1.

DATOS INFORMATIVOS: MATERIA O MDULO: LABORATORIO CLNICO ME CARRERA:

PRCTICAS DICINA NIVEL: SEGUNDO N CRDITOS: COMA CINCO) CRDITOS TEORA: 1 CRDITOS PRCTICA: 0,5 DATOS DEL PROFESOR: Nombre: Celia Annabel Bowen Fernndez Grado Acadmico o Ttulo Profesional: Dra. Bioqumica y Far macia opcin Bioq. Clnica Breve indicacin de la lnea de actividad acadmica: Docenc ia en diferentes en diferentes ramas de la patologa clnica (Laboratorio clnico y Microbiologa) , coordinadora de los laboratorios en el rea de Destrezas Clnico Quirrgicas Indicacin de horario de atencin a estudiantes: Martes, Mircoles y Viernes 12:00 a 13.00 horas Correo Electrnico: bowencelia@yahoo.es Telfono: 084678618 PROFESOR: Grado acadmico o ttulo profesional: Dra. Bioqumica y Far macia opcin: Bioq. Clnica/ Diploma Superior en Pedagogas Innovadoras 2. DESCRIPCIN DE LA MATERIA: En este nivel de la carrera se estudian los fundamentos bsicos del laboratorio clnico, su estructura y organizacin dentro de un servicio de salud, sus funciones y se dan las primeras correlaciones de las pruebas de laboratorio con casos clnicos. Se aprende el uso racion al de las pruebas ms comunes y se pretende incentivar al estudiante a tomar con conciencia crtica las solicitudes de laboratorio y rescatar la interpretacin clnica como elemento fundamental de la Med icina de Laboratorio. 3. OBJETIVOS GENERAL: Reconocer la metodologa y realizacin de las pruebas bsicas de laborat orio clnico con el fin de corroborar la presencia y las concentraciones de los diferentes an alitos en las muestras biolgicas, con la morfologa y fisiologa del individuo normal, estudiadas en las dems reas de las ciencias morfofuncionales del segundo nivel de la carrera. 4. aje b. Manejar adecuadamente el manejo del microscopio segn las normas indica das c. Identificar y cumplir las normas de bioseguridad ESPECFICOS: 4.1. ACTITUDINALES: a. Compartir conocimientos y experiencias durante el proceso de aprendiz 1,5 (UNO

4.2. PROCEDIMENTALES: a. Revisar el mtodo de la puncin venosa y capilar y realizar el procedimiento b. Aprender a preparar soluciones y diluciones y su aplicacin para deducir l as unidades de medida utilizadas en el laboratorio c. Realizar y explicar los pasos del examen elemental y microscpico de orina y del coproparasitario y su respectiva interpretacin d. Realizar exmenes de glucosa, colesterol, rea, transaminasas y bilirrubinas as como relacionarlos con el respectivo diagnstico en caso de haber alteraciones 4.3. COGNITIVOS: a. Revisar los anticoagulantes y tubos de ensayo utilizados en las pruebas ms comunes b. Especificar el fundamento de las pruebas bioqumicas enzimo-colorimtricas, de la espectrofotometra y los clculos matemticos necesarios c. Conocer la tcnica de electroforesis y las diferentes fracciones proteica s sanguneas 5. CONTENIDOS 1. Laboratorio clnico: Normas de bioseguridad PRIMERA SEMANA 1 rotacin, DCIMA SEMANA 2 rotacin 2. Toma de muestras de sangre, anticoagulantes, tubos al vaco PRIMERA SEMANA 1 rotacin, DCIMA SEMANA 2 rotacin 3. Soluciones y diluciones, unidades de medida SEGUNDA SEMANA 1 rotacin, DCIMA PRIMERA SEMANA 2 rotacin 4. Elemental y microscpico de orina TERCERA SEMANA 1 rotacin, DCIMA TERCERA SEMANA 2 rotacin 5. Parasitologa, coprolgico-coproparasitario CUARTA SEMANA 1 rotacin, DCIMA CUARTA SEMANA 2 rotacin 6. Carbohidratos: glucosa QUINTA SEMANA 1 rotacin, DCIMA QUINTA SEMANA 2 rotacin 7. Lpidos: colesterol QUINTA SEMANA 1 rotacin, DCIMA QUINTA SEMANA 2 rotacin 8. Protenas: electroforesis y examen qumico SEXTA SEMANA 1 rotacin, DCIMA SEXTA SEMANA 2 rotacin 9. Funcin renal: urea SPTIMA SEMANA 1 rotacin, DCIMA SPTIMA SEMANA 2 rotacin 10. Pruebas de funcin heptica: transaminasas, bilirrubinas OCTAVA SEMANA 1 rotacin, DCIMA SPTIMA SEMANA 2 rotacin 6. METODOLOGA, RECURSOS: 6.1. Mtodos didcticos a. Charla de fundamentacin terica b. Explicacin prctica y observacin c. Realizacin de prcticas de pruebas de laboratorio a. b. d) c. d. e. f. 6.2. Recursos Uso de manual de prcticas de Laboratorio Clnico Toma de fotos con respecto a las prcticas realizadas en clases (smartboar Uso de Atlas de sedimento urinario y parsitos Equipos de Laboratorio de Clnico (Microscopios, incubadora, centrfuga, espectrofotmetro, etc.) Reactivos varios Muestras biolgicas varias

7. EVALUACIN: 7.1. CRONOGRAMA DE EVALUACIONES: 1era. Evaluacin (promedio de lecciones): Cada semana 2da. Evaluacin (terica): Octava semana 3ra. Evaluacin (prctica + carpeta): Novena semana

SISTEMA DE CALIFICACIN: EVALUACIONES PARCIALES PRCTICA Y TERICA: 30 puntos 10 puntos de cada una de las evaluaciones ms trabajos o promedios de lecciones indicadas en el cronograma Nota final: 20 puntos Primera parte: 10 puntos con un examen final del rea de Prcticas en la semana 8 y 18 de la rotacin Segunda parte (examen integrador de la Macrorea de Morfof uncin): semana 9 y 18 de la rotacin 8.

BIBLIOGRAFA: TEXTOS DE REFERENCIA: ngel M., G. y M. ngel R., Interpretacin Clnica del Laboratorio, 6. edicin, Edi Mdica Panamericana, Bogot, 2.001 Manual de Bioseguridad en el Laboratorio, O. M. S., Ginebra, 1.994

TEXTOS RECOMENDADOS: Henry, J. B., Diagnstico y Tratamiento Clnicos por el Laboratorio, 9. Edicin, Edi ial Salvat Mdica, Mxico, 1.993 Mtodos Bsicos de Laboratorio en Parasitologa Mdica, O. M. S., Ginebra, 1.992 Morn Villaroto, Obtencin de Muestras Sanguneas de Calidad Analtica, Editorial Md anamericana, Mxico, 2.001

PRCTICA No. 1 BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO CLINICO Definicin: Conjuntos de normas y procedimientos para obtener una situacin carente de riesgos o con riesgos limitados. PRECAUCIONES UNIVERSALES: 1. Acceso restringido, permitido solo a personas autorizadas 2. Prohibido usar el celular, comer, fumar, beber o almacenar comidas o cua lquier objeto de uso personal dentro del laboratorio. 3. Usar ropa protectora de trabajo como mandil, mascarillas, guantes (de lte x) la misma que debe ser retirada antes de abandonar el laboratorio. Botas y gor ra en casos de exposicin a microorganismos de alta peligrosidad. 4. Antes de iniciar cualquier actividad en el laboratorio asegurarse de que en la mano no existan escoriaciones. En caso contrario cubrir las mismas de man era adecuada. 5. Cambio inmediato de los guantes en caso de rotura y lavado de manos. 6. No tocarse la boca ni los ojos con las manos enguantadas 7. Evitar la formacin de aerosoles y gotas.

