Apostila PatologiaFlorestal Caldeira1999

UNIVERSIDADE FEDERAL DE MATO GROSSO FACULDADE DE ENGENHARIA FLORESTAL DEPARTAMENTO DE ENGENHARIA FLORESTAL
P A T O L O G I A F L O RE S T A L
ROTEIRO DE AULAS PRTICAS (2a. Edio)
SIDNEY FERNANDO CALDEIRA

Eng. Florestal - CREA 2.919-MT - M. Sc. Fitopatologia
CUIAB - 1999
APRESENTAO
Esta segunda verso publicada com o objetivo de orientar os acadmicos nas atividades prticas da disciplina de Patologia Florestal do curso de Engenharia Florestal. A busca do conhecimento no deve ser limitada e esta publicao apenas introduz um comportamento laboratorial para subsdio nas anlises das doenas em espcies florestais. Outra finalidade estimular e orientar o aluno no processo de consulta e pesquisa, apresentando diversos ttulos publicados que podem complementar seu ensino e aprendizagem. Como bem mencionou Francisco Alves Ferreira, nosso amigo "Xyko", em seu livro sobre Patologia Florestal: "este trabalho foi publicado para no ser rescrito".
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AGRADECIMENTOS
Aos poucos que, de alguma forma, colaboraram. A todos que, de qualquer forma, incentivaram. grande maioria que, pelo menos, no atrapalhou.
DEDICAO
minha mulher e filhos, pela pacincia. A voc, leitor, pela ateno.
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NDICE
AULA
PGINA
1. Introduo atividade laboratorial ................................... 1 2. Preparaes microscpicas ................................................... 6 3. Medies microscpicas ......................................................... 11 4. Isolamento de fitopatgenos ............................................... 16 5. Inoculao de fitopatgenos ................................................ 29 6. Fungos inferiores Mastigomycotina e Zygomycotina .. 38 7. Fungos superiores Ascomycotina ..................................... 46 8. Fungos superiores Ascomycotina ..................................... 57 9. Fungos superiores Basidiomycotina ................................ 58 10. Fungos imperfeitos Deuteromycotina ............................ 65 11. Outros agentes biticos de fitomolstias .......................... 74 12. Prescrio tcnica ................................................................... 81 13. Defensivos agrcolas para a rea florestal ........................ 89 Bibliografia ............................................................................... 93
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LISTA DE FIGURAS
FIGURA
PGINA
1. Maneira correta para depositar a lamnula sobre a lmina .............. 8 2. Disposio das etiquetas e informaes para identificao ............... 8 3. Conidiforo e micrmetro ocular, MO ................................................... 13 4. Clamidsporo e micrmetro ocular (acima); micrmetro ocular e lmina micromtrica (abaixo) .................................................................. 14 5. Seqncia da tcnica de induo da esporulao ................................. 18 6. Seqncia da tcnica de induo do crescimento micelial ................. 18 7. Seqncia da tcnica de induo de diluio ......................................... 20 8. Seqncia da tcnica de armadilha .......................................................... 20 9. Esquema da tcnica de fluxo bacteriano ................................................ 22 10. Esquema da tcnica de diluio ................................................................ 23 11. Esquema de montagem da tcnica do funil de Buckmann ................. 24 12. Seqncia da tcnica de peneiramento mido ...................................... 25 13. Seqncia da tcnica de centrifugao em suspenso de sacarose .. 26 14. Seqncia da tcnica de aplicao direta de miclio em folha e em colo de mudas ............................................................................................... 31 15. Seqncia da atomizao com suspenso de esporos ou miclio em folhas ....................................................................................................... 32 16. Seqncia da tcnica de injeo em tecido lenhoso ............................. 32 17. Seqncia da tcnica de infestao do solo com inculo ................... 34 18. Seqncia da tcnica de imerso de razes em suspenso aquosa de inculo ...................................................................................................... 34 19. Diagrama do sistema de cinco Reinos proposto por Whittaker em 1969, segundo AINSWORTH & BISBY (1983) ...................................... 39 20. Chave simplificada dos fungos inferiores de importncia para a Patologia Florestal ....................................................................................... 42
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FIGURA
PGINA
21. Ciclo de vida tpico de fungos de gnero Pythium, segundo GALLI (1994) ............................................................................................................ 43 22. Ascomas tpicos e estruturas de reproduo sexual e assexual da subdiviso Ascomycotina, segundo AGRIOS (1979) ............................ 47 23. Ciclo do mal das folhas de Hevea sp., causado por Microcyclus ulei, segundo GASPAROTTO & FERREIRA (1989) ................................ 51 24. Ciclo de Calonectria crotalariae (Cylindrocladium crotalariae), agente causal de manchas de folhas em Eucalyptus sp., segundo 53 FERREIRA (1989) ......................................................................................... 25. Ciclo de Apiosphaeria guaranitica, agente causal da crosta marrom do ip, segundo FERREIRA (1989) .......................................... 54 26. Ciclo da mancha aureolada da seringueira, causada por Thanatephorus cucumeris, segundo GASPAROTTO & FERREIRA 60 (1989) ............................................................................................................ 27. Ciclo da ferrugem do ip-amarelo, causada por Prospodium bicolor, segundo FERREIRA (1989) ......................................................... 62 28. Esquema e caractersticas das classes e ordens da subdiviso Deuteromycotina ......................................................................................... 66 29. Ciclo de Oidium sp. em Eucalyptus sp. e diversas essncias florestais, segundo FERREIRA (1989) ..................................................... 69 30. Ciclo de Cercospora sp., agente de manchas foliares em diversas espcies florestais, segundo FERREIRA (1989) ..................................... 70 31. Ciclo de Fusarium sp., agente causal de tombamento de mudas, segundo FERREIRA (1989) ........................................................................
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32. Os seis principais gneros de fitobactrias e sintomas tpicos, Segundo GALLI et al. (1994), adaptado de Kiraly et al. (1970) ....... 75 33. Anatomia tpica de nematide macho e fmea, fitoparasitos, segundo AGRIOS (1971) ............................................................................ 78
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LISTA DE TABELAS
TABELA
PGINA
1. Diluio e meios de cultura indicados para isolar fitopatgenos do solo .................................................................................................................. 19 2. Classificao do reino dos fungos segundo AINSWORTH & BISBY (1983) ............................................................................................................ 39 3. Classificao simplificada de classes, ordens, famlias e alguns exemplos dos fungos inferiores ................................................................ 41 4. Associao de gneros de Ascomycotina com Deuteromycotina ...... 47 5. Classificao simplificada de ordens, famlias e alguns exemplos de fungos da subdiviso Ascomycotina ........................................................ 48 6. Classes da subdiviso Basidiomycotina segundo diferentes autores. 59 7. Resumo do ciclo de vida de um fungo causador de ferrugem .......... 61 8. Principais caractersticas dos gneros de bactrias fitopatognicas. 77 9. Nematides fitoparasitos de algumas espcies florestais e respectivo modo de ao ............................................................................ 77 10. Classificao de pulverizao de acordo com o volume de calda utilizado ......................................................................................................... 82 11. Algumas substncias qumicas utilizadas como fungicidas e classificados quanto sua gerao e grupo qumico ........................... 83 12. Princpio ativo e nome comercial de alguns nematicidas e alguns antibiticos utilizados como bactericidas e fungicidas ....................... 84 13. Denominao, cor da faixa e equipamento obrigatrio de acordo com a classe toxicolgica dos defensivos agrcolas .............................. 84 14. Dose e agrotxicos para controle qumico de doenas do Cacau (Theobromae cacao) .................................................................................. 89 15. Dose e agrotxicos para controle qumico de doenas do Eucalipto (Eucalyptus spp.) ......................................................................................... 89 16. Dose e agrotxicos para controle qumico de doenas do Ip (Tabebuia spp.) ........................................................................................... 90
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vi
TABELA
PGINA
17. Dose e agrotxicos para controle qumico de doenas do Pinheiro (Pinus spp.) ................................................................................................... 90 18. Dose e agrotxicos para controle qumico de doenas de plantas ornamentais .................................................................................................. 90 19. Dose e agrotxicos para controle qumico de doenas da Seringueira (Hevea spp.) ........................................................................... 91 20. Dose e agrotxicos para controle qumico de doenas de outras espcies florestais ........................................................................................ 92
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INTRODUO ATIVIDADE LABORATORIAL
1. OBJETIVOS Conhecer e saber as normas do Laboratrio de Patologia Florestal e as tcnicas de coleta de amostras de material vegetal doente para anlises patolgicas.
2. CONSIDERAES Nas aulas prticas de Patologia Florestal uma srie de normas deve ser seguida para atingir os objetivos propostos e o domnio tcnico dessas atividades. 2.1. Normas de laboratrio obrigatrio o uso de guarda-p em todas as aulas prticas e expressamente proibido fumar nas dependncias do laboratrio. Todo aluno deve ter para seu uso pessoal: esmalte incolor; estilete de ponta grossa e de ponta fina; etiquetas gomadas; lminas de barbear; lpis preto n. 2 e borracha. Somente utilize material e equipamentos que fizerem parte da atividade prtica em execuo. A assepsia fundamental para atingir os objetivos propostos; o aluno deve lavar suas mos com sabo e limpar a bancada com lcool 70% e algodo, antes de iniciar seu trabalho, alm de limpar o seu local de trabalho, aps o trmino da atividade. No deixe de resolver as questes propostas, consultar a literatura adicional e tirar suas dvidas, pois as atividades prticas faro parte das avaliaes gerais e avaliaes prticas e somente sero aceitos relatrios dos alunos que participarem da execuo da atividade prtica. 2.2. Noes de Microscpio O microscpio um equipamento de preciso e sensvel; deve ser utilizado com cuidado e mantido sempre limpo e coberto aps o uso. Antes da utilizao faa um ajuste das lentes oculares de acordo com a sua acuidade visual e distncia interpupilar. Somente utilize para observao em microscpio o material devidamente montado em lmina. Qualquer outro tipo de material deve ser observado em microscpio
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estereoscpio, a lupa, que adequado para material volumoso. Antes da observao abaixe a mesa do microscpio e aps depositar a lmina, sempre com a objetiva de menor aumento, suba a mesa vagarosamente acionando o parafuso macromtrico e observando vista nua. Olhe pela lente ocular e acerte o foco com o parafuso macromtrico e complete o ajuste com o parafuso micromtrico. Faa as observaes em outras objetivas e selecione a que proporcionar a melhor visualizao para desenhar as estruturas observadas. Evite a utilizao de mxima luminosidade, para no prejudicar sua viso e diminuir a vida til da lmpada do aparelho. Somente utilize a objetiva de imerso, a de 100 vezes, para observao de esfregao bacteriano, adicionando uma gota de leo de imerso, leo-de-cedro, sobre o local a ser observado e aps o exame efetue a limpeza da objetiva com algodo embebido em xilol, secando posteriormente com algodo limpo e seco. Ao trmino limpe a mesa do microscpio, desligue o aparelho, retire o plugue da tomada e cubra o equipamento, eliminando as lminas em recipiente adequado, separando a lmina da lamnula. Quando for solicitado entregue a lmina montada, devidamente etiquetada, junto com o respectivo relatrio dirigido, j preenchido. 2.3. Noes de Sintomatologia Diagnose a determinao de uma enfermidade e seu agente etiolgico atravs do exame de sintomas e sinais apresentados pela planta doente, associado s tcnicas de isolamento de planta doente e inoculao do patgeno em planta sadia, repetio dos mesmos sintomas e sinais e o reisolamento do mesmo patgeno da planta inoculada. De modo simplificado, sintoma a exteriorizao da doena, como resultado das alteraes fisiolgicas e morfolgicas no hospedeiro; sinal a presena de estruturas ou produtos da ao do patgeno junto ao tecido afetado. Os sintomas observados em plantas doentes so assim agrupados: (a) necrticos, caracterizados por morte do tecido infectado, observados como: amarelecimento, mancha, murcha, seca, cancro, tombamento, gomose, morte dos ponteiros, podrido e resinose, entre outros; (b) hiperplsticos ou hipertrofias, caracterizados por incremento no nmero ou tamanho das clulas, observados como: galha, tumor, sarna e vassoura-debruxa, entre outros e (c) hipoplsticos ou hipotrofias, quando apresentam reduo no desenvolvimento ou atrofia, como: albinismo, clorose, mosaico, estiolamento, enfezamento e roseta, entre outros. Os microorganismos que podem estar envolvidos nestes sintomas so os fungos, bactrias, nematides e vrus, denominados agentes de doenas patognicas. possvel observar alguns desses sintomas cuja causa so agentes no patognicos, denominados de desordens fisiolgicas, causadas por: adversidade climtica, deficincia nutricional, poluentes e toxidez mineral, entre outros. Alguns desses sintomas podem ser causados por insetos, o que implicar em procedimentos que no so objeto desta disciplina. Quanto localizao os sintomas podem surgir nas folhas, flores, frutos, ramos, galhos, troncos e razes. Quando ocorrem no local da infeco so genericamente denominados de sintomas primrios e quando ocorrem em parte do vegetal diferente do
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local da infeco, so denominados de sintomas secundrios ou reflexos. importante observar que existem sintomas caractersticos em certas doenas: como murcha, seca e podrido mas, de modo geral, ocorrem vrios sintomas ou sinais no processo doena. Esse conjunto de sintomas e sinais, que caracteriza determinada doena, denominado de quadro sintomatolgico. 2.4. Recomendaes para coleta de material doente Para diagnosticar uma enfermidade necessrio que o material doente chegue em condio de anlise no laboratrio e as amostras representem os sintomas e sinais que esto ocorrendo no campo e envio imediato ao laboratrio. A forma adequada de coleta para cada parte do vegetal a seguinte: (a) material foliar: se for possvel chegar ao laboratrio em 48 horas, poder ser enviado fresco em sacos de papel ou caixas de papelo com pequenos furos ou entre folhas de papel de jornal. Quando exceder a 48 horas, o material dever ser prensado e secado sombra. No enviar em sacos plsticos. (b) ramos, galhos, troncos ou suas partes: destacar a parte afetada, de forma representativa, com faca ou ferramenta afiada e, quando necessrio, proceder a lavagem em gua corrente e deixar secar ao sol, acondicionando em sacos de papel ou caixa de papelo e completar o espao vazio com papel amassado, para evitar movimento do material. No enviar em sacos plsticos. (c) razes: proceder a coleta, lavagem, secagem e acondicionamento de forma semelhante ao item anterior. Efetuar coletas adicionais de 8 a 10 subamostras de solo rizosfrico, prximo das razes doentes, em diversos locais e a diferentes profundidades; misturar e retirar uma amostra composta com cerca de 500g e umedecer levemente, se necessrio, acondicionando em saco plstico bem vedado. (d) frutos e rgos suculentos: coletar e acondicionar amostras representativas em vidro contendo lcool a 40% ou soluo 1:1:1 de lcool a 90%, gua e benzeno. Junto com as amostras coletadas dever ser respondido um questionrio complementar que acompanhar as amostras ao laboratrio, com os recipientes devidamente identificados com data e local de coleta, coletor, espcie e variedade coletada. Na coleta importante tentar caracterizar o quadro sintomatolgico existente; nem sempre possvel amostrar totalmente este quadro em certas pocas e situaes. O treinamento visual do tcnico muito importante para uma correta diagnose, principalmente para comparao com a literatura, herbrio e outras fontes de consulta.
3. PROCEDIMENTOS Efetuar uma coleta de material florestal doente, respondendo adequadamente ao questionrio. Efetuar a descrio dos sintomas e sinais observados. Observar que este mesmo material poder ser utilizado futuramente para execuo das tcnicas de isolamento de fitopatgenos.
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4. RESULTADOS Entregar o material coletado, com a devida identificao acompanhado do questionrio informativo.
5. QUESTES COMPLEMENTARES 1. O que assepsia e qual sua importncia na atividade laboratorial para anlise das doenas florestais? 2. Quais as partes que compem um microscpio ptico? 3. Que tipos de ajustes podem ser efetuados em um microscpio ptico para otimizar a visualizao do material a ser observado? 4. O que um esfregao e como preparado? 5. Qual a funo do leo-de-imerso e quando este deve ser utilizado na rotina de laboratrio? 6. Quais so os principais erros cometidos na coleta de material para diagnstico de doenas florestais? 7. Qual a diferena entre sintoma e sinal? 8. O que quadro sintomatolgico? 9. Quais informaes devem ser enviadas nas embalagens de material coletado para exame fitopatolgico?
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RELATRIO DE AULA PRTICA N. 01 Aluno(a):
Data:
Sub-turma:
QUESTIONRIO INFORMATIVO - ANLISE DE FITOMOLSTIA Interessado: Endereo: Cidade/UF: Espcie: Variedade: Estgio: [ ]fruto; poca observada: [ Parte(s) afetada(s): vegetao adjacente: Telefone: idade: espaamento: [ ]semente; [ ]estaca; [ ]muda; rea plantada: rea afetada: [ ]rvore jovem; [ ]rvore adulta
] = Se o fato ocorreu, marque com um x e procure detalhar da melhor forma.
Sintomas observados:
[ ]em planta isolada; [ ]ocorrncia anterior:
[ ]foco(s) isolado(s);
[ ]em reboleira(s);
[ ]generalizado
[ ]em outras espcies? Quais: [ ]Temperatura alta [ ]inundao - dias tipo de solo: ons txicos no solo: poluentes atmosfricos: [ ]Calagem [ ]poda(s) [ ]outras, especificar: defensivos agrcolas (produto e dosagem): [ ]fertilizantes ou adubos [ ]desrama(s) [ ]irrigao [ ]desbaste(s) [ ]frente fria [ ]excesso de sombra [ ]falta de chuva [ ]insolao forte profundidade: pH do solo:
[ ]capina/roada, equipamento:
[ ]Remessa anterior ao laboratrio: observaes: data da coleta: / / coletor:
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PREPARAES MICROSCPICAS
1. OBJETIVOS Recordar as tcnicas rotineiras de preparaes microscpicas para as anlises laboratoriais e saber as funes dos lquidos de montagem.
2. CONSIDERAES O diagnstico de uma enfermidade, na maioria das vezes, no pode ser feito pela simples observao dos sintomas; podem ser necessrios exames microscpicos de cortes histolgicos, de estruturas reprodutivas do patgeno ou raspagem da superfcie de leses, alm da execuo dos postulados de Koch. Somente possvel estabelecer a causa de uma fitomolstia a um microorganismo atravs dos postulados descritos por Robert Koch em 1881, que so: (a) associao constante do patgeno e hospedeiro: presena do microorganismo em todas as plantas da mesma espcie, observadas com os sintomas; (b) isolamento do patgeno das leses observadas no hospedeiro doente; (c) inoculao do patgeno isolado em planta sadia, da mesma espcie e reproduo dos mesmos sintomas observados inicialmente no hospedeiro doente, e (d) reisolamento do patgeno do hospedeiro sadio inoculado. 2.1. Lquidos de montagem Alm das tcnicas de isolamento e inoculao, para execuo do postulados de Koch necessria a identificao do microorganismo, o que efetuado mediante estudo de suas estruturas em preparaes microscpicas. Os lquidos de montagem utilizados nas preparaes microscpicas tm as funes de colorao, que objetiva um melhor contraste das estruturas com o meio circundante; de fixao, cuja finalidade conservar o material evitando a deteriorao das estruturas e, finalmente, da manuteno da umidade, para que o material no seque e mantenha a forma original das estruturas. Dentre os lquidos de montagem mais utilizados para observaes rpidas, podem ser citados: a gua destilada e a glicerina a 20%; para preparaes permanentes os mais comuns so: lactofenol, azul de Amann e fuccina cida, cujas formulaes so apresentadas a seguir.
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O lactofenol preparado pela mistura de 10 ml de cido lctico com 10 ml de glicerina PA e mais 10 g de fenol cristalizado em 10 ml de gua destilada. J a fuccina cida ou lactofuccina preparada pela mistura de 0,1 g de fuccina cida em 100 ml de cido lctico PA. Para preparar o azul de Amann basta adicionar o corante azul de algodo, "cotton blue", na proporo de 0,05 a 0,1%, a partir de uma soluo estoque a 0,5% em gua destilada, a um determinado volume de lactofenol, preparado segundo as indicaes j apresentadas. 2.2. Preparaes microscpicas As tcnicas mais comuns para preparaes microscpicas, so: (a) fragmentao ou esmigalhamento de estruturas: indicada para corpos frutferos como apotcio, peritcio, picndios, entre outros, atravs da presso do material acondicionado entre a lmina e a lamnula; (b) exame de culturas superficiais: aps o acondicionamento do material em lmina e lamnula, retirado de meio de cultura com auxlio de estilete; (c) raspagem da superfcie de leses: indicado para montagem de condios, conidiforos, picndios, entre outros, desde que se apresentem superficialmente no tecido do hospedeiro; (d) corte histolgico: efetuado com micrtomo ou mo livre, indicado para observao de estruturas subepidermais no tecido do hospedeiro, como acrvulos, picndios, estromas e outros; (e) fita adesiva: utilizada para observaes de esporos ou frutificaes superficiais existentes no tecido do hospedeiro. Em alguns casos possvel a observao direta do material afetado e identificao do microorganismo, quando este apresenta-se sobre o tecido afetado com as estruturas de frutificao. Isto comum nas anlises fitossanitrias de sementes e algumas doenas de folhas e troncos, cuja frutificao pode ser estimulada pelo acondicionamento do material em cmara mida. importante observar que a montagem de boas lminas depende de treinamento e da tentativa repetitiva e cuidadosa, j que as estruturas so bastante pequenas e sensveis. Normalmente para obter-se uma boa lmina devemos efetuar, pelo menos, trs montagens e selecionar a melhor estrutura.
3. PRODECIMENTOS Observar os rgos com leses ou as placas com fungos que forem apresentados em aula sob o microscpio estereoscpio at a completa visualizao das estruturas do patgeno. Retirar com auxlio de um estilete flambado a estrutura do microorganismo e acondicionar em uma gotcula de lquido de montagem sobre uma lmina e cobrir cuidadosamente com a lamnula, conforme o esquema apresentado na figura 1.
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FIGURA 1 - Maneira correta para depositar a lamnula sobre a lmina.
FIGURA 2 - Disposio das etiquetas e informaes para identificao.
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Se a estrutura for volumosa e interessar a observao de seu interior, efetuar o esmigalhamento com o cabo do estilete, atravs de presso ou batidas suaves sobre a lamnula. Aps a observao da estrutura proceder a lutagem com o esmalte incolor e somente aps a secagem do esmalte desenhar a estrutura e colar a etiqueta anotando as informaes especificadas na figura 2. Para as preparaes em que o material estiver em placa de Petri, com meio de cultura, o procedimento ser idntico, mas ao colocar o material no lquido de montagem utilize dois estiletes para separar e posicionar o material na lmina. Cuidar para no exagerar na quantidade de lquido de montagem e quando isto ocorrer, antes da lutagem, remover o excesso com leno de papel ou papel borro. Nunca utilizar o leo de imerso neste tipo de trabalho.
4. RESULTADOS O aluno dever executar a montagem de lminas com os materiais entregues em sala de aula, efetuar a lutagem, etiquetar, desenhar e identificar as estruturas observadas em relatrio prprio que ser entregue juntamente com as lminas montadas.
5. QUESTES COMPLEMENTARES 1. Qual a finalidade dos lquidos de montagem? 2. Qual o objetivo de se efetuar as preparaes microscpicas nas anlises laboratoriais? 3. Qual a funo do esmalte nas preparaes microscpicas e que outros produtos so utilizados para tal finalidade? 4. Quais os erros mais comuns cometidos na montagem de lminas? 5. Citar dois lquidos de montagem e respectiva formulao, diferentes dos que foram apresentados neste roteiro. 6. Porque devemos dar a localizao das estruturas montadas em lminas? 7. Quais so as tcnicas mais utilizadas nas preparaes microscpicas?
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RELATRIO DE AULA PRTICA N. 02 Aluno(a): Material 1: Subdiviso: Classe: Ordem: Famlia: Gnero: Espcie:
Data:
Sub-turma:
Estruturas observadas: Lmina n.: Material 2: Subdiviso: Classe: Ordem: Famlia: Gnero: Espcie: Abs. X ord.: Ampliao:
Estruturas observadas: Lmina n.: Abs. X ord.: Ampliao:
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MEDIES MICROSCPICAS
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1. OBJETIVOS Aprender a calcular os coeficientes micromtricos e medir algumas estruturas de microorganismos em microscpio binocular.
2. CONSIDERAES Dentre as vrias caractersticas utilizadas para a classificao de microorganismos, a dimenso de suas estruturas vegetativas e reprodutivas parmetro de fundamental importncia na identificao de gneros e espcies. Para medio dessas estruturas necessrio utilizar determinado aparato junto ao microscpio e a operao divide-se em duas fases: primeiro determinar os coeficientes micromtricos, CM, e depois medir as estruturas. Na primeira fase utilizada a lmina micromtrica, LM, junto com o micrmetro ocular, MO, e na segunda fase utilizado o mesmo MO e a lmina montada com o material a ser mensurado. A LM caracteriza-se por ser reticulada de 10 em 10, ou com uma medida conhecida, num total de 100 retculos. J o MO reticulado de forma eqidistante, sem uma medida definida, podendo ter um total de 50 ou de 100 retculos. O MO utilizado como um referencial para registrar os CM resultantes dos efeitos da ampliao sofrida pela medida real da LM que, nas diferentes objetivas, geram diferentes CMs. importante salientar que cada lente objetiva ter um CM e seu valor ser inversamente proporcional ampliao oferecida pelas lentes objetivas. Como alguns microscpios apresentam diferentes lentes oculares, 10X, 15X e at 20X, e estas lentes influenciam na ampliao final obtida, ao se trocar de lente ocular ou lente objetiva, ocorrer alterao no valor do CM. O clculo do CM dado pela equao: CM = 10 x (LM) / MO
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onde: LM = nmero de retculos considerados da LM MO = nmero de retculos do MO que coincidiu com o nmero de retculos da LM O valor do CM dado em micros, no importando qual o nmero de retculos considerados; ele sempre ter o mesmo valor para um determinado conjunto de lentes objetiva e ocular. Finalmente, considerando que o valor dos CMs sempre inversamente proporcional ampliao oferecida pelo conjunto ptico do microscpio, possvel estimar com uma regra de trs simples o valor de todos os CMs, a partir de um nico calculado. Nesta estimativa podero ocorrer pequenas diferenas em funo das lentes ou da passagem da luz pelo sistema ptico do microscpio mas, de modo geral, aparelhos de mesma marca e mesmo modelo apresentam CMs cujos valores so bastante prximos para os respectivos conjuntos de lentes ocular e objetiva.
3. PROCEDIMENTOS Inicialmente o aluno dever regular o microscpio sua viso; acondicionar a LM na mesa do microscpio, prendendo-a pela platina e o MO dever ser instalado junto lente ocular direita do microscpio. Observando com a objetiva de menor aumento efetuar a superposio dos retculos iniciais da LM e do MO e localizar a superposio de qualquer outro retculo da LM com outro do MO, efetuando a contagem do nmero de retculos contido entre estes dois, tanto na LM como no MO. Os valores encontrados devero ser substitudos na equao apresentada anteriormente para determinao do CM, especificando sempre para qual conjunto de lentes objetiva e ocular foi efetuada esta determinao. A operao dever ser repetida para outros conjuntos de lentes objetiva e ocular, Uma opo para este passo pode ser a estimativa dos CMs dos outros conjuntos de lentes, com base nas ampliaes oferecidas pelo microscpio. Em seguida a LM dever ser retirada da mesa do microscpio e em seu lugar depositada a lmina montada com a estrutura a ser medida, selecionando a lente objetiva que oferecer a melhor visualizao da estrutura. O passo final efetuar a contagem do nmero de retculos do MO que ocupam a estrutura a ser medida, sendo este valor denominado de leitura, L, e para determinao do tamanho da estrutura utilizar a seguinte equao : T (obj.) = (CM) x (L)
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onde: T (obj.) = dimenso da estrutura, em micros CM = valor do coeficiente micromtrico, em micros L = leitura correspondente ao nmero de retculos ocupados pela estrutura medida
4. RESULTADOS Apresentar o relatrio com os clculos ou estimativas de todos os CMs para o microscpio que for utilizado, bem como o desenho das estruturas observadas, em relatrio prprio, e as dimenses encontradas.
5. QUESTES COMPLEMENTARES 1. Se um microscpio apresenta quatro objetivas: 4, 6, 60 e 100 e um conjunto de trs oculares: 5X, 10X e 20X, quantos CMs dever ter a mais que outro que apresenta somente trs objetivas: 6, 10 e 60 e duas oculares: 10X e 20X? 2. Um microscpio apresenta o CM = 10, objetiva 10 com a ocular 10X. Qual ser o tamanho do conidiforo, filide e condio, esquematizados na figura 3, abaixo, se sua observao visual foi efetuada na objetiva 60 com a ocular 15X?
FIGURA 3 - Conidiforo e micrmetro ocular, MO.

