PRACTICA N2

TEMA: DETERMINACION DEL TIEMPO DE PROTROMBINA Y TROMBOPLASTINA.

1. OBJETIVOS
Objetivo General Determinar el Tiempo de Protrombina y Tromboplastina para el anlisis de enfermedades hematolgicas. Objetivos Especficos Analizar las causas que producen aumento en el tiempo de protrombina. Determinar la utilidad del Tiempo parcial de Tromboplastina en la deteccin de alteraciones hemostticas.

2. MATERIALES:
Tubos vacutainer de tapa celeste Torniquete Torundas de Alcohol Lpiz graso Tubos de ensayo pequeos Micropipetas de 100 y 200 ul Papel absorbente Gradilla Puntas desechables para micropipeta Equipo de Bioseguridad: Mascarilla, gorro, mangas plsticas, guantes, camiseta y pantaln de color azul marino, zapatos blancos cerrados y mandil. EQUIPOS Cronometro Bao Mara Centrifuga REACTIVOS Reactivo de TP Reactivo de TTP MUESTRA Sangre venosa

3. MARCO TEORICO
Protrombina

La protrombina es una protena del plasma sanguneo, forma parte del proceso de coagulacin mediante la reaccin de sta con la enzima "tromboplastina", una enzima ubicada en el interior de los trombocitos, liberada al romperse la frgil membrana celular de los trombocitos. En esta etapa tambin participa el Ca++ (calcio), actuando como factor coenzimtico.

La protrombina es creada en el hgado al igual que la mayora de los factores coagulantes, tambin se denomina factor II de la coagulacin. Se ha descubierto que un porcentaje reducido de personas sufren una mutacin al gen de la protrombina, siendo ms propensos a una trombosis. Alteraciones del Tiempo de Protrombina El tiempo de Protrombina puede aumentar debido a diferentes causas entre las ms mencionadas tenemos: Enfermedades Hepticas, como la cirrosis heptica y la insuficiencia heptica aguda Dficit de vitamina K, esto debido a una mala absorcin o a la ingesta de antibiticos. Monitorizacin a pacientes con anticoagulantes Hepatopatas Antes de Cirugas

Valores Normales Los rangos de los valores normales pueden variar ligeramente entre diferentes laboratorios. Edad Adultos Nios Prematuros Recin nacidos Valores Normales 10 14 segundos 12 21 segundos 12 20 segundos

Patologas Se produce un aumento en el tiempo de Protrombina cuando existe: Deficiencia de factores V, VII y X Deficiencia de vitamina K Hepatitis Alcoholismo Medicamentos Se produce disminucin en el tiempo de Protrombina cuando existe: Hiperfuncin ovrica Dieta rica en grasas

Tromboplastina Es un examen que mide la capacidad de la sangre para coagular, especficamente la va intrnseca (que implica al factor IX y cofactores) y la va comn (factores X y II, y cofactores) de la coagulacin. Est enfocado en un paso especfico del proceso de coagulacin. Adems de detectar anormalidades de la coagulacin, el TTP se usa tambin para controlar el efecto del tratamiento con heparina, uno de los anticoagulantes ms utilizados. Se usa conjuntamente con el tiempo de protrombina (PT), que mide la va extrnseca (que implica al factor VII y el factor tisular) Cuando se realiza Este examen que va junto al tiempo de protrombina se utiliza para: Detectar problemas de sangrado Vigilar personas con tratamientos de anticoagulante Antes de realizar cirugas Valores Normales Los tiempos de coagulacin dependen de numerosos factores, entre los que se incluyen la temperatura, la calidad del agua, el pH, la carga inica, el anticoagulante, la toma de muestras, la conservacin de muestras y la poblacin de pacientes. Cada laboratorio ha de establecer lmites especficos normales para cada prueba. Edad Adultos Valores Normales 30 45 segundos

Patologas Se produce un aumento del tiempo parcial de tromboplastina cuando existe: Cirrosis Coagulacin Intravascular diseminada Deficiencia del factor XII Hemofilia A y B Hipofibrinogenemia Mala Absorcin Enfermedad de Von Willebrand

Tiempo de Protrombina Principio El PT de un paso mide el tiempo de coagulacin del plasma despus de adicionar una fuente de factor tisular (Tromboplastina) y calcio. La recalcificacin del plasma en la

presencia del factor tisular genera la activacin del factor Xa con la consecuente formacin de trombina y por ultimo un coagulo de fibrina. Tiempo Parcial de Tromboplastina Principio El Tiempo parcial de Tromboplastina activada se realiza por la adicin a la muestra del reactivo de aPTT que contiene un activador de plasma y fosfolpidos. Los fosfolpidos sirven como un sustituto de las plaquetas. Esta mezcla se incuba para una activacin, despus se recalcificacin cloruro de calcio y se contabiliza el tiempo de formacin del coagulo.

4. PROCEDIMIENTO
Reactivo de TP Extracto de cerebro de conejo 2.6 % CaCl2.. 0.13 % Sales y estabilizadores Mtodo de TP Una vez seleccionada la vena se procede a limpiar el sitio de puncin. Se realiza una pequea puncin y se extrae con vacutainer 4.5 ml de sangre en un tubo con citrato de sodio. Despus se lleva a centrifugar la sangre y se separa el plasma. Luego como reactivo de TP viene liofilizado, es decir en polvo, para utilizarlo se coloca 2ml de agua destilada, se agita suavemente hasta que se disuelva completamente y se lo deja incubar por 15 minutos. Colocar en un tubo de ensayo el plasma ya separado. En otro tubo colocar 200ul de reactivo de TP. Estos dos tubos se los lleva al bao Mara a 37C de 3 a 5 minutos. Transcurrido este tiempo se aade 100ul de plasma en el tubo que contiene reactivo de TP, apenas se aade el plasma se activa el cronometro y mezclo sin sacar del bao Mara. Pasado unos 7 segundos aproximadamente luego de ver activado el cronometro se saca el tubo y se observa hasta que se forme la red de fibrina.

