Microbiologa segunda semana Dentro de las clulas microbianas tenemos a las bacterias que son las que han

ocupado mayor investigacin a lo largo del tiempo quizs el conocimiento de la estructura y de la fisiologa bacteriana es lo que ha permitido de alguna manera conocer la estructura de la clula eucariota y del organismo superior luego tenemos tambin dentro de las clulas microbianas estn consideradas algunas clulas eucariotas como es el caso de los hongos y los mohos los virus no estn considerados ac aunque son parte importante del estudio de los miro organismos porque no son microorganismos son parsitos de los microorganismos por eso es que hay una ciencia nueva que ha surgido en estos ltimos tiempos que es la virologa. Tienen Uds. ah una morfologa de una bacteria gran positiva en donde vamos a ver nosotros algunas estructuras que vamos a ir describiendo una por una donde estn observando Uds. ah una estructura bastante gruesa bastante grande de color verde que es quien da la forma a la clula bacteria que es la pared celular despus estn viendo una estructura pintada de azul que es la membrana plasmtica estamos viendo un citoplasma de color naranja dentro de ese citoplasma ribosomas dispersos a lo largo de toda la citoplasma estamos viendo mesosomas un ncleo en el caso de las bacterias en realidad es un nucleodide un falso ncleo que no existe como tal donde el genoma est disperso a lo largo del todo citoplasma que mas estamos viendo flagelos una estructura un poco ms al extremos que es la capsula luego vemos ribosomas a nivel de la membrana citoplasmtica protenas que siempre van estar ah que cumplen la funcin de permitir el paso de sustancias y tambin permitir la salida de metablitos de excrecin Ah tienen Uds. una levadura esto es un montaje y la otra es un modelo de clula bacteriana que es un esquema en verdad diseado para que se observe, que las clulas en las bacterias son tridimensionales si bien es cierto nosotros hemos visto un esquema anterior en una sola dimensin que es una dimensin plana en verdad una bacteria tiene una estructura tridimensional. Una caracterstica de la clulas bacterias procariotas es que carecen de ncleo carecen de ncleo van a tener una morfologa variada podemos encontrar bacilos podemos encontrar cocos podemos encontrar espirilos se las considera las clulas mas arcaicas las clulas ms simples que existen en la naturaleza entre los componentes estructurales bsicos esta la pared celular, la pared celular es una estructura rgida que es la que de alguna manera le da la forma a la clula bacteria y no solamente le da la forma sino que tambin cumple una funcin de proteccin qumicamente tiene una composicin variada como vamos a ver ms adelante luego tiene la membrana plasmtica que sta formada por protenas tambin tiene hay una capa lipidica de mayor consistencia en las bacterias gram la membrana es pues la zona atreves de la cual la clulas se nutren por eso tienen esa capacidad de formar mesosomas que no son otra cosa que repliegues atreves de los cuales puede atrapar nutrientes luego se tiene cidos nucleicos dentro

de los ellos hay que resaltar el ADN que es el contiene tiene toda la informacin gentica que determian la morfologa y la fisiologa de al celula bacteria y tambin tiene el acido ribonucleico el ARN que forma parte importante porque es el que de alguna manera copia la informacin que tiene el ADN para poder sintetizar protenas junto con la participacin de los ribosomas y de esa manera asegurar la supervivencia de la clula. . Entonces si nosotros vamos un poco a comparar pues una de las caractersticas respecto a la eucariota es bsicamente la presencia del ncleo he y luego la mayor complejidad que se puede encontrar en las clulas eucariotas ya sean las animales y he vegetales otros de los aspectos importantes es que solamente hay mesosomas en los procariotas mas no en los eucariotas y en el caso de pared celular si nosotros vamos por ejemplo a los hongos filamentosos en ello si vamos observar pared celular lo que no se observa en una levadura . Entonces ah tenemos la comparacin en cuanto a estructura s que vimos tambin la semana pasada, pasa a la siguiente para entrar bsicamente a describir las estructuras de las clulas bacterianas. . Entonces dentro de las clulas bacterias nosotros vamos a diferenciar dos tipos de elementos estructurales los que son obligados sea los que van estar en toda clula bacteriana y ah tenemos la pared celular la membrana plasmtica el citoplasma con la parte del ianoplasma mas los rganos que estn flotando en el y el genoma que segn la literatura Uds. lo van encontrar denominado nucleoide en alguno casos o como DNA extra luego tenemos elementos facultativos que reciben esa denominacin porque no estn en todas la bacterias porque algunas las portan y otras no y ah tenemos por ejemplo la capsula que esta denominada como glicocalix en algunos casos o como capa glucoxida esta es una estructura que no est presente en todas las bacterias, las bacterias que poseen el glicocalix bajo la forma de capsula o bajo la forma de capa glucosa son aquellas bacterias ms virulentas sea digamos las que son mas patgenas o ms agresivas, luego tenemos los flagelos que tampoco estn presentes en todas la bacterias algunas son flageladas otras no lo son luego tenemos las fimbrias o pili la denominacin varia en cuanto a la dimensin y a la disposicin o estructura en la que se encuentra entonces hablamos de fimbrias cuando estn dispersas a lo largo del todo el cuerpo de la clula y que le sirven como una suerte de estructuras que le ayudan a moverse pero hablamos de pili cuando de pronto es solo una estructura atreves de la cual se fija al rgano donde va a colonizar o a la glucosa en la cual se va adherir luego hablamos de esporas las esporas tampoco son estructuras obligadas son facultativas entonces por eso se habla de bacterias esporiladas

Ah tienen Uds. las estructuras de las clulas de la clula bacteria el flagelo que es bastante largo que lo estn viendo asa un extremo hacia un polo de la clula despus estn viendo las otras estructuras en rojito tambin que son las fimbrias las capsulas que lo estn viendo en un tono rosado que algunas clulas la tienen otras no,

Entonces tienen ahi los elementos obligados que mencionamos pared celular membrana citoplasmtica el adn los ribosomas Dentro de los facultativos estamos hablando de las capsulas las esporas la siguiente Ahora cuando hablamos de microorganismo procariontes tambin se habla de la denominacin de eubacterias y dentro de las eubacterias ah que diferenciar pues grupos entre ellas pueden ser diferenciadas por las estructura de la pared celular y cmo se ha diferenciado a las bacterias? por la estructura de la pared celular quien ha contribuido a esa diferenciacin ha sido la tincin pero que tincin una tincin ha sido la de gran gran es un cientfico que empez a jugar con colorantes para poder observar los componentes de las clulas bacterianas y empez a observar ciertos hallazgos y es gracias a esta tincin que de alguna manera se ha podido clasificar a los organismos y diferenciarlos y poder comprobar que la pared celular no es igual en las bacterias cada grupo de bacteria tiene caractersticas muy puntuales la siguiente Entonces ah nosotros vamos observar las tinciones, las tinciones nos han permitido diferenciar la morfologa pero como les dije denantes la morfologa a quien se debe? A la pared celular, la pared celular es quien nos va decir que forma tiene la bacteria y ah estn uds viendo las coloracin donde estamos viendo cocos cocos a manera de racimos a ellos se les denomina estafilococos, cocos dispuestos en cadena estreptococos despus tenemos por ejemplo bacilos que son mucho ms largos de pronto de forma ms geomtricas en la parte inferior estamos viendo espiral se les ha denominado espirilos eso no sera posible si no se hace una tincin porque las bacterias son transparentes en la realidad no se las va haber no tienen un color definido entonces la coloracin es la que nos evidencia la morfologa pero esa coloracin a dnde se va adherir? a la pared celular es por eso que la pared celular es responsable de la morfologa y nosotros observamos esa morfologa gracias a la tincin la siguiente Entonces ah tenemos nosotros miren las bacterias las arqueas estas ya son fotografas de microscopia electrnica miren las arqueas en morfologa son muy parecidos a las bacterias dentro de los eucariotas tambin hay levaduras tambin hay protozoarios tambin hay algas ac tambin estamos viendo virus en el caso por ejemplo del VIH estn viendo Uds. ah un leucocito un cd4 en donde se estn observando las partculas virales del VIH la siguiente Ac est un esquema de la morfologa cocos la morfologa puede estar as como cocos individuales pueden estar como diplococos cocos en parejita pueden estar como estafilococos en los bacilos estreptococo en cadena bacterias flageladas estn viendo ah mltiples flagelos bacilos espirilos la siguiente