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MEDIES MICROSCPICAS
3. Um microscpio apresenta os seguintes CMs: 16,1 para a lente objetiva 10 com a lente ocular 10X e 7,98 para a lente objetiva 10 com a lente ocular 20X. Qual o tamanho provvel de um objeto, se as Ls efetuadas foram, respectivamente: 20,2 e 39,5? 4. Sabe-se que um objeto mede 100 micros. Quais devem ter sido as Ls efetuadas se o microscpio apresenta os seguintes CMs : 29,5, objetiva 4 com a ocular 15X, e 2,2, objetiva 60 com a ocular 15X ? Se substituirmos a ocular 15X pela ocular 10X, quais seriam os valores dos CMs e as respectivas leituras? 5. Um microscpio apresenta as objetivas 4, 10, 60 e 100 e as oculares 10X, 15X e 20X. Ao acondicionarmos a LM e o MO o observador constatou o campo visual esquematizado na figura 4a; utilizando a objetiva 4 com a ocular 15X. Posteriormente utilizando a objetiva 100 com a ocular 10X observou uma hifa com um clamidsporo, esquematizados na figura 4b. Com estas informaes pergunta-se : a) quais so os CMs possveis de serem calculados e/ou estimados para este microscpio ? b) qual ser o dimetro do clamidsporo e a espessura da parede da hifa?
FIGURA 4 Clamidsporo e micrmetro ocular (acima); micrmetro ocular e lmina micromtrica (abaixo).
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MEDIES MICROSCPICAS
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1. CLCULO DOS COEFICIENTES MICROMTRICOS (CMs) QUADRO DE LEITURAS Lentes Objetivas N. de retculos LM MO Lentes Objetivas 10 X QUADRO DOS CMs Lentes Oculares 15 X 20 X
OCULAR UTILIZADA: 2. DESENHO Material : Estruturas observadas: Lmina n.: Abs. X ord.: Ampliao:
3. CLCULO DA DIMENSO DAS ESTRUTURAS QUADRO DE RESULTADOS Estrutura 1. 2. CM Leitura Tamanho
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ISOLAMENTO DE FITOPATGENOS
1. OBJETIVOS Conhecer e saber as principais tcnicas de isolamento de fungos e bactrias fitopatognicas e as tcnicas de extrao de nematides fitfagos, dos diferentes rgos e tecidos afetados do hospedeiro e tambm do solo.
2. CONSIDERAES A presena do patgenos nos tecidos do hospedeiro ocasiona uma srie de leses que, em alguns casos, so to peculiares a ponto de possibilitar a diagnose da doena. Em outros casos h necessidade de se isolar o microorganismo, principalmente para testar se existe patogenicidade, atravs dos postulados de Koch, para determinar variedades resistentes, ensaio com defensivos e outros testes. Isolar um fitopatgeno consiste em transferi-lo do tecido vegetal atacado para crescer isoladamente em meio de cultura. Observe-se que os parasitas obrigatrios agentes de doenas conhecidas como ferrugens, por exemplo: Puccinia sp., Uromyces sp. e outros; como carves, por exemplo: Ustilago sp. e outros; como mldios, por exemplo: Plasmopora sp., Peronospora sp. e outros e como mldios pulverulentos ou oidioses, por exemplo: Erysiphe sp., Oidium sp. e outros, no crescem em meio de cultura artificial. O isolamento afetado pelos seguintes fatores: condio do material vegetal doente, tipo de desinfetante superficial, meio de cultura utilizado, temperatura de incubao e pela tcnica de isolamento utilizada. 2.1. Isolamento de fungos fitopatognicos 2.1.1. Induo da esporulao A tcnica de induo da esporulao indicada para isolamento de fungos que causam manchas foliares, como Cercospora sp., Colletotrichum sp., Helminthosporium sp., Phoma sp., Septoria sp., entre outros. Contudo comum o aparecimento de Alternaria sp., Aspergillus sp., Cladosporium sp., Penicillium sp. e Trichoderma sp. que, na maioria das vezes, so apenas contaminantes saprofticos, mas que costumam prejudicar essa tcnica de isolamento.
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Esta tcnica consiste em tomar pedaos quadrados de 1 a 2 cm da folha lesionada na rea de transio do tecido doente para o tecido sadio, cortados com lmina flambada e imerso em lcool a 70% por 1a 2 minutos; em seguida em hipoclorito de sdio a 2% por 30 a 60 segundos e por mais trs passagens sucessivas em gua estril para retirar o excesso do hipoclorito de sdio. Em seguida retirar o excesso de gua entre folhas de papel de filtro esterilizadas e deposio em placas de Petri com meio de cultura gar-gua, sempre com auxlio de pina flambada. As placa de Petri sero incubadas em ambiente ou estufa com observao diria. Aps o aparecimento da esporulao utilizar estilete flambado para repicar o fungo para placa de Petri com meio de cultura BDA e montar a lmina para identificao das estruturas. O material poder tambm ser repicado para tubo de ensaio quando se desejar armazenar o fungo. A figura 5 apresenta um esquema deste procedimento tcnico. Observa-se que a funo do lcool, como solvente orgnico, consiste em eliminar substncias cerosas da folha vegetal que possam impedir o contato do desinfetante superficial, o hipoclorito de sdio, com o tecido foliar, sendo que a menor ou maior durao desta operao depender da espessura e estado do material. 2.1.2. Induo do crescimento micelial Os organismos que atacam tecidos carnosos como galhos, madeira, razes e frutos, aqueles de difcil esporulao e os que causam tombamento de plntulas so geralmente isolados a partir de pedaos internos do tecido afetado para crescer em meio de cultura gar-gua ou meio de BDA acidificado. Esta tcnica presume que nos tecidos internos somente estar presente o fungo patognico com ausncia de saprfitas que usualmente esto sobre a superfcie dos tecidos afetados. indicada para isolar Cryphonectria cubensis, Sclerotium sp. e Armillaria mellea, entre outros. A tcnica consiste em lavagem externa da rea afetada com gua corrente e, se necessrio, com ajuda de escova de cerdas duras, retirar excesso de terra e secagem com papel de filtro. A desinfestao externa pode ser efetuada com lavagem com ou passagem de algodo embebido em lcool a 70% ou hipoclorito de sdio a 2% seguido de flambagem externa. Com auxlio de bisturi retirado um pedao do tecido interno e acondicionado em placa de Petri com o meio de cultura selecionado. A incubao, observaes dirias, repicagem para placa e tubo de ensaio alm da montagem de lmina so semelhantes tcnica anterior e com os mesmos objetivos. A figura 6 apresenta um esquema deste procedimento tcnico. 2.1.3. Diluio Esta tcnica indicada para isolar microorganismos que produzem grande nmero de unidades reprodutivas, principalmente patgenos do solo, com Fusarium sp., bactrias, actinomycetes e fermentos. Esta tcnica pode ser afetada pela forma de coleta e armazenamento do solo, pelas caractersticas do material utilizado e pelo meio de cultura utilizado. A tabela 1 apresenta um resumo das diluies mais adequadas e respectivos meios de cultura seletivos indicados para alguns fitopatgenos.
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FIGURA 5 Seqncia da tcnica de induo da esporulao
FIGURA 6 Seqncia da tcnica de induo do crescimento micelial
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A tcnica consiste em tomar uma amostra de solo representativa, secar naturalmente, moer em almofariz e aps peneirar, retirar 10 g que sero diludas em gua esterilizada, at atingir a diluio desejada. Em seguida alquotas de 1 ml sero depositadas em placas de Petri com o meio de cultura selecionado, conforme apresenta o esquema da figura 7. TABELA 1 - Diluio e meios de cultura indicados para isolar fitopatgenos do solo. MICROORGANISMO Actinomycetes Bactrias Fungos DILUIO 1/10 1/105 a 1/107 1/104
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MEIO DE CULTURA SELETIVO gar-gua, casena-glicerol gar-nutriente, extrato de solo BDA-tergitol, V-8 Martin, DAES
Uma alternativa mais simples e que diminui a quantidade de vidraria, consiste em tomar cerca de 0,005 a 0,15 g de solo devidamente preparado e misturar com 1 ml de gua em placa de Petri esterilizados, adicionando em seguida de 10 a 15 ml do meio de cultura selecionado temperatura de 40 a 45C e com movimentos rotatrios misturar a gua com o solo com o meio de cultura. Em qualquer desses dois procedimento, a incubao, observaes dirias, repicagem para placa e tubo de ensaio e montagem de lmina so semelhantes s tcnicas anteriores e com os mesmos objetivos. necessrio corrigir o pH do meio de cultura para 4,00 a 4,50 se o objetivo for o isolamento de fungos e em torno de 7,00 se for para isolar bactrias. 2.1.4. Em hospedeiros Esta tcnica indicada principalmente para patgenos obrigatrios, sendo tambm utilizada para infeces brandas e organismos de crescimento muito lento. Consiste em crescer o hospedeiro em ambiente controlado e isento de outros microorganismos e posteriormente transferir esporos da planta doente para esta planta sadia que incubada no mesmo local, com observaes dirias e montagem de lmina para identificar as estruturas do fitopatgeno. 2.1.5. Armadilha indicada para fungos do solo que apresentam bom crescimento sobre certas iscas como cenoura, tomate, sementes de alfafa do Nordeste, folhas de abacaxi, ma, entre outros. Consiste na utilizao de um substrato preferencial, isca ou armadilha nutritiva, para atra-los, antes de outros, da microfauna do solo. Observa-se que o tempo de contato entre o solo e o substrato no deve ser curto ou excessivo e o solo deve ser coletado de amostras compostas sempre na rizosfera ou prximo ao colo da planta afetada. De modo geral o enterro de hospedeiros suscetveis sadios em solo infestado tambm considerado uma armadilha. A garantia do sucesso da tcnica est na utilizao de um substrato adequado e na alta populao desse patgeno no solo onde est a planta doente.
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FIGURA 7 Seqncia da tcnica de induo de diluio.
FIGURA 8 Seqncia da tcnica de armadilha.

