire passe donc travers la cuve sans que les photons agissent sur les lectrons de llment. Dans de tels spectromtres, tous les lments sont situs sur la mme ligne. Dans les spectromtres fluorescence, les dtecteurs mesurent lintensit I de la lumire remise par llment, aprs que celui-ci ait absorb la lumire I0 provenant de la source. Dans de tels spectromtres, le porte-chantillons nest plus sur la ligne o se situent les autres lments mais se trouve 90. Ainsi, la lumire I0 venant de la source ne peut arriver au dtecteur et fausser ses mesures.
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La lecture de labsorbance dun chantillon est dtermine en mesurant lintensit de la lumire atteignant le dtecteur sans chantillon (cest le blanc ) et lintensit de la lumire atteignant le dtecteur aprs avoir travers lchantillon. 2.6. Mthodologie 2.6.1. Cas de dosage dun seul lment Le blanc utilis doit contenir la solution laquelle llment tudi a t retir. Dans un premier temps, on cherche la longueur donde dabsorption maximale de cet lment, en traant son spectre dabsorption (A en fonction de ) : max est dtermine. Ensuite, max (pour neffectuer quune seule mesure tout en vitant au mieux les lumires parasites), on trace la courbe dtalonnage de llment. Pour cela, on prpare environ 5 chantillons des concentrations connues et on mesure chaque fois labsorbance A. Parmi ces 5 chantillons, on prpare un chantillon qui donne A = 0 (solvant seul sans llment tudi) et un autre qui donne A = 100% (lment seul). Cette courbe dtalonnage permet de calculer le coefficient dextinction dfini prcdemment. Alors, les concentrations inconnues de llment peuvent tre dtermines, max, en reportant sur la courbe les absorbances mesures. Notons que les mesures ne sont valables que si labsorbance ne dpasse pas 3. 2.6.2. Cas dun mlange de plusieurs lments Le blanc utilis doit contenir la solution laquelle les lments tudis ont t retirs. La loi de Beer-Lambert tant linaire, on peut crire assez simplement les quations dabsorbance pour lensemble des lments.
Dans le cas de 2 lments :

A = 1 c1 l + 2 c2 l
Dans le cas de n lments :