Si queremos ver a dems de la morfologa el tamao la tincin tambin ha permitido poder establecer Dimensiones para la bacterias ah estn viendo por ejemplo la ms grande de las bacterias es la una cianobacterias que lo estn viendo ah de forma vacilar bastante larga alargada despus tienen el bacilo megateirun que tambin es bastante grande luego le sigue el eschericha coli los estreptococos. La siguiente Nuevamente estas son fotos de microscopia para diferenciar miren el caso de cocos como se miran en un esquema como se miran en una tincin la siguiente En cuanto a los bacilos los mismos la pueden ver as muy solitos o como podran ver agrupados a manera de cadenas o a manera de bacilos unidos en cadena de a dos. Las metodologas de observacin las metodologas de cuantificacin estn en funcin tambin del tamao de clulas no toda metodologa es aplicable a todo en si, ac tienen la forma de espirilos a a quin tenemos en forma de espirilo? Treponema por ejemplo treponema palidun que produce la sfilis tiene al estructura de espiral se observa as en microscopia, por ejemplo no es cultivable el treponema por eso la metodologa de diagnostico para sfilis no es microbiolgica si no es inmunolgica la bacteria es especial es del grupo de bacterias a las que se llama fastidiosa por que requieren de pronto tantos nutrientes y es difcil poderlas manipularlas dentro del laboratorio entonces la ciencia ha desarrollado alternativas para el diagnostico una de ellas son las lesiones propias que se producen en el rgano sexual de la persona infectada o los brotises que se hace tambin de las secreciones donde se puede ver los espirilos, sea basta con ver los espirilos para estar con la certeza de que hay una infeccin asociada al treponema. La siguiente La siguiente Luego tienen las formas filamentosas estas formas filamentosas mas la van a ver en hongos por eso se habla de hongos filamentos porque? Porque presentes estas estructuras a manera de filamentos a manera de hilos entonces la morfologa ayuda mucho a la diferenciacin de la clula Uds. con una simple diferenciacin en el microscopio podran decir si est presente o no sin necesitar medios de cultivo una coloracin ayuda bastante, entonces en una muestra uds pueden ver si hay o no como lo van a ver el da de maana cuando hagan Uds. tinciones van a de pronto tomar una muestra de sarro dental y van a repetir el experimento de .. Cuando vio los animaculos que uds lo van a colorear y van a ver cada cavidad oral individual la siguiente Entonces ah tienen todas las formas de agrupaciones bacterianas asociadas a la morfologa estn viendo uds ah por ejemplo hay una forma de distribucin que es la de cubos la de las zarcinas los coquitos estn agrupados a manera de cubo imagnense uds un cubo formado por cocos eso es tpico en las zarcinas la siguiente Entonces ah estn las agrupaciones bacterianas hay coloraciones morfologas que pueden ayudar al diagnostico ese es el caso por ejemplo del los diplococos tpicos de una clula nos pueden evidencias que estn presentes son los nicos cocos que son gran negativa

23:44 luego tenemos tambin el grupo de los bacilos entonces los bacilos pueden estar solitos pueden estar juntos en pareja pueden estar en cadena de bacilos pueden estar en empalizadas sea unidos a manera de blondas formando figuras como x como b como y. estos bacilos lo van a ver Uds. desde el mas pequeitos cuando estn muy pequeitos son muy regordetes a veces se habla de cocobacilos echericha coli por ejemplo es un cocobacilo es un bacilo pequeito algo gordito sin embargo si uds ven un bacilos serius un bacilos sotil lo van a ver alargado bastante largo a manera de cabello Entonces la tincin gran es la que nos ha permitido poder visualizar estas agrupaciones de bacterias poder diferenciarlas he mire esta coloracin desde cuando fue descubierta sigue vigente hoy en da y es una de las tinciones que permite en bacteriologa diferenciar a las clulas en dos grandes grupos las gran + o las gran y a qu se debe esta diferencia de tincin? A la estructura de la pared celular que interacta de una manera fsica con los colorantes y nos evidencia las caractersticas de la clula la siguiente De que est formada esta tincin esta es una tincin diferencias se habla de tincin diferencial esta es una tincin diferencia que juega con dos colorantes un colorante como el cristal violeta y el otro colorante que es la safranina ambos van a dar lugar a la coloracin de la estructura de la pared celular de las bacterias mientras unas van a coger el cristal violeta hay quienes no van a ser coloreadas por el cristal violeta sino por la safranina entonces las que cogen el cristal violeta se van a llamar gran positiva y los que escoge el rosado de la safranina se les va llamar gran negativa, adicional en esta tincin diferencial sea en el sed de gran nosotros tenemos dos elementos ms est el lugol y el alcohol acetona el lugol Uds. estn viendo en uno se coloca el cristal violeta despus de haber hecho un crotis adecuado pasa la tincin entonces se coloca el cristal violeta y se deja actuar un minuto entonces que va a ocurrir? Que las clulas van a coger esa tincin si pared celular lo permite despus Uds. van a colocar, eliminan el cristal violeta se lavan ligeramente con agua destilada y se colocan el guante, el lugol que funcin cumple ah que funcin creen que cumple el lugol? Es un fijador, ayudar a la fijacin del colorante a la estructura que se quiere teir se coloca el lugol y un minuto ms despus de eso se deja caer el lugol y se pasa a una etapa de decoloracin. 30:22 Y entonces porque los colorantes nos permiten evidenciar esas morfologas? Por la solubilidad que van a tener con las estructuras como son la pared celular de las bacterias gram positivas , se ha establecido que dentro de las propiedades fisicoqumicas de las paredes celulares en el caso de las gran positivas estas dicen son insolubles en solventes usuales de protenas y polisacridos incluyendo ter alcoholes acetona por eso cuando se pone acetona alcohol la pared celular no se altera en anda no se disuelve, pero claro ah solventes que si pueden daar la pared celular ah tenemos por ejemplo los solventes de protena, la guanidina es una estrategia para romper pared celular y extraer el adn porque la pared celular no se disuelve con acetona y alcohol

Todas la SUSTANCIAS QUE ESTAN FORMANDO PARTE DE esa PARED CELULAR Y TAMBIEN SE LLAMAN ANTIGENOS superficiales o antgenos somticos que se puede extraer bajo ciertas condiciones

GENTICA BACTERIANA (cuarta semana) En las bacterias principalmente cromosoma es uno solo y tienen todos los genes necesarios para la bacterias ellos necesariamente piensan tener lo genes para metabolizar los diferentes nutrientes a los cuales se encuentran expuestos y de pronto por ah algunos factores de virulencia algo que les permita causar enfermedad el tamao de los cromosomas en la bacteria varan muchas veces varia con el tamao de la bacteria, ms grande la bacteria de pronto ms cantidad de pares de bases de su cromosoma por ejemplo echericha coli tiene 4.7 por 106 pares de bases mientras que el micoplasma que es un microorganismo especial tiene hasta 580 mil de pares de bases y a pesar de que es de tamao poco menor codifica hasta 470 genes pero necesarios para que este microorganismo pueda sobrevivir que forma tiene el cromosoma generalmente circular y de cadena doble en las mayora de las bacterias siempre existen excepciones a las reglas en este caso se sabe que esos dos microorganismos son de forma lineal no lo tienen de forma circular. Tamao del cromosoma 1mm en las bacterias y 1 metro en los humanos. La siguiente Entonces al igual que las clulas eucariotica al igual que en la especie del ser humano tambin hay un sper enrollamiento porque un milmetro es muy grande en comparacin con el tamao de la estructura bacteriana, entonces hay un sper enrollamiento del ADN adoptando una forma ms compacta que el circular no es histonas precisamente es otro tipo de protenas las que ayudan a este enrollamiento y se logra que el ADN del cromosoma pueda tener cierta estabilidad y cierta proteccin frente a algunos medios adversos que podran afectar ese cromosoma. Se dice por ejemplo que para echericha coli existen unos 50 enrollamientos llamados dominios que son estables pero hay que tener una particularidad en el enrollamiento no es solo hacia un lado si no se ha visto que la caracterstica es as: un giro hacia la derecha para las eubacterias y gira hacia la izquierda ese sper enrollamientos en aquellas bacterias llamadas arqueas dentro de las bacterias arqueas tenemos bacterias especiales de un comportamiento extremo por ejemplo termfilos, halofitas entonces este grupo tienen el enrollamiento caracterstico de su cromosoma hacia el lado izquierdo. Ya recordando un poco de lo que es el dogma de cromosoma del ADN solo para recordar cmo es la decodificacin del genoma es muy igual que las clulas de los mamfero cuando el ADN se duplica el termino correcto es replicacin, duplicacin del ADN se conocer como replicacin sin embargo cuando se quiere poder codificar y tener protenas enzimas se tienen que pasar por una serie de proceso por ejemplo de ADN a ARN ese proceso se conoce como

