UNIVERSDAD DE ANTIOQUIA FACULTAD DE MEDICINA DEPARTAMENTO DE FSIOLOGA Y BIOQUMICA

MANUAL DE LABORATORIO HEMOSTASIA NORMAS PARA EL INGRESO AL LABORATORIO:

LABORATORTO DE HEMATOLOGA il (HEMOSTASTA)

El mecanismo hemosttico est diseado para detener la hemorragia en vasos que presentan dao en su integridad. El proceso es rpido y localizad y no afecta la fluidez de la sangre en circulacin. La hemostasia comprende una interaccin integrada compleja de: 1) vasos sanguneos,2) plaquetas y 3) factores de la coagulacin y 4) la fibrinlisis.

Para las pruebas de coagulacin, el anticoagulante utilizado es el Citrato de sodio al3.25o/o, el cual tiene como principio la frecipitacin del calcio.
TIEMPO DE SANGRA
OBJETIVO

Evaluar

funcin. Esta prueba es utilizada como:

la hemostasia primaria, involucrando el recuento de plaquetas y

su

'

' Prueba de tamizaje de las diferentes trombopatas: Enfermedad willebrand, Trombastenia de Glanzmann y sndrome de Bernard soulier. , Control de los medicamentos antiagregantes.

Prueba prequirrgica para evaluar los trastornos hemorrgicos relacionados con las plaquetas y su valor predictivo positivo es bueno.

de

von

FUNDAMENTO

Al lesionar pequeos vasos la hemorragia provocada es determinada por

la

liberacin sustancias vasoconstrictoras y por la agregacin plaquetaria que tapona la lesin.

MATERIALES . Lanceta desechable . Papelfiltro ' Cronmetro . Algodn . Alcohol ' Portaobjetos METODOLOGA

' Seleccin del sitio de puncin: Se selecciona la parte anterior, aproximadamente 5 cm por debajo del pliegue antecubital. del brazo, este no debe estar paralizado ni con edema. Debe evitarse lesionar grandes vasos, as como las reas callosas y cicatrizadas. Si es necesario, se debe afeitar el lugar de incisin seleccionado. ' Colocar el tensimetro sobre la porcin superior del brazo del paciente. , Desinfectar el lugar de la incisin Subir el tensimetro a 40 mmHg durante 30 segundos antes de hacer la ' incisin ' Colocar la lanceta en la zona elegida, asegurndose de que est en contacto con la piel. ' Si la prueba se realiza con lanceta, se deben hacer tres punciones y los extremos de la lanceta deben quedar marcados en la piel, para garantizai que penetr completamente.
(rasgado), sin tocar el tapn que se est formando. ' En caso de que la sangre que fluya sea muy abundante, puede absorber con mayor frecuencia.

' cada 30 segundos absorba la sangre que fluye, con papel de filtro #1

' Detenga el cronmetro una vez que el sangrado de haya detenido completamente. Si despus de 15 minutos contina la hemorragia se hace un vendaje con gasa estril y seca, el resultado se reporta mayor de 1S minutos. . Retire el tensimetro y limpie el rea de incisin.
vALoR DE REFERENCIA: El valor normal es de 3 a 6 minutos.

lnterpretacin: La prueba se encuentra alterada en:

nmero de plaquetas est por debajo de 100.00/ mm3

Trombocitopenia: Hay una correlacin inversa entre el nmero de plaquetas y la prolongacin del tiempo. El tiempo de sangra se encuentra alterado cuando el

Trombopatas: I Enfermedad de

Bernard Soulier etc.

por lo general, el tiempo es de ms de 1s minutos von wiilebrand, Trombasienia de Granzmann, sndrome

en: de

Cushing, Amiloidosis, desrdenes del tejido conectivo y Ehlers Danlos. se puede alterar.

vasculares primarios: vasculitis, Sindrorne de

uso de medicamentos antiagregantes (aspirina)

PRUEBA DE TORNIQUETE: METoDo DE RUMPEL _ LEEDE OBJETIVO Determinar la fragilidad capilar del paciente.
FUNDAMENTO Determina la fragilidad capilar, al aumentar la presin sangunea. La obstruccin del flujo venoso por el aumento de la presibn puede producir la ruptura de pequeos vasos y la aparicin de petequias

MATERIALES

. .

Tensimetro. Cronmetro.

METODOLOGIA

' Antes de iniciar la prueba se debe observar cuidadosamente el antebra zo, para comprobar si hay petequias, de haberlas, se deber encerrar en un crculo, y determinar si aparecieron nuevas o aumentaron de tamao. ' se coloca el rensimetro en er brazo der paciente y se ileva a gOmmHg mantenindolo as por 5 minutos. ' Transcurrido este tiempo se retira, se esperan otros 5 minutos y se observa la aparicin de petequias en el antebra zo y en la mano. ' El resultado se da por cruces de 1 - 4 dependiendo del nmero de petequias: ) + Mas de 10 petequias en el antebrazo. F ++ Mas de 20 petequias en el antebrazo. ) +++ Mas de 40 petequias en el antebra zo y el dorso de la mano.

F ++++ lncontables petequias.