A = i=1i=n (i ci l) Le principe par rapport au cas dun seul lment varie car il ne devient plus assez prcis de travailler aux longueurs donde max de chaque lment. On prfre utiliser toute une gamme de longueurs donde qui se situent dans les parties intressantes des courbes (figure 7).
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absorbance
m longueurs donde p
figure 7 Pour le calibrage (ltalonnage), on prend environ 30 chantillons dans lesquels les lments tudis ont des concentrations diffrentes. Pour chaque chantillon, on a, p :
pour 2 lments :
Ap = 1p c1p l + 2p c2p l
Pour n lments :
Ap = i=1i=n (ip cip l) Avec 30 chantillons, on obtient 30 quations pour chaque longueur donde p que lon peut crire sous forme matricielle : [A] = [K] [C] avec : [A] matrice des absorbances de taille : (nombre de longueurs donde) lignes * (nombre dchantillons) colonnes, soit ici : m * 30 [K] matrice des coefficients de Beer-Lambert (cest--dire les coefficients l) de taille : (nombre de longueurs donde) * (nombre dlments), soit ici : m * n [C] matrice des concentrations de taille : (nombre dlments) * (nombre dchantillons), soit ici : n * 30 En supposant la matrice [K] inversible, on crit lquation : [C] = [P] [A] avec : [P] matrice inverse de la matrice [K]
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En fait, des rsidus de lumire ne permettent pas davoir cette quation avec [P] = [K]-1. On cherche donc [P] pour que : [C] = [P] [A] + E Avec E le plus petit possible. On rsout grce des mthodes de moindres carrs (cf. 1.6.). Les appareils utilisant cette mthode sont gnralement constitus de photodiodes (cf. 7.3.). Ils sont vendus pour une tche bien prcise (par exemple, la mesure de mtaux lourds), et ont dj intgr [P]. Lutilisateur n a donc plus qu prparer 30 chantillons et effectuer les mesure de calibrage. Ensuite, connaissant [P], il peut dduire [C] dans le cas de mlanges des concentrations inconnues. De plus amples informations concernant la technicit des appareils sont donnes en 7.3.
3.
Mise en oeuvre
Le schma gnral d'un spectrophotomtre absorption molculaire UV-visible ayant t prsent dans le paragraphe prcdent, nous allons dtailler dans cette partie les diffrents instruments qui le constituent.
source
monochromateur
chantillon
Dtecteur + systme de mesure
schma simple d'un spectrophotomtre UV spectroscopy, techniques, instrumentation, data handling UV spectrometry group. Chapman Hall 3.1. Les sources
Pour la plupart des spectrophotomtres UV-visible, on utilise principalement deux types de lampes afin de couvrir la totalit du spectre. Ainsi, pour la partie UV du spectre, on emploie des lampes au deutrium ou parfois au xnon haute pression. Les lampes au deutrium mettent en effet un rayonnement dont les longueurs d'onde sont comprises approximativement entre 180 et 400 nm. Ce sont des lampes
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arc remplies de deutrium gazeux basse pression qui mettent un spectre continu, ce qui simplifie la prise en compte des donnes. De plus, elles mettent quelques raies atomiques qui permettent de faire un calibrage prcis. Cependant, ces lampes ncessitent un prchauffage de 30 minutes et ont une dure de vie d'environ 1000 heures, ce qui peut s'avrer gnant lors des applications industrielles o l'on travaille en continu. En ce qui concerne la partie visible du spectre, les plus utilises sont les lampes halogne au quartz filaments de tungstne dont le rayonnement, continu, est compris entre 350 et 1300 nm. La prsence de l'halogne augmente sensiblement la dure de vie de la lampe(1500 2000 heures).Ces deux lampes sont donc utilises de faon complmentaire et simultane pour couvrir la totalit du spectre UV-visible. Il est aussi possible d'utiliser des lampes flash au xnon qui ne chauffent pas si le flash et l'instant du recueil des donnes sont synchroniss; cette caractristique leur confre une dure de vie trs longue (107 heures). De plus, leurs rayonnements couvrent pratiquement la totalit du spectre UV-visible. Elles sont donc de plus en plus utilises dans l'industrie. 3.2. Monochromateurs et polychromateurs
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La fonction du monochromateur est de slectionner une longueur d'onde parmi le spectre du rayon incident. Les plus simples sont composs de filtres ne laissant passer qu'une seule longueur d'onde; il est possible d'en utiliser plusieurs afin d'obtenir diffrentes longueurs d'onde. Cependant leurs possibilits sont limites: les filtres sont peu prcis dans leur slection et ne sont utilisables que dans le domaine visible. De plus, balayer le spectre entier ncessite une multitude d'interventions. Les monochromateurs les plus utiliss sont composs en gnral d'une fente d'entre, d'un dispositif de dispersion comme un prisme ou un rseau, et d'une fente de sortie. L'chantillon et le dtecteur, placs juste derrire le monochromateur, ne seront donc traverss que par un domaine troit de longueurs d'onde. Pour changer de longueur d'onde, il suffit alors de faire pivoter le dispositif de dispersion. En ritrant cette opration, le spectre entier sera balay. Notons que les rseaux offrent une meilleure rsolution que les prismes et une dispersion linaire(voir 1-1-3). Depuis quelques annes l'apparition de dtecteurs multiples a entran l'utilisation de polychromateurs dans les spectrophotomtres. Le polychromateur spare le spectre en d'troites bandes grce un rseau holographique fixe.
monochromateurs
- le monochromateur est plac entre l'chantillon et la source: protection des chantillons du rayonnement. - montage optique complexe; lenteur du systme de balayage.
polychromateurs
- le polychromateur se trouve derrire l'chantillon: l'chantillon reoit tout le rayonnement UV, nfaste certaines cellules. - montage sans pices mobiles: bonne reproductibilit des mesures.
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- large domaine spectral et haute rsolution.
- vitesse d'acquisition du spectre relativement lente, du fait du balayage.
- domaine spectral peu tendu et son agrandissement va de pair avec une diminution de la rsolution. - obtention immdiate de la totalit du spectre.
Les deux sortes dinstruments ont donc chacun leurs avantages et leurs inconvnients et leur choix dutilisation dpend de lexprience raliser. 3.3. Les dtecteurs
Il existe deux types principaux de dtecteurs: le dtecteur unicanal et le dtecteur multicanal. En fait, le premier convient un monochromateur alors que le second est utilis avec un polychromateur.
Le dtecteur unicanal le plus utilis est le photomultiplicateur. Celui-ci est en fait