transcripcin y posterior ese ARN especficamente el ARN mensajero se traducir en una protena necesaria para la bacteria, cules son las principales diferencias entre una clula eucariotica hablando ya de la parte genmica con respecto a una clula procariotica? El ncleo, tipos de organelas, las bacterias tienen protenas que no son histonas, entonces hemos dicho que una de las diferencias es el ncleo obviamente este ncleo ser utilizado para algo dentro de la clula eucariotica y justamente es para la duplicacin de su ADN en este caso la clula eucariotica cuantos genes segn nuestro ejemplo cuantos genes esta codificando solo uno para el ejemplo le he puesto genes x este es un tipo de informacin monocistronica solo estamos llevando la informacin de un gen sin embargo el ADN que forma este gen tiene dos tipos de secuencias las secuencias llamadas intrones y exones, alguien sabe la diferencia? recuerdan que el exn tiene la informacin gentica y los intrones no tienen la informacin gentica Entonces esa es la principal diferencia por lo tanto cuando hay una transcripcin y hay un ARN previo inmaduro sin procesar todava se transcriben esos intrones y esos exones pero cuando el ARN ya empieza a madurar elimina totalmente esos intrones que no tienen ningn tipo de informacin gentica por lo tanto el ARN maduro solo estar formado por la secuencia d exones y obviamente hasta all llega con el ARN y si ya quiere pasar a traducir tiene que salir del ncleo hacia el citoplasma para que el ARN ya conocido como mensajero se pueda traducir en una sola protena. Qu pasa con la clula procaritoica? es mas practica mas ahorrativa desde este punto de vista, empezando no tiene intrones as que no tiene nada que eliminar, tiene la informacin necesaria no de mas otra cosa trabaja de manera policistronica puede codificar traducir varios genes a la vez por lo tanto obtener varias protenas a la vez entonces en este caso nuestro adn por ejemplo le he puesto ah dos genes que se transcriben aun ARN mensajero pero como esta ARN m lleva informacin para varias protenas se llama policistronico no tiene que pasar de ncleo a citoplasma porque no hay ncleo por lo tanto inmediatamente se traduce cada uno dando informacin en las protenas que necesitaba traducirse. Entonces es mas practico en las clulas procariotica es mas ahorrativa, en cuanto a la parte de informacin es muy precisa muy exacta en cuanto necesita. Siguiente Entonces viendo y recordando ms que todo recordando para Uds. la parte de duplicacin de ADN es muy similar a la clula eucaritoica la duplicacin de ADN es similar a la replicacin son sinnimos e igualmente la doble hlice de and se tiene que separar en dos por eso se llama una separacin semi-conservadora porque cada una de las hebras de los nuevos ADN van a conservar una hebra parental de la que le dio origen. siguiente Como el ADN en caso de nuestra bacteria es circular tiene que partir de algn punto especifico para que empiece la duplicacin en este casos se conoce una secuencia especifica de 300 bases generalmente no es algo estndar pero generalmente hay un promedio de 300 bases y se llama ori, origen de replicacin y justamente en ese origen de replicacin en esa secuencia va empezar la replicacin de nuestro ADN circular, entonces a la altura ms o menos de ori o del origen de replicacin se va a formar una burbuja sea va haber una especie de separacin en las dos cadenas y de tal manera que va empezar nuevamente la duplicacin en sentido contrario y luego continua de tal manera que vamos a poder obtener cromosomas circulares hijos que han partido

del cromosoma circular parental entonces la replicacin en ese sentido al darse de esta manera se puede decir que es bidireccional. La siguiente Y ah lo tenemos origen de replicacin cuando va empezar esta replicacin inmediatamente se forma esta horquilla que es una especie de abultamiento y a apenas se da la separacin de esas dos hebras inmediatamente empieza la duplicacin bidireccional entonces a medida que hay separacin inmediatamente se est sintetizando la hebra complementaria para dar lugar a ambos cromosomas hijos. La siguiente Quin me puede explicar esto? Porque eso ya es un recordar de los que es la replicacin del ADN as a groso modo a ver para qu es la topoisomerasa ? para el desenrollamiento de la doble hlice ya, luego tenemos por aca a la enzima helicasa? para el corte es decir la separacin de las dos cadenas, luego tenemos protenas de unin a cadenas simples esas protenas van evitar que esas dos hebras se vuelvan complementar por que al ver complementariedad rpidamente se volveran a unir pero no, estas protenas evitan esto, luego tenemos la ARN primasa porque siempre se dice que para sintetizar la cadena complementaria se necesita pequeas cadenas cortas que se llaman cebadores, y luego tenemos nuestra enzima ADN polimerasa que tiene una particularidad solo se va a mover solo va a duplicar la cadena en el sentido 3a 5 por lo tanto se dice que hay duplicacin o replicacin y a las que es ms rpido se le llama cadena adelantada y a la que demora un poquito ms es la cadena retrasada pero porque se da esta diferencia? La ADN polimerasa se mueve en sentido decimos 3a 5 por lo tanto si nuestra cadena original es esta 3 5, para este lado no hay problema nuestra polimerasa se mueve y sigue movindose se va abriendo la cadena y sigue sintetizndose, no hay problema en ese lado y qu pasa con la otra cadena? La otra cadena si la vemos empezara en 5no podra sintetizar de una misma manera, entonces que hace nuestra ADN polimerasa? la hace al revs entonces tenemos de all para ac, va sintetizando pero como ya a cabo este lado da un salto nuestra ADN polimerasa y vuelve a sintetizar otro fragmento salta nuevamente otro fragmento conocidos como qu? Fragmentos de okasaki , despus que Pasa? simplemente viene una ADN ligasa y une todos esos fragmentos de okasaki no hay problema entonces tenemos la replicacin de nuestro ADN igualito como hemos visto de pronto para las clulas eucarioticas sucede para las clulas procarioticas. La siguiente Luego tenemos los genes, qu tipos de genes? los genes que codifican protenas, que codifican enzimas llamadas cistrones, pero no olvidemos que tambin hay genes para el ARN ribosmico que van expresar en forma continua que son los genes constitutivos y aquellos genes que son inducidos por ciertos sustratos que son los genes inducibles, que ejemplo podramos tener entonces de los genes constitutivo, por ejemplo para que podramos sintetizar continuamente una protena una enzima? Vamos a suponer que el microorganismo esta en un medio de cultivo que tiene glucosa entonces y siempre lo va estar por ejemplo vamos a suponer que su hbitat usual es medios que contengan glucosa entonces esta bacteria necesita la enzima para poder usar esa glucosa para poderla metabolizar ese sera un gen constitutivo que siempre se va ir sintetizando porque es parte de la vida de la bacteria, que pasa con un gen inducible solo se va inducir cuando haya una necesidad bacteria ya se para nutricin ya sea para defensa ya sea para infectar a un hospedador sea solo se va inducir cuando sea necesaria. La siguiente

Entonces se estn realizando estudios comparativos en los cromosomas de las bacterias, Uds. pueden tener acceso a diferentes artculos cientficos y va a ver lo primero que se estudia es los cromosomas bacterianos para ver y explicar el diferente comportamiento de la bacteria frente a un hospedador. Las bacterias dice estrechamente relacionadas tienen una disposicin similar, similar mas no igual entonces bacterias muy relacionadas como por ejemplo todas las entero bacterias pueden tener una disposicin similar de sus genes pero sin embargo dice la disposicin de los genes en un mismo operon, en dos bacterias diferentes puede ser diferentes, es decir lo que yo codifico que puede ser para utilizar el triptfano en una bacteria no es igual a lo que codifica para utilizar el triptfano por otra bacteria son mecanismos totalmente diferentes que no tienen ningn tipo de relacin. La siguiente

operon
El operon es la parte esencial que va a codificar ciertas protenas, ciertas enzimas en una bacteria qu cosa comprende? principalmente un grupo de genes, generalmente todas apuntan a un mismo objetico comn y estn bajo el control de los mismos elementos reguladores, si tenemos entonces genes que tienen la misma funcin se dice entonces que el operon es policistrnicos Porque esta codificando para varias protenas, para varias enzimas cules son las partes los elementos de un operon? tenemos el gen regulador que va regular si el operon se induce si el operon se va reprimir, hay dos elementos de control llamados promotor y operador que estn generalmente uno detrs de otro y luego tenemos los genes que son los cistrones los genes que directamente van a codificar una protena o una enzima que son los genes estructurales para nuestro ejemplo hemos puesto tres pero pueden estar constituidos por mas genes. Entonces de acuerdo a si perteneces a genes inducidos o genes reprimidos los operones pueden ser a su vez inducibles o represibles