No se deben contar las que aparecieron en el sitio donde se coloc et Tensimetro, ni en el pliegue del brazo, ya que estas se presentan por
continuidad.
VALOR DE REFERENCIA: Hasta '10 petequias en el antebrazo. FRAGILIDAD CAPILAR AUMENTADA: Se asocia a deficiencia de vitamina C, trombocitopenia, prpura de Schelein Henoc, prpura senil, diabetes, sepsis, hiperesplenismo. TIEMPO DE COAGULACIN SANGRE TOTAL
UTILIDAD Evaluar el sistema intrnseco de coagulacin FUNDAMENTO El contacto de la sangre venosa con una superficie extraa (vidrio) produce la activacin del factor Xll que a su vez activa el factor Xl as sucesivamente hasta la formacin del cogulo de fibrina.

MATERIALES . Jeringa . Tubo de sangra sin anticoaugulante . Bao maria a 37oC . Cronmetro . Sangre . Algodn . Alcohol . Torniquete
PROCEDIMIENTO lnmediatamente despus del sangrado se activa el cronometro, se mantendr en la mano para mantener la temperatura corporal, posterior a ello se gira el tubo a 90 grados suavemente cada 30 segundos y se debe observar dtenidamente hasta que se forme completamente el cogulo.

El valor normal es de 6 a 15 minutos. Un resultado menor indica, una tcnica defectuosa. Un valor mayor de 15 minutos indica un defecto severo en alguno de los factores, exceptuando el factor VII o Xll. Puede indicar tambin presencia de un anticoagulante circulante.

RETRAccTr.l

orl coculo

UTILIDAD Evaluar la funcin plaquetariay la estructura de la fibrina en la induccin de la retraccin del cogulo.

FUNDAMENTO El cogulo formado en un tubo de vidrio se retrae por accin de las plaquetas y la fibrina.

PROCEDIMIENTO La sangre utilizada en el procedimiento anterior la dejamos en el bao mara y observamos el tubo cada 15 minutos sin agitarla. Transcurrida una hora, r observa la separacin del cogulo de las paredes del tubo, con la presencia de suero alrededor del cogulo. La retraccin o separacin debe ser total en 12 horas, el cogulo formado debe persistir por 72 horas. El resultado se reporta. Normal: Si hay retraccin. Negativa: Si no se observa retraccin. La retraccin depende del nmero de plaquetas y su funcin. Es negativo en las trombocitopenias y trombopata.

DESFIBRINACIN DE LA SANGRE
OBJETIVO Promover la coagulacin de la sangre total, dando como resultado la formacin de fibrina FUNDAMENTO La sangre total es un conjunto de clulas y plasma. En el plasma encontramos los
la

formacin de fibrina que ser atrapada en los palillos.

factores de la coagulacin, los cuales al ser activados dan como resultado

MATERIALES

. . . . . .

Jeringa Agujas Alcohol Algodn Cpsula de porcelana. Palillos.

PROCEDIMIENTO . Tomar 2 cm de sangre venosa en una cpsula de porcelana ' Agitar con los palillos juntos impidiendo que se coagule la sangre, se obtendr un cogulo adherido a los palillos el cual debe lavarse y observar cuidadosamente su forma y contextura. Examinar la sangre que queda en el recipiente.

TTEMPO DE PROTROMBTNA (TP)

OBJETIVO Medir el tiempo requerido para la formacin del cogulo de fibrina, despus de agregar tromboplastina tisular y cloruro de calcio a un plasma citratado pobre en plaquetas. Los factores que evala el TP son: . El FVll (que es el que se activa con la tromboplastina tisular) . Los factores comunes (FX, FV, Fll y Fibringeno) ' Es la prueba ideal para el control de la anticoagulacin con anticoagulantes orales, en este caso se debe reportar con el lNR.

convierte la protrombina en trombina y el fibringeno en fibrina.

y calcio, agregados al plasma reaccionan con los otros factores (V, Vll, X y fibrinogeno) para formar un compuesto activo, que

FUNDAMENTO Un exceso del extracto tisular

MATERIALES

. . ' . . . . . .

Alcohol Algodn Agujas Tubos tapa azul (citrato a\3.25%) Tubos de ensayo Pipetas pasteur de 0.2 y 0.1 ml Bao de mara a 37"C Cronmetro Tromboplastina tisular que contiene calcio

PROCEDTMTENTO (SOLO DOCENTES)

anticoagulante). ' Centrifugar 10 minutos a 3.000 r.p.m.para obtenerplasma pobre en plaquetas y separar el plasma. ' En un tubo se colocar 0.2 ml de tromboplastina tisular e incubar a 37 "C durante 60 segundos ' Adicionar 0.1 ml de plasma y poner en marcha el cronmetro.

