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M JIMENA LE ROY
Frotis Aspiracin y/o lavado puncin aspiracin con aguja fina impronta biopsia puncin con trocar autopsia.
FROTIS
biopsia
Obtencin de la muestra
Para fijar las muestras se emplean dos procedimiento: FIJACIN POR INMERSIN :
muestra debe realizarse inmediatamente de ser extraida del ser vivo (biopsia) o inmediatamente despus de la muerte (necropsia).
Consolidar una disposicin espacial existente creando enlaces entre molculas vecinas que soporten la manipulacin posterior.
La fijacin debe
Detener los procesos de autlisis. Especialmente la accin de proteasas y nucleasas Conservar la cito-histoarquitectura de la muestra similar a su estado in vivo. Preparar al tejido para los procedimientos posteriores Agente Anti-microbiano
Aplicacin de fro
CONGELACIN
DIRECTA
Buena conservacin de la morfologa Se conservan sustancias solubles en agua Se conservan molculas pequeas Permite post fijacin
CONGELACIN
Trozos pequeos o Paso por isopentano o Nitrgeno lquido o Transporte a cmara fra
No es una fijacin propiamete No hay insolubizacin de protenas Complementar con vapores de formol
CALOR Coagulacin de protenas Disolucin de lpidos Baja conservacin del tejido Conservacin de ncleos Conservacin de microrganismos
Mtodos Qumicos
Convierte citoplasma en un gel insoluble Conserva organelos Penetracin + lenta de medios de inclusin
Mtodos Qumicos
Convierte citoplasma en un gel insoluble Conserva organelos Penetracin + lenta de medios de inclusin
Formaldehdo
Glutaraldehdo Tetrxido de Os
Mtodos Qumicos
Coagulacin de prot. Citoplasmticas Destruccin o distorsin de organelos mejor penetracin de inclusin en parafina
Mtodos Qumicos
Coagulacin de prot. Citoplasmticas Destruccin o distorsin de organelos mejor penetracin de inclusin en parafina Etanol Metanol, Acetona A. Tricloroactico A. Pcrico Cloruro mercurio
INMUNOHISTOQUIMICA
Patrn nuclear
INMUNOHISTOQUIMICA
Que induzca cambios los menores cambios conformacionales en nuestro tejido No enmascare estructuras provoque la menor difusin, Provoque la menor extraccin o desplazamiento de Permita la penetracin tinciones posteriores Buena morfologa Baja toxicidad, Estabilidad en su almacenamiento Sea econmico.
Cualidades de un fijador:
1.- Fijar la clulas antes que aparezcan fenmenos post-mortem (autlisis, desintegracin, etc.) 2.- Poseer alto poder de penetracin para fijacin correcta en las capas profundas de la pieza
Cualidades de un fijador:
1.- Fijar la clulas antes que aparezcan fenmenos post-mortem (autlisis, desintegracin, etc.) 2.- Poseer alto poder de penetracin para fijacin correcta en las capas profundas de la pieza
3.- Conservar los detalles estructurales que presentaban in vivo 4.- Permitir el empleo de procedimientos necesarios para su observacin ulterior
Cualidades de un fijador:
1.-Fijar la clulas antes de que aparezcan los fenmenos post-mortem (autlisis, desintegracin, etc.) 2.- Poseer alto poder de penetracin para fijacin correcta en las capas profundas de la pieza 3.- Conservar los detalles estructurales que presentaban in vivo 4.- Permitir el empleo de procedimientos necesarios para su observacin ulterior
5.- Impedir la desaparicin de los elementos solubles durante o despus de ella. 6.- No provocar la produccin de estructuras artificiales.
Cualidades de un fijador:
1.-Fijar la clulas antes de que aparezcan los fenmenos post-mortem (autlisis, desintegracin, etc.) 2.- Poseer alto poder de penetracin para fijacin correcta en las capas profundas de la pieza 3.- Conservar los detalles estructurales que presentaban in vivo 4.- Permitir el empleo de procedimientos necesarios para su observacin ulterior 5.-. Impedir la desaparicin de los elementos solubles durante o despus de ella. 6.- No provocar la produccin de estructuras artificiales.
3.- Conservar detalles estructurales que presentaban in vivo 4.- Permitir uso de procedimientos necesarios para observacin ulterior
3.- Conservar detalles estructurales que presentaban in vivo 4.- Permitir uso de procedimientos necesarios para observacin ulterior
1.-Fijar la clulas antes de que aparezcan los fenmenos post-mortem (autlisis, desintegracin, etc.)
Histologa en general Formol neutro Formol buffer Formol alcalino Formol Ca etc Estudios histolgicos Sistema nervioso Impregnaciones argnticas Tejido seo Identificacin de fosfolpidos protenas
Fijador de tipo coagulante, poco penetrante. Se emplea en mezclas fijadoras. La ms usada es la mezcla de Bouin. Provee buena morfologa. Su uso se recomienda para estudio de inmunoglobulinas, filamentos intermedios y hormonas.