une amlioration du phototube, auquel a t rajout un systme damplification interne. En effet, la lumire incidente arrive sous forme de photon sur la cathode du photomultiplicateur. Par effet, photolectrique, il apparat des lectrons qui, grce aux lectrodes placs dans le tube de linstrument, se multiplient. En fait, le photomultiplicateur est un tube lectrons contenant une photocathode qui produit des lectrons quand elle est expose la lumire. Pour un lectron la cathode, il y en a 106 lanode. On remarque que la tension de sortie est proportionnelle au flux lumineux.
En ce qui concerne les dtecteurs multicanaux, les diffrents instruments ont tous
le mme principe de fonctionnement: en effet, le faisceau lumineux arrive sur un cristal de silicium dont la structure lectronique va tre modifie grce aux photons incidents; des lectrons excits vont alors passer de la bande de valence la bande de conduction. Ces porteurs de charge libres vont tre utiliss de diffrentes manires selon le type de dtecteurs. Pour un dtecteur du type CCD (Charge Coupled Device), les porteurs de charge libre sont stocks dans des pixels (en fait des diodes) qui caractrisent une troite bande de longueurs d'ondes. Ces pixels sont organiss selon un tableau de colonnes et de lignes, les colonnes servant stocker les lectrons. Dans chaque pixel, associ une bande de longueur d'onde, sont stocks les lectrons mis par les photons correspondants. Le premier pixel vacue ses lectrons dans un fil reli un instrument de mesure, tandis que chaque pixel se dverse dans le pixel le plus proche. A la sortie, un 'transformateur' convertira et amplifiera chaque lot d'lectrons en un signal d'amplitude proportionnelle. Signalons que la taille du pixel dans un CCD influera de manire importante sur la qualit et la prcision des rsultats: un pixel large augmente la capacit de
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stockage et de transmission mais se rvlera moins prcis pour des signaux de faible amplitude qu'un pixel de faible taille. Une barrette de diodes est compose d'une srie de photodiodes montes cte cte sur un cristal de silicium. Chaque diode est ddie la mesure d'une bande troite du spectre. Elle est, de plus, associe un condensateur et connecte une ligne vido de sortie commune travers un commutateur tat solide. Initialement, les condensateurs sont chargs un niveau spcifique. Lorsque les photons pntrent dans les silicium, les porteurs de charges libres gnrs, dchargent les condensateurs. La charge ncessaire au rechargement des condensateurs reprsente le nombre de photons dtects par chaque diode, qui est proportionnel l'intensit lumineuse. Le photomultiplicateur prsente des avantages de simplicit en comparaison des autres cellules de mesure; de plus il prsente un niveau de bruit trs faible (de l'ordre d'un lectron par seconde) et est donc trs sensible. Cette prcision engendre cependant des inconvnients: fragilit mcanique, sensible aux fluctuations des champs magntiques, prix de vente lev et cet instrument ncessite une alimentation de haut tension. Le principal intrt du CCD par rapport la barrette de diode se situe au niveau de la mesure de 'petits' signaux. Le CCD a en effet un niveau de bruit sensiblement plus faible que la barrette de diodes et est donc plus sensible pour les faibles concentrations et les applications ncessitant un faible clairage. Il est par exemple utilis dans les domaines de la biologie molculaire et gntique. Par rapport au photomultiplicateur, s'il prsente un niveau de bruit plus lev, il ne ncessite pas une alimentation aussi puissante et possde un domaine spectral plus large. En revanche, le prix du CCD reste lev et sa manipulation est complexe. La barrette de diode, bien que prsentant un niveau de bruit assez lev ( de l'ordre de quelques milliers d'lectrons par pixel) et tant sensible aux effets de lumire parasite, possde divers avantages. Tout d'abord, elle permet l'acquisition en seulement un dixime de secondes avec une excellente sensibilit d'un spectre complet. C'est pourquoi on l'utilise frquemment pour la mesure de systmes dynamiques tels que la dtection en chromatographie en phase liquide, les analyses en dbit continu, le contrle de processus ou les mesures cintiques. Contrairement la plupart des spectrophotomtres, elle peut mesurer tous les points du spectre simultanment et faciliter ainsi l'utilisation de diverses techniques pour amliorer la qualit des donnes et donc la productivit. De plus, le spectrophotomtre barrettes de diodes n'a pas de problmes de rptabilit du rglage de la longueur d'onde: aucune pice mobile n'tant utilise pour le changement de longueur d'onde ou le balayage, l'imprcision mcanique et la drive en fonction du temps sont limines.
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Enfin, les spectrophotomtres barrettes de diodes sont simples utiliser: comme il n'y a pas de fentes rgler et que la vitesse de balayage est sans effet sur la forme du spectre, les possibilits d'erreur de manipulation sont rduites. 3.4. Le recueil du signal
Le dtecteur est reli grce un convertisseur, un microprocesseur, qui non seulement recueille toute la srie de mesures, mais galement, dans certains spectrophotomtre, conduit le pivotement du systme optique (rseau ou prisme). Grce l'amlioration de la reproductibilit des mesures, la spectrophotomtrie par absorption UV-visible apporte maintenant des rponses qualitatives. La spectrophotomtrie par absorption UV-visible peut tre utilis soit pour une mesure qualitative grce au trac du spectre d'absorption en fonction de la longueur d'onde, soit pour une analyse industrielle en dterminant la composition d'un chantillon grce la loi de BeerLambert. Actuellement, grce aux spectrophotomtres modernes, on prfre effectuer une analyse multicomposants plutt qu'une analyse monocomposant: on obtient ainsi en moins de 1 seconde la totalit des donnes, ce qui permet de rsoudre des problmes de plus en plus complexes et de comparer les spectres de diffrents chantillons.
4.