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A utilizao de cenoura como armadilha d bons resultados com Agrobacterium tumefaciens e Thielaviopsis basicola; a tcnica com celofane tm sido utilizada para Rhizoctonia sp.; a deposio de solo em buracos feitos em frutos de ma ou o enterro de folhas de abacaxi, sem ferimentos, em solo infectado por Phytophthora spp. atra este fitopatgeno; quando as folhas de abacaxi so feridas com estilete flambado e enterradas atraem Pythium spp.. Para executar esta tcnica, cortar com escalpelo flambado discos de cenoura desinfestada superficialmente e depositar em placa de Petri com papel de filtro e gua esterilizados. Sobre o disco colocar cerca de 1g de solo e incubar por 24 a 48 horas; em seguida retirar o solo com jatos de gua esterilizada e incubar novamente os discos de cenoura em cmara mida, com observaes dirias, repicagem e montagem de lmina, igual ao exposto anteriormente. Em alguns casos possvel transferir para placas de Petri com meio de cultura, pedaos da armadilha. A assepsia ser fundamental para obter-se bons resultados. A figura 8 apresenta um esquema deste procedimento. 2.1.6. Direto Esta tcnica indicada especialmente para microorganismos que podem ser encontrados em colnias puras e tambm para alguns de crescimento lento. Neste caso a transferncia da estrutura do microorganismo direta do tecido vegetal afetado para placa de Petri com meio de cultura e tambm para a montagem de lminas, com auxlio de um estilete flambado. 2.2. Isolamento de bactrias fitopatognicas As bactrias fitopatognicas, seres unicelulares, encontram-se aos milhares no tecido enfermo e as tcnicas para seu isolamento procuram diminuir essa quantidade atravs de diluies para tentar obter-se colnias puras e separadas, oriundas de uma nica clula. importante dar oportunidade para que as bactrias fitopatognicas possam formar colnias individualizadas, pois estas crescem mais lentamente que as bactrias saprfitas. De modo geral as bactrias desenvolvem-se bem em meio de reao neutra com pH entre 6,50 e 7,50 enquanto para os fungos o pH ideal est entre 4,50 a 5,50. O meio de cultura mais utilizado para bactrias o gar-nutritivo preparado com 3 g de extrato de carne, 10 g de peptona, 18 g de gar e volume de gua destilada para completar 1000 ml. Se nesta formulao for retirado o gar e adicionado 10 g de dextrose, este meio de cultura conhecido como caldo-nutritivo. Existe uma rotina prtica para diferenciar uma leso de folha ou do sistema vascular causada por bactria. No caso das folhas basta cortar um pequeno pedao de cerca de 3 mm de lado, na rea de transio entre o tecido sadio e o tecido afetado e colocar com gua estril entre lmina e lamnula e observar ao microscpio. Se existirem bactrias as mesmas formaro um fluxo bacteriano de cor cinza claro, saindo das nervuras, facilmente observvel.
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No caso de doena vascular basta cortar pedaos de ramos ou caules, plano na base e em bisel na parte superior, de tamanho varivel e depositar imediatamente em p sobre uma placa de Petri com gua esterilizada, cobrindo o conjunto com cuba de vidro. O surgimento de pequenas bolhas na extremidade superior dos vasos, de colorao cinza claro, ser indicativo de fluxo bacteriano, conforme esquema da figura 9.
FIGURA 9 Esquema da tcnica de fluxo bacteriano
2.2.1. Plaqueamento em gar Esta tcnica semelhante quelas descritas de induo da esporulao e induo do crescimento micelial para isolamento de fungos fitopatognicos, utilizadas de acordo com o tipo de tecido afetado pelas bactrias. 2.2.2. Diluio a mesma tcnica apresentada para isolamento de fungos fitopatognicos, sendo que para bactrias existe outra alternativa prtica na rotina de laboratrio, que consiste em obter uma suspenso bacteriana e posteriormente diluir, por meio de estrias, no meio de cultura gar-nutritivo em placa de Petri. Inicialmente feita a desinfestao superficial do tecido lesionado com hipoclorito de sdio a 2% e retirada do excesso por lavagem com gua estril. Em um placa de Petri esterilizada depositar 3 a 4 gotas de gua estril e transferir para cada gota um pedao do tecido que foi desinfestado. Com basto de vidro ou bisturi
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flambado triturar os tecidos para difuso das bactrias e deixar em repouso por 10 a 20 minutos. Com ala de platina flambada retirar uma gota da suspenso bacteriana e depositar no canto de um placa de Petri contendo gar-nutritivo e sem arranhar o meio de cultura traar estrias deslizando a ala de platina em ziguezague ou perpendicularmente. Outra variao a deposio de 3 a 5 pedaos de tecido lesionado em 5 ml de gua esterilizada em tubo de ensaio e deixar repousar de 10 a 30 minutos, transferir uma gota e fazer as estrias nas condies descritas anteriormente, conforme figura 10.
FIGURA 10 Esquema da tcnica de diluio.
2.2.3. Armadilha Esta tcnica tambm igual quela descrita para isolamento de fungos. 2.3. Extrao de nematides de solo e razes Os nematides, animais naturais do solo, podem ser extrados do solo ou de razes em funo de sua mobilidade. 2.3.1. Funil de Buckmann Esta tcnica indicada basicamente para extrao de nematides migradores, tanto do solo como das razes. O procedimento consiste em colocar uma quantidade
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representativa de solo e raiz da planta atacada sobre um papel de filtro, montado sobre uma tela plstica na parte superior de um funil, contendo um tubo de ensaio com gua destilada na sua parte inferior, conforme ilustra a figura 11.
FIGURA 11 Esquema de montagem da tcnica do funil de Buckmann. O solo deve ser levemente umedecido e aps 24 a 48 horas os nematides devero estar depositados no fundo do tubo de ensaio. O excesso de gua eliminado e o restante com os nematides colocado em vidro de relgio para coleta, tambm chamada de pescaria, dos nematides com estilete e montagem de lmina. 2.3.2. Peneiramento mido indicada tanto para nematides migradores como para nematides sedentrios, desde que no segundo caso as razes sejam previamente trituradas em liquidificador por 2 a 3 minutos com gua destilada para liberao dos nematides. A tcnica consiste em tomar uma amostra de solo e raiz da planta atacada, com cerca de 200 g, que deve ser misturada em aproximadamente 1000 ml de gua destilada e aps agitao deixar decantar por alguns minutos. Em seguida a mistura deve passar por uma peneira com 2 mm de malha, recolhendo o lquido peneirado e descartado o material retido nesta peneira. O lquido peneirado deve ser passado em outra peneira de 0,25 mm, sendo o material retido na peneira coletado em vidro de relgio com auxlio de uma piseta com gua destilada. O lquido peneirado agora descartado. O vidro de relgio levado sob microscpio estereoscpio e os nematides so pescados, conforme figura 12.
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FIGURA 12 Seqncia da tcnica de peneiramento mido.
Quando o material apresentar grande quantidade de matria orgnica esta tcnica tambm pode ser associada tcnica de centrifugao em sacarose que consiste em resuspender o material retido na segunda peneira em um tubo de centrfuga com uma soluo de sacarose, preparada pela diluio de 454 g de sacarose e volume completado com gua para 1000 ml, at 1 cm da borda do tubo. O tubo ento submetido centrifugao a 2.000-3.000 rpm por 3 minutos. A suspenso ento novamente passada pela peneira de 0,25 mm, deixando-se o material orgnico no fundo do tubo centrfugo e efetuada a lavagem do material retido na peneira, com auxlio de uma piseta com gua destilada, para remoo da soluo de sacarose. O material retido ento coletado em vidro de relgio e o procedimento o mesmo da tcnica apresentada anteriormente. Uma seqncia da tcnica est esquematizada na figura 13. 2.3.3. Extrao direta Esta tcnica adequada para extrao de nematides sedentrios. Consiste em lavar as razes em gua corrente, secar com papel de filtro e depositar sob microscpio estereoscpio em um vidro de relgio. Com auxlio de dois estilete finos efetuado ento o dessecamento das galhas ou das leses nas razes at encontrar os nematides que so transferidos para outro vidro de relgio com gua destilada, seguido de montagem de lmina.
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FIGURA 13 Seqncia da tcnica de centrifugao em suspenso de sacarose.
3. PROCEDIMENTO Executar isolamento de fitopatgeno de material doente de sua livre escolha, colhido no campo, ou o apresentado em laboratrio, selecionando a tcnica que julgar adequada para operacionalizar.
4. RESULTADOS Entregar um tubo de ensaio com o fitopatgeno isolado, bem como a montagem de lmina/lamnula, identificao e desenho em relatrio dirigido.
5. QUESTES 1. Qual a importncia do isolamento de fitopatgenos? 2. Como a condio do material doente pode afetar o isolamento? 3. Qual o objetivo de se utilizar lcool a 70% e hipoclorito de sdio a 2% e a gua esterilizada na tcnica de induo da esporulao? 4. Qual a garantia de sucesso quando utilizada a tcnica de induo do crescimento micelial para isolamento de patgenos de tecidos carnosos?
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5. Quais so as vantagens e desvantagens da tcnica de diluio para isolamento de patgenos do solo? 6. Qual a vantagem e a desvantagem da tcnica de armadilha sobre a tcnica de diluio para isolamento de patgenos do solo? 7. Em que se baseia a tcnica de armadilha ou isca? 8. Qual o princpio bsico de todas as tcnicas de isolamento de bactrias? 9. Quais so as principais caractersticas dos nematides fitfagos? 10. Qual o princpio envolvido na tcnica de peneiramento mido e na tcnica de centrifugao em sacarose para extrao de nematides? 11. Qual o princpio da tcnica do funil de Buckmann para extrao de nematides do solo? 12. Quais as vantagens da tcnica de peneiramento mido sobre a tcnica do funil de Buckmann?
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INOCULAO DE FITOPATGENOS
1. OBJETIVOS Conhecer e saber as tcnicas utilizadas para inoculao de fitopatgenos nos tecidos e rgos de hospedeiros florestais.
2. CONSIDERAES Inculo qualquer tipo de propgulo do patgeno que possa causar infeco nos tecidos da planta hospedeira. Os tipos mais comuns de propgulos dos fungos so hifas ou pedaos de hifas, esporos sexuais como osporo, zigsporo, ascsporo e basidisporo, alm de esporos assexuados como condio, esporangisporo, esclerdio e outros. J as bactrias propagam por suas clulas e algumas podem apresentar endsporos, enquanto os vrus so propagados por suas prprias estruturas virais e, finalmente, os nematides atravs dos ovos, larvas e indivduos adultos. Inoculao a transferncia do Inculo de sua fonte at os tecidos suscetveis do hospedeiro, onde dever estabelecer o processo infeccioso pela colonizao das clulas e tecidos, aps a penetrao. O tempo decorrido desde a inoculao at o aparecimento dos sintomas da doena no hospedeiro denominado de perodo de incubao ou perodo latente, enquanto o tempo que demora desde a inoculao at a reproduo do patgeno denominado de perodo de gerao. O potencial de inculo refere-se quantidade de propgulos que compe o inculo ou seja, quanto maior for o nmero de propgulos maior ser o potencial deste inculo. O aumento deste potencial resultar em mais leses e doena sobre o hospedeiro, at determinado limite, aps o que qualquer outro aumento pouco afetar na variao da quantidade de doena. O objetivo bsico da inoculao testar a patogenicidade do microorganismo atravs do estabelecimento dos postulados de Koch, mas tambm pode servir para determinar variedades resistentes, determinar rgos suscetveis ou no do hospedeiro, estudar formas de penetrao, estudar influncia de fatores externos no estabelecimento da infeco, entre outros. Alguns fatores podem afetar o sucesso da inoculao, como: a patogenicidade do microorganismo; a suscetibilidade do hospedeiro; as condies ambientais e o potencial de inculo.
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Dentre estes fatores necessrio destacar que as condies ambientais favorveis no devem ser somente durante o processo de inoculao, mas devem durar ainda algum tempo aps a efetiva penetrao do patgeno no interior dos tecidos. Por esta razo esta tcnica sempre efetuada em ambiente controlado como casa-de-vegetao e cmaras de neblina ou cmaras midas, onde existe a possibilidade de manter alta umidade relativa e temperaturas adequada infeco, que pode demorar de 12 a 72 horas para doenas de folhas ou frutos e at semanas para doenas de galhos ou troncos. Na prtica de inoculao possvel efetuar variaes que facilitem a penetrao do patgeno, normalmente atravs de ferimentos com estilete flambado ou escarificantes superficiais para eliminar a barreira que representam as clulas epidermais. 2.1. Inoculao de fungos Os fungos apresentam distintas formas de penetrao como aqueles que penetram diretamente pelo rompimento da epiderme, os que penetram por ferimentos ou aberturas naturais e aqueles que penetram por rgos especiais como o Fusarium sp. que pode penetrar pelo local de emisso de novas radicelas. O conhecimento prvio do tipo de penetrao facilita a execuo destas tcnicas. 2.1.1. Aplicao direta de miclio A aplicao direta do miclio fngico no campo de infeco, com disco de miclio, indicada principalmente para fungos de difcil esporulao, principalmente aqueles que atacam a parte foliar, podendo ser ainda utilizada para ramos, galhos e tronco, como o caso de Cryphonectria cubensis em Eucalyptus spp.. Consiste em retirar cilindros de meio de cultura com miclio fngico utilizando-se um fura-rolhas flambado e depositar esses cilindros sobre o local de inoculao na planta hospedeira que pode receber ou no ferimentos. Se a inoculao for em folhas estas devero ser cobertas com um saco plstico transparente contendo em seu interior um pedao de algodo embebido em gua esterilizada por 24 a 48 horas, aps o que o saco deve ser retirado. Deve ser evitada exposio direta ao sol para no queimar as folhas inoculadas. Quando a inoculao efetuada em mudas embaladas, pode ser necessria uma armao de arame para sustentar o saco plstico. J a inoculao de tecidos lenhosos pode ser feita por aberturas na casca, com o mesmo fura-rolhas, com ferimento por estilete ou ferramenta cortante flambado ou ento sem qualquer tipo de ferimento, sendo o local igualmente coberto com plstico e um pedao de algodo embebido em gua esterilizada para garantir alta umidade. A figura 14 apresenta um esquema deste procedimento tcnico. 2.1.2. Atomizao com suspenso aquosa de esporos ou miclio A suspenso de esporos ou de miclio triturado indicada para inoculao de folhas, inflorescncias e frutos, tanto com parasitas obrigatrio como facultativos. Para os parasitas obrigatrios a coleta de esporos efetuada pela raspagem com pincel ou
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escalpelo do local doente ou ainda a deposio dos tecidos com esporos diretamente sobre a gua esterilizada em um bquer. A concentrao dos esporos dever ser de 103 at 106 esporos por mililitro, o que feito com auxlio de hematocitmetro ou cmara de Neubauer. A inoculao feita por atomizao com pulverizador De Vilbs.
FIGURA 14 Seqncia da tcnica de aplicao direta de miclio em folha e em colo de mudas.
Os parasitas facultativos devem ser previamente cultivados em placas de Petri com meio de cultura adequado e aps crescimento micelial o contedo da placa de Petri deve ser triturado com gua esterilizada em liquidificador. Quando o fungo apresentar esporulao, um pouco de gua esterilizada deve ser adicionada placa de Petri seguido de agitao para liberao dos esporos e a suspenso coletada em bquer para avaliao e correo da concentrao. A inoculao semelhante ao descrito anteriormente e a figura 15 apresenta um esquema deste procedimento tcnico. 2.1.3. Injeo com suspenso aquosa de esporos ou miclio A injeo com suspenso aquosa de esporos ou miclio no caule de plantas pode ser empregada para patgenos que causam murchas vasculares, como Ceratocystis ulmi e C. fimbriata, com auxlio de uma seringa. Previamente deve ser efetuada uma abertura longitudinal no caule, com 1 a 2 cm de comprimento, levemente inclinada, onde deve ser injetada a suspenso. O preparo da suspenso e a correo da concentrao so semelhantes ao descrito na tcnica anterior, conforme mostra a figura 16.
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FIGURA 15 Seqncia da atomizao com suspenso de esporos ou miclio em folhas.
FIGURA 16 Seqncia da tcnica de injeo em tecido lenhoso.
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2.1.4. Aplicao de esporos a seco A inoculao com aplicao de esporos a seco indicada principalmente para doenas como oidioses e ferrugens, causadas por parasitas obrigatrios, cuja fonte de inculo so as prprias plantas hospedeiras infectadas. A inoculao pode ser efetuada pela simples agitao de folhas doentes sobre as folhas sadias ou ento retirar os esporos da folha infectada com auxlio de um pincel seco que ser passado em seguida sobre a folha sadia a ser infectada. As folhas a serem inoculadas podero ser previamente nebulizadas com gua esterilizada, utilizando-se um pulverizador De Vilbs n. 15 e, em seguida, permanecero em cmara mida pelo perodo que for necessrio, at o aparecimento dos sintomas. 2.1.5. Infestao do solo com inculo Esta tcnica indicada para inoculao de fungos que atuam no sistema radicular ou no colo das plantas, alm das infeces sistmicas cujos patgenos penetram pelo sistema radicular, como Cylindrocladium spp., Botrytis sp., Fusarium spp., Armillaria mellea, entre outros. Consiste em produzir previamente mudas sadias em vasilhames contendo solo expurgado e a seguir infest-lo por irrigao com um volume conhecido de uma suspenso de inculo tambm de concentrao conhecida. Esta tcnica pode ser efetuada com ou sem ferimento do sistema radicular, o que pode ser feito por sucessivos furos perpendiculares no solo, prximo ao colo das plantas, com estilete flambado. Uma variao desta tcnica a infestao do solo com o inculo seguido de semeadura ou transplante do hospedeiro, tambm com ou sem ferimento do sistema radicular. A figura 17 apresenta um esquema deste procedimento tcnico. 2.1.6. Imerso de razes em suspenso aquosa de inculo Esta tcnica tambm indicada para fungos que atacam as razes e consiste na retirada das plantas que estavam crescendo em vasilhame com solo previamente expurgado, imerso das razes por 1 a 5 minutos em um bquer com suspenso de inculo e replantio. Outra opo a imerso de plntulas durante o processo de repicagem. A figura 18 apresenta um esquema deste procedimento tcnico. De modo geral tanto o transplante como a repicagem so processos que causam algum tipo de ferimento no sistema radicular, mas este processo pode ser intensificado por ferimentos, com estilete flambado. 2.2. Inoculao de bactrias As bactrias caracterizam-se por no apresentar penetrao direta, s penetrando por ferimentos ou por aberturas naturais. Este fato implicar na necessidade de ferimentos ou de propiciar condies adequadas para o contato do inculo com as aberturas naturais no local de infeco do hospedeiro.
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FIGURA 17 Seqncia da tcnica de infestao do solo com inculo.
FIGURA 18 Seqncia da tcnica de imerso de razes em suspenso aquosa de inculo.