8. Manejo adecuados de los objetos corto punzantes. Una vez utilizados se d eben almacenar en recipientes rgidos y eliminarse luego de ser decontaminados. 9. Terminantemente prohibido pipetear con la boca. Debe utilizarse los pip eteadores automticos. 10. Decontaminar las superficies de trabajo una vez terminado el trabajo dia rio.Se recomienda el uso de hipoclorito de sodio al 10% 11. Evitar conductas inseguras y de riesgo. 12. Manejo adecuado de los desechos desde el lugar de origen y realizar trat amiento adecuado especialmente de los infecciosos. 13. Los desechos de los fluidos corporales pueden eliminarse por las caerias habituales una vez que hayan sido decontaminados. 14. Lavarse las manos con abundante agua y jabn luego de haber terminado el t rabajo diario. 15. Plan de inmunizaciones para el personal de laboratorio TRABAJO EN CLASE: Poner en prctica las normas anteriores durante cada sesin de laboratorio

PRACTICA No. 2 Tema: Toma de muestras de sangre (venosa y capilar) Objetivos: 1. Conocer la tcnica para la obtencin de muestras de sangre como medio para mantener la integridad del profesional de salud y la del paciente 2. Adiestramiento adecuado para el manejo de instrumentos necesarios en la toma de muestras sanguneas 3. Aplicar las precauciones universales de bioseguridad en el laboratorio c on respecto al manejo de lquidos biolgicos y material infeccioso 4. Conocer los usos de los diferentes anticoagulantes empleados en el labor atorio Fundamento terico: La relativa facilidad con que se obtiene la sangre venosa hace de esta tcnica el principal mtodo de obtencin de sangre en los laboratorios de anlisis clnicos. A part ir de la sangre sin anticoagulante se obtiene suero, si la sangre contiene antic oagulante, se obtiene plasma. Del plasma forma parte el fibringeno, sustancia de la que carece el suero. Materiales: -Torniquete -Algodn -Alcohol antisptico (isoproplico al 70%) -Jeringuillas -Sistema vacutainer: capsula, tubos alvaco, agujas de toma mltiple - Lancetas -Tubos capilares heparinizados -Plastilina Tcnica de la puncin venosa: 1. Se identifica al paciente comprobando que la solicitud de exmenes corresp

onda al mismo 2. Si se solicita una muestra en ayunas, debe comprobarse que efectivamente el paciente no ha ingerido alimentos 3. Hay que dirigirse al paciente e informarle sobre el procedimiento a que va a ser sometido. Se debe tranquilizarle, eliminando en lo posible su tensin. 4. Se ha de colocar adecuadamente al paciente, segn ste se encuentre sentado, o en decbito prono, para tener acceso fcil y cmodo a la fosa antecubital. 5. Hay que preparar todo el material, incluidos los tubos para recogida de la muestra, el torniquete, los objetos que se emplean para limpiar la piel, las jeringas, cuando sea necesario, la aguja estril para extraccin de sangre y disposi tivo utilizado para fijar la aguja al tubo de extraccin al vaco. 6. Se solicita al paciente que cierre el puo para que las venas resulten ms p alpables. 7. Se seleciona una vena adecuada para la puncin. Se prefieren las venas de la fosa antecubital, en particular la cubital interna y la ceflica. Tambin pueden utilizarse las venas de la mueca, el tobillo y la mano. Si existiera ya un catter intravenoso en un brazo, se utilizar el otro para la extraccin de la muestra. 8. Preparar la cpsula insertando la aguja pero dejando un poco flojo la capu cha de la parte externa de la misma para retirarlo al momento de la puncin. 9. Se aplica un torniquete varios centmetros por encima de la zona de puncin (aproximadamente a cuatro dedos sobre el doblez del brazo). No hay que dejar nun ca el torniquete ms de 1 minuto. En casos excepcionales no debe usarse el torniq uete, por ejemplo cuando en el pedido est el Calcio. 10. Se limpia la zona de la venopuncin con una torunda embebida en solucin en alcohol antisptico. Se comienza en el punto de la puncin y se prosigue la limpieza hacia fuera siguiendo un movimiento en espiral. Se deje que la zona se seque y no se toca con ningn objeto que no haya sido esterelizado previamente. 11. Se fija firmemente la vena tanto por encima como por debajo del lugar de puncin, con la ayuda de los dedos pulgar y medio, o ndice y pulgar. 12. Se realiza la venopuncin. a) Se penetra a travs de la piel con la aguja fo rmando un ngulo de aproximadamente 15 con el brazo y con el bisel hacia arriba. Se sigue la direccin de la vena con la aguja. B) Se introduce la aguja con suavidad pero con la suficiente rapidez para reducir las molestias del paciente. No hay que enterrar la aguja. C) Si se utiliza una jeringa, se tira hacia atrs del mbolo, con tensin lenta y uniforme a medida que la sangre va fluyendo en su interior. N o debe realizarse este movimiento con excesiva rapidez, ya que podra hemolizarse la sangre o colapsarse la vena. d) Si se utiliza un tubo al vaco, en cuanto la ag uja haya penetrado en la vena, se dirigir el tubo todo lo posible hacia delante e n el dispositivo de sujecin. Al mismo tiempo se sujeta tenuemente la aguja en su lugar. Una vez que haya llenado el tubo, se retira, cogindolo por su extremo y ti rando suavemente de l. 13. Cuando la sangre comience a fluir, se suelta el torniquete. 14. Una vez que se haya extrado toda la muestra, hay que indicar al paciente que relaje el puo y que no bombee con la mano. 15. Se coloca suavemente sobre el punto de la puncin una bola de algodn estril. Se extrae la aguja y a continuacin se ejerce presin sobre la zona. 16. Se venda el brazo. En general es suficiente una tira de esparadrapo sobr e la bola de algodn, para detener la hemorragia. 17. Se mezclan los tubos con el anticoagulante. Si la muestra ha sido extrada con jeringa, se transferir la sangre a los tubos correspondientes tomando las de bidas precauciones para evitar la hemlisis de las muestras. 18. Se comprobar el estado del paciente; por ejemplo, si se ha mareado y si l a hemorragia est controlada. 19. Se elimina el material contaminado: agujas, jeringas, algodones, etc. 20. Se marcan las etiquetas y se registra la hora en que se extrajeron las m uestras. 21. Se envan los tubos de sangre para su anlisis a los correspondientes depart amentos del laboratorio. Si es preciso, se hace constar la hora en la solicitud. Puncin capilar:

1. Tener todo el material en perfecto orden: algodn, alcohol, lancetas, tubo s capilares y plastilina. 2. Pedir al paciente que se frote el dedo pulgar hasta que obtenga una buen a irrigacin de la zona de puncin. 3. Desinfectar la zona y secarla con otro algodn libre de alcohol 4. Sacar la lanceta y realizar la puncin de forma rpida y firme. 5. Deshechar la primera gota para evitar contaminacin con restos de alcohol. 6. Colocar el capilar en la zona e ir llenndolo hasta las tres cuartas parte s del tubo. 7. Retirarlo de la zona y colocar un algodn con poco alcohol y solicitar al paciente que se sostenga por unos minutos para que deje de fluir la sangre. 8. El capilar sellarlo con plastilina y colocarlo en el lugar designado par a ese paciente. Anticoagulantes utilizados con mas frecuencia EDTA (tapn lila): Tubo estril con anticoagulante EDTA: sal de cido etileno diamina tetractico di o tripotasica o di sdica, concentracin: 1,2 a 2,0mg/ml de sangre(4,1 a 6,8mmol/l de sangre) basado en EDTA anhidro. Para uso en hematologa Citrato de sodio (tapn azul 1/9 y tapn negro 1/4): citrato trisdico con 0,100 a 0,1 36 mol/l de cido ctrico. Se recomienda 0,105 mol/l para lograr la estandarizacin re comendada por la WHO para que quede a 3,2%. Se usa para pruebas de coagulacin (TP , TTP, fibringeno), utilizar l parte de citrato y 9 de sangre entera. Tapn rojo: Tubo estril sin anticoagulantes ni aditivos ni geles separadores. Para obtener suero. Los tapones de colores con una banda Gris agregada indican que el tubo correspon de a uno los anteriores y que adems contiene gel separador de suero o plasma TRABAJO EN CLASE: Estudiar bien las instrucciones anteriores para ponerlo en prctica con algn compaer o de clase PRACTICA No. 3 Tema: Soluciones y diluciones Objetivos: Conocer lo que es un soluto y un solvente para preparar soluciones a dif erentes concentraciones Conocer dos formas de expresar matemticamente la proporcin de soluto a sol vente dentro de una solucin (p/v y v/v) Realizar diluciones simples a partir de una solucin Fundamento terico: Las soluciones son mezclas homogneas de dos o ms substancias, que pueden separarse por mtodos fsicos en sus diversas substancias componentes. En una solucin, aquell a substancia que se encuentra en mayor proporcin se conoce como Solvente y las de ms como Solutos. Existen varias formas de expresar la concentracin de una solucin, esto es, la prop orcin de soluto a solvente. Para efectos cualitativos, frecuentemente se habla de soluciones diluidas, concentradas, saturadas o sobresaturadas. Aunque existen d iversas formas de expresar matemticamente la proporcin de soluto a solvente dentro de una solucin, las de uso mas extendido suelen ser Molaridad, el Porcentaje Pes o a Volumen, el Porcentaje Peso a Peso y las Partes por Milln. El porcentaje Peso a Volumen es una relacin que expresa los gramos de soluto que se hallan contenidos en cada 100 mililitros de solucin. Materiales y reactivos: Materiales: Probeta graduada de 50 ml

Vaso de precipitacin de 50 ml Matraz aforado de 50 ml Pipetas graduadas de : 1, 2, 5 y 10 ml. Peras de seguridad Tubos de ensayo Gradillas Balanza Varilla de vidrio

Reactivos: Safranina en polvo Cloruro de sodio en polvo Agua destilada Procedimiento: 1. Mtodo para preparar soluciones: Unidades de medidas: p/v = peso de soluto sobre volumen de solvente expresado en gr/ 100ml v/v = volumen de soluto sobre volumen de solvente expresado en ml/100 ml. Ejemplo de soluciones p/v: Preparar 50 ml. de solucin de NaCl (cloruro de sodio) al 0.85% en agua destilada Datos V1= 50 ml. V2= 100 ml Concentrac. Solucin= 0.85% (pesar 0.85 gramos de NaCl y aforar con agua destilada hasta obtener 100 ml de solucin) 0.85 gr. NaCl 100 ml agua destilada X 50 ml agua destilada X= 0.425 gr. de NaCl disolver en agua desti lada hasta obtener 50 ml de solucin Ejemplo de soluciones v/v: Preparar 40 ml. de solucin de Etanol al 70% en agua destilada Datos V1= 40 ml. V2= 100 ml Concentrac. Solucin= 70% (70 ml de etanol puro diluidos en 100 ml de agua destila da) 70 ml de etanol 100 ml agua destilada X 40 ml agua destilada X= 28 ml. de etanol puro diluir en 12 ml de agua destilada para obtener una solucin de 40 ml de etanol al 70% 2. Mtodo para realizar diluciones Partiendo de una solucin cualquiera que sea su concentracin las diluciones se rea lizan del siguiente modo: Si se tiene una solucin HCl (cido clorhidrico) y se quiere diluir en agua destila da 1:20 para obtener un volumen final de 50 ml se realiza los siguientes clculos: 1ml de soluc. HCl 20 ml. de agua destilad a X 50 ml de agua destilada X =2.5 ml de HCl se necesita para obtener una solucin de 50 ml en agua destilada (medir 47.5 ml de a gua)

3. Para obtener el factor de dilucin: Utilizando el ejemplo anterior el factor de dilucin se obtiene del siguiente modo : Fd = Volumen mayor Volumen menor (alcuota) = 50 = 2,5 20

La solucin en efecto est diluida 20 veces

PRACTICA No. 4 Tema: Elemental y microscpico de orina Objetivos: 1. Analizar la orina realizando exmenes macrscopico, qumicos y microscpicos en la misma 2. Correlacionar los parmetros analizados con enfermedades renales o del tra cto urinario Definicin de examen rutinario de orina: Es un examen fsico y/o qumico de la orina y comprende una serie de pruebas qumicas y microscpicas para evaluar infecciones d el tracto urinario, enfermedad renal y enfermedades de otros rganos que provocan la aparicin de metabolitos anormales (productos de descomposicin) en la orina. El examen elemental y microscpico de orina consta de tres partes: 1) Macroscpico: color, aspecto 2) Qumico (tira reactiva): pH, leucocitos, protenas, glucosa, urobilingeno, bi lirrubina, cuerpos cetnicos, sangre 3) Microscpico: leucocitos, eritrocitos, clulas bajas, clulas altas (se report a numero por campo en 10 camposcon lente de 40x), moco, bacterias, cristales, pa rsitos, hongos (se reporta por cruces en 10 campos con lente de 40 x) y cilindros se reporta nmero por placa (con lente de 10x). 1. Instrucciones para recoger una muestra parcial de orina a. El frasco tiene que ser suministrado por el Laboratorio, o adquirir en l a farmacia uno estril apropiado para la recoleccin de orina. b. Es preferible que la orina sea la primera orina de la maana. c. Practicar previo aseo genital, con agua y jabn, sin dejar residuos. Esto es especialmente importante en la mujer que debe lavarse el rea entre los labios de la vagina y evitar la contaminacin de la muestra con crema, antispticos y secre ciones vaginales. Los hombres y nios deben limpiarse la cabeza del pene d. Deje escapar la porcin inicial de la miccin al inodoro, a continuacin recol ecte en el frasco la porcin media (10 ml) y descarte la porcin final de la miccin n uevamente en el inodoro. e. Tape bien el frasco y entrguelo rpidamente al Laboratorio (mximo dos horas luego de tomar la muestra). f. NO recoger la muestra durante el Periodo Menstrual 2. Mtodo para el anlisis de orina macroscpico y qumico: a. Despus de recibir la orina en el laboratorio, analizarla tan pronto como sea posible. Antes del anlisis las muestras de orina deben estar a la temperatura ambiente b. Realizar la homogenizacin de la orina c. Con movimientos moderados en el recipiente transportado hasta el laborat orio (bien mezclada y no agitada) d. Verter en un tubo de ensayo de 16 x 100 mm aproximadamente 10 ml e. Determinar el color, aspecto (nitidez) f. Registrar la presencia de un olor inusual y de cantidades anormales de e spuma coloreada