Offres commerciales
4.1. ZEISS
Adresses: Allemagne: Zeiss Gruppe Analysentechnik, D-07740 Jena Tel: (+49-36 41) 64 33 85 Fax: (+49-36 41) 64 24 85 France: Carl Zeiss S.A., Dpartement Instruments Analytiques, 60 route de Sartrouville, BP 66, 78230 LE PECQ. Tel: (1) 34 80 20 00 Fax: (1) 34 80 20 01 Matriel:
Une srie de spectrophotomtres multicanaux barrette de photodiodes MCS

(disponibles en 1992).Les MCS sont munis dun rseau holographique concave et dune barrette de photodiodes servant de dtecteur canaux multiples. Les modules de spectrophotomtre Zeiss sont conus pour tre combins avec des fibres optiques. Les modles MCS ont un connecteur de bus pour ordinateurs IBM-AT et compatibles. Il existe 7 modles diffrents: MCS 320( 200-620 nm),
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MCS 330( 300-720nm), MCS 310( 360-780nm), MCS 350( 500_915 nm), MCS 340( 600-1010 nm), MCS 311/2( 360-780 nm; les MCS 311 et 312 sont double faisceau).
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Accessoires: guides de lumire (fibres optiques individuelles et en faisceau, simples

et ramifies), adaptateur de fibres optiques, cuves, interface de bus.
Une gamme de modules spectrophotomtriques MCS( disponibles en 1994): MCS

501( 215-1015 nm), MCS 521 UV( 215-800 nm), MCS 521 VIS( 340-900 nm), MCS 551 UV( 215-635 nm), MCS 551 VIS( 360-780 nm), MCS 551 NIR( 6901010 nm). La dure de balayage est variable. Lorsque la dure de mesure n'est pas critique, le balayage et le temps d'exposition de la barrette de photodiodes se rglent automatiquement entre 11 et 120 ms.
Accessoires: Ttes de mesure manuelle et goniomtrique, sonde ATR, objectif

Vario, sonde TS immersion en quartz, sondes TS 10-50 immersion en titane, tte de mesure de rflexion, microscope, cuves circulation.
Les spectrophotomtres SPECORD M 500.1( monochromateur simple) et M