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As tcnicas utilizadas para inoculao de bactrias so: picada com estilete previamente mergulhado em suspenso bacteriana; injeo de suspenso de inculo; atomizao de suspenso aquosa de inculo, com ou sem ferimento e, finalmente, imerso das razes na suspenso de inculo. Exceto a primeira tcnica, especfica para bactrias, as outras so executadas de modo semelhante quele descrito para os fungos, observando-se que os meios de cultura para bactrias so diferentes, sendo mais fcil obter a suspenso bacteriana pelo cultivo da bactria em meios lquidos, como o caldo nutritivo. Quanto picada com estilete previamente mergulhado em suspenso bacteriana necessrio tambm criar um ambiente favorvel infeco, o que pode ser feito com uma cmara mida, tambm descrito anteriormente. 2.3. Inoculao de nematides Os nematides so inoculados atravs de seus ovos, larvas ou adultos. Aps extrao do solo e raiz; um volume, com concentrao conhecida dessas estruturas, inoculado em solo previamente expurgado, em vasilhames onde esto crescendo as plantas hospedeiras, sem necessidade de qualquer ferimento, considerando que este microorganismo apresenta o estilete com o qual ir atingir as razes do hospedeiro. A execuo desta tcnica semelhante quela descrita para infestao do solo, utilizada tanto para fungos como bactrias.
3. PROCEDIMENTO Executar a inoculao com o material apresentado em sala de aula ou isolado na prtica anterior, selecionando a tcnica mais adequada e respectivo local de infeco.
4. RESULTADOS Entregar um relatrio com observaes dirias anotando somente nos dias em que for observada presena ou variao de sintomas.
5. QUESTES 1. Qual a importncia de executar a inoculao de fitopatgenos? 2. Conceituar inculo, inoculao e potencial de inculo. 3. Descrever uma tcnica de inoculao para fungo fitopatognico. 4. Como possvel avaliar o potencial de inculo de fitopatgenos? 5. Quais so os cuidados que devem ser tomados na preparao do inculo e nas tcnicas de inoculao? 6. Quais fatores podem afetar a tcnica de suspenso aquosa de inculo?
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7. Qual o objetivo de se utilizar cmara mida aps a inoculao? 8. Que tipo de caracterstica fundamental distinguir quando utilizada a mesma tcnica de inoculao para fungos e bactrias fitopatognicos? 9. Quando possvel afirmar que uma tcnica de inoculao foi satisfatoriamente executada? 10. Qual a importncia de se conhecer os perodos de incubao e inoculao de determinada doena e como estes valores podem ser determinados? 11. Que resultado pode evidenciar que a tcnica de inoculao foi mal executada? Justifique sua resposta.
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Data:
Sub-turma:
RELATRIO DE INOCULAO Hospedeiro: Patgeno: Tcnica de inoculao: Data da inoculao: Tipo de inculo: Localizao da(s) planta(s) inoculada(s): Parte vegetal inoculada: Outros procedimentos: N. de plantas inoculadas: Potencial:
Data / /
Sintoma(s) observado(s)
Perodo de incubao: Observaes:
Perodo de gerao:
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FUNGOS INFERIORES - MASTIGOMYCOTINA E ZYGOMYCOTINA
1. OBJETIVOS Conhecer e saber as espcies de fungos inferiores de importncia patolgica para essncias florestais, bem como montar lminas, conhecer e identificar suas estruturas.
2. CONSIDERAES Os fungos constituem um reino de seres vivos, segundo Whittaker (1969), conforme o diagrama apresentado na figura 19. Tipicamente so seres heterotrficos com clula eucaritica e multinucleada; apresentam estrutura vegetativa filamentosa, denominada hifa, com presena ou no de septos e parede com quitina; um conjunto de hifas denominado miclio. A reproduo pode ser sexuada ou assexuada que pode ocorrer em corpos de frutificao denominados esporocarpos. A classificao que ser adotada a de AINSWORTH & BISBY (1983) que agrupa os fungos em duas divises: Myxomycota e Eumycota. A diviso Myxomycota contm sete classes: Acrasiomycetes, Ceratiomyxomycetes, Dictyosteliomycetes, Labyrinthulomycetes, Myxomycetes, Plasmodiophoromycetes e Protosteliomycetes, onde esto agrupados os fungos amebides e plasmdios. A segunda diviso apresenta cinco subdivises, denominadas: Ascomycotina, Basidiomycotina, Deuteromycotina, Mastigomycotina e Zygomycotina, sendo que os fungos inferiores esto agrupados nas subdivises Mastigomycotina e Zygomycotina. A tabela 2 resume esta classificao. Mastigomycotina apresenta trs classes: Chytridiomycetes, Hyphochytriomycetes e Oomycetes, enquanto Zygomycotina contm duas classes: Trichomycetes e Zygomycetes, sendo que para este estudo interessam somente as classes Oomycetes e Zygomycetes. Os fungos inferiores caracterizam-se por apresentar miclio cenoctico sem septo, multinucleado, geralmente intercelular e com haustrios, sem grampo de conexo e sem esclerdios. Os esporos assexuais so endgenos produzidos em esporngios, denominados esporangisporos, e a reproduo sexual pode ocorrer por isogamia ou heterogamia. Isogametas originam o zigsporo, tpico da classe zygomycetes; heterogametas, o masculino, anterdio, e o feminino, oognio, originam o osporo, da classe oomycetes. Tambm possvel observar a presena de esporos mveis, denominados de zosporos, e as estruturas de resistncia so os clamidsporos e especificamente em Zygomycotina podem ser encontrados os azigsporos.
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FIGURA 19 Diagrama do sistema de cinco Reinos proposto por Whittaker em 1969, segundo AINSWORTH & BISBY (1983).
TABELA 2 - Classificao do reino dos fungos segundo AINSWORTH & BISBY (1983). SUBDIVISO CLASSE DIVISO Myxomycota (falsos fungos) No tem 1.1. 1.2. 1.3. 1.4. 1.5. 1.6. 1.7. Protosteliomycetes Ceratiomyxomycetes Dictyosteliomycetes Acrasiomycetes Myxomycetes Plasmodiophoromycetes Labyrinthulomycetes
Eumycota (fungos verdadeiros)
1. Mastigomycotina
2. Zygomycotina 3. Ascomycotina 4. Basidiomycotina
5. Deuteromycotina
1.1. Chytridiomycetes 1.2. Hyphochytriomycetes 1.3. Oomycetes 2.1. Zygomycetes 2.2. Trichomycetes No reconhecidas 4.1. Hymenomycetes 4.2. Gasteromycytes 4.3. Urediniomycetes 4.4. Ustilaginomycetes 5.1. Coelomycetes 5.2. Hyphomycetes
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Apesar da complexidade dos fungos inferiores, so poucas as espcies de interesse para a Patologia Florestal. As principais enfermidades causadas pelos fungos inferiores so o tombamento, tambm denominado "damping-off", queimas, podrides radiculares, podrides de sementes e aquelas conhecidas como mldios. A tabela 3 apresenta uma classificao simplificada das classes, ordens, famlias e alguns exemplos dos fungos inferiores de interesse patolgico, alm de uma chave simplificada apresentada na figura 20. 2.1. Ordem Peronosporales Nesta ordem est a famlia Pythiaceae como a mais importante por apresentar os gneros Pythium e Phytophthora, que se caracterizam como parasitas facultativos, com miclio intercelular com haustrios, presena de esporngios ovides a esfricos, que nascem isoladamente na extremidade do esporangiforo, como resultado da reproduo assexual; a reproduo sexual ocorre pela presena de heterogametas que originam o osporo. As espcies de Pythium caracterizam-se pela produo de vescula no esporngio, para onde passa a maior parte do contedo protoplasmtico onde so formados os zosporos, tpicos por apresentarem flagelos que permitem sua mobilidade em pelcula de gua. Aps sua liberao os zosporos nadam, deslocam-se, por alguns minutos no filme de gua no solo ou na superfcie do hospedeiro, incistam e posteriormente germinam atravs do tubo germinativo, produzem apressrio e penetram diretamente pela cutcula. Se isto ocorrer fora do hospedeiro o esporo no atingir o hospedeiro e poder morrer. A sobrevivncia destes fungos se d no solo em restos culturais ou em matria orgnica em decomposio, na forma de hifas ou osporos. Estes fungos so importantes por causarem tombamento de plntulas na sementeira, em vrias essncias florestais, principalmente quando ocorre condio de alta umidade, associada a alta densidade de sementes ou plntulas; so exemplos: Pythium ultimum em Eucalyptus spp. e Pythium spp. em espcies de Pinus. A figura 21, a seguir, ilustra um ciclo de vida tpico de fungos do gnero Pythium. As espcies do gnero Phytophthora so responsveis por inmeras doenas de grande importncia, como a requeima da seringueira e a podrido parda do cacau causada por P. palmivora; o cancro do painel da seringueira, Phytophthora spp.; tombamento de Eucalyptus spp., P. palmivora e P. cinnamomi e, na Austrlia, o "jarrahdie-back" de E. marginata, causado por P. cinnamomi. 2.2. Ordem Glomales (Endogonales) A famlia Endogonaceae tambm importante, no por apresentar fungos de importncia patolgica, mas sim por apresentar fungos que formam endomicorriza vesicular-arbuscular, MVA, com as razes de plantas superiores e, praticamente, com a maioria das espcies, excetuando-se umas poucas famlias, como Pinaceae e Abietaceae, que formam ectomicorriza. Alguns autores preferem a denominao apenas de MV, pois nem todos os fungos desta associao apresentam arbsculos.
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TABELA 3 - Classificao simplificada de classes, ordens, famlias e alguns exemplos dos fungos inferiores. CLASSE Chytridiomycetes ORDEM (*) 1. Chytridiales (9) 2. Harpochytriales (1) 3. Blastocladiales (4) 4. Monoblepharidales (2) Hyphochytriomycetes Oomycetes 5. Hyphochytriales (3) 6. Peronosporales (4) 6.1. Pythiaceae 6.2. Peronosporaceae 6.3. Albuginaceae 7. Lagenidiales (3) 8. Leptomitales (2) 9. Saprolegniales (5) Zygomycetes 1. Glomales (1) 1.1. Endogonaceae Acaulospora spp., Entrophospora spp., Gigaspora spp., Glomus spp., Endogone spp., Modicella spp., Sclerocystis spp. e Scutellispora spp. Choanephora spp. Mucor spp. e Rhizopus spp. parasitas de insetos e nematides Phytophthora sp. e Pythium sp. Peronospora spp. e Plasmopara spp. (mldio pulverulento) Albugo spp. (ferrugem branca) FAMLIA 1.1. Synchytriaceae EXEMPLO Synchytrium endobioticum
2. Mucorales (9) 3. 4. 5. 6. Trichomycetes Entomophthorales (3) Dimargaritales (1) Kickxellales (1) Zoopagales (4)
2.1. Mucoraceae
parasitas de fungos e nematides
7. Harpellales (2) 8. Asellariales (1) 10. Amoebidiales (1) 11. Eccrinales (3)
(*) O nmero entre parnteses indica a quantidade de famlias apresentada em cada Ordem.
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FIGURA 20 - Chave simplificada dos fungos inferiores de importncia para a Patologia Florestal.
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A MVA uma associao simbitica obrigatria, com benefcios para ambos simbiontes. O fungo beneficiado pelo habitat disponvel e ambos so beneficiados nutricionalmente, o vegetal principalmente pelo aumento da disponibilidade de fsforo, sendo que o vegetal pode ter uma proteo maior contra patgenos do sistema radicular, alm de resistir melhor passagem do fogo e seca, quando comparado com planta da mesma espcie, em condies semelhantes, mas no micorrizada. Estes fungos caracterizam-se por apresentar infeco intracelular, com a presena de vesculas e, em alguns casos, arbsculos, caractersticas estruturais que determinam sua denominao, sendo os arbsculos relacionados com as trocas nutricionais com o citoplasma celular e as vesculas estruturas de armazenamento de energia, principalmente na forma de lpides. A reproduo sexual por isogametas origina o zigsporo e a reproduo assexual ocorre formando clamidsporo ou azigsporo, sendo que o azigsporo um tipo especial de reproduo assexual por gemulao da hifa prxima vescula, com migrao do contedo nutricional para este esporo, sendo comum observar a presena de vesculas vazias remanescentes, aps a produo do azigsporo. Os gneros desta famlia que formam MVA so: Glomus, Acaulospora, Entrophospora, Gigaspora [Endogone], Sclerocystis, e Scutellispora , alm dos gneros: Endogone e Modicella. Entre as espcies arbreas que formam MVA, podem ser citadas so: Araucaria cunninghamii, Cedrela odorata, Delonix regia, Eucalyptus spp., Hevea spp., Jacaranda mimosaefolia, Michelia champaca, Chorisia speciosa, Tectona grandis e Theobroma cacao, entre outras.
FIGURA 21 - Ciclo de vida tpico de fungos de gnero Pythium, segundo GALLI (1994).
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2.3. Ordem Mucorales Os gneros Rhizopus, Mucor e Choanephora pertencem famlia Mucoraceae, com importncia patolgica, sendo que Rhizopus sp., apesar de ser um fungo saprfita, um importante apodrecedor de sementes de essncias florestais armazenadas de maneira inadequada, geralmente em alta umidade e alta temperatura, alm de causar podrido mole em frutos e tubrculos ricos em carbohidratos. Alm disso, Rhizopus sp. um importante contaminante de laboratrio, juntamente com o fungo Monilia sp., da subdiviso Deuteromycotina, e tambm contamina sementes em testes de germinao, juntamente com os fungos Nigrospora sp., Aspergillus sp. e Penicillium sp., tambm da subdiviso Deuteromycotina.
3. PROCEDIMENTO Examinar as culturas e os materiais apresentados, no microscpio estereoscpio e montar lminas para conhecer o esporangiforo, esporngio, esporangisporo, vesculas, zosporos e outras estruturas dos fungos inferiores.
4. RESULTADOS Desenhar e identificar as estruturas observadas, em relatrio prprio, entregando juntamente com as lminas montadas.
5. QUESTES COMPLEMENTARES 1. Quais as principais doenas causadas pelos fungos inferiores em espcies florestais? 2. Porque normalmente as sementes so armazenadas em condies de baixo teor de umidade e baixa temperatura? 3. Como caracterizada morfologicamente a endomicorriza do tipo vesiculararbuscular, MVA, ou simplesmente MV e qual a sua importncia para espcies florestais? 4. Quais as caractersticas reprodutivas dos fungos denominados inferiores? 5. Citar, pelo menos, duas doenas diferentes das relacionadas neste relatrio, em espcies florestais, causadas por fungos inferiores. 6. Porque importante o controle de condies ambientais no processo de produo de mudas com semeadura seguida de repicagem? 7. Quais so as estruturas responsveis pela sobrevivncia dos fungos inferiores durante a estao seca? 8. Quais as caractersticas que diferenciam as ordens e famlias dos fungos inferiores, de importncia patolgica?
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FUNGOS SUPERIORES - ASCOMYCOTINA
1. OBJETIVOS Conhecer e saber as espcies de fungos desta subdiviso de importncia patolgica para essncias florestais, alm de montar lminas, conhecer e identificar suas estruturas.
2. CONSIDERAES Esta subdiviso o maior grupo dos fungos contendo cerca de 28.650 espcies, em 2.770 gneros. Estes fungos apresentam miclio septado, esporos assexuais exgenos na fase conidial e esporos sexuais endgenos em asco. Alm de fungos com miclio desenvolvido tambm existem alguns unicelulares, como as leveduras. As estruturas de resistncia so os clamidsporos e ascsporos. Na fase sexual podem produzir diferentes corpos de frutificao, denominados genericamente de ascomas, onde esto arranjados os ascos, apresentando os seguintes tipos: cleistotecial, peritecial, apotecial e estromaticial. Os gametas envolvidos na reproduo sexual, basicamente por contato gametangial, so o anterdio e ascognio, que do origem aos ascsporos, geralmente em nmero de 8, dentro de cada asco, mas que podem ter de 1 at mais de 1000 ascsporos. A presena ou no de oprculo, operculado e inoperculado, e tipo de tnica, unitunicado ou bitunicado, nos ascos, arranjo dos ascos, tipo de ascoma e presena ou no de camada himenial, himnio, so as caractersticas mais importantes para classificao desses fungos. A figura 22 apresenta os ascomas e outros tipos de estruturas apresentados por fungos desta subdiviso. Nesta subdiviso encontram-se grande nmero de saprfitas, formadores de liquens, fermentadores, produtores de antibiticos, comestveis, simbiontes que formam ectomicorriza, alm de importantes patgenos para essncias florestais. A maioria dos fungos imperfeitos da subdiviso Deuteromycotina apresenta sua fase sexual nesta subdiviso, conforme exemplos apresentados na tabela 4, a seguir. Anteriormente, estes fungos eram agrupados em uma nica classe denominada Ascomycetes e respectivas ordens, famlias e assim por diante; posteriormente, com base no arranjo dos ascos nos ascomas, estes fungos foram agrupados em seis classes: Hemiascomycetes, Plectomycetes, Pyrenomycetes, Discomycetes, Laboulbeniomycetes e Loculoascomycetes.
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FIGURA 22 - Ascomas tpicos e estruturas de reproduo sexual e assexual da subdiviso Ascomycotina, segundo AGRIOS (1979).
Atualmente existem inmeras classificaes, sendo complexa a adoo de um sistema, conforme AINSWORTH & BISBY (1983) que citaram doze diferentes classificaes de 1931 a 1983, sugerindo a adoo de 37 ordens sem agrup-las em classes, conforme a tabela 5 que apresenta uma classificao simplificada dessas, ordens, famlias e alguns exemplos de interesse patolgico.
TABELA 4 - Associao de gneros de Ascomycotina com Deuteromycotina. FASE PERFEITA (SEXUAL) Cryphonectria sp. Ceratocystis sp. Microcyclus sp. Cucurbitaria sp. Elsinoe sp. Glomerella sp. Calonectria sp., Giberella sp., Nectria sp. Mycosphaerella sp. Eurotium sp. e Sartoria sp. Eupenicillium sp. e Talaromyces sp. FASE IMPERFEITA (ASSEXUAL) Phomopsis sp. Graphium sp. Fusicladium sp. Diplodia sp. e Phoma sp. Sphaceloma sp. Colletotrichum sp. Fusarium sp., Cylindrocladium sp. Cercospora sp., Cladosporium Septoria sp. Aspergillus sp. Penicillium sp.
sp.,
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TABELA 5 - Classificao simplificada de ordens, famlias e alguns exemplos de fungos da subdiviso Ascomycotina. ORDEM (*) 1. Coryneliales (1) 2. Diaporthales (5) 3. Dothideales (52) FAMLIA 1.1. Coryneliaceae 2.1. Gnomoniaceae 2.2. Valsaceae 3.1. Aulographaceae 3.2. Botryosphaeriaceae 3.3. Capnodiaceae 3.4. Cucurbitariaceae 3.5. Elsinoeaceae 3.6. Dothideaceae 3.7. Masarinaceae 3.8. Melanommataceae 3.9. Meliolaceae 3.10. Pleosporaceae 3.11. Pyrenophoraceae 4.1. Elaphomycetaceae 5.1. Saccharomycetaceae 6.1. Erysiphaceae 7.1. Trichocomaceae 8.1. Sclerotiniaceae 9.1. Hypocreaceae 11.1. Pezizaceae Corynelia sp. Endothia sp. (Cytospora sp.) Cryphonectria sp. e Diaporthe sp. (Phomopsis sp.) e Valsa sp. Aulographina sp. Botryosphaeria sp. (Botryodiplodia sp., Dothiorella sp. e Lasiodiplodia sp.) Capnodium sp.(Polychaeton sp.) - Fumagina Cucurbitaria sp. (Diplodia sp. e Phoma sp.) Elsinoe sp. (Sphaceloma sp.) Microcyclus sp. e Mycosphaerella sp. (Cercospora sp.. e Septoria sp.) Massarina sp. (Coniothyrium sp.) Melanomma sp. (Aposphaeria sp.) Meliola sp. Pleospora sp. (Alternaria sp. e Phoma sp.) Cochliobolus sp. e Pyrenophora sp. (Drechslera sp. e Helminthosporium sp.) Elaphomyces sp. ectomicorriza Saccharomyces sp. levedo Erysiphe sp. (Oidium sp. mldio pulverulento) e Uncinula sp. Eupenicillium sp., Eurotium sp. e Talaromyces sp. (Aspergillus sp.) Sclerotinia sp. (Sclerotium sp.) Giberella sp. (Cylindrocladium sp.) e Nectria sp. (Fusarium sp.) Ceratocystis sp. (Cephalosporium sp. e Graphium sp.) saprfitas em madeira e ectomicorriza Apiosphaeria sp., Catacauma sp. Gloeosporium sp.) e Phyllachora sp. Davisomycella sp. e Laphodermium sp. e Glomerella sp. (Colletotrichum sp. e EXEMPLO
4. Elaphomycetales (1) 5. Endomycetales (4) 6. Erysiphales (1) 7. Eurotiales (3) 8. Helotiales (11) 9. Hypocreales (2) 11. Pezizales (13)
10. Ophiostomatales (1) 10.1. Ophiostomataceae 12. Polystigmatalaes (1) 12.1. Phyllachoraceae 13. Rhytismatales (4) 13.1. Hypodermataceae
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TABELA 5 - Classificao simplificada de ordens, famlias e alguns exemplos de fungos da subdiviso Ascomycotina (continuao). 14. Sordariales 15. Sphaeriales (4) 16. Taphrinales (2) 17. Arthoniales 18. 19. 20. 21. 22. 23. 24. 25. 26. 27. 28. 29. 30. 31. Ascosphaerales Caliciales Clavicepitales Cyttariales Ciatrypales Graphidales Gyalectales Gymnoascales Laboulbeniales Lecanidiales Lecanorales Microascales Opegraphales Ostropales 14.1. Chaetomiaceae 14.2. Sordariaceae 15.1. Xylariaceae 16.1. Taphrinaceae Chaetomium sp. Sordaria sp. Rosellinia sp. e Xylaria sp. Taphrina sp.
decompositores de madeira
saprfitas de madeira e caule de herbceas
32. Peltigerales 33. Pertusariales 34. Pyrenulales 35. Spathulosporales 36. Teloschistales 37. Verrucariales
saprfitas em madeira
(*) O nmero entre parnteses indica a quantidade de famlias apresentada em cada Ordem.
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Aqui sero apresentadas algumas caractersticas e somente exemplos das ordens com fungos de importncia patognica e aqueles que podem formar ectomicorriza: 2.1. Ordem Coryneliales Apresenta apenas uma famlia Coryneliaceae, ex.: Corynelia sp., parasita de folhas de rvores da famlia Podocarpaceae e conferas. No constatado no Brasil. 2.2. Ordem Diaporthales (Valsales) Os fungos apresentam ascoma peritecial com rostro, imerso em estroma e asco unitunicado. Contm cinco famlias, destacando-se duas: Gnomoniaceae (Obryzaceae), ex.: Endothia sp., agente de cancros em espcies arbreas e a famlia Valsaceae (Diaporthaceae), ex.: Cryphonectria cubensis [Diaporthe cubensis], agente do cancro do Eucalyptus sp. e Valsa sp., agente de cancro em diversas espcies arbreas. 2.3. Ordem Dothideales (Asterianales, Capnodiales, Chaetothyriales, Dothiorales, Hysteriales, Melanommatales, Meliolales, Myriangiales, Perisporiales, Pleosporales e Pseudosphaeriales)
Nesta ordem so classificados fungos que caracterizam-se por apresentar asco bitunicado em lculos dentro de tecido estromtico. a ordem que apresenta maior nmero de famlias, cinqenta e duas, destacando-se diversas delas com fungos agente de doenas florestais: Na famlia Aulographaceae, ex.: agente de mancha de folha de Eucalyptus sp., Aulographina eucalipti, cuja fase anamrfica Thyrinula eucalyptina, enquanto na famlia Botryosphaeriaceae, ex.: Botryosphaeria sp. presente em cancros arbreos com estrias que pode ser de causa fisiolgica. que agrupa as formas perfeitas da fase anamrfica Botryodiplodia sp., Lasiodiplodia sp., Dothiorella sp. e Fusicoccum sp.. Na famlia Capnodiaceae, ex.: Capnodium sp. responsvel pela fumagina dos citros e diversas espcies de plantas; na famlia Cucurbitariaceae, ex.: Cucurbitaria sp., que na fase imperfeita apresenta-se como Diplodia sp. e Phoma sp. enquanto na famlia Elsinoeaceae, ex.: Elsinoe heveae (Sphaceloma heveae) agente da antracnose maculada da seringueira e Elsinoe sp. agente da verrugose dos citros. Em Dothideaceae (Mycosphaerellaceae), ex.: Microcyclus ulei [Dothidella ulei] o agente do mal das folhas da seringueira, cuja fase imperfeita em Deuteromycotina conhecida como Fusicladium macroscoporum [Aposphaeria ulei]; A figura 23 apresenta o ciclo de vida do agente do mal das folhas de Hevea sp. A espcie Mycosphaerella pini [Scirrhia pini] fase perfeita de Dothistroma septospora [D. pini], o agente da queima das acculas de Pinus sp. importante destacar que o gnero Mycosphaerella pode tambm ser a fase perfeita dos gneros Cercospora, Ramularia, Ascochyta, Phoma e Septoria, entre outras espcies. Em Massarinaceae, ex.: Massarina sp., cuja fase anamrfica Coniothyrium sp.; Na famlia Melanommataceae, ex.: Melanomma sp., cuja fase anamrfica Aposphaeria sp.; Em Meliolaceae, ex.: Meliola sp.; Em Pleosporaceae, ex.: Pleospora sp. cuja fase anamrfica
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pode ser Alternaria sp.; e finalmente Pyrenophoraceae, ex.: Pyrenophora sp., e Cochliobolus sp. fases perfeitas de Helminthosporium sp., Drechslera sp., e Curvularia sp..
FIGURA 23 - Ciclo do mal das folhas de Hevea sp., causado por Microcyclus ulei, segundo GASPAROTTO & FERREIRA (1989).
2.4. Ordem Elaphomycetales Apresenta uma nica famlia Elaphomycetaceae, ex.: Elaphomyces sp., destaca-se por apresentar espcies que podem formar ectomicorriza com espcies arbreas. 2.5. Ordem Endomycetales (Ascoideales, Cephaloascalaes, Dipodascales, Spermophthorales); Esta ordem no tem importncia patolgica para espcies florestais, contudo, a famlia Saccharomycetaceae contm os fungos denominados leveduras como o Saccharomyces cerevisiae. 2.6. Ordem Erysiphales Esta ordem apresenta apenas a famlia Erysiphaceae, ex.: Erysiphe sp., agente de doena conhecida como mldio pulverulento, cuja forma imperfeita o gnero Oidium sp., razo pela qual a doena tambm conhecida como oidiose. Esta doena comum em
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viveiros de Eucalyptus sp., em mudas passadas, mas j foram constatados alguns surtos em plantios adultos. Em Mato Grosso sua ocorrncia comum em urucum. Outros gneros importantes: Uncinula sp. e Phyllactinia sp., formas perfeitas de Ovulariopsis sp. 2.7. Ordem Eurotiales (Aspergillales, Plectascales) Esta ordem caracteriza-se por apresentar ascoma cleistotecial sem himnio, com ascos arredondados cuja parede decompe. Apresenta trs famlias, destacando-se: Trichocomaceae, ex.: Eupenicillium sp., Eurotium sp. e Talaromyces sp. formas perfeitas de Aspergillus sp., Paecilomyces sp. e Penicillium sp.. 2.8. Ordem Helotiales Esta ordem caracteriza-se por apresentar ascoma apotecial com asco unitunicado. Apresenta 11 famlias, destacando-se a famlia Sclerotiniaceae, ex.: Sclerotinia sp., como agente de podrido de razes, cuja fase anamrfica Sclerotium sp.; Aqui tambm so classificados os gneros Monilinia sp., Botryotinia sp. e Diplocarpon sp., cujas fases anamrficas so, respectivamente, Monilia sp., Botrytis sp. e Marssonina sp.. 2.9. Ordem Hypocreales Os fungos desta ordem caracterizam-se por apresentar ascoma peritecial colorido, rostrado ou no sem ostolo, agrupado sobre ou imersos em estroma. Apresenta duas famlias e destaca-se: Hypocreaceae (Nectriaceae) que inclui fungos do gnero Hypocrea, cuja fase anamrfica Trichoderma sp., importante fungo antagnico por parasitismo e antibiose a diversos fitopatgenos; Calonectria, cuja fase anamrfica Cylindrocladium spp., agentes de tombamento, podrido de razes e estacas e de manchas foliares em diversas espcies florestais, conforme apresentado na figura 24. Tambm destacam-se, ainda; Gibberela, cuja fase anamrfica Fusarium sp., e finalmente o gnero Nectria sp., agente de cancros e "die-back", fase anamrfica Tubercularia sp., ou ainda apresenta fases anamrficas como Verticillium sp., agente de manchas vasculares e tambm como Fusarium sp., agente de damping-off, podrido de razes, murchas vasculares e deteriorao de sementes. 2.10. Ordem Ophiostomatales Nesta ordem os fungos caracterizam-se por apresentar ascoma peritecial, ostiolado ou no, com uma nica famlia: Ophiostomataceae, ex.: Ceratocystis fimbriata, agente do mofo cinzento da seringueira, da seca da mangueira e do cancro de Gmelina arborea. Em outros pases: Ceratocystis fagacearum, causador da seca do carvalho, Ceratocystis ulmi, agente da seca do olmo holands, cujos ascsporos e condios so disseminados por colepteros; As formas imperfeitas so os gneros Cephalosporium e Graphium, em Deuteromycotina.
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FIGURA 24 - Ciclo de Calonectria crotalariae (Cylindrocladium crotalariae), agente causal de manchas de folhas em Eucalyptus sp., segundo FERREIRA (1989).
2.11. Ordem Pezizales Esta ordem contm treze famlias cujos fungos caracterizam-se pela presena de ascoma peritecial e so importante por apresentar fungos que formam ectomicorriza e saprfitas em madeira. 2.12. Ordem Polystigmatales (Phyllachorales) Esta ordem apresenta uma nica famlia com fungos que apresentam ascoma peritecial imersos no tecido do hospedeiros com asco unitunicado. Phyllachoracea, ex.: agente da crosta marrom do Ip, Apiosphaeria guaranitica; conforme ciclo de vida apresentado na figura 25. Destaca-se ainda Glomerella cingulata forma perfeita de Colletotrichum sp., que causa a antracnose da seringueira; Phyllachora huberi [Catacauma huberi], agente da crosta negra da seringueira e Coccostroma sp. [Catacauma torrendiella], agente da lixa negra do coqueiro. Podem apresentar ainda na fase anamrfica o gnero Gloeosporium. 2.13. Ordem Rhytismatales (Phacidiales) Ascoma apotecial e asco unitunicado, com quatro famlias, destacando-se a famlia Hypodermataceae, ex.: Davisomycella ampla e Laphodermium pinastri, agentes de manchas nas acculas de Pinus spp..
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FIGURA 25- Ciclo de Apiosphaeria guaranitica, agente causal da crosta marrom do ip, segundo FERREIRA (1989).
2.14. Ordem Sphaeriales (Xylariales) Esta ordem apresenta quatro famlias cujos fungos apresentam ascoma peritecial tipicamente ostiolado, carbonceo e asco unitunicado cilndrico em himnio, destacandose a famlia Xylariaceae, ex.: Rosellinia sp. e Xylaria sp. agentes de podrido de razes em espcies arbreas. O gnero Hypoxylon, observado como agente de cancro em rvores em outros pases, foi observado no Brasil como saprfita em toras de Eucalyptus sp. empilhadas. 2.15. Ordem Taphrinales (Protomycetales) Nesta ordem os fungos apresentam miclio vegetativo dicaritico, ascoma ausente e a camada de ascos produzida na superfcie das folhas do hospedeiro. Apresenta duas famlias e em Taphrinaceae, ex.: Taphrina coerulescens, agente do encrespamento da folha do Quercus sp., carvalho, em outros pases. As outras ordens desta subdiviso so: Arthoniales; Ascosphaerales (Pericystales); Caliciales; Clavicipitales (Hypomycetales); Cyttariales; Diatrypales; Graphidales; Gyalectales; Gymnoascales (Onygenales); Laboulbeniales; Lecanidiales; Lecanorales; Microascales; Opegraphales; Ostropales; Peltigerales; Pertusariales; Pyrenulales; Sordariales (Chaetomiales, Coronophorales); Sphathulosporales; Teloschistales; e Verrucariales.
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3. PROCEDIMENTO Examinar o material apresentado ao microscpio estereoscpio e montar lminas. Com o material vegetal efetuar cortes histolgicos e examinar em microscpio.