Control negativo
Ah tenemos por ejemplo dos tipos de control del operon, se llama control negativo porque esta utilizando protenas llamadas represoras, pero a su vez este control negativo tiene dos tipos la represin enzimtica y la induccin enzimtica que pasa para la represin enzimtica, cuando no hay represor simplemente la ARN polimerasa nuestra enzima se une al promotor y se puede dar lugar a la transcripcin es decir a la sntesis de enzima sntesis de protena sin mayor problema pero de pronto tenemos una protena llamada represora la cual se tiene que unir a otra protena ms pequea que la activa y la cambia de estructura conformacional de tal manera que este represor se une al operador, al unirse al operador la ARN polimerasa ya no puede transcribir el mensaje por lo tanto ya no hay sntesis ni de enzimas ni de protenas la transcripcin por lo tanto est bloqueada. Qu pasa con la induccin enzimtica? En caso de la induccin enzimtica para la sntesis de una enzima el represor siempre esta unido al operador por lo tanto lo normal que suceda? Que no haya transcripcin, entonces basta que venga un inductor que puede ser un polisacrido un disacrido se une a este represor y le cambia la conformacin de tal manera que ya no se pueda unir al operador, al no poderse unir se separa y el ARN polimersa transcribe sin mayor problema entonces de esa manera actan las protenas represoras pero ojo cuando en la

represin se une una molcula esta molcula se llama co-represora, represin y cuando esta molcula ayuda que se separe y haya trascripcin est induciendo entonces es inductor, induccin enzimtica, la siguiente

Control positivo
Pero as como hay represores: control negativo, tambin hay un control positivo, en este caso ya no hay una protena represora sino una protena llamada activadora qu es lo que sucede normalmente? dice en ausencia del inductor ni la protena activadora se va poder unir al ADN sea normalmente la protena activadora puede estar por ah cerca pero no se va unir qu es lo que falta? Una molcula que induzca esta unin entonces cuando apareze esta molcula que induce esta unin se une a la protena activadora y recin ah es que se puede unir al ADN de esta manera el ARN polimerasa se une al promotor y hay trascripcin un ejemplo de este tipo de control es el operon maltosa.la siguiente

Operon lac de E. coli

Entonces hablamos en algn momento de genes inducibles como se da esa formacin esa sntesis de esas protenas inducidas, vamos a suponer que pasa en el operon lac, operon lactosa de escherichia coli si a escherichia coli la tenemos en un medio con glicerol la bacteria no sintetizara o sintetizara muy pocas enzimas para lactosa porque no necesita la lactasa para poder utilizar esta lactosa porque no hay en el medio, estara desperdiciando por gusto la maquinaria celular qu pasa si se agrega a este medio lactosa? si agregamos a este medio con glicerol, lactosa entonces la bacteria se va haber en la necesidad de poder utilizar esta lactosa y por lo tanto necesita sintetizar enzimas paras poder utilizarlas entonces se van inducir lo genes y se van sintetizar principalmente permeasas y beta galactosidasa que son enzimas para la utilizacin de lactosa. Siguiente

Operon lac
Entonces como est conformado el operon lac, si podemos ver en este caso el inductor es la misma lactosa, es el azcar en este caso el que va inducir, hay un gen regulador hay otros elementos de control promotor y operador, y estn los genes estructurales en este caso como es operon lactosa necesitamos los genes estructurales para utilizar la lactosa entonces tenemos la permeasa que va ayudar para que pase la lactosa hacia el citoplasma celular, la transacetilasa que tambin interviene en este paso al interior de la clula y la betagalactosidasa que es la que va romper este azcar para poder ser utilizado por la bacteria entonces en este caso los genes estructurales son solo 3 en algunos casos sern ms. La siguiente

Induccin enzimatica
Entonces que sucede en la lactosa, hay lo que se conoce como una induccin enzimtica; miren bien como se est dando hemos dicho que tiene que haber una protena represora, claro cuando en el medio de cultivo no hay lactosa la protena represora esta unida al operador, al estar unida al operado no hay sitio donde se pueda unir la ADN polimerasa, la ADN polimerasa esta por ah flotando y por lo tanto no hay sntesis de enzimas y para que sintetizar enzimas si no va utilizar lactosa pero qu pasa cuando en el medio se agrega lactosa? si hay lactosa esa lactosa va unirse al represor lo cambia conformacionalmente de tal manera que y no se une este represor al ADN y

en su lugar la ADN polimerasa se une y puede transcribir sin mayor problema pasa al ARNm y pasa a sus tres enzimas que necesita para que? Para poder consumir lactosa.

Represin enzimtica
Ac es otro ejemplo, lo contrario a lo anterior llamada represin enzimtica, a ver observen el grafico y de pronto alguien me puede compartir lo que entiende de este grafico, en este caso por ejemplo el inductor el represor seria el mismo triptfano del aminocido, haber la parte superior es el comportamiento cuando no hay triptfano, qu estara pasando ac? Normalmente qu cosa ocurre? Normalmente al no haber triptfano que es un aminocido necesario para la construccin proteica, tambin bacteriana necesitara la bacteria sintetizar este aminocido por lo tanto cuando no hay triptfano el represor esta inactivo no est unido al ADN entonces la ARN polimerasa esta unida al ADN y est constantemente transcribiendo para qu? para pasarlo al ARN m y este a su vez pueda codificar y producir triptfano de esta manera la bacteria estara supliendo esta deficiencia de triptfano pero qu pasara si agregamos al medio de cultivo triptfano? O Si la misma bacteria ha producido demasiado triptfano en exceso tampoco es bueno entonces cuando ya hay bastante triptfano este acta como un co-represor y se une a nuestra protena que est en un inicio inactiva pero cuando se unen estos esta represora es activa y se puede unir al operador, al unirse al operador el adn polimerasa ya no puede transcribir es mas se separa y se detiene todo este proceso de sntesis ya, entonces en el caso anterior era porque se agregaba un nutriente y necesitaba consumirlo, sintetizar enzimas para consumir lactosa en el siguiente caso ya es un aminocido de tipo estructural, que la bacteria necesita para consumir que si no hay lo sintetiza y que si hay en exceso ya no tiene por qu sintetizar mas. Entonces hemos dicho que las bacterias tienen un cromosoma circular de cadena doble pero no es la nica informacin gentica que tiene las bacterias tienen ms informacin y mientras ms informacin extr cromosomal mejor para la bacteria porque se puede adaptar a diferentes ambientes sobre todo de tipos por inanicin metablica como la respuesta frente a la accin de un antibitico esos elementos que tambin son secuencia de cidos nucleicos que estn fuera del cromosoma sea lejos del cromosoma pero dentro del citoplasma se llaman elementos genticos extracromosomicos. Hay varios tipos de elementos genticos los ms conocidos los ms estudiados son los plsmidos por el tamao que son ms grande tambin son circulares se duplican de manera independiente del cromosoma bacteriano y tambin hay unas secuencias mas pequeitas y que tiene la caracteristica de moverse de un lado a otro dentro del cromosoma dentro del plasmido estos elementos se llaman elementos transponibles que se estn moviendo constantmente y tenemos tres principales: las secuenciad de insercin, transposones y alguno virus porque decimos algunos virus? porque los virus siempre tienen que ser intracelular siempre parte de su genoma se incorpora al cromosoma del hospedero y toma la batuta de la replicacin de la maquinaria celular entonces se considera tambin un elemento transponible cul es la diferencia entre los dos primeros? el tamao de pronto, las secuencias de insercin varan entre 1 a 2 Kb. son formas ms simples y no contienen informacin, simplemente la informacin necesaria para moverse de un lugar a otro mientras que los transposones son secuencias mas grandes y ellos

no solo tienen informacin para moverse sino tambin tienen genes que pueden estar llevando algn tipo de informacin se replican como parte de una molcula de manera muy independiente del cromosoma.

Secuencia de insercin
Ah tenemos lo que es un ejemplo de secuencia de insercin generalmente tienen esta conformacin lo principal que codifica esta secuencia de insercin es una enzima llamada Tpasa o transposasa esta enzima que codifica? simplemente que esta secuencia se est moviendo de un lado a otro nada amas no est llevando ningn otro tipo de informacin entonces lo principal que codifica la secuencia de insercin es la enzima transposasa su nica informacin que mas hay en esta secuencia de insercin? existe las secuencias de reconocimiento de estas misma enzima por all tenemos secuencia de corte. Ac tenemos en la parte de arriba, en la parte superior la secuencia a de insercin y en la parte en la doble cadena roja es donde esta secuencia de insercin va ser colocada va ser insertada entonces que dice: la tpasa reconoce las secuencias repetidas y corta en los extremos qu extremos corta? Solo corta los extremos 3 y va dar un corte a diferente nivel en cada una de las hebras originales de donde proviene la secuencia de insercin y tambin da un corte en la secuencia donde se va insertar que es esa doble cadena roja pero solo a nivel 3 y luego tenemos que esos extremos 3 de cada una de la hebras se unen a los extremos 5complemntarios es decir que en este momento ya se est produciendo la unin, la secuencia de insercin ya se est colocando dentro de la secuencia diana se est insertando puede ser en un cromosoma extrao. Al siguiente Esas hebras que estn quedando de ms simplemente son rotas degradadas de tal manera que solo va quedar la secuencia del ADN diana que es la cadena roja con la secuencia de insercin luego intervienen ligasas que van tratar de colocar con una cadena con su secuencia de insercin Cules son las ventajas y desventajas de la cadenas de insercin? Tenemos el gen a, gen b, gen c Que pasa en el ejemplo uno pasa algo? normalmente uno podra decir que no afecta porque esta colocndose entre dos genes, no est afectando la informacin que pueda llevar este gen, aparentemente podra ser una insercin que no va afectar, perjudicar a la bacteria de pronto una insercin silenciosa pero qu pasa si esa insercin va dentro de la secuencia de un gen? Este gen va codificar lo mismo? Va codificar la protena b? no, no va codificar porque ya se perdi la secuencia de los nucletidos y si esta protena sintetizada es esencial para la vida de la bacteria simple la bacteria puede morir; pero vamos a suponer otro caso que de pronto y como se va a ver en los transposones para que este gen A sea generador de una protena que puede causar dao en el hospedador le faltaba una determinada secuencia y esta secuencia de insercin de manera casual tena ese faltante para que este gen sintetice una protena patgena para el hospedador entonces en este caso si sera perjudicial no para la bacteria sino para el hospedero si la bacteria fuera patgena.

