Conservacin ex situ: Boletus edulis

Boletus edulis
Ordenacin taxonmica:

Subdivisin: Basidiomycotina Clase: Homobasidiomycetes Subclase: Agaricomycetidae Orden: Boletales Familia: Boletaceae Genero. Boletus Especie: Boletus edulis

Boletus edulis es el nombre en latn de una seta comestible, tambin conocida en Espaa como seta calabaza, seta de calabaza o simplemente calabaza. Puede encontrarse muy frecuentemente en bosques de pinos. Es una seta que puede alcanzar dimensiones notables; por lo general el sombrero puede medir de 7 a 20cm de dimetro y el pie adquirir la misma altura. Altamente apreciado, el Boletus edulis es comercializado fresco en otoo, en el centro y sur de Europa, pero tambin se comercializa seco por todo el mundo.

DESCRIPCIN MACROSCPICA: Sombrero: Desarrolla la forma tpica de los "boletus", al principio semiesfrico, con el margen rodeando al pie, despus convexo. Tiene dimetro que puede llegar a los 25 o 30 cm. y un color marrn claro, pardo, canela, ms oscuro en el centro y frecuentemente difuminado a los bordes, donde llega a ser casi blanco. La cutcula es ligeramente viscosa, sobre todo en tiempo hmedo, caracterstica que pierde con la edad. Su margen es excedente, incurvado que pasa a ser casi plano con su desarrollo. Himenio: Los tubos son libres y largos, de 10 a 20mm. segn la edad del ejemplar. Fcilmente separables de la carne e inicialmente blancos,

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pasando a ser con la madurez, amarillos y posteriormente verdosos. Sus poros son circulares del mismo color que los tubos. No azulean al roce. Pie: De 5-20 cm. de largo por 2-8 cm. de dimetro segn su estado de crecimiento. Consistente y robusto, frecuentemente ms engrosado en la parte media, sobre todo en los ejemplares jvenes. Est finamente decorado, sobre todo en su parte superior, con una retcula blanca que contrasta con el color avellana del fondo y se difumina en el pice del pie que es ms claro, casi blanco. Carne: Espesa, blanca, inmutable, tierna. Bajo la cutcula adquiere un color rojizo. Con la edad adopta una consistencia esponjosa. Olor y sabor muy agradables y caractersticos, que recuerda ligeramente al de la avellana.

ECOLOGA:

Aparece desde finales de verano, hasta final del otoo, bajo conferas, caducifolios (robledales, castaares, abedulares), jalares, etc. Prefiere suelos cidos. Suele crecer en grupos de varios ejemplares ms o menos dispersos.

Condiciones climticas y ecolgicas de fructificacin:

Los Boletos cuentan en Europa con ms de un centenar de especies, de las cuales en la Pennsula Ibrica se hallan presentes una gran mayora. La posicin geogrfica de Espaa le permite gozar de una zona de clima predominantemente atlntico y otra zona mucho ms amplia en la que predomina el clima mediterrneo. Tambin presenta la pennsula un clima prealpino, junto a zonas en el sur en las que la lluvia pasa grandes temporadas sin aparecer y con amplias franjas costeras dunares. Cabe mencionar que la mayora de boletos son especies micorrizgenas asociadas a un tipo concreto de rbol o planta.

Boletus edulis una especie ubiquista por naturaleza puede estar asociado con hayas (Fagus sylvatica), robles (Quercus sp.), pinos (Pinus sp.), castaos (Castanea sativa), avellanos (Corylus avellana) y curiosamente tambin con
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plantas Cistceas (Cistus ladanifer), pudiendo prcticamente encontrarlo en todo tipo de hbitats.

MICROSCOPA: Esporada: Ocre-olivcea. Esporas: Amarillentas, lisas y no amiloides. 14-20 x 4-6 m. Cistidios fusiformes. Basidios: claviformes. 29-40 x 7-12 m.