5. QUESTES COMPLEMENTARES 1. O que forma imperfeita de um fungo? 2. Como podemos diferenciar um peritcio de um cleistotcio? 3. Como podemos diferenciar um apotcio de um ascostroma? 4. O que um asco nu e um asco truncado? 5. O que camada himenial, onde ela se localiza e qual sua importncia na classificao dos fungos de Ascomycotina? 6. O que tecido estromtico ou estroma? 7. Citar trs doenas causadas por fungos de Ascomycotina, com os respectivos agentes. 8. Qual a forma imperfeita de Glomerella cingulata e a forma perfeita de Fusicladium macrosporum? 9. Porque o nmero de ascsporos em um asco geralmente 2, 4, 8 ou 16? 10. Qual a importncia da fase assexual ou imperfeita para os fungos da subdiviso basidiomycotina? 11. Qual a importncia e a doena causada por Ceratocystis fimbriata em Gmelina arborea? 12. Qual a doena causada por Davisomycella ampla em Pinus sp.?
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RELATRIO DE AULA PRTICA N 07. Aluno(a): Material 1: Subdiviso: Classe: Ordem: Famlia: Gnero: Espcie:
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Material 2: Subdiviso: Classe: Ordem: Famlia: Gnero: Espcie:
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FUNGOS SUPERIORES - BASIDIOMYCOTINA
1. OBJETIVOS Conhecer e saber as espcies de fungos superiores de importncia para a patologia florestal, alm de montar lminas, conhecer e identificar as estruturas tpicas desta outra subdiviso de fungos superiores.
2. CONSIDERAES Os fungos aqui agrupados caracterizam-se por ter miclio septado e bem desenvolvido, podendo apresentar grampo de conexo. A reproduo sexual d origem a esporos exgenos, chamados basidisporos, produzidos sobre uma hifa claviforme especial denominada basdio. Os esporos de sobrevivncia so clamidsporos, telisporos e o probasdio. Os basdios podem ser produzidos em corpos de frutificao, os basidiocarpos ou basidiomas. Os fungos aqui classificados podem ser benficos, como os comestveis, chamados de cogumelos; como aqueles que formam ectomicorriza, alm de um grande nmero de saprfitas. Entre os prejudiciais esto os saprfitas sobre madeira, agentes de podrides radiculares, alm dos agentes de doenas conhecidas como ferrugens e carves, normalmente sobre folhas e frutificaes de vegetais. Esta subdiviso contm quatro classes: Hymenomycetes, Gasteromycetes, Urediniomycetes e Ustilaginomycetes; existem classificaes diferentes, de outros autores, podendo ser comparados trs exemplos apresentados na tabela 6. Aqui sero abordadas apenas as classes de interesse patolgico para espcies florestais. 2.1. Classe Hymenomycetes Nesta classe encontram-se alguns fungos de importncia patolgica, fungos comestveis e formadores de ectomicorriza, mas em sua grande maioria so saprfitas, importantes apodrecedores de madeira e matria orgnica depositada no solo, destacando-se algumas espcies xilfagas: Lenzites trabea, Polyporus sp., P. fumosus, Poria sp., Xiloborus sp. entre outras. Esta classe est dividida em duas subclasses: Phragmobasidiomycetidae, caracterizada pela presena de fungos gelatinosos com basdio septado e a segunda,
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Holobasidiomycetidae, que apresenta os cogumelos e orelhas-de-pau, cujo basdio no septado. Enquanto a primeira apresenta trs ordens: Auriculariales, Septobasidiales e Tremellales; a segunda j apresenta nove ordens: Agaricales, Aphyllophorales (Polyporales), Boletales, Brachybasidiales, Cantharellares, Dacrymycetales, Exobasidiales, Russulales (Asterosporales) e Tulasnellales.
TABELA 6 Classes da subdiviso Basidiomycotina segundo diferentes autores. AINSWORTH & BISBY (1983) 1. Hymenomycetes 1.1. Holobasidiomycetidae 1.2. Phragmobasidiomycetidae 2. Gasteromycetes 3. Urediniomycetes 4. Teliomycetes CMI (1983) 1. Hymenomycetes 1. Holobasidiomycetes 2. Phragmobasidiomycetes 2. Gasteromycetes 3. Hemybasidiomycetes 3. Teliomycetes GALLI et al. (1995)
Podem ser destacadas quatro ordens da subclasse Holobasidiomycetidae: 2.1.1. Ordem Agaricales Esta ordem contm onze famlias, das quais destacam-se: Agaricaceae e Amanitaceae, respectivamente pela presena de fungos comestveis, como Agaricus campestris e de fungos que podem formar ectomicorriza com Pinus spp., tais como: Amanita sp. e Suillus sp.; J na famlia Tricholomataceae, destacam-se as espcies Armillaria mellea, agente de podrido radicular em espcies florestais, principalmente Pinus spp., alm de Crinipellis perniciosa [Marasmius perniciosus], agente da vassoura-debruxa em Theobromae cacao. 2.1.2. Ordem Aphyllophorales (Polyporales) Nesta ordem destacam-se trs famlias de vinte e duas: Thelephoraceae, ex.: Thelephora terrestris, que pode formar ectomicorriza com Pinus spp.. Na famlia Corticiaceae, destacam-se ex.: Thanatephorus cucumeris [Pellicularia filamentosa], cuja fase anamrfica Rhizoctonia solani, agente da mancha aureolada da seringueira, cujo ciclo apresentado na figura 26, alm de causar tombamento em vrias espcies florestais; Destaca-se tambm Corticium salmonicolor, agente de rubelose da seringueira e doena rosada de Eucalyptus spp.; alm do agente de mancha foliar de seringueira na Amaznia, Pellicularia koleroga, doena conhecida tambm como queimado-fio. Finalmente, na famlia Polyporaceae, ex.: Ganoderma philippii [G. pseudoferreum], Rigidoporus lignosus e Phellinus noxius [Fomes noxius], respectivamente agentes das podrides vermelha, branca e parda que ocorrem nas razes da seringueira.
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FIGURA 26 - Ciclo da mancha aureolada da seringueira, causada por Thanatephorus cucumeris, segundo GASPAROTTO & FERREIRA (1989).
2.1.3. Ordem Boletales Esta ordem apresenta seis famlias, destacando-se a famlia Boletaceae com vrias espcies formadoras de ectomicorriza, como Boletus aureus em Eucalyptus spp.. 2.1.4. Ordem Exobasidiales Nesta ordem existe uma nica famlia Exobasidiaceae cujos fungos caracterizam-se por parasitismo obrigatrio, semelhante queles da Ordem Taphrinales da subdiviso Ascomycotina. No apresentam basidioma e apenas camadas de basdio na superfcie do hospedeiro. Causam distoro e crescimento excessivo em folhas de ornamentais e no h citao de sua ocorrncia em espcies florestais. 2.2. Classe Gasteromycetes Os fungos desta classe caracterizam-se por apresentar basdio com quatro esporos e massa de esporos dentro do basidioma, glabra, dividido em lculos e sem himnio. Apresenta as ordens: Galtieriales, Hymenogastrales, Lycoperdales, Melanogastrales, Nidulariales, Phallales, Podaxales, Sclerodermatales e Tulostomatales, destacando-se:
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2.2.1. Ordem Hymenogastrales Esta ordem apresenta oito famlias, destacando-se duas, principalmente pela presena de fungos que formam ectomicorriza: Hydnangiaceae e Rhizopogonaceae, ex.: respectivamente: Hydnangium sp. que forma micorriza com Eucalyptus sp. e Rhizopogon sp. que forma micorriza com Pinus sp., Picea sp., Cupressus sp. e Pseudotsuga sp.. 2.2.2. Ordem Lycoperdales Aqui so encontradas cinco famlias, destacando-se Lycoperdaceae, ex.: Bovista sp., Calvatia sp. e Lycoperdon sp. que podem formar ectomicorriza com Pinus sp. e Picea sp.. 2.2.3. Ordem Sclerodermatales Esta ordem apresenta quatro famlias, destacando-se fungos que podem formar ectomicorriza com Pinus sp., Picea sp., Cupressus sp., Eucalyptus sp., Larix sp. e Pseudotsuga sp., apenas da famlia Sclerodermataceae, ex.: Pisolithus tinctorius e Scleroderma sp., que se caracterizam, respectivamente, por perdio fino e esporos marrons e perdio espesso e esporos negros. 2.3. Classe Urediniomycetes Nesta classe encontram-se os agentes de doenas conhecidas como ferrugens cuja denominao advm da colorao das pstulas com esporos, produzidas sobre a folha do hospedeiro, de colorao amarelo-ouro que lembra um material enferrujado. Contudo, nem todas as ferrugens apresentam esta colorao tpica. Estes fungos caracterizam-se como parasitas obrigatrios e apresentam alta especificidade, com a presena de formas especiais, formae speciales = f.sp., e de raas fisiolgicas (RF). O miclio intercelular com presena de haustrios, produzindo vrias formas de esporos em estgios especficos, conforme apresentado na tabela 7.
TABELA 7 - Resumo do ciclo de vida de um fungo causador de ferrugem. ESTGIO 0 I II III IV TIPO DE ESTRUTURA Espermagnio ou Pcnio cio Uredo Tlio Basdio TIPO DE ESPORO Hifas receptivas e espermcios cisporos Uredsporos Telisporos Basidisporos NMERO DE CROMOSSOMOS n n + n (*) n+n n+n n VARIAO MORFOLGICA pouca pouca muito pouca bastante --
(*) n + n = dicaritico
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As ferrugens podem ser classificadas, quanto ao seu ciclo de vida, em macrocclicas quando apresentam todos os estgios especificados no quadro anterior, podendo ser exemplificada com a ferrugem do Ip amarelo e a ferrugem fusiforme dos Pinus sp., esta segunda no constatada no Brasil; ou em microcclicas quando est ausente pelo menos um dos estgios, como o caso da ferrugem do Eucalyptus sp. causada por Puccinia psidii. As ferrugens ainda podem ser classificadas, quanto ao nmero de hospedeiros, em auticas que so aquelas cujo ciclo de vida ocorre sobre apenas um hospedeiro, como a ferrugem do Ip; ou em hetericas, quando necessitam de mais de um hospedeiro para completar seu ciclo de vida, como a ferrugem fusiforme dos Pinus sp., que passa parte do seu ciclo de vida sobre o Pinus sp. e outra sobre o Quercus sp.. Esta classe apresenta apenas a ordem Uredinales com duas famlias. Em Melampsoraceae encontram-se: Cronartium fusiforme, agente da ferrugem fusiforme dos Pinus sp., C. ribicola, agente da ferrugem dos Pinus sp., alm de espcies de Coleosporium sp., Melampsora sp. e Uredinopsis sp.. Na segunda famlia Pucciniaceae encontram-se: Puccinia psidii, agente da ferrugem do Eucalyptus spp. e outras Mirtaceae; Prospodium bicolor [P. tecomicola], agente da ferrugem do ip-amarelo, cujo ciclo apresentado na figura 27; Prospodium appendiculatum, agente da ferrugem do ip de jardim (Tecoma stans); Sphaerophragmium acaciae, agente da ferrugem da accia-branca; Uleiella paradoxa, agente da ferrugem de Araucaria angustifolia; alm de espcies de Gymnosporangium sp., Phragmidium sp. e Uromyces sp..
FIGURA 27 Ciclo da ferrugem do ip-amarelo, causada por Prospodium bicolor, segundo FERREIRA (1989).
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2.4. Classe Ustilaginomycetes Nesta classe encontram agentes de doenas denominadas carves. Estes fungos ainda no foram constatados em espcies florestais no Brasil. Caracterizam por atacar frutificaes e outras partes provocando hipertrofia e imensa produo de clamidsporos de cor negra ou cinza, caracterstica de sua denominao. Nesta classe encontram-se as ordens: Sporidiales com as famlias: Sporidiaceae e Sporidiobolaceae e Ustilaginales com trs famlias: Graphiolaceae, Tilletiaceae e Ustilaginaceae.
3. PROCEDIMENTO Examinar as culturas e os materiais apresentados, no microscpio estereoscpio e montar lminas com cortes histolgicos, para conhecer os diferentes tipos de estruturas e esporos apresentados nesta subdiviso.
5. QUESTES COMPLEMENTARES 1. Qual a importncia patolgica da subdiviso Basidiomycotina? 2. Quais so as partes que compem a estrutura de reproduo sexual dos fungos classificados na subdiviso Basidiomycotina? 3. Quais so as estruturas de resistncia apresentadas pelos fungos da subdiviso Basidiomycotina? 4. O que grampo de conexo e como ele formado? 5. Quais so as principais caractersticas dos fungos causadores das doenas conhecidas como ferrugens? 6. Apresentar um ciclo de vida de um fungo agente de ferrugem? 7. Qual a importncia de se determinar se uma ferrugem autica ou heterica? 8. Qual a fase de reproduo repetitiva dos agentes das ferrugens e sua importncia para o incremento da doena?
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FUNGOS SUPERIORES - DEUTEROMYCOTINA
FUNGOS IMPERFEITOS - DEUTEROMYCOTINA
1. OBJETIVOS Conhecer e saber as espcies de fungos imperfeitos de importncia fitopatolgica, alm de montar lminas, conhecer e identificar suas estruturas.
2. CONSIDERAES Os fungos agrupados nesta subdiviso caracterizam-se por apresentar miclio septado e bem desenvolvido, com reproduo assexual, denominada fase anamrfica, tpica de condios sobre conidiforos, com exceo da classe Agonomycetes. Os conidiforos podem ser livres, agrupados em sinmios ou esporodquios ou, ainda, em frutificaes conhecidas como conidioma, que so os picndios e acrvulos. As estruturas de dormncia ou resistncia so clamidsporos, esclerdios e microesclerdios. A denominao de imperfeitos do fato de, em alguns casos, no se conhecer a reproduo sexual e em outros, por ser dificilmente observada. Em sua grande maioria, a fase sexual, denominada teleomrfica, resulta na produo de ascsporos dentro de ascos sendo ento classificados em Ascomycotina. Alguns poucos da classe Agonomycetes tem a fase sexual em Basidiomycotina pois apresentam produo de basidisporos sobre basdios. Por isto esta subdiviso considerada artificial, em termos taxionmicos. Aqui so encontrados muitos fungos de importncia patognica, saprfitas e parasitas de insetos e animais. comum sua presena em sementes. Alternaria sp., A. tenuis, Aspergillus sp., Cladosporium sp., Curvularia cymbopogonis, C. lunata, Drechslera hodoles, D. sorghicola, Epicoccum nigrum, Fusarium oxysporum, F. semitectum, F. moniliforme, F. solani, Fusicoccum sp., Graphium sp., Nigrospora sp., Penicillium sp., Periconia sp., Pestalotia sp., Peyronellaea sp., Phoma sp., Phomopsis sp., Pithomyces chartarum, Trichoderma sp., Trichothecium sp. e Verticillium sp., tm sido encontrados em sementes de essncias florestais, tais como: Angico vermelho, Cabreva, Canafstula, Cssia, Cedro, Ip Branco, Jacarand e outras. Os fungos aqui agrupados esto divididos em duas classes: Coelomycetes com trs ordens: Melanconiales, Sphaeropsidales e Pycnothyriales; enquanto a classe Hyphomycetes (Hyphales), apresenta quatro ordens: Agonomycetales (Mycelia sterilia), Hyphomycetales, Stilbellales e Tuberculariales. A figura 28 apresenta um esquema das classes, ordens e famlias desta subdiviso.
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FIGURA 28 - Esquema e caractersticas das classes e ordens da subdiviso Deuteromycotina.
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2.1. Ordem Melanconiales Esta ordem caracteriza-se por apresentar conidioma acervular, tambm denominado acrvulo, que se caracteriza por conidiforos e condios sobre um estroma subepidrmico que ao desenvolver-se rompe a epiderme do vegetal. Os condios podem ser expelidos em camada mucilaginosa que os une denominada cirros. Alguns acrvulos podem apresentar-se com cerdas ou setas. Alm das famlias Coryneaceae e Stilbosporaceae, merece destaque a famlia Melanconiaceae onde classificado o fungo Colletotrichum gloeosporioides, agente da antracnose da seringueira, mangueira, eritrina, entre outras espcies, cuja forma perfeita Glomerella cingulata. Manchas foliares e cancro nos frutos de Oiti so causados por Gloeosporium sp.; alm de alguns parasitas de pequena virulncia, como Pestalotia sp., normalmente associados a infeces secundrias ou em plantas debilitadas. 2.2. Ordem Sphaeropsidales (Phomales, Phyllostictales) Esta ordem caracteriza-se pela presena de conidioma picnidial, tambm denominado picndio, estrutura semelhante aos peritcios, mas sem rostro e com ostolo, por onde so liberados os condios; podem ter vrias formas, geralmente escuros e surgem superficiais ou subepidermais. Destaca-se aqui a famlia Sphaerioidaceae (Phomaceae, Sphaeropsidaceae), onde so classificados: Phomopsis sp., cuja forma perfeita Cryphonectria cubensis [Diaporthe cubensis], agente do cancro do Eucalyptus spp.; o fungo Dothiorella sp. agente de leses em tronco de Eucalyptus spp. e fungo Coniella fragariae sp. agente de manchas da folha de Eucalyptus spp.. Tambm aqui so classificados: Sphaeropsis sapinea [Diplodia pinea] agente da seca dos ponteiros de Pinus spp., alm do agente da queima das acculas de Pinus spp., Dothistroma septospora [D. pini] e o fungo Hendersonula sp. agente de doena em Pinus spp... Em essncias nativas so observados os gneros Septoria e Phyllosticta, agentes de manchas foliares; Polychaeton sp, fungo fumagneo observado em ipamarelo, cuja fase perfeita Capnodium sp.. J em Hevea sp. ocorre Botryodiplodia sp. e Lasiodiplodia sp. agentes do cancro do enxerto e podrido da casca de seringueira, alm de Botryodiplodia theobromae agente do cancro do cacaueiro. As outras famlias so: Asbolisiaceae, Discellaceae, Excipulaceae, Leptostromataceae e Nectrioidaceae (Zythiaceae). 2.3. Ordem Pycnothyriales Esta ordem caracteriza-se por apresentar conidioma picniotirial, tambm denominado de pcnio, podendo ser citadas as seguintes famlias: Pycnothyriaceae, Microthyriopsidaceae, Peltopycnidiaceae, Actinothyriaceae, Actinopeltaceae, Rhizothyriaceae e Peltasteraceae. Contudo, aqui no so encontrados fungos de interesse patolgico para espcies florestais.
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2.4. Ordem Agonomycetales (Mycelia Sterilia) Esta ordem caracteriza-se por apresentar miclio estril com ausncia de condios. O perodo de resistncia ocorre no solo com a produo de esclerdios, microesclerdios ou clamidsporos. Apresenta uma famlia Agonomycetaceae, ex.: Rhizoctonia solani, cuja forma perfeita o fungo Thanatephorus cucumeris, agente de tombamento em Eucalyptus spp., Pinus spp. e outras espcies florestais; este mesmo fungo o agente da mancha aureolada da seringueira, alm de atacar Leucaena leucocephalla, no Esprito Santo. O fungo Sclerotium sp. o agente tanto de tombamento em sementeiras, j observado em aroeira e cedro Australiano, em Mato Grosso, como agente de podrido de razes. A espcie S. rolfsii causa anelamento das partes basais de mudas de ip alm de podrido de razes em reboleiras de Araucaria excelsa, enquanto a espcie S. coffeiculum causa mancha foliar em Gmelina arborea, Bawinia sp. e outras espcies florestais na Amaznia. 2.5. Ordem Hyphomycetales (Moniliales) Esta ordem caracteriza-se por apresentar conidiforos livres, com apenas duas famlias. A famlia Moniliaceae caracteriza-se por hifas e esporos hialinos, onde podem ser encontrados inmeros patgenos: Oidium spp., parasita obrigatrio que apresenta a fase perfeita como Erysiphe sp., agente de mldio pulverulento ou oidiose em seringueira, sete-copas, urucum entre outras; enquanto a espcie O. eucalipti agente de oidiose em Eucalyptus spp.; tambm j foi observado Ovulariopsis sp. no Rio Grande do Sul, agente de oidiose em ip-roxo. A figura 30 apresenta o ciclo de Oidium sp. em Eucalyptus sp.. Tambm destacam-se espcies do gnero Cylindrocladium como agentes de vrias doenas: C. scoparium, tombamento de mudas de Eucalyptus spp., Pinus spp., algaroba entre outras, alm de podrido de estacas de Eucalyptus spp.; C. clavatum , tombamento de mudas de Eucalyptus spp. e podrido de razes de Pinus spp. e Eucalyptus spp. principalmente quando a planta est debilitada por outros fatores; C. pteridis, queima das acculas de Pinus spp.; C. crotalariae, mancha da folha de Swietenia macrophylla e Eucalyptus spp.; C. ilicicola, podrido do colo e tambm mancha da folha de Eucalyptus spp. e C. quinqueseptatum, agente de mancha foliar em Eucalyptus spp., cuja forma perfeita Calonectria quinqueseptata. Destaca-se ainda Verticillium spp. que, alm de parasitar outros fungos superiores, agente de murchas vasculares em diversas espcies, como o cacau; a espcie V. alboatrum agente da seca do Carvalho. Tambm pode ser citado Botrytis cinerea, anelamento das partes basais e leses em folhas mais baixas em viveiro de Eucalyptus spp. e outras essncias nativas. Neste famlia ainda so encontrados Aspergillus sp., Penicillium sp. e Monilia sp., contaminantes de laboratrio; Trichoderma sp., saprfita do solo e promissor para controle biolgico; Paecilomyces sp., hiperparasito da lagarta do ip; Metarhizium anisopleae, parasita de insetos como Zulia entririana e cigarrinhas de pastagem.
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FIGURA 29 Ciclo de Oidium sp. em Eucalyptus sp. e diversas essncias florestais, segundo FERREIRA (1989).
A famlia Dematiaceae apresenta hifas e esporos negros ou coloridos, destacandose os seguintes agentes de doenas: Fusicladium macrosporum, mal das folhas de Hevea sp.; Corynespora casiicola, manchas foliares de seringueira, cacau, ip, paineira, entre outras espcies, alm de Drechslera heveae [Helmilthosporium heveae], mancha olho-depssaro em Hevea sp. Outras espcies importantes so: Cercospora eucalypti e C. meliicola, respectivamente agentes de manchas foliares em Eucalyptus spp. e cinamomo; e, finalmente, Cercospora sequoiae, agente da seca dos ramos de Cupressus sp. e Cryptomeria sp., sendo apresentado o ciclo na figura 31. Finalmente, Alternaria sp., mancha da folha de Eucalyptus spp. e em mudas de seringueira; Periconia manihoticola, mancha concntrica da folha de seringueira; Thielaviopsis sp., agente da seca da mangueira, alm de inmeras espcies saprfitas, contaminantes de laboratrio, principalmente em testes de patologia de sementes, como Nigrospora sp., Cladosporium sp., Curvularia sp., entre outros. 2.6. Ordem Stilbellales Esta ordem caracteriza-se por apresentar conidioma sinematoso, tambm chamado sinmio, que so feixes de conidiforos inteiramente ligados em forma de coluna, onde encontra-se a famlia Stilbellaceae, destacando-se o gnero Graphium sp., forma imperfeita de Ceratocystis sp.; tambm podem ser citados Briosia sp. e Stilbum sp., saprfitas de madeira.
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FIGURA 30 Ciclo de Cercospora sp., agente de manchas foliares em diversas espcies florestais, segundo FERREIRA (1989).
2.7. Ordem Tuberculariales Esta ordem caracteriza-se por apresentar conidioma esporodoquial, tambm chamado de esporodquio, que uma massa de tecido estromtico, em forma de almofada, sobre a qual so produzidos os conidiforos em forma de paliada e, sobre estes, os condios. Destacam-se diversas espcies do gnero Fusarium sp., agente de tombamento e murchas ou doena vascular em vrias espcies florestais; na forma perfeita denomina-se Nectria sp., cujo ciclo de vida tpico apresentado na figura 32; em Mato Grosso foi observado em sementes e plntulas de Magonia pubescens, timb, e plntulas de Caryocar brasiliensis, pequizeiro, como agente de tombamento. Tambm pode ser citado Tubercularia sp., que atua como saprfita na decomposio de madeira, alm dos gneros Pucciniopsis e Volutella, todos desta mesma ordem.
3. PROCEDIMENTO Examinar as culturas e os materiais apresentados, no microscpio estereoscpio e montar lminas para conhecer as estruturas dos fungos desta subdiviso.
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FIGURA 31 Ciclo de Fusarium sp., agente causal de tombamento de mudas, segundo FERREIRA (1989).
5. QUESTES COMPLEMENTARES 1. Quais so as caractersticas da subdiviso Deuteromycotina e sua importncia na classificao dos fungos? 2. O que a forma imperfeita de um fungo e sua fase perfeita ou teleomrfica? 3. Qual a diferena entre sinmio e esporodquio? 4. Quais so as estruturas de resistncia que os fungos da subdiviso Deuteromycotina podem apresentar? 5. Citar seis espcies de fungos associadas a sementes florestais? 6. Quais as doenas florestais causadas por fungos do gnero Cylindrocladium? 7. Quais so as caractersticas morfolgicas dos fungos inferiores utilizadas para sua classificao em ordens? 8. Quais as principais caractersticas dos fungos da famlia Agonomicetaceae?
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RELATRIO DE AULA PRTICA N. 10-A Aluno(a): Material 1: Subdiviso: Classe: Ordem: Famlia: Gnero: Espcie:
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OUTROS AGENTES BITICOS DE FITOMOLSTIAS
1. OBJETIVOS Conhecer e saber espcies de bactrias, nematides e parasitas de plantas superiores como agentes de fitomolstias e conhecer suas estruturas.
2. CONSIDERAES Apesar dos fungos serem os responsveis pela maioria das fitomolstias, existem outros seres vivos que tambm podem retirar a energia necessria para seu desenvolvimento de clulas ou tecidos de espcies florestais, como algumas bactrias, nematides e parasitas de plantas superiores. Convm destacar que estas referncias so somente relativas s doenas de origem infecciosa, pois existem as de origem no infecciosa, denominadas genericamente como desordens fisiolgicas, que podem ter como causas: temperaturas muito altas ou muito baixas; falta ou excesso de umidade no solo; falta ou excesso de luz; falta de oxignio no solo, associada ao excesso de umidade no solo; poluio do ar; deficincias nutricionais; toxidez mineral; acidez ou alcalinidade excessiva no solo; toxidez por agrotxicos; alm de prticas culturais ou silviculturais inadequadas. Ainda possvel observar competio intra e interespecfica entre plantas, por luz, gua e nutrientes; alelopatia, que consiste na eliminao de substncias fitotxicas a outros vegetais; mal formao anatmica; anormalidades genticas, como albinismo e, finalmente, ao de ventos, raios e chuvas de granizo. 2.1. Bactrias As bactrias fitopatognicas, seres unicelulares e procariticos, encontram-se aos milhes no solo, no ar, na superfcie e nos tecidos enfermos. Geralmente so bastonetes com 1 a 3 de comprimento que se reproduzem por fisso binria transversa ou cissiparidade, sendo classificadas como protistas inferiores, segundo classificao proposta por Whittaker em 1969. Algumas so mveis por meio de flagelos, sendo que as espcies fitopatognicas no apresentam endsporos; algumas apresentam cpsulas ou camada mucilaginosa que conferem maior resistncia a condies adversas do meio.
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Caracterizam-se como heterotrficas, a maioria so aerbias com algumas anaerbias facultativas, crescendo bem em meios de cultura artificiais, apesar das bactrias saprfitas desenvolverem-se mais rpido que as fitopatognicas o que, muitas vezes, mascara o resultado de isolamentos. Apresentam o melhor desenvolvimento em pH neutro em torno de 6,50 a 7,50, enquanto os fungos preferem pH em torno de 4,50 a 5,50. As bactrias tambm so importantes por produzirem antibiticos; podem ser utilizadas em controle biolgico, como o caso de Bacillus thuringiensis que ataca lagartas de Lepidpteras. Algumas espcies de Bacillus esto sendo testadas para controlar Cylindrocladium spp., agentes de diversas doenas em espcies florestais. As principais bactrias fitopatognicas so: Agrobacterium tumefaciens, agente de galhas em Eucalyptus spp.; Agrobacterium radiobacter pv. tumefaciens, agente de galhas areas em ramos de Inga sp.; Pseudomonas solanacearum, agente de murcha em Eucalyptus spp. na Amaznia; Xanthomonas campestris pv. cordiae, agente da mancha angular das folhas de Cordia goeldiana. Como observou-se acima, as bactrias podem apresentar variao patognica denominada de patovar, cuja abreviao pv. . Merecem destaque os gneros de bactrias fitopatognicas, com suas principais caractersticas resumidos na tabela 8. A figura 32, abaixo, apresenta as caractersticas de disposio de flagelos das bactrias fitopatognicas e os sintomas das doenas que podem causar.
FIGURA 32 Os seis principais gneros de fitobactrias e sintomas tpicos, segundo GALLI et al. (1994), adaptado de Kiraly et al. (1970).
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2.2. Nematides Os nematides, animais naturais do solo, so multicelulares, geralmente microscpicos, que apresentam os sistemas digestivo, reprodutivo, nervoso e muscular, mas com ausncia dos sistemas respiratrio e circulatrio. A reproduo por ovos e, pelo menos, quatro ecdises no estgio larval at a fase adulta; algumas fmeas apresentam, quando adultas, forma diferente dos machos, denominada dimorfismo. Os nematides que se caracterizam como fitoparasitos apresentam uma estrutura tpica denominada estilete bucal, especializada para retirar os nutrientes do hospedeiro. Aqueles que so transmitidos por sementes apresentam caracterstica de anidrobiose, podendo paralisar seu metabolismo mas conservando-se vivo por algum tempo dentro das sementes. Os nematides podem prejudicar os vegetais por traumatismos, pela retirada de nutrientes e por ao txica, que se manifesta pela ao tpica de vrios grupos como: causadores de galhas, migradores, cavernculos, espiralados e outros. De acordo com o tipo de parasitismo, os nematides podem ser endoparasitas quando adultos se instalam e colocam seus ovos no interior dos tecidos vegetais; semiendoparasitas quando se fixam junto s razes mas efetuam postura no exterior do vegetal e ectoparasitas quando vivem no solo todo seu ciclo de vida mas alimentando-se do hospedeiro vegetal. Quanto mobilidade podem ser sedentrios, quando se fixam no tecido vegetal e no se movem mais e migratrios, quando se locomovem no solo para a planta e viceversa, em qualquer fase de seu ciclo de vida. A figura 33 apresenta respectivamente as anatomias tpicas de um nematide fmea e um nematide macho fitoparasitos. A tabela 9 resume alguns nematides fitoparasitos de algumas espcies florestais e respectivo modo de ao. 2.3. Parasitas de plantas superiores Alguns vegetais tm a habilidade de parasitar outras plantas e dependem de seus hospedeiros para conseguir gua e todos os minerais para sua sntese, atravs de haustrios que se fixam e anastomosam com o tecido do hospedeiro. Este parasitismo aparece em diferentes nveis quanto dependncia do hospedeiro. No Brasil, destacam-se Psittacanthus dichrous, Psittacanthus spp., Struthanthus rhynchophyllus, S. syringifolius, S. flexicaulis e Struthanthus spp., conhecidos como ervade-passarinho, que atacam inmeras espcies arbreas, como oiti, sete-copas, teca, unhade-vaca, pau-de-bicho e outras. Tambm pode ser citada Cuscuta epithymum, conhecida como cip-de-chumbo ou fio-de-ouro, sobre diversas espcies florestais e ocasionando alta mortalidade em mudas de Eucalyptus grandis em cartuchos laminados. Em regies de clima temperado Arcenthobium sp. parasita conferas de um modo geral, enquanto, na Amrica do Norte, a espcie Phorandendron flavescens e, na Europa, a espcie Viscum album, so parasitas em galhos de espcies florestais como Juniperus sp. e Cupressus sp..
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TABELA 8 - Principais caractersticas dos gneros de bactrias fitopatognicas.