500.2( double monochromateur).
Pour le SPECORD M 500 : un logiciel danalyse des cintiques de raction, un

logiciel danalyse pour multicomposants, un module de mthode....
Caractristiques annonces. Les SPECORD S5 et S10 barrettes de photodiodes, avec des logiciels du mme
type que pour les M 500.
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MCS 310 350
SPECORD M 500
Le SPEKOL 1100 barrettes 185 900 nm de photodiodes, avec interface RS 232 C pour imprimante ou PC externe, et logiciels optionnels analyses d'eau et analyses agro-alimentaires. Appareil de petite taille, avec cran cristaux liquides( rsolution 3.3 pixels/nm). Interface RS 232 C. Gamme spectrale. Vitesse de balayage Largeur de bande spectrale Gamme photomtrique 0.1 50 nm/s 0.8 nm -0.9 4 Abs ou 0 400 %T 0.1 nm 0.3 nm 50 nm/s maxi. 0.1 5 nm
Reproductibilit des longueurs 0.05 nm dondes. Prcision en longueur donde 2.4 nm Exactitude photomtrique Bruit photomtrique 0.003 Abs Abs=1 0.0002 Abs Abs=0, l=500 nm avec une bande de 2 mm et en 5s 0.00005 Abs/heure 551 UV 215-635 551 VIS 360-780
Stabilit photomtrique MCS... G. Spect. Vitesse Larg. de b G. Photo Repro. l. Prcis. l. Ex. Photo Bruit Ph. Stab. Ph. 501 215-1015
551 NIR 690-1010
521 VIS 340-900 3.3 nm
521 UV 215-800 2.2 nm
0.8nm -0.3 4 Abs. +-0.5 nm 0.3 nm 0.005 Abs, mesure avec des filtres NBS 0.00005 Abs RMS
0.5 nm
G. Spect. Vitesse Larg. de b. G. photo.
SPEKOL 1100 320-900 nm
Specord S 5 UV Specord S 5 VIS Specord S 10 UV VIS 200-620 nm 360-780 nm 190-1017 nm 1 mesure sur tout le spectre prend 1 s pour les 3 modles 0.8 nm -0.3 4 Abs.
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Repro. l. Prcis. l. Ex. Photo. Bruit Ph. Stab. Ph.
1nm de 270 650 nm, sinon 2 nm. 0.005A pour A=1 0.005 A avec A = 1 et mesure 400 nm 0.0002 A rms avec A = 0.
0.05 nm 1nm
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4.2. HITACHI Adresse en Europe: Nissei Sangyo Co. Ltd., Hogwood Industrial Estate, Finchampstead, Wokingham, Berkshire RG11 4QQ, United Kingdom. Tel : +44 1734 328632 Fax : +44 1734 732622 Matriel: Les spectrophotomtres U-1100 et U-1000 sont les modles de base monochromateurs, conus pour des mesures comme celles des cintiques de ractions ou le calcul des activits enzymatiques. Le modle U-2000 est un appareil double faisceau et 8 vitesses de balayage, quip d'un calculateur, d'un cran et d'une petite imprimante qui permettent un calcul et une lecture directe des concentrations. Le U-3000 ( double faisceau galement), muni d'un P.C. et d'un logiciel d'analyse sous windows, est conu pour permettre l'analyse de trs petits chantillons. Il est aussi disponible en version double monochromateur (U-3300). Les modles U-3501 (187-3200nm) et U-4001 (240-2600nm) sont double faisceau et double monochromateur: il sont conus pour permettre l'analyse d'une large gamme de solides et de liquides. U-1000 325-1100nm 60 nm/s 5 nm -0.5 3 Abs ou 0 300 %T +- 0.3 nm U-1100 200-1100nm
Gamme spectrale Vitesse de balayage Largeur de bande spectrale Gamme photomtrique Reproductibilit en longueur d'onde Prcision en longueur d'onde Exactitude photomtrique Bruit photomtrique Stabilit photomtrique
+- 1 nm +-0.002 Abs (0-0.5 Abs), +-0.004 Abs (0.5-1 Abs), +-0.15%T 0.0005 Abs 500 nm 0.001 Abs/h U-2000 190-1100 nm 40 nm/s maxi (8 vitesses) 2 nm -1 3 Abs ou 0 300 %T +-0.2 nm U-3000 et 3300. 190-900 nm 30 nm/s maxi (10 vitesses) 0.1, 0.5, 1, 2, 4, ou 5 nm. -2 3 poud le 3000, et -2 4 pour le 3300. 0 300%T +-0.05 nm
Gamme spectrale Vitesse de balayage Largeur de bande spectrale Gamme photomtrique Reproductibilit en L d'ondes