Reactivo de TTP Extracto de cerebro y fosfolpidos 0.007 %

cido Elgico 0.0037 % Bufferes, sales y estabilizadores Mtodo de TTP Una vez seleccionada la vena se procede a limpiar el sitio de puncin. Se realiza una pequea puncin y se extrae con vacutainer 4.5 ml de sangre en un tubo con citrato de sodio. Despus se lleva a centrifugar la sangre y se separa el plasma. Se enumeran 2 tubos uno para reactivo de TTP y otro para Cloruro de Calcio. En un tubo se colocan 100ul de reactivo de TTP a este mismo tuvo le adiciona 100ul de plasma y se mezcla suavemente. En otro tubo colocamos el cloruro de calcio. A los dos tubos se los lleva al bao Mara a 37C de 3 a 5 minutos. Luego se coloca 100ul de cloruro de calcio en el tubo que contiene plasma y reactivo de TTP, apenas coloco el cloruro de calcio activo el cronometro y mezclo el tubo dentro del bao Mara por 25 segundos. Transcurrido este tiempo saco el tubo y observo hasta que se formen los filamentos de fibrina.

Resultados Responsables Doctora Daniela TP 11 segundos 13 segundos TTP 44 segundos 41 segundos

Interpretacin de Resultados Tiempo de Protrombina (PT) En este examen el rango de error establecido por la docente fue de 1 por lo que comparando el resultado obtenido por la docente que es de 11 segundos con el resultado obtenido por mi persona que es de 13 segundos y tomando en cuenta el rango de error mi valor esta fuera del rango establecido por la doctora. Cabe destacar que ambos valores se encuentran dentro de los valores de referencia que son de 10 a 14 segundos. Tiempo Parcial de Tromboplastina (TTP) En este examen el rango de error establecido por la docente fue de 1 por lo que comparando el resultado obtenido por la docente que es de 44 segundos con el resultado obtenido por mi persona que es de 41 segundos y tomando en cuenta el rango de error mi valor esta fuera del rango establecido por la doctora. Cabe destacar que ambos valores se encuentran dentro de los valores de referencia que son de 30 a 45 segundos

5. GRAFICOS
Procedimiento para TP

Procedimiento de TTP

6. CONCLUSIONES
El tiempo de Protrombina puede aumentar debido a diferentes causas entre las ms mencionadas tenemos: - Enfermedades Hepticas, como la cirrosis heptica y la insuficiencia heptica aguda - Dficit de vitamina K, esto debido a una mala absorcin o a la ingesta de antibiticos. - Monitorizacin a pacientes con anticoagulantes - Hepatopatas - Antes de Cirugas

El tiempo parcial de Tromboplastina se utiliza para detectar anormalidades de la coagulacin, el TTP se usa tambin para controlar el efecto del tratamiento con heparina, uno de los anticoagulantes ms utilizados. Se usa conjuntamente con el tiempo de protrombina (PT), que mide la va extrnseca (que implica al factor VII y el factor tisular)

7. LIMITACIONES
No se encontr ninguna limitacin

8. RECOMENDACIONES
Homogenizar bien la sangre con el anticoagulante, para evitar la coagulacin de la misma. Tener mucha atencin en el momento en que empieza a formarse el coagulo de fibrina en caso del TP y los filamentos de fibrina en caso de TTP para evitar dar resultados errneos. Pipetear adecuadamente para que los resultados no se alteren. Evitar que el tiempo en que estn los tubos en el bao Mara sea mayor a 5 minutos.

9. BIBLIOGRAFIA
Burneo, R. Principios de Laboratorio Clnico. 1era Edicion. Loja-Ecuador.Cientifica Medica. 1992. Pgs. 182-183
YOVISNA, Manual Bsico de Laboratorio Clnico, disponible en, http://www.monografias.com/trabajos14/labclinico/labclinico.shtml

Las pruebas de coagulaci n

Es difcil medir las diferentes etapas de la coagulacin en forma aislada y muy especialmente la etapa II, porque en ella la protrombina se convierte en trombina con el auxilio de la tromboplastina (sea extrnseca o intrnseca) y calcio, manifestndose el punto final de esta reaccin por el paso de fibringeno a fibrina, que sera la etapa III de la coagulacin. Tiempo de protrombina (PT) El tiempo de protrombina es la prueba ms importante para medir la etapa II e indirectamente la etapa III.

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Se trata de un tiempo de coagulacin obtenido al agregar al plasma un exceso de tromboplastina hstica y calcio. Mide los niveles de factor I (fibringeno), factor II (protrombina), y factores V, VII y X. Es decir que el nombre de esta prueba dara una idea equivocada, porque no es slo el factor II el medido, sino todos los factores intervinientes en la etapa II.

Tiempo de tromboplastina parcial (PTT) Es un tiempo de recalcificacin del plasma sin plaquetas al que se agrega un sustituto plaquetario (tromboplastina parcial). Constituye una medida del sistema intrnseco de coagulacin; no mide deficiencias del factor VII, necesario slo en el sistema extrnseco. El plasma del paciente provee todos los factores de coagulacin, excepto el in calcio las plaquetas. El anticoagulante remueve el calcio de la sangre y la centrifugacin, las plaquetas. El PTT depende de la totalidad de factores de coagulacin involucrados en las etapas I, II y III, excepto calcio, plaquetas y factor VII. En general el tiempo de tromboplastina parcial resulta mas sensible para detectar valores bajos de factores de la primera etapa de coagulacin (XII, IX, VIII) que para los de las etapas II y III.