GNERO Agrobacterium Clavibacter Curtobacterium Erwinia MOBILIDADE Imvel e mvel Imvel Mvel Mvel DISPOSIO DE FLAGELO trica e montrica trica Loftrica Pertrica COR DA COLNIA branca creme creme branca GRAM + + TIPO DE DOENA Hipertrofia (tumores ou galhas) Infeco sistmica (murchas) e cancros Infeco sistmica (murchas) Leses e manchas na parte area (queima de ponteiro) e podrides mole em bulbos e tubrculo Pseudomonas Xanthomonas Mvel Mvel Loftrica Montrica cinza claro amarela Manchas foliares e Infeco sistmica (murchas) Manchas foliares e outros rgos e Infeco
sistmica (murchas)
TABELA 9 - Nematides fitoparasitos de algumas espcies florestais e respectivo modo de ao. Tipo de ao Espcie Florestal
Eucalyptus sp. Hevea sp. Theobromae cacao Outras espcies Meloidogyne incognita Meloidogyne thamesi Meloidogyne sp.
Causadores de galhas
Migradores
Pratylenchus brachyurus Pratylenchus brachyurus Pratylenchus sp. Pratylenchus sp.
Espiralados
Helicotylenchus sp. Helicotylenchus sp. Helicotylenchus sp.
Outros
Criconema sp. Criconemoides sp. Heterodora sp. Trichodorus sp. Xiphinema sp.
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FIGURA 33 Anatomia tpica de nematide macho e fmea, fitoparasitos, segundo AGRIOS (1971).
2.4. Outros agentes biticos certo que outros seres vivos tambm podem atacar espcies vegetais, como alguns protozorios, micoplasmas (MLO) e vrus, contudo estes no foram ainda relatados em espcies florestais no Brasil, exceto uma ocorrncia isolada, em 1982, de carlavirus em seringueira, de material oriundo da Amaznia. Ainda no se tem casos relatados de importncia destes agentes sobre espcies florestais no Brasil. Quando aos protozorios fitopatognicos, ex.: Phytomonas sp. da famlia Trypanosomatidae, tem sido observado mais associados no Brasil a espcies de Palmae, como agente de murcha.
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Os micoplasmas fitopatognicos, chamados MLO (Mycoplasma Like Organism), so procariticos, sem parede celular, com 60 at 1.100 n:, mas exercem funo prpria de manuteno e reproduo por gemulao ou fisso binria transversa. De outros lado, vrus um conjunto formado por uma ou mais molculas de cido nucleico, normalmente envolto por uma capa protetora de protena ou lipoproteina (Matthews, 1991).
3. PRODECIMENTOS Preparar lmina com o material apresentado com presena de bactrias e observar a formao do fluxo bacteriano e posteriormente montar um esfregao em lmina para observao com lente de imerso. Adicionar leo-de-cedro e posteriormente limpar a objetiva com xilol e algodo seco. Extrair um nematide do material apresentado, montar lmina com gua e efetuar um rpido aquecimento para paralisar o nematide, observando a seguir suas principais estruturas. Os parasitas de plantas superiores sero observados diretamente no campo.
4. RESULTADOS O aluno dever montar lminas com o material entregue, desenhar e identificar as estruturas observadas em relatrio prprio entregue juntamente com as lminas.
5. QUESTES COMPLEMENTARES 1. Quais so as principais caractersticas das bactrias fitopatognicas? 2. Qual a importncia da forma de penetrao das bactrias para seu controle? 3. Como so classificadas as bactrias e quais suas principais caractersticas morfolgicas? 4. Quais so as principais doenas florestais cujo agentes so bactrias? 5. Quais as principais caractersticas que diferenciam o gnero Agrobacterium do gnero Pseudomonas? 6. Quais as principais caractersticas dos nematides fitoparasitos? 7. Quais as espcies de nematides fitoparasitos importantes para espcies de Eucalyptus sp. e Hevea sp.? 8. Que tipo de prejuzo pode causar um nematide s espcies hospedeiras? 9. O que o fenmeno de anidrobiose nos nematides fitoparasitos? 10. Quais as principais caractersticas dos parasitas de plantas superiores e as espcies mais importantes?
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1. OBJETIVOS Conhecer e saber os principais defensivos agrcolas utilizados na rea florestal, as informaes tcnicas contidas nos rtulos das embalagens e as informaes necessrias para a confeco do receiturio florestal.
2. CONSIDERAES Uma das formas de se prevenir ou controlar fitomolstias a utilizao de produtos qumicos com princpios txicos para os microorganismos. Apesar dos plantios florestais apresentarem rotao mais longa e microclima mais estvel durante mais tempo, ainda assim povoamentos homogneos em grandes reas podem exigir a utilizao desses produtos, alm de outras medidas preventivas. Tambm nas prticas de armazenamento de sementes e produo de mudas pode ser necessria a utilizao desses produtos conhecidos como defensivos agrcolas ou agrotxicos. De qualquer forma importante utilizar de forma integrada as diferentes formas de controle das fitomolstias e somente utilizar esses defensivos quando estritamente necessrio, observando todas indicaes tcnicas, ou seja: sempre prescrever o produto qumico atravs do receiturio florestal; discriminar todas as informaes qualitativas e quantitativas exclusivas para o problema analisado, no permitindo qualquer tipo de extrapolao; discriminar a poca, forma e equipamento adequados para aplicao do produto e, finalmente, indicar os cuidados necessrios na operao, armazenamento e eliminao de embalagens, bem como informar os perigos de intoxicao. Apesar de existirem muitos produtos no mercado, poucos so os que j vm com indicaes para doenas florestais. Muitas vezes necessrio recorrer a resultados de instituies de pesquisas, como as Universidades, EMBRAPA e CEPLAC, ou literatura especializada, como FERREIRA (1989), GRUPO PAULISTA DE FITOPATOLOGIA (1986), Revista Fitopatologia Brasileira e anais dos Congressos Brasileiros de Fitopatologia da Sociedade Brasileira de Fitopatologia, revista Agropecuria Brasileira e outras, para conseguir referncias tcnicas para controle das fitomolstias florestais. Empresas que produzem agrotxicos costumam distribuir para profissionais da rea os guias de produtos com especificaes tcnicas para orientar sua utilizao. Em 1998, a Associao Brasileira de Educao Agrcola Superior, ABEAS, juntamente com o
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Ministrio da Agricultura, lanaram um software, denominado Agrofit 98, contendo especificaes tcnicas da maioria dos agrotxicos comercializados no Brasil. importante destacar que os defensivos agrcolas ou agrotxicos so substncias que no podem ser utilizadas em rea urbana. Uma alternativa para as fitomolstias que ocorrem em quintais, jardins e vasos, a utilizao da publicao Receiturio Caseiro, alternativa para controle de pragas e doenas de plantas cultivadas e de seus produtos, editado pela EMBRATER em 1985. Quando no for possvel encontrar tais referncias ou no houver disponibilidade de produtos no mercado, pode ser necessrio testar alguns produtos, alertando ao profissional que qualquer tipo de prejuzo sempre ser de sua inteira responsabilidade tcnica, por isso recomendvel seguir alguns critrios: testar produtos indicados para doenas semelhantes; testar doses sempre partindo da menor indicao; adequar o volume de calda de acordo com a rea foliar do plantio e observar claramente se o controle ocorre e no h sintomas de fitotoxidez. Sintomas de fitotoxidez costumam se expressar por enrugamento, encharcamento, queimadura ou secamento de folha ou partes tenras como os meristemas; neste caso necessrio irrigar intensamente as plantas tratadas, interromper o tratamento e procurar outra opo. Tratamentos qumicos em povoamentos adultos normalmente exigem um volume de calda muito superior ao recomendado para culturas de menor porte ou ento para viveiro ou jardins clonais, conforme apresenta a tabela 10, a seguir.
TABELA 10 - Classificao de pulverizao de acordo com o volume de calda utilizado. VOLUME DE CALDA (l/ha) DENOMINAO Alto volume (AV) Mdio volume (MV) Baixo volume (BV) Muito baixo volume (MBV) Ultra baixo volume (UBV) PEQUENO PORTE mais de 600 200 a 600 50 a 200 5 a 50 at 5 PORTE ARBREO mais de 1.000 500 a 1.000 200 a 500 50 a 200 at 50
Outra observao importante diz respeito forma de aplicao e do tipo de equipamento utilizado nos povoamentos adultos que podem exigir pulverizadores canho, termonebulizadores ou mesmo aplicao area. Em povoamentos jovens, viveiros e jardins clonais possvel a utilizao de pulverizadores costais manual ou motorizado, barra de pulverizao ou irrigao manual ou por equipamentos. 2.1. Defensivos agrcolas Os defensivos agrcolas podem ser agrupados segundo seu modo de ao ou princpio de controle envolvido em: protetores ou residuais de folhas; erradicantes ou de contato para parte area; erradicantes para tratamento do solo; fungicidas residuais ou de contato para tratamento de sementes; fungicidas curativos sistmicos e fungicidas
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residuais ou de contato para tratamento ps-colheita. Este ltimo grupo est mais relacionado com a atividade agrcola, pois na atividade florestal o tratamento de madeira estudado em tecnologia da madeira, com uso de substncias preservativas. Quanto ao seu desenvolvimento e origem qumica, os fungicidas podem ser agrupados em primeira, segunda e terceira gerao. A tabela 11 apresenta alguns produtos, respectivos grupos qumicos e substncias qumicas.
TABELA 11 - Algumas substncias qumicas utilizadas como fungicidas quanto sua gerao e grupo qumico. GERAO Primeira GRUPO QUMICO base de enxofre Cpricos base de estanho e outros Ditiocarbamatos Segunda Guanidinas Nitrogenados heterocclicos Produtos aromticos
e classificados
SUBSTNCIA QUMICA Enxofre Sulfato de cobre, oxicloreto de cobre, hidrxido de cobre e xidos cuprosos Binapacril, curzate, dithianon, iprodione, sumilex, vinclozolin, entre outros Ferban, mancozeb, maneb, propineb, thiram, zineb e ziram Dodine Captafol, captan e folpet Bifenil, clorotalonil, dicloran, dinocap, fenaminosulf, hexaclorobenzeno, PCNB ou quintozene, pentaclorofenato de sdio, e outros Cloranil e diclone Metalaxyl Benomyl, carbendazim, thiabendazol, tiofanato metlico, entre outros Carboxim Imazalil Dodemorph e tridemorph Ediphenphos, kitazim e pirazophos A.L., chloroneb, efosite, entre outros Triforine Dimethirimol, ethirimol, entre outros Triadimefon
Quinonas Acilalanina Benzimidazole Carboximida Imidazole Morfolina Organo-fosforados Outros grupos Piperazim Pirimidina Triazole
Terceira
Alm desses fungicidas necessrio relatar alguns nematicidas seu princpio ativo e nome comercial alm de alguns antibiticos utilizados como bactericidas e outros que so utilizados como fungicidas, apresentados na tabela 12. 2.2. Rtulo dos defensivos agrcolas As informaes mnimas que devem conter o rtulo das embalagens dos defensivos agrcolas so definidas por legislao especfica do Ministrio da Agricultura.
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TABELA 12 - Princpio ativo e nome comercial de alguns nematicidas e alguns antibiticos utilizados como bactericidas e fungicidas. TIPO DE PRODUTO Nematicidas PRINCPIO ATIVO Aldicarb Carbofuram Dazomet Fensulfothion Bactericidas Estreptomicina Tetraciclina Ciclohexamida Fungicidas Blasticidina-S Kasugamicina NOME COMERCIAL Temik Furadan Basamid G Dasanit, terracur P Distreptine 20 Aureomicina, terramicina Actidione PM Bla-S Kasumim
O rtulo deve conter os nomes tcnico e comercial do produto e seu ingrediente ativo, tambm denominado nome qumico ou composio, com a respectiva quantidade, normalmente expressa em porcentagem. Quase sempre os nmeros apresentados com o nome comercial indicam a composio do ingrediente ativo. Por exemplo: delsene 750 indica que existe 750 g de carbendazim em cada quilograma do produto comercial ou 75% de princpio ativo; orthodifolatan 50 indica que o produto comercial tem 50% de princpio ativo ou 500 g do princpio ativo em cada quilograma do produto comercial. A classificao do produto tambm aparece no rtulo especificando se trata de um fungicida, fungicida sistmico, herbicida, inseticida, nematida, acaricida, entre outros; tambm aparece a indicao do tipo de formulao apresentada: p seco (PS), p molhvel (PM), lquido, entre outros; bem como a indicao a classe toxicolgica, detalhada na tabela 13, a seguir:
TABELA 13 - Denominao, cor da faixa e equipamento obrigatrio de acordo com a classe toxicolgica dos defensivos agrcolas. CLASSE
I II III IV
DENOMINAO
Altamente txico Medianamente txico Pouco txico Praticamente atxico
COR DA FAIXA
Vermelha Amarela Azul Verde
EQUIPAMENTO OBRIGATRIO
mscara, culos, luvas, chapu, botas, macaco com mangas compridas e avental impermevel mesmo da classe I mesmo da classe I, podendo dispensar culos e avental impermevel mesmo da classe III
Ainda aparecem no rtulo outras informaes como: prazo de validade para aplicao, quantidade contida na embalagem, empresa que produz ou comercializa o produto que, na maioria das vezes esto na frente da embalagem.
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Na parte posterior da embalagem normalmente encontram-se as instrues de uso, indicao de culturas, respectivas doenas e doses, forma e intervalo de aplicao e volume de calda a ser utilizado, expresso por hectare. Tambm podem aparecer informaes acerca da limitao de uso, precaues no manuseio, perodo de carncia, bem como sintomas, antdotos e cuidados no caso de intoxicao. Estes produtos txicos podem penetrar via oral, por ingesto; via respiratria, por inalao; via drmica, atravs da pele ou provocar irritaes externas, entre outros. Para isto existe o seguinte equipamento de segurana para proteo: mscara, culos, luvas, chapu, botas, macaco com mangas compridas e avental impermevel. A restrita obedincia s indicaes dos rtulos de responsabilidade exclusiva do tcnico que faz a prescrio tcnica, lembrando que prescries inadequadas podem implicar em sanes civis, no caso de prejuzo ao proprietrio ou ao trabalhador rural, sanes penais, no caso de morte, sanes trabalhistas, no caso de utilizao de mo-deobra imprpria ou descumprimento da legislao trabalhista e, cumulativamente ou no, sanes ticas se o profissional infringir ao Cdigo de tica do Engenheiro. 2.3. Receiturio florestal O receiturio florestal o documento tcnico-legal para se efetuar as prescries tcnicas ou seja, a indicao de produtos qumicos com princpios txicos para controle de doenas de espcies florestais. O receiturio florestal foi institudo pela Portaria n. 238 de 1. de setembro de 1982 do Ministrio da Agricultura, em consonncia ao receiturio agronmico institudo em 13 de janeiro de 1981 atravs da Portaria n. 07 do mesmo Ministrio, que deve ser tambm utilizado pois ali constam os detalhes tcnicos operacionais para tal instrumento. Desde que o profissional atenda s disposies mnimas contidas na Portaria n. 07, ele mesmo poder confeccionar seu prprio talo de receiturio. De qualquer forma, os Conselhos Regionais de Engenharia, Arquitetura e Agronomia, CREAs, em suas respectivas jurisdies, tambm podem fornecer blocos de receiturio j vinculados Anotao de Responsabilidade Tcnica, ART, para facilitar esta atividade ao profissional e da prpria fiscalizao; a Empresa de Pesquisa, Assistncia Tcnica e Extenso Rural de Mato Grosso, EMPAER, tambm utiliza modelo prprio para seus extensionistas. Segundo esta legislao o receiturio deve conter: (a) informaes do requerente e do problema fitossanitrio, como: espcie afetada, rea total plantada e a tratar, alm do diagnstico; (b) informaes do tratamento, como: nome tcnico e dose do produto para o diagnstico efetuado, quantidade total a ser adquirida, nmero, forma e intervalo entre cada aplicao, quantidade de calda em litros por hectare, equipamento envolvido e condies de aplicao; (c) recomendaes, como: carncia, classe toxicolgica, toxidade, equipamento de proteo e cuidados operacionais e, finalmente, (d) informaes do profissional, como nome, formao, endereo e registro do profissional junto ao CREA da jurisdio competente. Na indicao do produto deve ser sempre utilizado o nome tcnico e suas respectiva dosagem, podendo ser citado o nome comercial, mas sempre aps o nome tcnico, tomando-se o cuidado para no confundir a dosagem do princpio ativo, PA, com a dosagem das embalagens, normalmente expressa para o produto comercial, PC.
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No verso do receiturio podem ser impressos de forma complementar as medidas de preveno de acidentes, primeiros socorros, medidas de proteo ambiental e, se for o caso, telefones e endereos para emergncias. O Relatrio dirigido, ao final deste roteiro, apresenta um modelo genrico de receiturio, observando-se que as discriminaes contidas no item tratamento so apenas para orientao didtica, no devendo constar do modelo definitivo. O receiturio deve ser confeccionado em, pelo menos, quatro vias sendo a primeira para o requerente, a segunda e terceira vias ficam na empresa que comercializa os produtos e a ltima via no bloco do profissional. Das duas vias que ficam para o comerciante, uma seu comprovante e a outra fica disponvel para os rgos de fiscalizao do estado ou da fiscalizao da atividade profissional. Os receiturios devem ser numerados seqencialmente. O estado de Mato Grosso j possui legislao especfica sobre o assunto, atravs da Lei 1.011aprovada e sancionada em janeiro de 1984 que trata da comercializao desses produtos, dando competncia de fiscalizao s Secretarias de Agricultura e da Sade. Nas tabelas 14 a 20 so apresentadas informaes de alguns agrotxicos que podem ser utilizados para controle de doenas em espcies florestais, segundo indicaes de FERREIRA (1989) e GASPAROTTO et al. (1990).
3. PROCEDIMENTOS Examinar os rtulos dos produtos qumicos em aula prtica e identificar cada uma das informaes ali contidas. Examinar os modelos de receiturios e aprender seu correto conhecimento, efetuando inicialmente os clculos dos problemas propostos.
4. RESULTADOS Resolver os problemas propostos em sala de aula e aps a correta execuo dos clculos apresentar o seu receiturio preenchido, no modelo do prprio relatrio. Apresentar uma lista com cinco defensivos agrcolas que podem ser utilizados na rea florestal, tipo de utilizao, preo por embalagem e o nome da loja em que este levantamento foi efetuado.
5. QUESTES COMPLEMENTARES 1. Quantas gramas de um fungicida com 75% de cobre metlico deve ser misturado com 20 litros de gua, sabendo-se que este produto recomendado para pulverizaes a 0,3% do princpio ativo ? Como ser indicada a mesma dosagem se for tomado por base o produto comercial? 2. Qual a legislao pertinente ao Engenheiro Florestal que for trabalhar em Mato Grosso e necessitar fazer prescries tcnicas?
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3. No mercado existe o produto comercial Coprantol com 50% de oxicloreto de cobre e a recomendao de se utilizar 1.250 g do princpio ativo em 1.000 litros de gua. Para tratar 2.000 m2 de canteiros com pulverizao a mdio volume, qual ser o volume de calda e a quantidade do produto comercial necessrios para trs aplicaes? 4. Qual a diferena entre os produtos qumicos denominados de fungicidas de primeira, segunda e terceira gerao? 5. Utilizando-se um pulverizador com 20 litros de capacidade quantas gramas do produto comercial Kumulus, enxofre PM, voc dever utilizar se a dosagem recomendada de 0,2%. Se toda rea a tratar de 2.500 m2 e a pulverizao for a baixo volume, quais sero os volume mnimo e mximo de calda com os respectivos consumos do produto comercial? 6. Qual a importncia de se utilizar o receiturio florestal e quais so as implicaes do uso incorreto desta indicao tcnica? 7. Para se utilizar Benomyl na dosagem de 0,35% do princpio ativo para mudas em viveiro, qual a quantidade do produto comercial com 75% de princpio ativo dever ser gasta para preparar 600 litros de calda ? Quais sero as reas mnimas e mximas que podero ser tratadas se a pulverizao for efetuada a mdio volume ? Se a aplicao for mudada para irrigao na proporo de 1 l/m2 qual o tamanho da rea que poder ser tratado com este mesmo volume de calda? 8. Quais so os principais sintomas de fitotoxidez que podem ser observados na aplicao de defensivos agrcolas e como possvel diminuir seus efeitos? 9. Um viveiro produz 300.000 mudas/ano, com tempo mdio de 100 dias e apenas 30 dias favorveis ocorrncia de tombamento. O processo de produo de semeadura direta de trs sementes por embalagem e a espcie apresenta 1.200 sementes/kg. Utilizando-se embalagens que ocupam cerca de 150 cm2 e rendimento mdio operacional de apenas 75%, em funo da doena, solicita-se: (a) citar dois produtos que podem ser utilizados para tratamento das sementes e outros dois para pulverizaes preventivas dos canteiros com os respectivos preos e doses; (b) calcular o custo de aplicao de cada um dos produtos, de acordo com o nmero de aplicaes necessrias para os 30 dias favorveis doena; (c) qual ser a melhor combinao desses produtos para tratar as sementes e para tratar as mudas ? (d) supondo-se que cada muda vendida por R$0,20 qual ser o prejuzo sem qualquer tipo de tratamento? 10. O que significa dose letal ou DL-50 e qual a relao desta informao com a toxidade dos produtos utilizados como defensivos agrcolas?
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Data:
Subturma:
NOME DO PROFISSIONAL OU DA EMPRESA (Endereo completo) RECEITURIO FLORESTAL N. .... Interessado: Endereo completo: Espcie florestal: Diagnstico: reas total e a ser tratada:
Tratamento:
Carncia: Toxidade: Observaes:
Classe toxicolgica:
Local e data Assinatura Nome do profissional Formao profissional e CREA
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TABELA 14 Dose e agrotxicos para controle qumico de doenas do Cacau (Theobromae cacao). DOENA Antracnose Podrido parda Rubelose Vassoura-de-bruxa PATGENO Colletotrichum gloeosporioides Phytophthora spp. Corticium salmonicolor Crinipellis perniciosa AGROTXICO Cxicloreto de cobre Mancozeb Vide observao Oxicloreto de cobre Vide observao FORMA DE APLICAO, DOSE E OBSERVAO Pulverizao semanal, 600 l/ha a 0,2 a 0,4% Pulverizao quinzenal, 600 l/ha a 0,15 a 0,3% Mesma indicao dada para antracnose Pulverizao semanal, 600 l/ha de 2,5 a 3,0kg/ha Mesma indicao dada para rubelose
TABELA 15 Dose e agrotxicos para controle qumico de doenas do Eucalipto (Eucalyptus spp.). DOENA Doena rosada Ferrugem Mancha foliar em mudas Podrido basal Podrido de estacas em casa de vegetao PATGENO Corticium salmonicolor Puccinia psidii Botrytis sp., Hendersonula sp. Diplodia sp. e outros Sclerotium rolfsii Cylindrocladium Crotalariae AGROTXICO Oxicloreto de cobre Oxicloreto de cobre Maneb Captan Captafol Tiofanato metlico Brometo de metila Benomyl (benlate) FORMA DE APLICAO, DOSE E OBSERVAO Pulverizao semanal, 600 l/ha a 0,2% nas chuvas Pulverizao semanal, 600 l/ha a 0,15 a 0,25% Pulverizao semanal, 600 l/ha a 0,18 a 0,3% Pulverizao a cada 3 a 5 dias, 500 l/ha a 0,2 a 0,25% Pulverizao semanal, 500 l/ha a 0,2 a 0,25% nas mudas Pulverizao semanal, 500 l/ha a 7,0 a 10,0% nas mudas Fumigar o solo do canteiro com 20 a 40 cc/m2 Irrigar o porta-estacas 5 dias antes da coleta e antes do plantio passar a base da estaca em calda a 0,035% Imergir estacas por 1 minuto antes do plantio em soluo a 10%
Captan + PCNB + thiran Pulverizao semanal, 400 l/ha a 0,05 + 0,075 + 0,07%
Hipoclorito de sdio
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TABELA 16 Dose e agrotxicos para controle qumico de doenas do Ip (Tabebuia spp.). DOENA Ferrugem Mancha foliar Podrido de estacas em casa de vegetao PATGENO Prospodium tecomicola Corynespora casiicola Cylindrocladium crotalariae AGROTXICO Oxicloreto de cobre Benomyl Benomyl FORMA DE APLICAO, DOSE E OBSERVAO Pulverizao a cada 4 a 7 dias de 600 l/ha a 0,18 a 0,3% Pulverizao quinzenal de 200 a 400 l/ha a 0,03 a 0,035% Irrigar o porta-estacas 5 dias antes da coleta e antes do plantio passar a base da estaca em calda a 0,035% Imerso das estacas, 1 minuto antes do plantio em soluo a 10%
Hipoclorito de sdio
TABELA 17 Dose e agrotxicos para controle qumico de doenas do Pinheiro (Pinus spp.). DOENA Queima das acculas Queima das acculas PATGENO Cylindrocladium pteridis Dothistroma pini AGROTXICO Ferban Zineb Oxicloreto de cobre FORMA DE APLICAO, DOSE E OBSERVAO Pulverizar 2 vezes por semana 600 l/ha a 0,15 a 0,3% Pulverizar 2 vezes por semana 600 l/ha a 0,25 a 0,3% Pulverizar 2 vezes no perodo chuvoso 600 l/ha a 0,2 a 0,5%
TABELA 18 Dose e agrotxicos para controle qumico de doenas de plantas ornamentais. DOENA Oidiose PATGENO Oidium sp. AGROTXICO Enxofre Tiofanato metlico Manchas foliares Botrytis sp., e outros Tiofanato metlico FORMA DE APLICAO, DOSE E OBSERVAO Pulverizao semanal de 500 l/ha a 0,2 a 0,5% (controla caro) Pulverizar a cada 7 a 10 dias 700 a 800 l/ha a 0,07% Pulverizar a cada 7 a 10 dias 700 a 800 l/ha a 0,07%
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TABELA 19 Dose e agrotxicos para controle qumico de doenas da Seringueira (Hevea spp.). DOENA
Mal das folhas
PATGENO
Microcyclus ulei
AGROTXICO
Benomyl a 0,1% Triadimefon a 0,12% Tiofanato metlico 0,15% Mancozeb a 0,4% Carbendazin a 0,12%
FORMA DE APLICAO, DOSE E OBSERVAO