g. Sumergir brevemente la tira reactiva, no ms de un segundo (evitar tocarla con los dedos, ya sea antes o despus de sumergirla) h. Eliminar el exceso de orina en la tira,: limpiar el borde de la misma co n el reborde del tubo o con papel secante i. No permitir que los reactivos de la tira se junten j. No depositar la tira reactiva directamente sobre la superficie de trabaj o k. Seguir exactamente las recomendaciones en cuanto al tiempo para cada tes t qumico l. Mantener la tira reactiva junto a la carta de colores y leer bajo una bu ena iluminacin m. Tener en cuenta las fuentes de error, la sensibilidad y la especificidad de cada prueba con la tira reactiva 2.1. Parmetros que se observan en el examen macroscpico : En el examen macroscpico se analiza el aspecto como por ejemplo si es trasnparent e, ligeramente turbia, turbia, espesa, opaca y el color de la orina que puede se r amarilla plida, amarilla oscura, mbar, roja, verde, azul entre otros. 2.2. Parmetros que se observan en el examen qumico: ? Densidad ( gravedad especfica): Registra la concentracuin inica de la orina (es decir, qu tan concentrada o diluida se encuentra). Se basa en la liberacin de protones por un formador de complejos en presencia de cationes. Esto causa un vi raje de color del indicador azul de bromotimol, de azul hacia amarillo, pasando por verde azulado ? pH: Indican la acidez o alcalinidad de la orina. Los valores pH ms frecue ntes en orina fresca de personas sanas se encuentran entre 5 y 6. El test es esp ecfico para la deteccin de iones hidronio, siendo el valor pH el logaritmo decimal negativo de la concentracin de iones hidronio. El papel reactivo contiene los in dicadores rojo de metilo, fenolftalena y azul de bromotimol. ? Leucocitos: Comprueba la actividad estersica de granulocitos. Esta enzima s desdoblan un ster de indoxilo a indoxilo, que reacciona con una sal de diazonio formando un colorante violeta. se detectan leucocitos intacto y tambin los lisad os (indicio de IVU) ? Nitrito: Los agentes patgenos ms frecuentemente causantes de infecciones d e las vas urinarias, E. coli y la mayora de los grmenes patgenos urinarios, transfor man el nitrato absorbido con la alimentacin en nitrito. Este es detectado por una coloracin del rosa al rojo de la zona reactiva. El ensayo se basa en el principi o de la prueba de Griess y es especfico para el nitrito. (indicio de IVU) ? Protenas: El test se basa en el principio del error proteico de indicador es de pH y reacciona de manera especialmente sensible a la albmina. ? Glucosa: La deteccin de glucosa se efecta segn el mtodo especfico de la gluco sa-oxidasa-peroxidasa. ? Cuerpos cetnicos: La deteccin se realiza en el principio de la prueba de l egal y reacciona ms intensamente al cido acetilactico que a la acetona. Las cetonas son un subproducto del metabolismo de las grasas, presente con inanicin y diabet es. ? Urobilingeno: Es un producto de degradacin de la bilirrubina. El test se b asa en que una sal de diazonio estable produce con el urobilingeno, casi instantne amente un colorante azico rojo ? Bilirrubina: En la orina es un producto de degradacin de la hemoglobina. La deteccin se basa en la copulacin de una sal de diazonio con bilirrubina para f ormar un colorante azoico. Incluso los ms leves matices rosa ya deben ser conside rados como positivos. ? Hemoglobina: Es un indicio de hemlisis. La mioglobina cataliza la oxidacin del indicador por el hidroperxido orgnico contenido en el papel reactivo. Puntos verdes aislados hasta acumulados en la zona reactiva amarilla indican la presenc ia de eritrocitos intactos. La hemoglobina as como los eritrocitos hemolizados o la mioglobina son indicados por una coloracin verde homognea de la zona reactiva. 3. a. Mtodo para realizar el examen microscpico del sedimento urinario Una vez realizado el examen microscpico y qumico de la orina, se la centri

fuga por 5-10 minutos a 1500-2000 rpm con la orina previamente homogenizada b. Eliminar cuidadosamente el sobrenadante. El volumen final utilizado par a resuspender el sedimento puede variar segn el sistema estandarizado que se use, pero debe ser siempre constante en cualquier laboratorio dado. c. Resuspender con suavidad el sedimento, eliminar las dos primeras gotas y colocar la tercera gota en una placa portaobjetos, cubrir con un cubreobjetos. Dejar que la orina se deposite durante 30 a 60 segundos. d. Observar al microscopio con objetivos de pequeo y gran aumento. Para dete ctar algunas entidades del sedimento con un ndice bajo de refraccin ser necesaria u na luz amortiguada o una iluminacin de contraste de fase. El foco fino debe varia rse continuamente mientras se examina. Progresar de manera sistemtica a lo largo de toda la placa, teniendo cuidado de examinar los bordes en busca de cilindros . e. Recuento del nmero de cilindros por lo menos en 10 campos de pequeo aument o (10x) y anotar en el informe el nmero de cilindros por campo. Puede utilizarse un margen razonable, es decir, 0 a 2, 2 a 5, 5 a 10, etc. Usar el gran aumento ( 40x) para indicar el tipo de cilindros. Los cilindros se apreciarn si se utiliza microscopio de contraste de fase. f. Identificacin y recuento de los eritrocitos, leucocitos y clulas epitelial es renales utilizando el objetivo de gran aumento (40x). Efectuar el recuento po r lo menos 10 campo de gran aumento y expresarlo como clulas por campo. En el inf orme puede utilizarse un margen razonable. g. Reportar: h. Las clulas epiteliales (bajas) y altas si estn presentes en gran nmero o co mo fragmentos (clulas transicionales) i. Bacterias, levaduras, microorganismos. Una bacteriuria detectable a pequ eo aumento puede expresarse por lo menos como 2 +. j. Los cristales se cuantifican bajo pequeo aumento. La presencia de cristal es anormales debe confirmarse qumicamentey correlacionarse con la historia del pa ciente k. Grandes cantidades de moco OBSERVACIN: Para el siguiente literal por favor revisar el atlas para segundo niv el ubicado en el internet cuya pgina es ftp.puce.edu.ec 3.1. Elementos que se observan en el examen microscpico: Las bacterias y otros microorganismos (normalmente no estn presentes) Cilindros urinarios Cristales Grasa Moco Glbulos rojos (un indicio de dao en los tbulos) Clulas tubulares renales Clulas epiteliales de transicin Glbulos blancos (un indicio de infeccin del tracto urinario) TAREA EN CLASE: Cada estudiante debe traer su muestra de orina siguiendo las instrucciones anter iores, realizar el anlisis clnico durante la prctica y realizar el reporte de la mi sma para archivar en la carpeta. PRACTICA No. 5 Tema: Parasitologa : Coproparasitario Objetivos: 1. Observacin macroscpica y microscpica de las heces para aprender a reconocer diferentes patologas gastrointestinales 2. Aprender a realizar la tcnica para la preparacin de un coproparasitario