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Prcision en L d'ondes Exactitude photomtrique Lumire parasite Stabilit photomtrique
+-0.4 nm +-0.002 Abs (0 0.5 Abs) 0.05 % maxi 0.001 Abs/h ( 500 nm)
+-0.3 nm +-0.002 Abs de 0 0.5 Abs, et +-0.004 Abs de 0.5 1 Abs 0.015 %T pour le 3000, et 0.0005 %T pour le 3300. +-0.0004 Abs/h 340 nm
U-4001 U-3501 Gamme spectrale 240-2600 nm 187-3200 nm Vitesse de balayage Rglable jusqu' 50 nm/s. Largeur de bande spectrale Rglable de 0.07 8 nm ( 0.18 20 nm pour NIR) par intervalles de 0.01nm Gamme photomtrique -2 5 Abs par crans de 0.001 Abs. Reproductibilit en L. d'ondes +-0.1 nm en UV-VIS, et +-0.5 nm en NIR. Prcision en L. d'ondes +-0.2 nm en UV-VIS, et +-1 nm en NIR. Exactitude photomtrique 0.002 Abs de 0 0.5 Abs, 0.004 Abs de 0.5 1 Abs, 0.3 %T Lumire parasite Stabilit photomtrique 0.0004 Abs/h.
4.3. ATI UNICAM Ces renseignement datent de 1987. Adresse: ATI UNICAM, York Street Cambridge CB1 2PX Tel:0223 358866 Tlex: 817331 UNICAM G Fax: 0223 312764 Matriel : Srie 8600 UV. VIS. 8675: Spectre visible seulement. Appareil pour l'enseignement et les applications de routine. 8670: Spectre visible seulement; pour des applications plus avances. Programmable pour des tests calorimtriques. 8625: UV Visible. Pour l'enseignement et les applications biomdicales de routine. 8620: UV Visible. Pour applications avances: enseignement et industrie. Gamme spectrale: 1951100 nm. 8630: UV Visible. Permet l'analyse des cintiques chimiques. Conu pour les applications en biochimie: laboratoires mdicaux et biotechnologiques.
4.4.
SAFAS
Adresse: SAFAS, 10 quai Antoine 1-98000 MONACO. Tel:(33) 93 30 21 08. Tlex: 460000 SAFAS+ Fax: (33) 93 30 91 08.
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Matriel: Gamme double faisceau D.E.S (Double Energy System). Micro-ordinateur intgr et ordinateur extrieur compatible IBM (utilisable sparment pour des applications comme les traitements de textes. Les fichiers peuvent tre exports vers l'ordinateur extrieur). Le logiciel peut voluer selon les suggestions des utilisateurs et les nouvelles versions sont disponibles gratuitement. Traitement des donnes: mesure permanente du courant d'obscurit du photomultiplicateur, pour obtenir plus de prcisions dans les fortes absorbances. Les donnes sont traites, calcules et stockes sous forme numrique. Le micro-ordinateur intgr dcle certaines pannes, met des diagnostiques et indique des remdes certains problmes invisibles l'utilisateur et qui peuvent perturber ses mesures. Il existe aussi la gamme Easyspec monochromateur type Ebert (1, 2, 3 et 4): c'est une gamme conomique de caractristiques uniformes pour les 4 modles: 330 1000nm, lumire parasite 0.1% 340 nm et 0.5% sur tout le spectre, prcision en longueur d'onde +-1nm, reproductibilit +-0.5 nm, plage de mesure de -0.1 2 A et de 0 130%. Caractristiques annonces. 290 DES 200 DES 190 DES Gamme spectrale 290-1000 nm 200-1000 nm 190-1000 nm Vit. de balayage 166 nm/s 166 nm/s 166 nm/s L de B spectrale. 2 ou 1nm 2 ou 1 nm 0.2 10 nm Gamme photo. +-0.002A 1 A. Rep. en l. d'onde +-0.025 nm. Prec. en l. d'onde +-0.2 nm. Exact. photo. +-0.0002 A 1 A. Lumire parasite 0.02% 220 et 340 m, pour bande passante de 1 nm. Stabilit. photo. 250 nm, b. pas. de 0.5 nm, 0 A:+-0.00005 A.
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170 DES 170-1000 nm 166 nm/s 0.2 10 nm
4.5.
SHIMADZU.