- Viveiro e jardim clonal: pulverizao semanal nas chuvas e quinzenal na seca de 200 a 400 l/ha, nas doses indicadas. - Plantio com mais de 4 anos pulverizao semanal de 800 l/ha, nas doses indicadas, durante o reenfolhamento at a maturidade dos fololos, pulverizador tipo canho ou termonebulizadores. Pulverizao semanal de 500 a 800 l/ha a 0,3% Utilizar o produto a 0,12% Pulverizao semanal de 500 a 800 l/ha a 0,3% Utilizar o produto a 0,2% Pulverizao semanal de 500 a 800 l/ha a 0,3% Utilizar o produto a 0,3% Preventivo: pincelar ao ms e aps o corte; curativo: remover o tecido afetado e pincelar; desinfestar a faca em suspenso a 1% Preventivo: pincelar Benomyl 0,25% ou tiofanato metlico a 0,5%; Curativo: remover o tecido afetado, pincelar nas doses indicadas e desinfestar a faca com Benomyl a 0,5% aps cada corte Remover os tecidos afetados e pincelar soluo a 2% at 30 cm alm do ferimento Remover os tecidos afetados e pincelar soluo a 0,3% Remover os tecidos afetados e pincelar soluo a 0,3% com caiao no caule de todas as plantas Misturar 10% do produto com 85% de piche e 5% de querosene e pincelar as razes remanescentes Misturar 20% do produto com 75% de piche e 5% de querosene e pincelar as razes remanescentes
Mancha aureolada Requeima Antracnose Cancro do painel Mofo cinzento
Thanatephorus cucumeris Phytophthora spp. Colletotrichum gloeosporioides Phytophthora spp. Ceratocystis fimbriata
Oxicloreto de cobre Triadimefon Oxicloreto de cobre Captafol Oxicloreto de cobre Clorotalonil Captafol a 2% Benomyl a 1,0% Thiabendazole a 1,25% Tiofanato metlico a 0,7%
Rubelose Cancro do enxerto e podrido da casca Escaldadura Podrido vermelha e Podrido parda Podrido branca
Corticium salmonicolor Lasiodiplodia theobromae
Tridemorph Oxicloreto de cobre Oxicloreto de cobre
Ganoderma philippii e Phellinus noxius Rigidoporus lignosus
Tridemorph PCNB a 75%
PATOLOGIA FLORESTAL
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PRESCRIO TCNICA
TABELA 20 Dose e agrotxicos para controle qumico de doenas de outras espcies florestais. DOENA Tombamento de mudas de vrias espcies PATGENO Cylindrocladium scoparium, Rhizoctonia solani, Pythium spp. Fusarium spp. e outros AGROTXICO Brometo de metila FORMA DE APLICAO, DOSE E OBSERVAO Fumigar a sementeira com 20 a 40 cc/m2 ou fumigar o solo para embalagem com 150 cc/m3
PCNB Captan Benomyl Maneb ou zineb Lesan ou PCNB ou captan ou Lesan + PCNB Captan + PCNB + thiram
Irrigar 2 l/m2 de sementeira a 0,4% 24 horas antes da semeadura Irrigar 1 l/m2 de sementeira a 0,1% 24 horas antes da semeadura Pulverizao quinzenal do viveiro, quando necessrio, 0,2 a 0,3% Pulverizao semanal do viveiro, quando necessrio, 0,2 a 0,3% Tratar sementes, via seca, com 3 a 5 g/kg de semente; Pulverizao semanal de 200 a 400 l/ha a 0,3 a 0,5% Utilizar a mesma indicao dada para podrido basal causada por S. rolfsii em Eucalyptus spp. Para Cutieira, A. excelsa e outras, utilizar a mesma indicao apresentada para esta doena em Eucalyptus spp. Para Paineira e outras espcies, utilizar a mesma indicao apresentada para esta doena em Ip
Podrido de estacas em casa de vegetao Mancha foliar
Cylindrocladium crotalariae Corynespora casiicola
PATOLOGIA FLORESTAL
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BIBLIOGRAFIA
BIBLIOGRAFIA
AGRIOS, G. N. Plant Pathology. 2 ed. New York: Academic Press, 1978. 703p. ALEXOPOULOS, C. J. Introduccin a la Micologia. Buenos Aires: EUDEBA, 1966. 615p. ASSOCIAO BRASILEIRA DE ESTUDOS TCNICOS NA AGRICULTURA. Fungicidas. So Paulo: ABETA, 1974. 108p. BAKSHI, B. K. Mycorrhiza and its role in Forestry. India: Forest Research Institute and Colleges, 1974. 89p. BARNETT, H. L. & HUNTER, B. B. Illustrated genera of imperfect fungi. 3th ed. Minneapolis: Burgess Publishing Co., 1972. 241p. BERGAMIM FILHO, A.; KIMATI, H. & AMORIM, L. Eds. Manual de Fitopatologia. Princpios e conceitos. Vol. I, 3 ed. So Paulo: Agronmica Ceres, 1995. 919p. BRASIL, MINISTRIO DA AGRICULTURA. Catlogo dos defensivos agrcolas. 2 ed. Braslia: Diviso de Produtos Fitossanitrios, 1980. 427p. BRATHWAITE, C. W. D. An introduction to the diagnosis of plant disease. San Jos, Costa Rica: IICA, 1981. 39p. CARNEIRO, J. S. Teste de sanidade de sementes de essncias florestais. In: Patologia de Sementes. Campinas, SP: Fundao Cargill, 1987. 386-94p. CARNEIRO, J. G. A. Doenas de viveiro florestal. Curitiba: Faculdade de Florestas, 1972. [s.p.]. [mimeografado]. CHAVES, G. M. Roteiro de aulas prticas de Fitopatologia I. Viosa: CEAPUL-UFV, 1973. 58p. [mimeografado]. COMMONWEALTH MYCOLOGICAL INSTITUTE. Cambrian News Ltd., 1983. 439p. FERREIRA, F. A. Patologia Florestal. Principais doenas florestais no Brasil. Viosa: Sociedade de Investigaes Florestais, 1989. 570p. FERREIRA, F. A. & ALFENAS, A. C. Roteiros de aulas prticas de Patologia Florestal. Viosa: Departamento de Fitopatologia-UFV, [s.d.]. [s.p.]. [mimeografado]. FOSCO MUCCI, E. S. & SHIMURA YOKOMIZO, N. K. Aspectos fitossanitrios e de controle de doenas florestais. Bol. Tecn. do Inst. Florestal, So Paulo, 32:1-23, 1979. Plant Pathologists pocketbook. England: Manual de
PATOLOGIA FLORESTAL
93
BIBLIOGRAFIA
FRENCH, E. R. & HEBERT. T. T. Mtodos de investigacin fitopatologica. San Jos, Costa Rica: IICA, 1980. 289p. GALLI, F. Manual de fitopatologia. Doenas das plantas cultivadas. Vol. II, 2 ed. So Paulo: Agronmica Ceres, 1980. 587p. GASPAROTTO, L; FERREIRA, F. A.; LIMA, M. I. P. M.; PEREIRA, J. C. R. & SANTOS, A. F. dos. Enfermidades da seringueira no Brasil. Manaus: EMBRAPA-CPAA, 1990. 169P. GINSON, I. A. S. & SALINAS-QUINARD, R. GONZALEZ, L. C. Notas sobre enfermedades forestales y su manejo. Mxico: INIF, 1985. 196p. Boletn tcnico no. 106. Introduccin a la Fitopatologa. San Jos, Costa Rica: Instituto Interamericano de Ciencias Agrcolas, 1979. 148p. GUERRA, M. de S. Receiturio caseiro: alternativa para o controle de pragas e doenas de plantas cultivadas e de seus produtos. Braslia: EMBRATER, 1985. 166p. HAWKSWORTH, D. L.; SUTTON, B. C. & AINSWORTH, G. C. Ainsworth & Bisbys Dictionary of the Fungi. 7TH ed. Surrey: Commonwealth Mycological Institute, 1983. 445p. KIMATI, H.; SOAVE, J.; ESKES, A. B.; KUROZAWA, C.; BRIGNANI NETO, F. & FERNANDES, N. G. Guia de fungicidas agrcolas. Piracicaba: Livroceres, 1986. 281p. LORDELLO, L. G. E. 200p. ROMEIRO, R. G. Bactrias Fitopatognicas. Viosa: Imprensa Universitria-UFV, 1973. 33p. [mimeografado]. SILVEIRA, V. D. Lies de Micologia. Rio de Janeiro: Ed. Jos Olympio, 1968. 301p. STREETS, R. B. The diagnosis of plant diseases. Tucson, Arizona: The University of Arizona Press, 1969. [s.p.]. TUITE, J. Plant Pathological Methods. Minneapolis: Burgess Publishing Co., 1970. 239p. UNION CARBIDE DO BRASIL LTDA. Os nematides e seu controle pelo Temik. So Paulo: Union Carbide, [s.d.]. 28p. UNIVERSIDADE FEDERAL DE VIOSA. Roteiros de aula prtica de Microbiologia. Viosa: CEAPUL-UFV, [s.d.]. 35p. [mimeografado]. UNIVERSIDADE FEDERAL DO PARAN. Fitopatologia Florestal. Curitiba: Colpasca, [s.d.]. [s.p.]. [mimeografado]. VIANA, F. M. P. & MOREIRA, M. I. P. Recomendaes para o envio de material para exame fitopatolgico. Porto Velho: EMBRAPA-UEPAE, 1984. 12p. Circular Tcnica no. 07. VIGAS, A. P. Dicionrio de Fitopatologia e Micologia. Campinas: Instituto Agronmico, 1979. 882p. Nematides das plantas cultivadas. 4 ed. So Paulo: Nobel, 1977.
PATOLOGIA FLORESTAL
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Apostila PatologiaFlorestal Caldeira1999