CIDO PCRICO
Forma picratos: Sales, unindose anin con grupos bsicos de protenas Los picratos son solubles en agua Se recomienda paso posterior en OH 80 El alcohol coagula finalmente picratos de las protenas Hidroliza los cidos nucleicos Fijaciones prolongadas destruyen el tejido
BOUIN
HOLLANDE
ALLEN
Tejidos hemorrgicos
Dubosq Brasil Bouin alcohlico Alcohol 80... 150 cc Formol 60 cc. AC. Actico glacial. 15 cc. AC. Pcrico 1 gr. Tiempo de fijacin de 4 a 24 horas lavado posterior en alcohol de 80 3 horas.
DUBOSQ BRASIL
HISTOLOGIA EN GENERAL
ESPECIAL PARA PUNCIONES BIOPSIAS DE HGADO, RENALES Y TESTCULO EN GENERAL PARA ESTRUCTURAS FINAS
GENDRE -
ROSSMAN
HISTOLOGA DE POLISACRIDOS
Un agenta oxidante transfiere tomos de oxgeno al sustrato. el agente oxidante puede ser descrito como un agente oxigenante o un agente de transferencia de tomos de oxgeno. Algunos ejemplos son :
o tetrxido
todos estos compuestos son xidos, ms concretamente polixidos. En algunos casos, estos xidos pueden utilizarse como aceptores de electrones, como en la reaccin de conversin de permanganato MnO4- a mangato MnO42-
Eliminacin de residuos
o El cido pcrico es explosivo en forma no hidratada. o Cuando las soluciones que contengan cida sdica sean eliminadas por desage lavaremos este dejando correr mucha agua para evitar que esta reaccione con el metal de las caeras y lo haga explosivo. La formalina debe eliminarse en recipientes para ser destruda o Las soluciones de mercurio DEBEN tienen su propio contenedor: Si se tiran por el desage se forman resistentes amalgamas con el metal de las caeras.
R.N.A.
SISTEMA NERVIOSO
Altera morfologa de lpidos
Poco penetrante Fijador coagulante Buena penetracin de inmunoreactivos Puede inducir a cambios conformacionales Endurece los tejidos Morfologa regular
FRAGMENTOS TISULARES BUEN FIJADOR NUCLEAR CARNOY CORPSCULOS DE NISSL GLICGENO R.N.A. Altera citoplasma Produce lisis de glbulos rojos
Alcohol metlico
se lo emplea con frecuencia para fijar frotis desecados sangre, mdula sea, Ganglio bazo, lquidos de puncin,
CLORURO DE MERCURIO
HgCl2
H2O
HO
Hg
Cl + H+ + Cl-
Forma precipitado probablemente cloruro mercurioso Que debe ser removido Solucin de yodo Tiosulfato de Sodio Tiempos excesivos de fijacin provocan corrosion del tejido.
Poco penetrante. Se emplea en mezclas fijadoras: ZENKER; FORMOL SUBLIMADO; B5, etc. Aditivo y coagulante Excelente morfologa B5 recomendado especialmente para la fijacin de ganglios linfticos.
FIJ. A BASE DE METALES PESADOS ZENKER - HELLY- FORMOL SUBLIMADO Conserva morfologa Conserva histologa Tincin nuclear rganos hematopoyticos No se recomienda para histoqumica Necesario paso por alcohol yodado
CONSERVA MORFOLOGA HISTOLOGA FINA CITOLOGA ZENKER Favorece tincin nuclear FAVORECE TINCION FIBRAS COLGENAS Recomendado para rganos hematopoyticos
SUSA (cloruro de mercurio) ESPECIAL PARA GANGLIOS ENDOMETRIO ESTRUCTURAS FIBRILARES AGENTE DESCALCIFICADOR
CITOLOGA SISTEMA NERVIOSO GRASAS NO SATURADAS MICROSCOPA ELECTRNICA Costo muy elevado Reduccin rpida a luz Vapores irritantes
ACIDO SMICO se usa siempre como tetrxido de osmio (OsO4) en solucin acuosa al 1 o 2% disolucin demora de 6 a 12 horas, se conservar en oscuridad. poco capacidad de penetracin por lo que el tejido ser de 2 a 3 mm. ` TIEMPO DE FIJACIN: de 6 a 24 horas lavar con abundantemente en agua.
Se reduce fcilmente con la luz y en contacto con impurezas, por ello el material de vidrio usada debe necesita lavado qumico. evitar sus vapores por lo que debe salvaguardar especialmente los ojos.
ACIDO SMICO
es el fijador ideal para microscopa electrnica. pues se fija en los dobles enlaces de las cadenas laterales de los lpidos de las membranas plasmticas. adems el Os es un metal opaco a los electrones (sirve de tincin).
FIJACIN DE LOS LIPIDOS : es necesario evitar su oxidacin bloqueando los lugares donde existen enlaces
- CH=CH
TETRXIDO DE OSMIO
Para la FIJACIN DE LOS LIPIDOS es necesario evitar su oxidacin (o enranciamiento) bloqueando los lugares donde existen enlaces - CH=CH -
ACIDO SMICO Imprescindible para fijar mielina. Permite coloraciones complementarias con hematoxilina, safranina, fucsina.
Escasa penetracin