VARIEDADES:

Se han descrito numerosas formas debido a la variabilidad macroscpica de los ejemplares, as como a la influencia de los diferentes tipos de ecosistemas. Entre los ms destacados cabe mencionar:

Boletus edulis var. pusteriensis Ferrarese et Simonini, que se diferencia del tipo en que los poros son desde joven amarillos, para terminar amarillo oro en lugar de tener tonos olivceos. Y la carne azuela dbilmente.

Boletus edulis var. clavipes Peck. Con el borde del sombrero siempre marrn amarillento y tonos claros del sombrero y un pie exageradamente claviforme

COMESTIBILIDAD:

Uno de los mejores boletus comestibles. Por su abundancia se comercializa industrialmente, aunque su carne es atacada fcilmente por larvas de insectos y moluscos. Fcil de confundir con otros boletos de poros blancos (B. aerus, B. aestivalis, B. pinophilus, Tylopilus felleus) pero la fina retcula, carne bajo la cutcula color ferruginoso y el borde del sombrero ms claro son unos buenos distintivos para su identificacin.
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CONSERVACIN EX SITU

La observacin de que determinados hongos comestibles crecan espontneamente sobre algunos materiales orgnicos en descomposicin y la posibilidad de producir apreciados alimentos han hecho que se intente la tcnica para el cultivo de hongos.

Las especies cultivadas, sin embargo, jams han sido las ms apreciadas desde el punto de vista grastronmico aunque ha resultado ser, evidentemente, las ms consumidas. Las ms apreciadas, son sin duda los boletus, especies micorrzicas, cuyos carpforos todava no ha sido posible obtener en ausencia de la planta simbionte. El xito en el cultivo de los hongos ha quedado limitado por ahora a las especies saprfitas como el Agaricus bisporus.

El inters de conservar setas de inters comercial est justificado debido a la recoleccin masiva que se est produciendo en los ltimos aos y que podra derivar en la desaparicin de algunas especies determinadas zonas, junto con la problemtica de cultivar las especies micorrzicas.

A continuacin, se exponen ciertas tcnicas que hemos recopilado y que creemos, pueden ser utilizadas para la obtencin de micelios y esporas viables que pueden ser conservados en bancos de germoplasma.

Los mtodos utilizados para la conservacin de las cepas difieren segn el tipo de hongo y el estado biolgico del mismo que se pretende conservar (micelio, esporas sexuales, esporas asexuales, etc.). En general los mtodos de conservacin pueden clasificarse en aquellos que permiten la recuperacin de muestras en lapsos cortos, y aquellos en que es posible almacenar las muestras durante largos perodos de tiempo.

A corto plazo: Son aquellos en los que las cepas deben transferirse peridicamente a los medios de cultivo adecuados. El tiempo de transferencia vara segn la especie, de unas cuantas semanas a un mximo de tres meses.
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La resiembra peridica de las cepas se realiza utilizando bsicamente medios de cultivo slido adquiridos de manera comercial, como el agar con extracto de malta y de dextrosa y papa.

A largo plazo: Con estos mtodos es posible el almacenamiento de las cepas por largos perodos de tiempo sin que sean necesarias las resiembras frecuentes. La mayora de las cepas de hongos comestibles, en el estado vegetativo del micelio, son mantenidas inmersas en un contenedor de nitrgeno lquido a temperaturas ultrabajas (196 C). Para ev itar daos en las clulas debido a las bajas temperaturas del nitrgeno lquido, se utilizan sustancias crioprotectoras que evitan la formacin de grandes cristales de hielo durante la congelacin. Los crioprotectores utilizados son glicerol o dimetil sulfxido, en una concentracin de 10% y 5% respectivamente.

Aislamiento y mantenimiento de cepas

Para el desarrollo del micelio de los hongos en el laboratorio, se emplean medios de cultivo slidos que le proporcionan al hongo los nutrimentos necesarios para su desarrollo. Los medios de cultivo son generalmente vendidos por casas comerciales en diferentes presentaciones, como el caso del agar con extracto de malta y el agar con papa y dextrosa, sin embargo es posible prepararlos.