Materiales y rectivos: A. Materiales -Placa portaobjetos -Placa cubreobjetos -Microscopio -Guantes -Palillos de dientes B. Reactivos -Solucin fisiolgica al 0.85% -Solucin de lugol (dilucin 1:5 de lugol) -Muestra de heces Procedimiento: Recoleccin de la muestra: Debe recogerse en un recipiente limpio, debe tenerse cuidado de no mezclarse con orina, descartar los provenientes de pacientes tratados con bismuto y bario. La s muestras obtenidas deben enviarse rpidamente al laboratorio especialmente si so n lquidas o semilquidas ya que las formas trofozoicas de los protozoos pierden mov ilidad y mueren poco despus de enfriarse. Procesar la muestra antes de dos (2) horas. Si esto no es posible, mantener las muestras en refrigeracin o temperatura de 4 Centgrados. 1. Examen macroscpico (fsico) heces: La inspeccin de las heces es importante, ya que puede conducir a un diagnsrtico de infectacin parasitaria, ictericia obstructiva, diarrea, malabsorcin, obstruccin re ctosigmoidea, disentera o colitis ulcerosa, o prdida de sangre en el conducto gast rointestinal. a. Debe anotarse la consistencia (especificando si son pastosas, blandas, semilquidas lquidas duras) y color del excremento (caf, amarilla, rojiza, negruzca, verdes, etc) b. Los progltides o gusanos adultos se pueden detectar en el examen general, manchas de sangre o moco, y, la presencia de restos alimenticios. Color: Normalmente las heces son de color pardo de diferente intensidad, este co lor se debe a la presencia de urobilina, varia de acuerdo a la ingestin de alimen tos y medicamentos. Olor: Las sustancias aromticas provenientes de la desaminacin y descarboxilacin del triptofano por las bacterias son las que le dan a la materia fecal el olor cara cterstico. Consistencia: Normalmente las heces son blandas aunque moldeadas. Se observan he ces extremadamente duras en el estreimiento y lquidas por accin de purgantes, o por causas que originen diarrea. Esta consistencia puede ser : Lquida, blanda o dura . Aspecto: Hay diferentes aspectos como son : Diarreico, cremoso, mucoide, granulo so, pastosa,caprino. Reaccin: La reaccin y el pH de la materia fecal depende del rgimen alimenticio. 2. Exmen Microscpico de las heces: En una lmina portaobjetos se colocan dos gotas, en la parte izquierda solucin sali na y en la derecha lugol, luego se toma con un palillo la muestra de materia fec al, se debe escoger la parte que tenga elementos anormales como sangre, moco, et c. y de otra parte para que as quede una muestra representativa, se homogeniza en la lmina primero en la solucin salina y luego en el lugol, se le colocan los cubr eobjetos. La suspensin no debe quedar muy gruesa pero tampoco muy delgada. Residuos alimenticios: Fibras musculares: Se presentan en forma de cilindros con estras longitudinales y transversales. Grasas neutras: Aparecen como esferas refringentes de diferentes tamaos. Acidos grasos: Se observan como agujas incoloras. Almidones: Tienen formas irregulares y son refractiles al agregar el lugol. Fibras vegetales: Se caracterizan por ser de doble pared, contienen clorofila y

poseen un canal central muy marcado. Productos de irritacin de la mucosa: Moco: Se observa en cualquier patologa. Glbulos Rojos: Su hallazgo indica lesin en la parte baja del aparato digestivo. Clulas epiteliales: Indican una excesiva irritabilidad. Bacterias: Carecen de significacin clnica. Leucocitos: Si hay gran cantidad indica irritacin bacteriana. Cristales de Charcot-leyden: Se ven en forma de rombos alargados. 2. Exmen parasitolgico NEMATODOS: Gusanos redondos Ascaris lumbricoides: Se observan huevos miden aprox. 45-75 x 30-50 mm, presenta una clula rodeada por tres capas, producen una patologa de dolor de estmago y desn utricin. CESTODOS: Gusanos planos -Taenia: Los huevos miden 20-30 x 30-40 mm, son ovoides con membrana gruesa, ama rillenta que se encuentra estriada en forma de empalizada y encierra un embrin de seis ganchos poco visibles. Produce trastornos nerviosos. PROTOZOARIOS: Entamoeba histoltica: Se observan quistes miden aprox. 20 mm se observa con cuatr o ncleos. Pueden causar lesin de la mucosa intestinal. Entamoeba coli: Son quistes ms grandes que los de histoltica, tiene ms de cuatro ncl eos. Es considerada como no patgena. Giardia lamblia: es un protozoo flagelado patgeno que parasita el tracto digestiv o de humanos y otros mamferos. Presenta un tamao de 20 micras de longitud y 15 de ancho. Posee 8 flagelos, 2 anteriores, dos posteriores, dos ventrales y dos caud ales, cuya funcin es la de motilidad. Proyectada en un plano se parece una pera. OBSERVACIN: Por favor revisar el atlas para segundo nivel ubicado en el internet cuya pgina es ftp.puce.edu.ec TAREA EN CLASE Cada estudiante debe realizar un examen coproparasitario y hacer el reporte para archivarlo en la carpeta PRACTICA No. 6 CARBOHIDRATOS: Determinacin de glucosa en sangre 1. Objetivos: 1. Conocer la tcnica mediante la cual se determina la glucosa en sangre 2. Diferenciar pacientes con hipo e hiperglicemia 2. Fundamento terico: La glucosa es la principal fuente de energa de las clulas en el organismo. La gluc osa es un monosacrido con una concentracin postpandrial de 90 mg/dl en la sangre y sirve como una fuente de energa indispensable para la funcin celular. El diagnstico de los trastornos del metabolismo de los hidratos de carbono se apo ya en parte en la medicin de la glucosa plasmtica, ya sea en ayuna o tras estimula cin o pruebas de supresin. Los resultados de la glucosa plasmtica pueden clasificarse como hiperglucmicos (co mo la diabetes mellitus) o hipoglucmicos. Principio de la reaccin: La prueba utilizada se determina mediante el mtodo enzimtico colorimtrico, basado e n la reaccin de Trinder. Glucosa + O2 + H2O GOD (glucosa oxidasa) cido glucnico + H2O2 2H2O2 + 4-aminoantipirina + fenol POD (peroxidasa) quinoneimina (rojo) + 4H2O La glucosa se determina despus de la oxidacin enzimtica en presencia de glucosa oxi dasa. El perxido de hidrgeno formado reacciona bajo la catlisis de peroxidasa con f enol y 4-aminoantipirina formando un complejo rojo violeta llamado quinoneimina. Punto final de una reaccin: Las reacciones catalizadas por enzimas son nicas en el sentido de que presentan aumentos muy grandes de la velocidad en relacin a las reacciones no catalizadas y muestran una cintica de saturacin, es decir la velocid ad de la reaccin alcanza un valor mximo a una concentracin determinada de sustrato, no dan por resultado aumento de la velocidad de la reaccin. La medida se realiza