Los transposones
Los transposones se diferencian de la secuencia de insercin en que llevan a dems una codificacin para alguna protena, y estos ejemplos que hemos puesto para la secuencia de insercin tambin pueden pasar para los transposones sobre todo porque son secuencias mas grandes por ejemplo ah tenemos el transposon pintado de azul si ese transposon interrumpe la secuencia de un gen simplemente ese gen f ya no es funcional ya no se va transcribir en una protena pero si ese transposon se coloca entre genes diferentes simplemente esta bacteria continua con su funcionamiento normal pero adems ese transposon puede llevar informacin de una resistencia frente a un antibitico.

Islas genmicas
Muchas bacterias estn adquiriendo patogenicidad por las islas genmicas que son como los transposones pero que llevan mayor informacin. Qu cosa son factores de virulencia? En cuanto a la concentracin de unidades formadores de colonias, qu estructuras creen Uds. que le pueda conferir esta facilidad para producir enfermedad en un hospedero? Que elementos hacen que las bacterias se vuelvan ms patgenas? Endotoxinas, que estaen la pared celular entonces podramos decir que los gram negativos tienen cierta ventaja la toxicidad de su pared celular podra decir los flagelo? El flagelo tambin es un factor de virulencia porque le permite a la bacteria moverse atreves de los tejidos del endotelio moverse de un lado a otro no podemos comparar una bacteria que tiene la movilidad y que puede avanzar rpidamente atreves de los tejidos, con una bacteria que no tiene movilidad podemos decir que el Pili es un factor de virulencia? Intercambio gentico es una y otra? Fijacin, entonces esta bacteria que tiene Pili y por lo tanto libera dicen que tiene unas adhesinas se va adherir tan fuerte al endotelio a la clula que a veces los fluidos como por ejemplo la orina la bacteria no va poder ser eliminada arrastrada por la orina, la capsula? Ser un factor de virulencia? Le sirve para adherirse impide la fagocitosis, sirve como mecanismos de obstruccin para la accin de los antibiticos. Entonces transferir la informacin gentica que pueda catalogar estos factores de virulencia que son propios de un microorganismo a otro es muy importante estos son en cuanto a la estructura pero por ejemplo tenemos un gen que codifica por ejemplo una betagalactamasa que le hace resistente a las penicilinas cefalosporinas entonces volviendo a nuestro tema

Plasmidos
Plsmidos son elementos genticos extracromosmicos pequeos y como se replican muy aparte del cromosoma, se replican por si solos se les llama replicones, al igual que el cromosoma son bicatenario y circular, normalmente son 1/20 del tamao del cromosoma, una simple rotura en Y ah tenemos, Por un lado tenemos nuestro cromosoma y uno ms pequeito que es el plsmido cual es lo importante de los plsmidos? que tienen informacin gentica pero no para la vida bacteriana de la vida bacteriana est encargada el cromosoma es tiene informacin que tiene que ver con factores de virulencia pro ejemplo nivel alto de resistencia a antibiticos enzimas para tetraciclinas, ampicilinas; bacteriocinas sustancias que van inhibir a la competencia vamos a suponer que dos bacteria quieren infectar , la que tiene bacteriocina mata a la otra a la

competencia y se encarga de infectar. Toxinas acta a nivel mpc, determinantes de virulencia ese trmino es tenemos nuestra bacteria y suponiendo ms o menos as es la superficie entonces viene la inmunidad humoral, luego la inmunidad celular y la sntesis de anticuerpo no hay problema se sintetiza los anticuerpos lo lgico sera que una segunda infeccin ya los anticuerpos sirvan de defensa frente a estos determinantes antignicos y se pueda sintetizar simplemente y controlar la infeccin pero no, tienen plsmidos que estn llevando determinantes antignicos nuevos van a tener nuevos receptores celulares y tendr nuestro sistema inmune que sintetizar nuevos anticuerpo.

Mapa gentico del plsmido F

Ese es un mapa gentico del plsmido F y digo plsmido F porque puede haber muchos plsmidos dentro del citoplasma bacteriano no es un plsmido estos plsmidos pueden ser varios, entonces siempre tienen que haber al igual que el cromosoma el origen de replicacin, tiene que haber tambin una regin que codifique la transferencia y de pronto en estos lugares que no estn explicado ac haya genes que estn codificando factores de virulencia que pueden variar entre bacteria y bacteria ah que darnos cuenta que n los plsmidos hay varias secuencias de insercin y transposones esa secuencias mas grandes es un transposon y hay 3 secuencias de insercin.

Tipos de plasmidos
Los tipos de plsmidos bueno hemos dicho Codifican bastantes caractersticas fenotpicas por ejemplo escherichia coli, pseudomonas el plsmido tiene que ver ms con la conjugacin es por eso que hay conjugacin no solo entre gneros y especies parecidas sino entre especies relacionas del miso genero y diferentes especies por ejemplo aunque se ha visto que hay entre gneros diferentes.

Replicacin del plsmido

Cmo se replica el plsmido? Hemos dicho que el cromosoma es bidireccional el plsmido tiene las dos opciones bidireccional y unidireccional, entonces la bidireccional inicia la replicacin en un origen y luego en ambas direcciones se replican mientras que la unidireccional generalmente seda en plsmidos muy pequeos y la replicacin ocurre en una direcciona rpidamente

Replicacin de plsmidos
Ah tenemos es muy similar lo que hemos visto para el cromosoma y bueno la replicacin tanto para el cromosoma como para los plsmidos terminan cuando los origines se encuentran a unos 180 desde el origen.

Mutaciones
Hemos visto como funciona ms o menos todo el material gentico todo nuestro cromosoma de una manera natural tranquila pero lamentablemente siempre van haber mutaciones que es lo que a veces perjudica ms en el control microbiolgico que se pueda tener y las mutaciones pueden ser cambios que pueden ser hereditarios en el fenotipo la cepa original aquella que no tiene ningn tipo de informacin o mutacin extraa es la conocida como la cepa original de tipo salvaje mientras que la cepas que ya se les ha insertado o se ha descubierto un tipo de mutacin en su cromosoma o plsmido se le llama simplemente mutantes y son de un comportamiento no esperado.

Los tipos de mutaciones pueden ser espontaneas que se dan de manera normal casual al azar y las mutaciones inducidas, a ver ejemplos de sustancias que puedan inducir mutaciones: la radiacin, la radiacin uv, bromuro de etilo. Los mecanismos de mutacin que Uds. ya deben de conocer generalmente son por sustitucin de un nucletido el cual puede ser purina por purina o pirimidina por pirimidina que se llama transicin o cuando es al revs purina por pirimidina o viceversa que es la tranversion pero tambin no es por sustitucin sino adicionamos o quitamos un nucletido tambin es un tipo de mutacin en este caso los transposones generalmente van agregar una porcin de acido nucleico Mutaciones en los microorganismos. 01:05:00 Mutacin de sentido errneo tenemos nuestra secuencia normal que debera ser as y al fallar en la secuencia de un determinado aminocido este aminocido es reemplazado por otro y de pronto se produce una protena que no tiene la misma accin que no es tan funcional como la protena que debi ser. Cuando la mutacin es sin sentido este genera un aminocido de pronto determinacin de tal manera que la protena, ya se bloquea la sntesis y queda hasta all y faltan los siguientes ladrillitos de aminocidos que debera ser para continuar la protena se ha generado una mutacin y se a codificado un aminocido determinacin. O de pronto la mutacin silenciosa, En ese caso para el ejemplo la adenina ha sido remplazada por la guanina es una mutacin pero para suerte de la bacteria estos dos tripletes estos dos codones estn codificando el mismo aminocido por lo tanto no se percibe la mutacin no es perjudicial para la bacteria. En este mutacin de error en el marco de la lectura, se ha incorporado se ha adicionado una base pero basta esa incorporacin de base para cambiar todo el orden de los tripletes en vez de que se codifique prolina un treolina y as en vez de histindina una serina y se cambio toda la secuencia servir la protena no lo sabemos pero cambio toda la secuencia, la mutacin letal que va de muy de la mano con la mutacin de sentido errneo es cuando de pronto tena que codificar una protena y de alguna manera se bloqueo la sntesis o se incorporo un aminocido que no era importante para la secuencia proteica y por que repercute en la bacteria porque esta protena era importante para la vida bacteriana y al no tener esta protena sino parte de ella la bacteria muere. Y la ultima, mutacin letal condicional en el caso por ejemplo de bacterias termfilas que soportan altas temperaturas normalmente la bacteria sintetiza sus protenas que son resistente a altas temperaturas verdad hasta 40 C pero de ponto con la mutacin se bloqueo algunos aminocido la bacteria vive pero ya no soporta temperaturas altas. Pero las bacterias en ese sentido son muy hbiles, nosotros de pronto tenemos alguna mutacin y uno tiene que sufrir la consecuencia de estas mutaciones pero las bacterias tienen la habilidad muchas de ellas de reparar esas mutaciones y para eso tienen varios tipos de mecanismos y aquella que no puede solucionar aquella mutacin simplemente va haber un momento en que ella misma muere para qu? Para evitar que se propague esa mutacin en las diferentes especies descendientes y se pueda morir la especie no ellos tratan de mantener de conservar la especie