Adresse: distributeur: ROUCAIRE, BP 65 (20, Av. de l'Europe), 78143 Vlizy Villacoublay cedex Tel. Services Commerciaux: (1) 30 67 75 00 Tel. Service aprs-vente: (1) 30 67 75 75 Tlex: 697382 Tlcopie: (1) 30 70 87 20 Matriel: UV-1201V, quip d'un cran et d'un lecteur de cartes IC ROM. 15 Program Packs sont disponibles et permettent de configurer l'appareil selon les applications. Caractristiques annonces: UV-1201V 325-1100 nm 100 nm/s 5 nm
Gamme spectrale Vitesse de balayage Largeur de bande spectrale
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Gamme photomtrique Reproductibilit des longueurs d'onde Prcision en longueur d'onde Exactitude photomtrique Lumire parasite Stabilit photomtrique
-0.3 3 Abs ou 0 200 %T +-0.3 nm +-1.5 nm +-0.005 Abs 1 Abs, avec filtre NIST230D 0.05% 340 nm +-0.002 Abs./heure
4.6.
CIBA.CORNING.
Adresse: Ciba Corning Analytical, Halstead, Essex C09 2DX, England. Tel: (0787) 475155. Telex: 98204. Fax: (0787) 475088. Matriel: Les modles proposs sont ceux de la srie Spectrascan 2800. Ils possdent un logiciel de base pour les applications de routine, et sont quips d'un lecteur de cartes RAM et ROM, qui permet de les programmer pour diverses applications (Analyses multicomposants, analyse de cintiques enzymatiques, analyses sur films ...).Certains programmes sont capables d'interfacer les 2800 avec des compatibles PC. Les modles 2810,2815,2820,2830,2835, et 2840 diffrent par l'quipement qui accompagne le spectrophotomtre et l'unit de base. Caractristiques annonces: Gamme spectrale Vitesse de balayage Largeur de bande spectrale Gamme photomtrique Reproductibilit des longueurs d'ondes Prcision en longueurs d'ondes Exactitude photomtrique Lumire parasite Stabilit photomtrique Spectrascan 2800 200-1100 nm jusqu' 40 nm/s 3 nm (fixe) 0 2 Abs ou0 100%T +-0.1 nm +-0.5 nm +-0.005 Abs ( 0 1abs), +-0.3%T, mesur avec NBSSRM930D 0.1% 220 et 340 nm +-0.001 Abs/h
4.7.
MILTON ROY.
Adresse du distributeur en France BIOBLOCK SCIENTIFIC: Sige social: B.P.111, 67403 Illkirch Cedex Tel: 88 67 14 14 Telex Bioblock: 890436F Bioblock Paris: B.P.27, 92173 Vanves Cedex Tel: 1 46 44 46 46 Page 34
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Matriel: Spectronic 3000, quip d'un ibm 286/287 intgr, d'un disque dur et d'un lecteur de disquettes. Il possde un logiciel de base, peut tre utilis en traitement de texte, et peut tre programm pour accomplir des taches de routine. Caractristiques annonces: Gamme spectrale Vitesse de balayage Largeur de bande spectrale Gamme photomtrique Reproductibilit des longueurs d'ondes Prcision en longueurs d'ondes Exactitude photomtrique Bruit photomtrique Stabilit photomtrique Spectronic 3000 200-900 nm 2 nm -0.1 3.0 A +-1.0 nm +-0.005 A 1 A 0.0005 A prs de 0 A 0.004 A/s
MINES
SAINT-ETIENNE
DES
4.8.
SPECTRA-PHYSICS.
Adresses. France: 91 941 Les Ulis Cedex. Tel: (33) 1-69079956. Tlex: 691 183. Fax: (33) 69 07 60 93. France Sud: 38296 La Verpillire Cedex. Tel: (33) 74 94 43 77. Telex: 900 506. Fax: (33) 16 90 76 93. Matriel: Spectra FOCUS, quip d'un logiciel multitche permettant la gestion simultane de l'acquisition et du traitement des donnes. Systme d'exploitation IBM OS/2. Caractristiques annonces: Spectra FOCUS. Gamme spectrale. Vitesse de balayage. Largeur de bande spectrale. Gamme photomtrique. Reproductibilit des longueurs d'ondes. Prcision en longueurs d'ondes. Exactitude photomtrique. Bruit photomtrique. Stabilit photomtrique. 30 000 nm/s 0.00005 3.0 A
0.001 nm 0.00001 A 0.0002 A/h
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5. 6.
Critres de choix Bibliographie
UV Spectroscopy : Techniques, instrumentation, Data hendling (UV SPECTROMETRY GROUP). Vol 4.
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Axe " Gnie des Procds", centre SPIN, Ecole des Mines de Saint-Etienne