Al micelio de un hongo (forma algodonosa) que se desarrolla sobre un medio de cultivo nutritivo se le llama cepa. Su aislamiento se puede realizar por medio de tejido (fragmento del hongo) o por medio de esporas.

a) Aislamiento por medio de tejido

Este tipo de aislamiento es una de las formas ms simples de obtener una cepa y el obtenido el tejido. resultado es una copia idntica del hongo del cual se ha

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En un ambiente de absoluta asepsia, incluyendo los materiales previamente esterilizados, se coloca el hongo, el cual deber estar en buen estado y libre de tierra y/o insectos. El hongo se corta longitudinalmente con una navaja; con la ayuda de unas pinzas estriles y fras, se toman fragmentos del micelio o carne del hongo y se colocan en placas de Petri con medio de cultivo.

Las placas con los aislamientos se incuban entre 25-28 C, de preferencia en la oscuridad o penumbra; 2 3 das despus, se observar crecimiento micelial sobre la superficie del medio. Se deben seleccionar los cultivos con mejor apariencia y transferirse a nuevas placas con medio de cultivo.

b) Aislamiento por medio de esporas

Para llevar a cabo este aislamiento, se deber contar con una esporada del hongo. La esporada se obtiene colocando el sombrero del hongo con las lminas hacia abajo sobre papel estril por un tiempo de 6 a 8 hrs. Para evitar contaminacin y favorecer un ambiente hmedo para que la descarga de esporas se realice adecuadamente, el hongo y el papel se tapan con un recipiente limpio y tambin estril.

Transcurrido el tiempo, se retira el hongo del papel, quedando ste impreso con las esporas en forma de una huella radial, de preferencia se seca en una incubadora durante 24 hrs. a 28-30 C. Una ve z obtenida la esporada sobre el papel, con una navaja o tijeras estriles se corta un pequeo fragmento de aproximadamente 1cm, que se sumerge en 100ml de agua destilada estril fra, agitndose para que las esporas se disuelvan en el lquido. De esta dilucin, con ayuda de una pipeta, se toman 0.5ml y se colocan en placas de Petri con medio de cultivo. La placa se mueve ligeramente para distribuir homogneamente el agua con las esporas en todo el medio. Las placas se incuban en las mismas condiciones mencionadas para el aislamiento por tejido y 5 u 8 das despus, se observar el desarrollo del micelio. Todo este proceso se debe realizar en condiciones de esterilidad absoluta.
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Para evitar la contaminacin por bacterias y hongos, a los medios de cultivo esterilizados para ambos tipos de aislamiento, antes de su solidificacin, se les puede aplicar 100 mg/L de gentamicina, estreptomicina o penicilina y 100 ppm (0.1 por ciento) de benlate (benomyl).

Mantenimiento y/o preservacin de cepas

Para retardar el envejecimiento, la viabilidad y la prdida de las caractersticas propias de las cepas, es necesario preservarlas

adecuadamente. Para ello, las cepas se deben transferir peridicamente a nuevas cajas de Petri con medio de cultivo nutritivo.

La resiembra o transferencia se realiza tomando con una aguja de diseccin estril un fragmento del micelio del hongo y se coloca sobre el medio de cultivo de la nueva caja de Petri. Se incuba de 25-28 C y una vez que el micelio cubre toda la superficie del agar (10 a 15 das), las cajas se pueden mantener en refrigeracin a 5 C. El tiempo entre ca da transferencia es de 3 a 6 meses, dependiendo de la cepa y cuidados en almacenarla.

De igual manera, las esporadas que se hayan obtenido, se pueden preservar en bolsas de polietileno con material deshidratante, como silicagel (gel de slice), para favorecer que la esporada se mantenga seca. Tambin se pueden almacenar en pequeos frascos con tapa de rosca a 5 C.