Mecanismos de reparticin del ADN

La reparacin directa del ADN cosiste en la eliminacin enzimtica del dao que dijismo que preoduce los dimeros de tinina?el ultra violeta entonces en este caso la que ms fcil repara se conoce es la escherichia coli, escherichia coli rompe esos dmeros de etinina e inmediatamente repara con los nucletidos o con las bases que deben de ser y no hay problema contina la vida

normal de la bacteria, La bacteria ha sobrevivido por un mecanismo de reparacin. La reparacion por escisin rompe el segmentos de ADN que contiene las lesiones y sigue la sntesis de una nueva cadena de ADN hay una sntesis nueva que puede ser de secuancias muy grandes de mutacion Este mecanismo de reparacin de escisin puede ser general o puede ser especializado cuando es general? si tiene esto de ac mutado corta por aca no es muy especifico corta un poco mas adelante y un poco mas atrs, pero cuando es especializado es tan perfecto el corte que solo corta donde ha estado la mutacin esto vara entre bacteria y bacteria, entonces tenemos la reparacin general el dao es conocido por la endonucleasa, la endonucleasa entonces va a romper cerca a donde esta la mutacin, una ves que este roto actuan las exonucleasas, estas exonucleasas sacanel fragmento mutado y un poquito mas sacan para que finalmente una ARN polimerasa sintetice nuevamente la parte de la que cadena que falta pero ya reparada sin mutacion una vez que ya se ha sintetizado los diferentes pedacitos la ligasa que es otra enzima empieza unir esos fragmentos para generar nuestro ADN sin mutacin sin ningn tipo de error, la especializada es de manera similar co pero como les digo no se sabe a quin se acierta cuando esque el corte es muy amplio o es muy exacto en la mutacin sin embargo es muy relacionada los mecanismos. La siguiente La reparacin pos replicacin o por recombinacin consiste en la recuperacin de informacin que falta mediante procesos de recombinacin gentica que pueden ser dados entre bacteria en su vida normal en su hbitat o tambin es un mecanismo muy utilizado en el laboratorio.La llamada respuesta SOS, Se caracteriza por la induccion de numerosos genes tras la aparicin del dao al ADN. La siguiente

Respuesta SOS
La respuesta SOS generalmente se ha visto en algunas cepas de escherichia coli generalmente quien tiene toda esta secuencia del equipo de la maquinaria SOS tiene que haber dos genes infaltables el gen LexA que es el represor del sistema y el gen rec A que es el regulador positivo entonces cuando hay una dao en el ADN rpidamente funciona esta maquinaria SOS y genera una seal de induccin de esta manera la Rec A o el represor del sistema acta como una coproteasa y esta coproteasa que hace? destruye al regulador de tal manera que lo que se iba sintetizar o se iba transcribir al haber la falla en la mutacin ya no se transcribe entonces entonces es inhibido el regulado porque? porque rpidamente el sos daa o rompe a ese gen que permite se pueda transcribir a las siguientes generaciones esta mutacin de tal manera que hay una reparacin de ADN. La siguiente Importancia de las mutaciones Qu cosa es transferencia gentica? Transferir material gentico que puede ser cromosoma o plsmido de bacteria a bacteria o del medio ambiente a la bacteria. Entonces son tres mecanismos principales de transferencia gentica que son la conjugacin la transformacin y la traduccin. Uds. en estructura bacteriana han visto una estructura que est muy relacionada a unos de esos tres mecanismos a cul? Conjugacin quien interviene el Pili cuntos tipo de Pili hay? Dos cules son? De adhesin conocido como Pili somtico y el Pili sexual. La conjugacin ocurre entre dos bacterias en un inicio se pensaba que era entre bacterias del mismo gnero de la misma especie pero hoy se sabe que puede ser entre especies

relacionadas. La transformacin es un proceso mediante el cual las bacterias captan fragmentos de ADN desnudo no estamos hablando en este caso dos bacterias hablamos de una bacteria que est adquiriendo el cromosoma la informacin gentica del medio exterior. Y la traduccin que ah media no otra bacteria sino un virus bacteriano un bacterifago o un fago, entonces este fago transfiere ADN desde la bacteria a la cual infecto primero y lleva esa informacin a la que va a infectar despus entonces el fago hace de un mediador de una bacteria a otra el fago dice debe tener la caracterstica de no producir lisis del hospedero al cual transfiere el material gentico claro, normalmente el bacterifago el virus puede hacer dos cosas o vive con la bacteria o vive con el hospedero que se llama un estado lisognico porque puede convivir o tiene la otra opcin cuando es ms virulento que se produce una especie de lisis que se llama un proceso ltico rompe al hospedador mata al hospedador no queremos una fase ltica para lo que la parte de traduccin sino queremos una fase lisognica en la cual pueda vivir el fago con el hospedador.

Conjugacin
Ah tenemos el mecanismo mas sencillo que es la conjugacin, la conjugacin es el proceso por el cual el material gentico pasa directamente por contacto intercelular hay acoplamiento de dos bacterias siempre es unidireccional, siempre hay una bacteria donadora la F positiva y siempre hay una bacteria receptora, en el gram positivo tiene la ventaja de que los pilis adems del Pili sexual estn los pilis somticos los pilis que sirven para la adherencia entonces de esa manera las dos clulas se pueden juntar ms de una manera ms estable en gram negativos simplemente es mediante el Pili y ms que todo sobre una atraccin no de tipo mediado por adhesinas. La siguiente. . Tenemos nuestra F positiva y nuestra F negativa que es la receptora, lo que se va transferir en este caso no es el cromosoma sino el plsmido y lo primero que hay entonces es el contacto a travs del Pili sexual, este Pili que en un inicio tiene una gran distancia de separacin entre los dos cuerpos cromosmicos se van retrayendo de tal manera que acorta la distancia entre las dos bacterias y una vez que ya estn juntas inmediatamente el plsmido se abre como si fuera a replicarse entonces que pasa a este nivel? el plsmido a nivel de ori se empieza a separar y la otra cadena pasa con su ori en la nueva clula en la receptora e inmediatamente la ADN polimerasa para ambos casos empieza a sintetizar la nueva cadena para que se forme la doble cadena del plsmido entonces comienza la sntesis de la cadena complementaria en la receptora y finalmente al cabo de la conjugacin ambas bacterias van a tener dos plsmidos cada una su plasmido completo circular con su doble cadena. La siguiente. .. El gram negativas los donadores pueden tener hasta 3 pilis sexuales que se van unir a las protenas de las membrana externa de la receptora luego se contrae y unen a las dos clulas. En las gram positivas se produce las adhesinas

Transformacin
Dijimos que este mecanismo es el ms utilizado en el laboratorio, cundo creen que se pueda dar esa transformacin si partimos del concento que la clula receptora que se encuentra en estado fisiolgico de absorber e incorporar se llama competente entonces esta lista para captar ADN extrao y dice que la competencia aparece al final de la fase logartmica. Cmo puede ser que

una bacteria libere un cromosoma al medio ambiente y otra la absorba? En qu casos se da este ejemplo de mecanismos? Qu cosa es altruismo? Ser generoso, las bacterias lo son, entonces cuando una bacteria se encuentra expuesta frente a un medio adverso o de pronto tienen qu se yo una mutacin un defecto y no quiere de pronto que sus generaciones hijas la tengan entonces ella que hace? Simplemente se auto elimina y al autoeliminarse hay la posibilidad que parte de su cromosoma sea absorbido por otra bacteria entonces de esta manera hay transferencia gentica. Y es ah que la competencia aparece al final de la vida logartmica cmo es la curva de crecimiento en una bacteria? Si yo llamo a esto a b c d cul es la fase logartmica? La b, entonces como dice que la clula se hace competente al final de la fase logartmica sea mas o menos a este nivel debe estar hacindose competente no todas pero cuando se hacen competentes es a ese nivel y qu fase es la fase a? fase de latencia es decir una fase de adaptabilidad, se ha colocado a la bacteria en un medio nuevo recin la han sembrado est haciendo unas hora de latencia de pronto hasta que ya empieza a utilizar los nutrientes y crece logartmicamente Qu pasa en c? que cosa pasa en ese nivel y que hay una meseta ah sigue la multiplicacin? si sigue la multiplicacin pero el nmero de muertes es igual al nmero de los que se multiplican, por lo tanto no se ven cambios en la curva se mantiene como una maceta y por ultimo tenemos un decaimiento ya se han agotado los nutrientes se multiplican pero ya en menos frecuencia esta predominando la muerte bacteriana entonces a este nivel donde terminan la fase logartmicas es donde las bacterias se vuelven a ser clulas competentes.