METHODES SPECTROMETRIQUES D'ANALYSE ET DE CARACTERISATION

SPECTROMETRIE D'ABSORPTION MOLECULAIRE ULTRAVIOLETVISIBLE

un large domaine dapplication (chimie minrale,organique, biochimie, ...); 90%

une grande sensibilit: les limites de dtection atteignent couramment 10-410-5M et

la simplicit et la rapidit dutilisation.

Les limites de la spectromtrie UV-visible

La spectromtrie UV-visible emploie le spectre compris entre 185 et 800 nm.

thyl actate 260 nm

Les applications 1.3.1. Applications les plus courantes

La spectromtrie sutilise principalement dans deux cas:

en laboratoire afin dtablir un trac quantitatif dun spectre dabsorption ou de

en analyse industrielle soit pour dterminer la composition dun chantillon, soit

Lanalyse monocomposants : on utilise directement la loi de Beer-Lambert (cf.

La matire organique contenue dans l'eau et les effluents, les matires en

Spectromtrie optique guide 1.4.1. Avantages et inconvnients

1.4.2. Les diffrents types de sondes fibres optiques

Exactitude et prcision des rsultats

Les sources lumineuses idales

Etalon de longueur d'onde

Beckmann:spectre filtre Holmium

1.00 0.80 0.60 0.40 0.20 0.00

280 nm 460 nm 288 nm 362 nm

Spectre filtre Holmium-Spectroflux

0.60 0.40 0.20 0.00 300

Longueur d'onde (nm)

Etalon de longueur d'onde

excitation 1/E Figure 2 Absorbance

1/E Figure 3 Figure 4

Dans le cas de 2 lments :

Dans le cas de n lments :

Dtecteur + systme de mesure

- large domaine spectral et haute rsolution.

- vitesse d'acquisition du spectre relativement lente, du fait du balayage.

Le dtecteur unicanal le plus utilis est le photomultiplicateur. Celui-ci est en fait

Une srie de spectrophotomtres multicanaux barrette de photodiodes MCS

Accessoires: guides de lumire (fibres optiques individuelles et en faisceau, simples

Une gamme de modules spectrophotomtriques MCS( disponibles en 1994): MCS

Accessoires: Ttes de mesure manuelle et goniomtrique, sonde ATR, objectif

Les spectrophotomtres SPECORD M 500.1( monochromateur simple) et M

Pour le SPECORD M 500 : un logiciel danalyse des cintiques de raction, un

MCS 310 350

551 NIR 690-1010

521 VIS 340-900 3.3 nm

521 UV 215-800 2.2 nm

G. Spect. Vitesse Larg. de b. G. photo.

SPEKOL 1100 320-900 nm

Repro. l. Prcis. l. Ex. Photo. Bruit Ph. Stab. Ph.

Prcision en L d'ondes Exactitude photomtrique Lumire parasite Stabilit photomtrique

170 DES 170-1000 nm 166 nm/s 0.2 10 nm

Gamme spectrale Vitesse de balayage Largeur de bande spectrale

0.001 nm 0.00001 A 0.0002 A/h

Critres de choix Bibliographie

UV Spectroscopy : Techniques, instrumentation, Data hendling (UV SPECTROMETRY GROUP). Vol 4.

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