siempre en las condiciones ptimas de pH, temperatura, presencia de cofactores, e tc. En estas condiciones, la velocidad de reaccin observada es la velocidad mxima (Vmax). La velocidad puede determinarse bien midiendo la aparicin de los producto s o la desaparicin de los reactivos. En el caso de la reaccin de la glucosa catalizada por la enzima glucosa oxidasa y la peroxidasa llega a su punto final cuando todo el sustrato (glucosa) se ha ox idado, y despus se mide el cambio de color. Espectofotmetro: La absorbancia y la transmitancia de una sustancia en disolucin se miden con un a parato denominado espectrofotmetro, el cual consta bsicamente de los siguientes co mponentes: Fuente de luz: Lmpara que emite una mezcla de longitudes de onda. Colimador: Conjunto de lentes que enfocan la luz convirtindola en un haz de rayos paralelos. Monocromador: Dispositivo que selecciona luz de una nica longitud de onda. Detector fotoelctrico: Transductor de luz en electricidad. La luz provoca el desp lazamiento de electrones en el metal del detector, produciendo una corriente elct rica que es proporcional a la intensidad de la luz recibida. Registrador: Mide la seal del detector, la compara y genera una medida en una esc ala determinada.

A) Esquema de un espectrofotmetro de un solo haz B) Esquema de un espectrofotmetro de doble haz, en el cual se corrigen las variac iones espectrales de los diferentes elementos pticos que lo componen El funcionamiento del espectrofotmetro es el que sigue: la luz de una fuente cont inua pasa a travs de un monocromador, que selecciona una banda estrecha de longit udes de onda del haz incidente. Esta luz monocromtica atraviesa una muestra de espesor b, y se mide la potencia rad iante de la luz que sale. Es necesario calibrar el espectrofotmetro con un blanco antes de medir las absorbancias de la disolucin problema. Esta celda o cubeta de referencia sirve para compensar los efectos de reflexin, dispersin o absorcin de l uz de la celda con el disolvente. Cuando emerge poca luz de la muestra (absorbancia alta), la intensidad es difcil de medir. Cuando emerge mucha luz de la muestra (absorbancia baja), es difcil det ectar la diferencia de absorbancia entre las celdas de muestra y de referencia. 3. Parte experimental: 3.1. Procedimiento: Ensayo: Longitud de onda: Hg 546 nm. Paso de luz: 1 cm Temperatura: 20-25C Medicin: frente a un blanco de reactivo. Se requiere un blanco de reactivo por se rie Esquema de pipeteo: Microdeterminacin Pipetear en las cubetas Blanco de reactivo STD muestra STD muestra 5 ul Reactivo para glucosa 500 ul 500 ul Mezclar, incubar por 10 minutos de 20-25C 5 minutos a 37C. Medir la absorbancia de l STD y las muestras frente a un blanco de reactivo antes de 60 minutos. Materiales y reactivos: Materiales Reactivos

Espectrofotmetro Reactivo para glucosa Tubos de ensayo Estndar de glucosa (100 mg/dl) Gradilla Muestras de suero sanguneo ( plasma) Pipetas automtica Puntas de plstico para pipetas automt.. Reloj Cubetas de plstico para espectrofot. Nota: El espectrofotmetro debe estar encendido 20 minutos antes de leer las absor bancias. 3. Clculo de la concentracin de la glucosa C (mg/dl)= 100 x ?A muestra ?A Estndar Valores de referencia: 70 100 mg/dl TRABAJO EN CLASE: Realizar el anlisis de glucosa en un suero sanguneo y luego reportar los clculos en la carpeta con la respectiva interpretacin del resultado PRCTICA No 7 LPIDOS: Determinacin de colesterol en sangre 1. Objetivos: 3. Conocer la tcnica mediante la cual se determina el colesterol en sangre 4. Diferenciar pacientes con hipo e hipercolesteremia 2. Fundamento terico: Los principales lpidos del plasma humano son el colesterol, los steres del coleste rol, los triglicridos, los fosfolpidos y los cidos grasos no esterificados. El cole sterol es un importante componente estructural de las membranas celulares y un p recursor para la biosntesis de los cidos biliares y las hormonas esteroideas. El riesgo cardiovascular es una funcin continua de la concentracin de colesterol y que los individuos situados en el lmite superior del margen normal tienen un rie sgo mayor que los que estn situados en el lmite inferior. La prueba utilizada para determinar colesterol es mediante el mtodo enzimtico colo rimtrico del siguiente modo: Principio de la reaccin: Esteres de colesterol + H2O CHE(colesterol esterasa) colesterol + cidos graso s Colesterol + O2 CHO (colesterol oxidasa) colesterol- 3ona + H2O2 2H2O2 + 4-aminoantipirina + fenol POD (peroxidasa) Quinoneimina (rojo) + 4 H2O El colesterol se determina despus de hidrlisis enzimtica y oxidacin. El indicador e s la quinoneimina (complejo rojo) formada por el perxido de hidrgeno y 4-aminoanti pirina en presencia de fenol y peroxidasa. 2. Parte experimental: 2.1. Procedimiento: Ensayo: Longitud de onda: Hg 546 nm. Paso de luz: 1 cm Temperatura: 20-25C Medicin: frente a un blanco de reactivo. Se requiere un blanco de reactivo por se rie Esquema de pipeteo: Microdeterminacin Pipetear en las cubetas Blanco de reactivo STD muestra STD muestra 5 ul Reactivo para colesterol 500 ul 500 ul Mezclar, incubar por 10 minutos de 20-25C 5 minutos a 37C. Medir la absorbancia de l STD y las muestras frente a un blanco de reactivo antes de 60 minutos.

Materiales y reactivos: Materiales Reactivos Espectrofotmetro Reactivo para colesterol Tubos de ensayo Estndar de colesterol (200 mg/dl) Gradilla Muestras de suero sanguneo (o plasma) Pipetas automtica Puntas de plstico para pipetas automt.. Reloj Cubetas de plstico para espectrofot. Nota: El espectrofotmetro debe estar encendido 20 minutos antes de leer las absor bancias. 4. Clculo de la concentracin de colesterol C (mg/dl)= 200 x ?A muestra ?A Estndar Valores de referencia: hasta 200 mg/dl TRABAJO EN CLASE: Realizar el anlisis de colesterol en un suero sanguneo y luego reportar los clculos en la carpeta con la respectiva interpretacin del resultado CONSULTA: Criterios de la OMS para: Sndromes metablicos Factores de riesgo cardiovascular Nota: Archivar en la carpeta y estudiar para la evaluacin parcial