El segundo mecanismo de trasferencia gentica es la transformacin dijimos que esta transformacin las clulas no todas, entonces dijimos que las clulas se hacen competentes cuando empiezan la fase estacionaria es decir al termino de la fase logartmica y tambin mencionamos que este tipo de intercambio gentico si se puede decir as es muy utilizado en la actualidad para la tecnologa de etiologa molecular la siguiente Entonces el mecanismo de trasferencia del ADN puede ocurrir principalmente en las gram positivas eso no quita que las gram negativas tambin reciban material gentico por este mecanismo tenemos en la parte externa el cuerpo bacteriano, el ADN transformante el ADN que se va a recibir no necesitamos otra bacteria que se est donando basta que este el ADN libre en la parte externa de esta bacteria y cuando esta bacteria ya tiene sus receptores tienen protenas que van hacer que este cromosoma se fije a la pared celular de la bacteria si nos damos cuenta no est entrando la doble hebra solo est entrando una hebra suficiente porque en el interior de esta bacteria se va a replicar es decir entra la hebra sola y del alguna manera se va adherir a ciertas secuencias dentro en este caso del cromosoma o plsmido e inmediatamente empieza la adhesin la complementeriaridad de tal manera que se puedo luego juntar con el cromosoma y tenemos una bacteria que tiene informacin gentica adicional que tipo de informacin puede incorporar esta bacteria receptora hemos dicho resistencia a antibiticos de pronto produccin de bacteriosimas. El tercer mecanismo de intercambio gentico es la traduccin en este caso se utiliza un intermediario qu intermediario es? Es un bacterifago, en algunos casos lo pueden

encontrar como fago, la ventaja de algunos bacterifagos es que son especficos de especies hay bacterifagos propios de pseudmonas hay bacterifagos propios de estafilococos pero tambin hay bacterifagos verstiles que pueden llevar la informacin o pueden infectar a diferentes especies bacterianas, entonces esa es ms o menos la estructura que se presenta en un bacterifago es muy similar a la mayora de los virus de las clulas eucarioticas y se conoce que por este mecanismo la transduccin sea esta llevada y trada de material gentico puede ser especialidad es decir genes especficos o puede ser generalizada, genes al azar de manera aleatoria como dice ah. La siguiente Y ac tenemos el fago el bacterifago que esta infectando a una bacteria, no entra en toda su estructura sino basta que entre parte de su informacin gentica cuando esta informacin gentica se va incorporar al cromosoma o plsmidos bacteriano el fago toma la batuta en cuanto a la maquinaria celular enva el mensaje para la sntesis ya sea de protenas de estructura ya sea de su propio material gentico del bacterifago en esta primera infeccin generalmente va haber una lisis un rompimiento de la bacteria infectada sino no habra como liberar esa informacin gentica, no habra como liberar a esos fagos que estn infectando, entonces despus de haber infectado despus de que en mi interior se halla sintetizado protenas estructurales, material gentico se produce la ruptura, la lisis por eso se llama fase ltica, fase de rompimiento celular en la clula que ha estado infectada y los fagos que se liberan despus que se rompe esta bacteria tendrn la informacin en algunos casos tendrn informacin solo del fago, en algunos casos solo lleven informacin bacteriana y en algunos casos los fagos tendrn tanto del mismo del fago como tambin de la bacteria hasta ah es la primera parte; cuando ya ocurre la transferencia gentica es cuando estos fagos que se han liberado de la primera infeccin van infectar una nueva clula bacteriana entonces se repite el ciclo este fago est incorporando el material gentico pero veamos ac ya no es material gentico propio del fago para el ejemplo es material gentico de la primera bacteria infectada que ya fue lisada, entonces en esta oportunidad se va re combinar el cromosoma bacteriano con el cromosoma o parte de la informacin de la anterior bacteria ac no se est rompiendo la segunda clula si se rompiera la segunda clula no tendramos la seguridad de que persevere esa especie esa nueva informacin entonces un requisito de esta segunda infeccin es que se mantenga ese cromosoma unido y esta bacteria se puede replicar con esa informacin combinada a este tipo de procesos de infeccin se conoce como fase lisognica, no se est rompiendo nada simplemente se ha incorporado, esto de ac ya incomparado se llama profago y esta bacteria con su nueva informacin se puede replicar y heredar esa informacin a las sucesivas generaciones. Ac vemos ya el resumen de los tres tipos de intercambio gentico la conjugacin que esta mediada por el Pili sexual, la transformacin donde simplemente es la incorporacin del ADN o el materia gentico a una cepa, no tiene que haber necesariamente contacto entre dos clulas bacterianas y la tercera que es la transduccin donde hay un intermediario que es un bacterifago que va a llevar material gentico de una bacteria a otra, alguna pregunta, no solo hay transferencia de cromosomas a veces simplemente es transferencia de plsmido, entonces no es necesario que sea todo el cromosoma, todo el plsmido y desde el puntos de vista

bacteriano cual sera ms prctico transferir cromosoma o plsmido? plsmido porque es ms pequeo entonces el intercambio es ms rpido y puede pasar ms informacin en menos tiempo. 14:00 Lo que pasa es que el bacterifago en realidad tiene una especie de informacin necesaria sola para replicarse no es como una bacteria como las clulas eucarioticas que necesitamos toda nuestra informacin para poder sobrevivir, el fago como la mayora de los virus tiene a informacin solo exacta para que para replicarse y mandar lo que necesita nada ms, porque el resto podra decirse nutrientes lo va tomar acosta de la bacteria o clula que est infectada entonces ese material gentico que es pequeito con respecto a todo el cromosoma o con respecto a todo el plsmido se incorpora y de ah solo con esa secuencia manda a la clula la clula ya no trabaja parea si misma si no trabaja para el fago para el virus que la est infectado. Este material gentico en algn momento tiene que replicarse tiene que dividirse as como esta sintetizando protenas para la capsula de fago, esta sintetizando protenas de pronto para la envoltura del fago tambin esta sintetizando que se replique ese material cromosmico del fago pero esta replicacin no es tan exacta no solo se replica esa secuencia del fago sino se replica un poco mas parte de la informacin bacteria entonces es en este momento de la replicacin cuando hay un solo material que codifica para el fago sino tambin hay secuencias que estn codificando que se yo puede ser una enzima bacteria de tal manera que en las generaciones sucesivas del fago van a llevar su informacin propia y tambin informacin bacteriana. En el ejemplo se demostr que algunos fagos tenan solo informacin bacteriana que opinan Uds. Respecto a esto porque el ejemplo mostro haba fagos que tenan informacin propia de fago haban fagos que tenan informacin solo de bacteria y haba otras que tenan combinado, qu opinan de aquellos que tengan informacin solo de bacteria? Sern fagos que van infectar fcilmente a los hospedadores? No, de pronto son fagos que no van a tener mucho tiempo de vida porque no van a tener la suficiente herramienta para infectar entonces en estos casos son fagos que se llaman improductivos. Posiblemente ya no vuelvan a infectar nuevamente Toda esta gentica todo este conocimiento en cuanto a las bacterias que son las ms manejables en comparacin con los virus han hecho que se puedan tener algunas aplicaciones y que nos permitan estudiar no solo los genomas microbianos sino tambin de paso utilizarlos para la produccin por ejemplo una de las que hace muchos aos se estudio fue la produccin de insulina a costa de todo lo que es esto ingeniera gentica, entonces dice se emplea las tcnicas y mtodos desarrollados por especialistas en gentica bacteriana con la finalidad de purificar, amplificar modificar y expresar secuencias genticas especificas, entonces cuales son las principales herramientas para poder utilizar la ingeniera gentica : los vectores de clonacin y expresin y ah es que estamos agarrando que cosa? plsmidos que es materia gentico propio de las bacterias, cosmidos es un vector netamente de laboratorio en el cual ha tomado propiedades tanto de los plsmidos como de los fagos, podemos tambin manipular las diferentes secuencias de ADN. Luego tenemos como herramienta ya la parte de bioqumica que no podemos nosotros dejar de lado que son las diversas enzimas que van intervenir en los cohortes que se puedan hacer as como las ligasas del ADN. La siguiente

