Tecnologias de Controle de Atmosfrico no Cultivo de Microrganismos Alice Gomes Morita; Caroline; Jessica Amazonas; Las Cardoso; Luana Ribeiro.

A sobrevivncia e o crescimento dos microrganismos depende de um adequado suprimento de nutrientes e de um ambiente fsico favorvel. No entanto, h uma grande diversidade de necessidades nutricionais e ambientais entre os microrganismos e por isso que s compreendendo as suas necessidades que se consegue ter sucesso na cultura de microrganismos no laboratrio. A temperatura, o pH e a atmosfera gasosa so trs dos mais importantes fatores fsicos que influenciam o crescimento e sobrevivncia dos microrganismos (FMUP, 2006/2007).

CARACTERSTICAS DOS MICRORGANISMOS Os microrganismos apresentam uma grande diversidade em relao sua capacidade de usar o oxignio livre para a respirao celular. Na maior parte das clulas o oxignio atmosfrico necessrio para o processo bio oxidativo da respirao, no entanto h clulas que no tem o sistema enzimtico para a respirao em presena do oxignio e por conseguinte necessitam de usar uma forma anaerbia de respirao ou fermentao (FMUP, 2006/2007). Existem alguns tipos de bactrias sobrevivem apenas com a presena de oxignio, outras no resistem a ele e alguns tipos conseguem sobreviver tanto na presena como na ausncia de oxignio, os principais gases que afetam o crescimento bacteriano so o oxignio e o dixido de carbnico. Como as bactrias apresentam grande variedade de resposta ao oxignio livre, elas so divididas em: Bactrias aerbias: crescem na presena de oxignio livre, bactrias anaerbias: crescem na ausncia de oxignio livre, bactrias anaerbias facultativas: crescem tanto na presena como na ausncia do oxignio livre, bactrias microaerfilas: crescem na presena de quantidades pequenas de oxignio livre (BOSSOLAN, 2002).

TECNOLOGIAS DE CONTROLE ATMOSFRICO Os principais mtodos para o cultivo de bactrias que exigem uma determinada concentrao de oxignio so: jarra de aerobiose, saco de aerobiose, cmara de aerobiose e Roll tube (BOSSOLAN, 2002). -Sistemas GasPak: so sistemas que produzem atmosferas adequadas para suportar o isolamento e cultura primrios de bactrias anaerbias, microaeroflicas, capnoflicas

mediante a utilizao de saquetas produtoras de gs no interior de bolsas re-selveis para uma nica utilizao (BD, 2010). Um exemplo de saqueta a Saqueta Produtora de Gs GasPak EZ que constituda por uma saqueta de reagente contendo carbonato inorgnico, carbono ativado, cido ascrbico e gua. Quando a saqueta retirada do invlucro exterior, a saqueta ativa-se por exposio ao ar. A saqueta de reagente ativado e amostras so colocados na bolsa re-selvel e selados. A saqueta reduz rapidamente a concentrao de oxignio no interior da bolsa. Ao mesmo tempo, o carbonato inorgnico produz dixido de carbono (BD, 2010). - Jarra anaerobiose: fica fechada e tem um gerador prprio da mistura gasosa (Sistema GasPak); ou ento usa-se o Sistema de evacuao-substituio: extrai-se a atmosfera normal (com 21% de O2) e introduz-se a mistura gasosa livre de O2 (anaerobiose no imediata, mas mais rpida e cara). Como desvantagens: anaerobiose relativamente lenta (principalmente se for feita com um gerador) (FMUP, 2006). Quando se fecha a jarra, o gerador comea a produzir a atmosfera sem O2, mas algum O2 ainda ficou l retido (no existe uma anaerobiose imediata): o H2 produzido pelo gerador combina-se com o O2 e forma gua (H2O) que se deposita no fundo da jarra, logo: empilhamse vrias placas de Petri na jarra, mas a placa do fundo fica vazia, para evitar a contaminao por bactrias que podem ser arrastadas pela gua (FMUP, 2006). - Saco de anaerobiose: verso clssica da Jarra. Formado por um plstico impermevel ao ar e com gerador da mistura gasosa sem O2, s funciona com o sistema GasPak. pequeno e mais barato que a jarra, logo mais conveniente para laboratrios que faam culturas de anaerbios mais esporadicamente (FMUP, 2006). - Desvantagem: s pode utilizar 2 placas de Petri de cada vez (FMUP, 2006). Quer com a Jarra, quer com o Saco, quando se abre o dispositivo para inspecionar as culturas, ao coloc-las em cima da mesa de trabalho estamos a exp-las a um ambiente de aerobiose, logo o processamento tem de ser rpido: tem de ser uma pessoa com experincia, seno mesmo que se tenha cultivado em anaerobiose, se expe as bactrias durante muito tempo ao O2, vai haver uma inibio do seu crescimento (FMUP, 2006). - Cmara de anaerobiose: aqui tudo se processa em anaerobiose: uma cmara fechada (como se fosse uma cmara de fluxo laminar), onde existe uma porta por onde se introduz os meios de cultura e na qual h a prpria estufa de incubao, ou seja, todo o processamento da amostra feito anaerobiose. Funciona segundo um sistema de evacuao/substituio. Permite o uso das tcnicas de cultura convencionais (FMUP, 2006).

Desvantagens: preo muito elevado, ocupa muito espao e manuteno difcil (FMUP, 2006). - Roll tube/tubo Hungate: (s utilizado num laboratrio no mundo um centro de referncia para anaerbios e mesmo esse, recentemente, comprou vrias cmaras de anaerobiose). Os tubos no esto numa cmara, mas antes esto sempre expostos a um jato de gs inerte que no contm O2, logo afasta o O2 da atmosfera o que implica um grande gasto. Tem a vantagem terica de observar os tubos sem quebrar a anaerobiose, mas difcil isolar estirpes em cultura pura e fazer repicagens. Nunca foi usado para diagnstico clnico (FMUP, 2006).. No entanto estes sistemas no so infalveis, logo deve-se fazer o Controle de Anaerobiose por inicadores: - Qumicos - Biolgico: anaerbios estritos Fusobacterium Porphyromonas aerbios estritos Pseudomonas aeruginosa (FMUP, 2006). REFERNCIAS

BD. Sistemas de bolsa produtora de gs GasPak EZ, jun. 2010. Disponvel em: < http://www.bd.com/resource.aspx?IDX=21285> Acesso em: 2 mar. 2013.

BOSSOLAN, N. R. S. Apostila de Biologia 3 - Introduo a Microbiologia. USP-Instituto de Fsica de So Carlos Licenciatura de cincias exatas, So Paulo, 2002, 64p. Disponvel em: < biologia.ifsc.usp.br/bio4/outros/apostila.pdf>. Acesso em: 2 mar. 2013.

FMUP. Aula Terica 12 - Bactrias Anaerbias Parte I. Microbiologia Mdica, 2006. Disponvel em: <http://users.med.up.pt/cc04-10/Microdesgravadas/12_Anaerobias.pdf>. Acesso em: 2 mar. 2013.

FMUP. Aula Prtica 3 - Cultura de microrganismos necessidades nutritivas. Meios de cultura: composio, preparao, armazenamento, utilizao. Tcnicas de sementeira. Microbiologia Mdica, 2006/2007. Disponvel em:< users.med.up.pt/cc0410/micropratica/micro_p_3.doc>. Acesso em: 4 mar. 2013.