PRCTICA No. 8 TEMA: Mtodo para electroforesis de protenas en suero Objetivo: Aplicar la tcnica de electroforesis para separar las diversas fracciones protecas del suero humano Fundamento terico: La electroforesis es una tcnica basada en los movimientos de molculas cargadas en un campo elctrico, cada molcula se mueve hacia el electrodo de carga opuesta (ctodo y nodo), este movimiento denominado electroforesis da nombre a la tcnica. En el tra nsporte electrofortico, a la fuerza del campo elctrico se opone la resistencia vis cosa del medio, producindose, cuando se igualan una velocidad constante de despla zamiento de las partculas. En resumen, puede decirse que cuando una molcula cargada se coloca en un campo elc trico se mover hacia uno u otro electrodo dependiendo de: 1) su carga elctrica, 2) su tamao, 3) la intensidad del campo elctrico y 4) la temperatura del medio. La electroforesis se aplica en el campo de la Bioqumica a la separacin de compuest os que poseen grupos ionizables (aminocidos, pptidos, protenas, cidos nucleicos) ten iendo en cuenta que la carga neta de estas sustancias depende del pH del medio e n que se encuentren. Si la molcula tiene carga positiva migrar hacia el ctodo, si t iene carga negativa hacia el nodo. La fuerza inica de la solucin tampn tiene una imp ortancia fundamental en la electroforesis, puesto que cuando es baja, permite ve locidades de migracin de los solutos ms rpidas y con menor desprendimiento de calor . Las protenas estn compuestas de aminocidos que poseen grupos ionizables (principalm

ente -COO- y NH+ 3), pueden encontrarse cargadas positiva o negativamente, o bien de permanecer elctricamente neutras segn la proporcin de los diversos grupos ioniz ados a un determinado pH. En su punto isoelctrico (pI o pHI), la protena tiene car ga neta cero. Por debajo de pI las protenas estarn cargadas positivamente y por en cima del pI negativamente. El porcentaje normal de estas protenas en el suero humano es: -Albmina 54-62% -a-globulinas 9-15% --globulinas 14-19% -?-globulinas 14-19%

En el siguiente cuadro se observa la concentracin normal en mg/dl , peso molecula r (PM) y funciones de las protenas (el cuadro no presenta una clasificacin complet a de las protenas, se observan unos cuantos ejemplos que se encuentran en mayor c oncentracin) PROTENAS PM CONCENTRACIN FUNCIN 1)Albmina 69000 3500 a 4500 mg/dl Presin onctica y transporte 2)Globulinas alfa1 Alfa1 glucoprotena cida 40000 55 a 140 mg/dl Protena de fase aguda Alfa 1 antitripsina 54000 200 400 mg/dl Proteasa inhibidora 3)Globulinas alfa2 Alfa2 macroglobulina 725000 140 420 mg/dl Proteasa inhibidora Haptoglobina 90000 380 a 780 mg/dl Liga HB circulante 3.Globulinas beta Transferrina 76000 200 a 300 mg/dl Transporte del Fe Hemopexina 5700 50 a 100 mg/dl Liga el hem 4.Gama globulinas IgG 150000 700 a 1500 mg/dl Anticuerpos IgA 150000 a 300000 Anticuerpos IgM 750000 a 900000 - Anticuerpos Crioglobulinas 220 - Desconocido TRABAJO EN CLASE: Realizar el anlisis de las protenas en un suero sanguneo y luego reportar en la car peta con una foto los resultados con una posible patologa de la respectiva consul ta (realizar un ejemplo de cada una en la misma foto) CONSULTA: Patologas que se presentan cuando hay aumento disminucin de cada una de las protei nas (albmina, alfa1 y alfa2 globulina, beta1 y beta globulina, gamma globulina) Nota: Archivar en la carpeta y estudiar para la evaluacin parcial PRCTICA No. 9 TEMA: Determinacin de urea (Mtodo enzimtico-colorimtrico) Fundamento terico: La urea es el principal compuesto nitrogenado no proteico ms imporatnte en la may ora de los lquidos biolgicos. En el hombre es el principal producto final del metab olismo proteco. Se produce en el hgado y es excretada en la orina a travs de los rio nes. Una elevacin de la concentracin srica de urea, se interpreta generalmente como una posible disfuncin renal. Sin embargo, no debe dejarse de lado el hecho de que los valores sricos de urea se encuentran ntimamente relacionados con la dieta y el me

tabolismo proteico, por lo que cualquier alteracin en estas variables se traducir en un cambio de la concentracin de urea en suero. Fundamento del mtodo: La urea se hidroliza por accin de la ureasa en presencia de agua para producir am onaco y dixido de carbono. En una reaccin de berthelot modificada los iones amonio reaccionan con hipoclorito y salicilato produciendo un complejo verde llamado in dofenol que se determina colorimtricamente. ureasa NH2 CO NH2 + H2O (NH4+)2 + CO2 Nitroprusiato (no es enzima) (NH4+)+salicilato+ClONa+ 2-oxoglutarato (verde)

Indofenol

Parte experimental: 1.Procedimiento (en suero o plasma): 1.1. En cuatro tubos de ensayo marcados como B (blanco), S (Standard), M1 (muest ra 1) y M2 (muestra 2) agregar: B S M1 M2 Standard 10 ul Suero o plasma 10 ul 10 ul Reactivo 1 1000 ul 1000 ul 1000 ul 1000 ul Enzima ureasa 5 ul 5 ul 5 ul 5 ul Mezclar por agitacin suave e incubar 10 minutos a 20-25 C o por 3 minutos a 37C Reactivo 2 1000 ul 1000 ul 1000 ul 1000 ul Mezclar por agitacin suave e incubar 10 minutos a 20-25 C o por 5 minutos a 37C. Le er la absorbancia de la muestra (?A muestra) y del estndar (?A Estndar) en espectr ofotmetro a Hg 578 nm frente a un blanco reactivo antes de 60 minutos Clculos de concentracin de urea: C (mg/dl)= ?A_muestra x 80 ?A estandar Valores de referencia en suero: 10 50 mg/dl Parmetros a considerar: - El espectrofotmetro debe estar encendido 20 minutos antes de realizar las lectu ras de las muestras 2.Materiales y reactivos: 2.1. Materiales: -Gradilla -Cuatro tubos de ensayo -Espectrofotmetro -Pipetas automticas -Puntas de plstico para pipeta automtica -Cubetas de plstico para espectrofotmetro -Reloj 2.2.Reactivos: -Reactivo 1: Buffer fosfatos (pH 7.0), Salicilato de sodio, Nitroprusiato de sod io, EDTA -Reactivo 2: Buffer fosfato (pH= 13), hipoclorito -Standard: solucin de urea 80 mg/dl -Ureasa (enzima): Solucin estabilizada y tamponada de alta potencia