Uno de los mejores mtodos de almacenamiento de cepas es en nitrgeno lquido. La conservacin es a largo plazo ya que la actividad del micelio es completamente detenida a -196 C. Aqu la s cepas pueden permanecer viables por muchos aos sin necesidad de hacer resiembras peridicas, manteniendo sus caractersticas originales de forma, color y rendimientos en la produccin. La desventaja de este sistema es que debido a su alto costo y a la delicada tcnica para almacenar las cepas, slo es utilizado en instituciones de investigacin.

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Elaboracin del inoculo

La elaboracin de inculo se realiza en dos etapas:

Inculo primario.- es la propagacin del micelio en semillas a partir de una cepa crecida en medio de cultivo. Inculo secundario.- es la propagacin del micelio en semillas a partir del inculo primario, es decir, es la multiplicacin del micelio para disponer de una mayor cantidad para su siembra en el substrato elegido para la produccin de hongos.

El inculo primario como se mencion anteriormente, se elabora a partir del micelio desarrollado en medio de cultivo, ste se corta con una navaja o bistur flameado o desinfectado con alcohol, en fragmentos de

aproximadamente 1cm y con una aguja de diseccin se toma uno de stos y se coloca sobre la semilla, se le deja un poco de aire a la bolsa y se le hace un pequeo nudo en la parte superior. Se incuba de 25-28 C en oscuridad hasta que el micelio cubra totalmente la semilla; 15 20 das despus, el inculo primario estar listo y podr ser utilizado para elaborar el inculo secundario.

El inculo secundario se realiza vaciando un poco de inculo primario a nuevas bolsas con semilla estril, se agita homogneamente y se incuban en las mismas condiciones mencionadas para el inculo primario- El inculo secundario es el que se usa para la siembra y fructificacin de las setas. Si el inculo no se emplea inmediatamente puede ser almacenado de preferencia en oscuridad y refrigeracin a 5 C hasta por tres mese s, aunque lo recomendable es utilizarlo a la semana de estar en refrigeracin.

El inculo preparado se puede aplicar en las semillas o plntulas de las especies hospedantes.

En el caso de las semillas, se esterilizan en superficie, y para ello se lavan en primer lugar con agua corriente y se sumergen en H2O2 al 30% durante 30min en agitacin. Posteriormente, se lavan con agua destilada estril
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y se siembran en una bandeja con arena lavada, previamente esterilizada con autoclave. Una vez sembradas las semillas, se colocan en oscuridad y bajo condiciones controladas de T (222C) y humedad (40-50%). Se riega peridicamente con agua destilada y estril. La germinacin tiene lugar entre los 10-15 das despus de la siembra. Es entonces cuando se someten a un fotoperiodo de 16h.

La micorrizacin controlada de plntulas puede llevarse a cabo con inculo esporal y miceliar, ste ltimo de produccin ms costosa econmicamente por lo que explicaremos el mtodo con el inculo miceliar. La cantidad de inculo a utilizar depender de la concentracin de esporas/ml de suspensin y del nmero de plntulas que van a ser inoculadas. La suspensin de esporas se incorpora en el agua de riego y suelen utilizarse varias tandas de inoculacin separadas en el tiempo, para asegurar la micorrizacin. Es conveniente el uso de sustratos estriles. Al trmino de cualquier experiencia de inoculacin deben estimarse los porcentajes de micorrizacin de los sistemas radicales de las plntulas inoculadas.

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BIBLIOGRAFA

HONGOS. Guas de la Naturaleza. Giovanni Pacioni. Editorial Grijalbo. 1980

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Biotecnologa Forestal: Tcnicas de micorrizacin y micropropagacin de plantas. Mario Honrubia, Pilar Torres, Gisela Daz, asuncin Morte. Universidad Murcia. 1995.

Manual prctico del Cultivo de setas: Aislamiento, siembra y produccin. Rigoberto Gaitn-Hernndez, Dulce Salmones, Rosala Prez Merlo, Gerardo Mata. Instituto de Ecologa A.C.Xalapa, Veracruz, Mxico. 2006

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http://www.amanitacesarea.com/boletus-edulis.html

http://www.fungipedia.es/clasificacion-orden/basidiomycota/boletales/44boletus-edulis.html

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