' Extraer 4.7 ml de sangre en un tubo de tapa azul o hasta que se agote completamente el vacio. Esto permite mantener la relacin 9:1 (Sangre:

' Se inclina el tubo hasta la mitad para poder observar los hilos de fibrina y la formacin del cogulo, cuando se inicia formacin de los hilos, se detiene el cronmetro y se lee el tiempo.
se utiliza para las pruebas de laboratorio es un extracto de pulmn o cerebro ms calcio. La prueba se debe realizar por duplicado, el valor normal es de 10 a 15 segundos aproximadamente, pero cada
laboratorio tendr sus propios valores de refeiencia. INTERPRETACN La tromboplastina tisular que

El tiempo de protrombina mide principalmente la actividad del complejo protrombinico. La va extrnseca recibe ste nombre porque requiere la presencia del factor tisular presente en los tejidos extravasculares. El factor tisular en presencia del calcio activa al factor Vll, pero tambin puede ser estimulada, por clulas endoteliales y los leucocitos.
TEMPo TROMBOPLASTTNA pARcrAL AcflvADA (TTpa)
OBJETIVO Medir el tiempo requerido para la formacin del cogulo de fibrina, despus de agregar un activador de contacto (slica coloidal) a un plasma citratado pobre en plaquetas. Los factores que evala el TTp son: Factores Xll, Xl, lX y Vlll Los factores comunes (FX, FV, Fll y Fibringeno) Es la prueba para la monitorizacin de pacientes bajo terapia anticoagulante con heparina

FUNDAMENTO

Medir el tiempo de coagulacin del plasma en presencia de una tromboplastina parcial activada, la cual sustituye la accin del factor 3 plaquetario, necesario para la formacin del coagulo de fibrina.

, . . . , . . . ' .

MATERIALES Alcohol Algodn Agujas Tubos tapaazul (citrato al3.2S%) Tubos de ensayo Pipetas pasteur de 0.2 y 0.1 ml Bao de mara a 37'C Cronmetro Reactivo para medir tiempo parcial de tromboplastina (cefalina) Calcio 0.025 M

PROCEDIMIENTO

anticoagulante). ' Centrifugar 10 minutos a 3.000 r.p.m.para obtenerplasma pobre en plaquetas y separar el plasma. ' Tomar 0.1 ml de plasma y adicionar 0.1 ml de tromboplastina parcial e incubar por 5 minutos exactos a 37'C ' Agregar 0.1 ml de cloruro de calcio 0.025 M previamente incubado y poneren marcha el cronmetro. ' lnclinar el tubo hasta que aparezcan los hilos de fibrina y se forme el cogulo. Se detiene el cronmetro en el momento que aparezcan los hilos de fibrina y se anota el tiempo. INTERPRETACIN La prueba se debe realizar por duplicado, el valor normal es de 28-32 segundos aproximadamente, pero cada laboratorio tendr sus propios valores de referencia. El TTPa evala la va intrnseca, esta va es ms lenta que la extrnseca, se inicia con la activacin del factor Xll en el momento en que la sangre entra en contacto

' Extraer 4.7 ml de sangre en un tubo de tapa azul o hasta que se agote completamente el vacio. Esto permite mantener la relacin g:1 (Sangre:

con el endotelio lesionado

ciningeno de alto peso molecular, el colgeno y el F3p.

y esta activacin participan la precalicrena,

TTEMPO DE TROMBTNA (TT)

OBJETIVO Medir el tiempo requerido para la formacin del cogulo de fibrina, despus de agregar trombina a un plasma citratado pobre en plaquetas. Eltiempo de trombina mide la calidad y cantidad del fibringeno FUNDAMENTO El fibringeno, se convierte en fibrina, gracias a a la trombina mediante dos pasos, en el primer paso Ia trombina fija el fibringeno para formar monmeros de fibrina, luego estos se agregan para formar polmeros insolubles de fibrina. MATERIALES . Alcohol . Algodn ' Agujas . Tubos tapaazul (citrato al3.ZS%) , Tubos de ensayo . Pipetas pasteur de 0.2 y 0.1 ml . Bao de mara a 37"C , Cronmetro . Trombina . Solucin Salina

/'se se detiene el cronmetio en el momento que aparezcan los hilos de fibrina y se anota el
cogulo'
tiempo. INTERPRETACIN La prueba se debe realizar por duplicado, el valor normal es

anticoagulante). Centrifugar i0 minutos a 3.000 r.p.m. para obtener plasma pobre en plaquetas y separar el plasma. Tomar 0.2 mt de plasma control y adicionar 0.2 ml de salina hasta que el tiempo se encuentre en el intervalotrombina con solucin de referencia (16_22 segundos). ' Tomar 0'2 ml de plasma problema y adiciona r 0.2 mlde trombina ajustada. ' lnclinar y agitar el tubo hasta que aparezcan ros-hilos de tuiin, forme el

. .

' Extraer 4.7 mr de sangre en un tubo de rapa azur o hasta que se agote completamente er vacio. Esto permite mantener ra reracin :r (sangre:

PROCEDTMTENTO (SOLO DOCENTES)

aproximadamente,
referencia.

de 16-22 segundos pero cada laboratorio tendr sus propios valores de

Elvalor del TT pueden ser alterados por:

Afibrinogenemia Hipofibrinogenemia Disfibrinogenemia Anticoagulacin con heparina En presencia de productos de degradacin de fibringeno y/o fibrina Hipergammaglobulinem ias