Entonces tenemos enzimas y las enzimas tambin la obtenemos de la bacteria y son las ms sencillas de obtener esa enzima de restriccin que se est viendo ac en el lado izquierdo se llama ECO-RY porque viene de echericha coli entonces ah vemos como es la aplicacin de todas estos elementos bacterianos con la finalidad de nosotros hacer mejoras en la obtencin de diferentes productos. Entonces ms o menos la aplicacin es as: se est incorporando el gel de resistencia a un antibitico en este caso he puesto ampicilina dentro de un plasmido ah tenemos el sitio de cohorte de enzima de la enzima que proviene de echericha coli ECO-RY y por el otro lado tenemos la regin de inters en este caso tenemos tambin nuestro ADN y la caractersticas en ambos tanto en el ADN de inters como en el plsmido tienen que tener ambos sitios de corte de la enzima de restriccin ac vemos en el plsmido que esta un sitio blanco para el ECO-RY y en el ADN tambin tiene que haber un sitio blanco para el ECO-RY entonces secuencias parecidas en cuanto a cohorte una vez que hemos cortado con la enzima de restriccin rpidamente puede haber una hibridacin, entonces se logra hibridizar nuestra secuencia de inters dentro del plsmido, ac tenemos ya est incorporada la secuencia de inters y nuestro plsmido cul es la seal nuestro marcador de que el plsmido est siendo aceptado? recuerden van hacer la resistencia a la ampicilina.21..45 y bueno eso lo incorporamos en una bacteria cmo lo podemos incorporarlo en una bacteria? Qu mecanismo? Transduccin podra ser si tenemos un bacterifago y lo otro que es ms sencillo? Transformacin simplemente en cierto medio apropiado se incorpora ese plsmido y la bacteria que es un bacteria competente ya para eso el bacterilogo tiene que intervenir aqu la bacteria tiene que estar al finalizar la fase exponencial y al contactos simplemente la bacteria acepta ese material gentico dejamos que se multiplique la clula y como sabemos que la nueva clula a incorporado esa secuencia que nos interesa? Bueno simplemente la sembramos en un medio de cultivo pero con ampicilina porque con ampicilina? Porque se ha incorporado ese plsmido y estamos incorporndole tambin como marcador la resistencia ampicilina, no va ocurrir ningn problema la bacteria va crecer sin mayor problema porque es resistente a la ampicilina y de esa manera nos aseguramos que esta informacin gentica este en todas esas bacteria que van a crecer, purificamos el ADN pero ya en mayor cantidad ya hemos manejado mayor cantidad porque en todas las generaciones bacterianas nuevas tienen esa nueva secuencia que se est incorporando. La siguiente Solo para recordar ah de que manera el ADN se afecta con las diferentes temperaturas? cuando uno tiene el ADN en las temperaturas ambientales en la temperatura corporales el ADN est en su doble cadena pero a medida que uno va aumentando la temperatura va ocurrir lo que se llama la fusin la separacin es decir va haber el rompimiento de los enlaces o puente de hidrogeno que puede haber entre las dos cadenas de tal manera que en algn momento con una temperatura muy alta las cadenas se van a separar qu pasa si volvemos a bajar la temperatura? Se vuelven a unir, esa afinidad que hay en las cadenas hace que se vuelvan nuevamente a unir. La que sigue El ADN polimerasa es una enzima que necesitamos necesariamente para replicar el ADN para aumentar la cantidad de ADN necesitamos un cebador qu es un cebador? Es un marcador?

que dicen, Las polimerasas por si solas no van a trabajar de manera tan optima a menos que haya secuencias pequeas que sean las que dirigen entonces esas secuencias pequeas que tambin tiene que ver con este sistema de replicacin van tomando siempre la batuta y es como decir que estn dirigiendo a la ADN polimerasa entonces es un elemento que tampoco puede faltar en la replicacin y bueno aparte de otras cosas tenemos tambin que es importante cada uno de estos nucletidos. La siguiente Entonces de que manera estamos nosotros imitando esto que ocurre en vivo, lo hacemos in vtreo el ADN molde que generalmente puede ser un ADN bacteriano que es lo que generalmente se trabaja en la actualidad, la enzima la polimerasa que el ser humano ha obtenido una polimerasa que es muy verstil obtenida a partir de una bacteria y qu bacteria? una bacteria termfila. Que es etermofilus acuaticus y por eso esas inciales ta y porque quisiramos nosotros una polimerasa de un termfilo? Que podra tener esta polimerasa de otras polimerasa de otra bacteria? Resistente, resistente a cambios de temperatura. Entonces estas tcnica que se realiza en cadena y que de pronto ya lo han revisado Uds. en la parte de bioqumica pero me parece importante repesarles esta secuencia porque hay muchos elementos microbiolgicos que intervienen no se puede prescindir de las bacteria para haber logrado esa tecnologa consiste en una serie de pasos y si nos alcana tiempo mejor lo vemos en el resumen, puedes avanzarlo por favor Consiste en una serie de cambios de temperaturas entonces cada uno de estos cambios de temperara tiene un objetico en cuanto a la ADN, por ejemplo en una temperatura normal tenemos nuestra doble hebra pero a medida que elevamos la temperatura esta hebra se desnaturalizara inmediatamente, no se puede perder mucho tiempo porque sino rpidamente se vuelven unir esas dos hebras se baja inmediatamente se deben alinear ah los cebadores una vez que se unen los cebadores ya no hay problema puede venir la ADN polimerasa la cual acta a temperaturas ligeramente altas porque viene de un termfilo inmediatamente la polimerasa que va hacer? Va a duplicar cada una de esas clulas. Una vez realizada esas amplificaciones y pueden obtener un milln de copias de lo que Uds. Quieren, un gen por ejemplo pueden observarlo a travs de la cmara de electroforesis De dnde a donde corre el ADN de que polo a que polo? Qu carga tiene el ADN? Negativos entonces siempre se colocan en el polo negativo para que puedan migrar gracias hacia una fuente de poder un voltaje hacia el polo positivo de esas maneras vamos a controlar el peso de nuestro ADN. Ah por ejemplo se ve todo lo que hemos conversado, entonces dentro de todo lo que es cromosoma que es mucho ms pequeo que una bacteria comparada con una clula eucariota uno siempre va dirigido a cierta secuencia blanco, por ejemplo puede ser un gen, eso es lo que tenemos a temperatura ambiente, temperatura corporal 35 a 37 grados, cuando empieza todo este cambio de temperatura, cada cambio de temperatura se conoce como ciclos entonces uno incorpora y hemos visto que se ha tenido que ver que se separada las cebras a determinada temperatura y ah tenemos los cebadores estos cebadores se pueden unir a determinada

temperaturas y son especificas siempre se van unir al extremo 3 casi parecido como ocurre en la replicacin en vivo y dependiendo de la secuencia que se quiere amplificar porque no es un estndar vara entre genes entre secuencias blanco, se van incorporar lo nucletidos que uno los agrega tambin como si fueran ingredientes y tambin se agrega la polimerasa y la polimerasa va hacer su trabajo como si fuera in vivo y al finalizar el primer ciclo tendremos dos hebras pero no es solo la secuencia que queremos sino hay un exceso de nucletidos, nuevamente en el segundo ciclo se vuelve hacer los mismo recuerden siempre se baja la temperatura para que se alineen los cebadores y esta vez ya se est uniendo a un extremo 3que es ,muy corto comparado con la secuencia original. Acta la polimerasa, dependiendo de la fuente de polimerasa porque hay un montn en el mercado se vara la temperatura. Esta secuencia la segunda la que est en el tercer lugar y el sexto ya son ms pequeos. Recin estn apareciendo las secuencias que si nos interesan ac por ejemplo dice 8 secuencias que son ms de las que necesitamos por eso son ms largas con una secuencia que no nos interesan y 8 secuencias que si son las que nos interesan y as sucesivamente va repitiendo pero ahora ya no solo se van a separar solo las de origen sino tenemos ms secuencias que se van a separar con los cambios de temperatura se van extender, ya est ganando en cuanto a cantidad las secuencias que nos interesan que es muy importante imagnense que primen las otras no se va a poder observar muy bien en la electroforesis, ac ya tenemos ms de un milln de secuencias que si nos interesan ver unos 60 que son secuencias que tienen un extra de nucletidos y esto ms o menos se logra en no ms de 2 horas. Por ejemplo siempre la secuencia de inicio para una replicacin de una protena siempre es la metionina par las clulas eucarioticas pero para las bacterianas es formilmetionina.