-Suero sanguneo TRABAJO EN CLASE: Realizar el anlisis de urea en un suero sanguneo y luego reportar los clculos en la carpeta con la respectiva interpretacin del resultado PRCTICA No. 10 TEMA: Determinacin de transaminasas : TGO y TGP Las transaminasas son unas enzimas, principalmente localizadas en el hgado. Las ms importantes son: TGO: Transaminasa glutmicooxalactica. Est presente en casi todos los rganos, dentro de las clulas y que cuando se encuentran en sangre en niveles muy elevado s significa que ha habido destruccin celular. TGP: Transaminasa glutmicopirvica. Se localiza principalmente en el hgado y su misin es la fabricacin de glucosa. Se utilizan en la clnica para la confirmacin diagnstica del infarto agudo de miocar dio y para el estudio de enfermedades hepticas o musculares. Para realizar el examen en sangre, previamente es necesario que el paciente, uno s das antes, haga una dieta en la que no sobrecargue el hgado, no tomando alcohol, escasas protenas y grasas y tambin es necasrio no realizar esfuerzos fsicos import antes Parte experimental: 1.Procedimiento (en suero o plasma) tanto para TGO como para TGP: Longitud de onda: Hg 334 nm Temperatura: 25 C Cubeta: 1 cm paso de luz Ajuste cero: contra el aire Reactivo de trabajo 1000 ul colocar en la cubeta Muestra 100 ul colocar en la cubeta Mezclar e incubar por 1 minuto a temperatura de 25 C, leer en el espectrofotmetro (A1), repetir las lecturas exactamente al 2do.( A2) y 3er. Minuto(A3) Realizar los clculos: ?A/ min = A1 - A2 (usando los dos primeros minutos de lecturas de absorbancia ) ?A1/ min = A1 - A2 (usando los tres minutos de lecturas de absorbancia) ?A2/ min = A2 A3 ?A/ min = (?A1 + ?A2)/2 Concentracin de TGP = ?A x 1790 Concentracin de TGO= ?A x 1790 Reportar los resultados en U/l Valores de referencia (vara de acuerdo a la marca comercial del reactivo y a la t emperatura de medicin): TGO: Mujeres hasta 32 U/l Hombres hasta 38U/l TGP: Mujeres hasta 31 U/l Hombres: hasta 41 U/l

Parmetros a considerar: - Espectrofotmetro encender 20 minutos antes de realizar las lecturas de las mues tras 2.Materiales y reactivos: 2.1. Materiales: Espectrofotmetro, pipetas automticas, puntas de plsticos para pipeta, cubetas, relo j 2.2.Reactivos: TGO y TGP TRABAJO EN CLASE: Realizar el anlisis de TGO TGP en un suero sanguneo y luego reportar los clculos en la carpeta con la respectiva interpretacin del resultado PRCTICA No. 11

TEMA: Determinacin de bilirrubina total y directa El 80-85% de la bilirrubina se origina de la degradacin de la hemoglobina con un 15-20% que es derivada del citocromo, mioglobina y catalasas. La bilirrubina no conjugada, la cal se liga a la albmina del plasma, es producida en el curso de la degradacin en el sistema reticuloendotelial, clulas Kupffer del hgado, bazo y mdula s ea. Los ensayo de bilirrubina son posible para evaluar el grado de severidadad d e los sntomas clnicos de la ictericia as como para evaluar la funcin y el estado del hgado. Significado de los resultados anormales La ictericia es la coloracin amarillenta de la piel y de la esclertica del ojo, qu e ocurre cuando la bilirrubina se acumula en la sangre a un nivel mayor a 2.5 mg /dL aproximadamente. La ictericia se presenta porque los glbulos rojos se estn des componiendo demasiado rpido para que el hgado los procese, lo cual podra suceder de bido a una enfermedad heptica o a una obstruccin de las vas biliares. Si hay una obstruccin de las vas biliares, la bilirrubina directa se acumular, esca par del hgado y terminar en la sangre. Si los niveles son lo suficientemente altos, una parte de ella aparecer en la orina. Slo la bilirrubina directa aparece en la orina. El aumento de la bilirrubina directa generalmente significa que las vas bi liares (secrecin heptica) estn obstruidas. El aumento de la bilirrubina indirecta o bilirrubina total pueden ser un signo d e: Sndrome de Crigler-Najjar Eritoblastosis fetal Enfermedad de Gilbert Cicatrizacin de un hematoma grande (moretn o sangrado bajo la piel) Anemia hemoltica Enfermedad hemoltica del recin nacido Hepatitis Ictericia fisiolgica (normal en los recin nacidos) Anemia drepanoctica Reaccin a una transfusin Anemia perniciosa El aumento de la bilirrubina directa puede indicar: Obstruccin de las vas biliares Cirrosis Sndrome de Dubin-Johnson (muy raro) Hepatitis Colestasis intraheptica (acumulacin de bilis en el hgado) debido a cualquier causa En presencia del acelerador cafena, la bilirrubina total se acopla con el cido sul fnico para formar un complejo azobilirrubinado rojo, la intensidad del color es p

roporcional a la concentracin de la bilirrubina. La determinacin de la bilirrubina directa es desarrollada sin aditivo de cafena. La adicin de tartrato alcalino cau sa una transformacin del complejo rojo de la azobilirrubina a un complejo azul y las lecturas de las absorvancias son entre 546-578 nm. Bilirrubina total: Acido sulfanlico + NaNO2 Bilirrubina + cido sulfnico diazotizado rubina (rojo) Azobilirrubina + tartrato cido sulfnico diazotizado cafena complejo verde azobilir

1. Esquema de pipeteo: Bilirrubina total Microdeterminacin Pipetear en las cubetas Blanco de reactivo Muestra Reactivo 1 100 ul 100 ul Reactivo 2 ------ 25 ul Reactivo 3 500 ul 500 ul Muestra 100 ul 100 ul Mezclar, incubar por 10-60 minutos a temperatura ambiente. Aadir: Reactivo 4 500 ul 500 ul Mezclar e incubar a temperatura ambiente por 5-30 minutos. Leer la absorbancia d e la muestra contra el blanco Bilirrubina directa Pipetear en las cubetas Blanco de reactivo Muestra Reactivo 1 100 ul 100 ul Reactivo 2 ------ 25 ul Solucin NaCl 0.9% 1000 ul 1000 ul Muestra 100 ul 100 ul Mezclar, incubar por 5 minutos a temperatura ambiente. Leer la absorbancia de l a muestra contra el blanco 2. Clculos: Bilirrubina total: C (mg/dl)= 10.8 x ?A bilirrubina total Bilirrubina directa: C (mg/dl)= 13.7 x ?A bilirrubina directa Bilirrubina indirecta: BI= Bilirrubina total (BT) - bilirrubina directa (BD) 3. Materiales y reactivos: Materiales Reactivos Espectrofotmetro Reactivos para bilirrubina Tubos de ensayo Muestras de suero sanguneo ( plasma) Gradilla Pipetas automtica Puntas de plstico para pipetas automt.. Reloj Cubetas de plstico para espectrofot. Nota: El espectrofotmetro debe estar encendido 20 minutos antes de leer las absor bancias. Valores de referencia: Bilirrubina total: hasta 1.0 mg/dl Bilirrubina directa: hasta 0.25 mg/dl TRABAJO EN CLASE: Realizar el anlisis de las bilirrubinas en un suero sanguneo y luego reportar los clculos en la carpeta con la respectiva interpretacin del resultado

BIBLIOGRAFIA: ngel M., G. y M. ngel R., Interpretacin Clnica del Laboratorio, 6. edicin, Edit ica Panamericana, Bogot, 2.001 Henry, J. B., Diagnstico y Tratamiento Clnicos por el Laboratorio, 9. Edicin, Edi

ial Salvat Mdica, Mxico, 1.993 Manual de Bioseguridad en el Laboratorio, O. M. S., Ginebra, 1.994 Mtodos Bsicos de Laboratorio en Parasitologa Mdica, O. M. S., Ginebra, 1.992 Morn Villaroto, Obtencin de Muestras Sanguneas de Calidad Analtica, Editorial Md anamericana, Mxico, 2.001