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UNIVERSIDADE FEDERAL DE MATO GROSSO FACULDADE DE ENGENHARIA FLORESTAL DEPARTAMENTO DE ENGENHARIA FLORESTAL

SIDNEY FERNANDO CALDEIRA

minha mulher e filhos, pela pacincia. A voc, leitor, pela ateno.

INTRODUO ATIVIDADE LABORATORIAL

INTRODUO ATIVIDADE LABORATORIAL

INTRODUO ATIVIDADE LABORATORIAL

INTRODUO ATIVIDADE LABORATORIAL

INTRODUO ATIVIDADE LABORATORIAL

INTRODUO ATIVIDADE LABORATORIAL

RELATRIO DE AULA PRTICA N. 01 Aluno(a):

] = Se o fato ocorreu, marque com um x e procure detalhar da melhor forma.

[ ]em planta isolada; [ ]ocorrncia anterior:

[ ]Remessa anterior ao laboratrio: observaes: data da coleta: / / coletor:

FIGURA 1 - Maneira correta para depositar a lamnula sobre a lmina.

FIGURA 2 - Disposio das etiquetas e informaes para identificao.

Estruturas observadas: Lmina n.: Abs. X ord.: Ampliao:

FIGURA 3 - Conidiforo e micrmetro ocular, MO.

RELATRIO DE AULA PRTICA N. 03 Aluno(a):

3. CLCULO DA DIMENSO DAS ESTRUTURAS QUADRO DE RESULTADOS Estrutura 1. 2. CM Leitura Tamanho

FIGURA 5 Seqncia da tcnica de induo da esporulao

FIGURA 6 Seqncia da tcnica de induo do crescimento micelial

FIGURA 7 Seqncia da tcnica de induo de diluio.

FIGURA 8 Seqncia da tcnica de armadilha.

FIGURA 9 Esquema da tcnica de fluxo bacteriano

FIGURA 10 Esquema da tcnica de diluio.

FIGURA 12 Seqncia da tcnica de peneiramento mido.

FIGURA 13 Seqncia da tcnica de centrifugao em suspenso de sacarose.

Estruturas observadas: Lmina n.: Abs. X ord.: Ampliao:

FIGURA 14 Seqncia da tcnica de aplicao direta de miclio em folha e em colo de mudas.

FIGURA 15 Seqncia da atomizao com suspenso de esporos ou miclio em folhas.

FIGURA 16 Seqncia da tcnica de injeo em tecido lenhoso.

FIGURA 17 Seqncia da tcnica de infestao do solo com inculo.

FIGURA 18 Seqncia da tcnica de imerso de razes em suspenso aquosa de inculo.

RELATRIO DE AULA PRTICA N. 05 Aluno(a):

Perodo de incubao: Observaes:

FUNGOS INFERIORES - MASTIGOMYCOTINA E ZYGOMYCOTINA

FUNGOS INFERIORES - MASTIGOMYCOTINA E ZYGOMYCOTINA

FUNGOS INFERIORES - MASTIGOMYCOTINA E ZYGOMYCOTINA

Eumycota (fungos verdadeiros)

2. Zygomycotina 3. Ascomycotina 4. Basidiomycotina

FUNGOS INFERIORES - MASTIGOMYCOTINA E ZYGOMYCOTINA

FUNGOS INFERIORES - MASTIGOMYCOTINA E ZYGOMYCOTINA

parasitas de fungos e nematides

FUNGOS INFERIORES - MASTIGOMYCOTINA E ZYGOMYCOTINA

FUNGOS INFERIORES - MASTIGOMYCOTINA E ZYGOMYCOTINA

FUNGOS INFERIORES - MASTIGOMYCOTINA E ZYGOMYCOTINA

FUNGOS INFERIORES - MASTIGOMYCOTINA E ZYGOMYCOTINA

Estruturas observadas: Lmina n.: Abs. X ord.: Ampliao:

FUNGOS SUPERIORES - ASCOMYCOTINA

FUNGOS SUPERIORES - ASCOMYCOTINA

FUNGOS SUPERIORES - ASCOMYCOTINA

FUNGOS SUPERIORES - ASCOMYCOTINA

FUNGOS SUPERIORES - ASCOMYCOTINA

saprfitas de madeira e caule de herbceas

FUNGOS SUPERIORES - ASCOMYCOTINA

FUNGOS SUPERIORES - ASCOMYCOTINA

FUNGOS SUPERIORES - ASCOMYCOTINA

FUNGOS SUPERIORES - ASCOMYCOTINA

FUNGOS SUPERIORES - ASCOMYCOTINA

FUNGOS SUPERIORES - ASCOMYCOTINA

FUNGOS SUPERIORES - ASCOMYCOTINA

Estruturas observadas: Lmina n.: Abs. X ord.: Ampliao:

Material 2: Subdiviso: Classe: Ordem: Famlia: Gnero: Espcie: