CAPTULO 4 GENTICA BACTERIANA

INTRODUCCIN La informacin gentica en bacterias est codificada en la molcula de cido desoxirribonucleco, ADN, cuya propiedad de replicacin es esencial para la herencia de todos los rasgos genticamente determinados (genotipo y !ue en su con"unto definen las caractersticas obser#ables del microorganismo (fenotipo $ %ste captulo entregar al alumno los elemento bsicos relacionados con la organi&acin de la informacin gentica en las bacterias, su relacin con rasgos fenotpicos de inters mdico (factores de #irulencia y resistencia a antibiticos , as como, los mecanismos por los cuales estos organismo procariticos pueden ad!uirir #ariabilidad gentica$ NATURALEZA DEL MATERIAL HEREDITARIO EN BACTERIAS La molcula de ADN, corresponde a un polmero de cido nucleico, cuya unidad es el nucletido$ 'ada nucletido posee un grupo fosfato, una a&(car desoxirribosa y una base nitrogenada purina o pirimidina$ Las purinas son adenina (A y guanina () , mientras !ue las pirimidinas corresponden a timina (* y citocina (' $ Los nucletidos se unen uno a uno a tra#s de un enlace co#alente llamado unin fosfodiester, en la !ue un grupo +,-hidroxilo de un nucletido se une al grupo .,-fosfato del nucletido adyacente$ %sta unin fosfodiester asimtrica define la polaridad de la cadena polinucleotdica$ %l ADN es una molcula de doble hebra, con forma helicoidal, donde las dos hebras en la hlice son antiparalelas$ La doble hlice se encuentra estabili&ada por uniones dbiles del tipo puente de hidrgeno, entre una base purina y otra pirimidina, en hebras opuestas$ %n cada posicin del ADN, la adenina se aparea por dos puentes de hidrgeno a timina en la hebra opuesta, mientras !ue guanina se aparea por tres puentes de hidrgeno a una citocina$ /or lo tanto, las dos hebras de la doble hlice son complementarias$ Debido a esta complementaridad, la doble hebra de ADN contiene cantidades e!uimolares de purinas (A0) y pirimidinas (*0' , con igual cantidad de A y *, como ) y '$ 1in embargo, la fraccin molar de )0' en el ADN puede #ariar entre las diferentes especies de bacterias$ %l ADN posee dos funciones esenciales en los microorganismos, la replicaci ! la e"pre#i $

;< 3iologa de los microorganismos

Replicaci $ Durante la replicacin, cada hebra de la doble hlice sir#e como templado para la sntesis de una hebra complementaria$ 'ada nue#a molcula de doble hebra de ADN debe contener, por lo tanto, una hebra polinucleotdica #ie"a y una hebra recientemente sinteti&ada$ %ste tipo de replicacin del ADN se denomina semiconser#ati#a$ /or otro lado, la replicacin del ADN cromosomal en bacterias comien&a en un sitio especfico llamado origen y se reali&a bidireccionalmente hasta !ue el proceso se completa$ De este modo, cuando una bacteria se di#ide por fisin binaria, luego de haber completado la replicacin de su ADN, cada clula hi"a hereda un genoma replicado$ E"pre#i $ La informacin gentica codificada en el ADN se expresa a tra#s de la sntesis de otro cido nucleico, el A2N y protenas$ La sntesis de A2N, dependiente del ADN, se denomina transcripcin, mientras !ue la sntesis de las protenas a partir del A2N se llama traduccin$ La direccin del flu"o de informacin entre estas molculas esta definido por el Dogma de la 3iologa 4olecular (5igura 6-7 $

ADN

ARN
re+r*-ir'#

pr*+e, a
ARN -ir'#

%i&'ra 4()$ Dogma central de la biologa molecular$ La expresin gnica en bacterias est regulada$ De esta forma el microorganismo se adapta rpidamente a la #ariacin de concentracin de nutrientes presentes en el ambiente !ue los rodea$ /ara ello, las bacterias poseen genes relacionados, agrupados estructuralmente en operones$ )enes relacionados pueden ser a!uellos !ue codifican para en&imas !ue participan en una #a metablica com(n$ 8n opern consiste de un solo promotor (secuencia reguladora de la transcripcin , genes agrupados (cistrones y de un terminador de la transcripcin$ De esta forma, los genes son transcritos coordinadamente en un A2N mensa"ero policistrnico, !ue luego ser traducido a protenas$ Las bacterias, regulan la expresin gnica a ni#el de la transcripcin y la traduccin$ A pesar de su importancia, ambos procesos no sern re#isados en este captulo, dado !ue lo concerniente a regulacin de la expresin fue abordado en el captulo de 5isiologa 3acteriana$ 1e debe mencionar !ue las bacterias poseen tambin ni#eles de regulacin superior al opern$ %stos constituyen el 1istema de 2egulacin )lobal, el !ue est constituido por los regulones9 un con"unto de operones asociados a una #a, funcin o proceso com(n, ba"o el control de la misma protena reguladora: los modulones9 un con"unto de operones relacionados a #as o funciones m(ltiples, !ue responden a una protena reguladora com(n: y

;=

)entica bacteriana ;@

los estimulones9 un con"unto de operones, regulones o modulones, !ue responden frente a una se>al ambiental com(n$ ORGANIZACIN GENTICA EN BACTERIAS La informacin heredable en bacterias est organi&ada en dos elementos genticos9 el cromosoide o genoma bacteriano y elementos extracromosmicos, como los plsmidos y bacterifagos$ %stos elementos, replicables como unidades genticas discretas, son llamados genricamente replicones$ Cr*.*#*i/e 0ac+eria *$ %l tama>o del genoma bacteriano #ara entre ?$6x7? @ a <$Ax7?@ dalton$ Los cromosoides ms pe!ue>os se encuentran en las bacterias parsitos obligados, tales como micoplasmas, mientras !ue los de mayor tama>o estn en bacterias capaces de una diferenciacin comple"a, tal como Myxococcus$ La cantidad de ADN en el genoma determina la cantidad mxima de informacin !ue puede codificar$ La mayora de las bacterias presentan un genoma haploide, de una molcula simple de ADN, con topologa circular$ 1in embargo, la bacteria )ram (- Borrelia burgdorferi, posee un cromosoide lineal, mientras !ue Agrobacterium tumefaciens cuenta con un cromosoide lineal y otro circular$ /or otro lado, continuando con las excepciones, existen bacterias cuyos genomas son diploides ( Leptospira interrogans e incluso triploides (Burkholderia cepacia $ %l cromosoide de Escherichia coli es de +x7?@ Da, 6.?? Bilobases (Bb , lo !ue supone una longitud de 7$+ mm, aproximadamente 7??? #eces el dimetro de la clula$ %sto se explica debido a !ue el ADN del cromosoide est superenrollado y altamente empa!uetado en el nucleoide bacteriano$ 1e estima !ue el genoma de E. coli codifica para alrededor de 6??? genes, !ue definen las caractersticas fenotpicas de esta bacteria$ %l tiempo re!uerido para la replicacin completa de este cromosoide es de alrededor de 6? min$

Pl1#.i/*#$ Los plsmidos son replicones !ue se mantienen en las bacterias como elementos genticos extracromosomales y discretos (5igura 6-; $ %n general son de menor tama>o !ue el cromosoide bacteriano entre . a #arias decenas de Bb, aun!ue plsmidos tan grandes como ; 4b pueden encontrarse en bacterias$ Los plsmidos normalmente codifican para rasgos fenotpicos no esenciales para la #iabilidad de la bacteria y se replican en forma independiente del cromosoide$ 'asi todos los plsmidos son molculas de doble hebra de ADN y circulares, aun!ue tambin se han reportado plsmidos lineales en Borrelia y Streptomyces$ Dos plsmidos estrechamente relacionados o idnticos no pueden ser mantenidos en forma estable dentro de un mismo hospedero bacteriano, por lo tanto son incompatibles$ mientras !ue plsmidos no relacionados pueden coexistir, dado !ue pertenecen a grupos de incompatibilidad diferentes$ La incompatibilidad !ueda establecida por la competencia de los factores (protenas del hospedero necesarios para la replicacin plasmidial$

+? 3iologa de los microorganismos

PBR322

ampR 444 50

tetR

ori

%i&'ra 4(2$ 2epresentacin de un plsmido tpico$ ori, origen de replicacin: ampR, gen de resistencia a ampicilina: tetR, gen de resistencia a tetraciclina$ 1e destacan sitios blancos de en&imas de restriccin$

De acuerdo a las caractersticas !ue pueden conferir a las bacterias !ue los portan, los plsmidos pueden ser clasificado como9 /lsmidos 29 /lsmidos col9 /lsmidos metablicos9 A!uellos !ue codifican para resistencia a antibiticos$ Los !ue expresan factores !ue act(an como bacteriocinas$ Los !ue portan los genes necesarios para el metabolismos de molculas comple"as$ /lsmidos de #irulencia9 /lsmidos !ue codifican para factores de #irulencia$ /lsmidos con"ugati#os9 A!uellos !ue tienen la informacin necesaria para promo#er su propia transferencia a otra bacteria receptora$ %l n(mero promedio de molculas de un plsmido particular por bacteria se denomina n(mero de copia$ /lsmidos mayores a 6? Bb son frecuentemente con"ugati#os y tienen un ba"o n(mero de copia (7 a 7? por bacteria $ %stos codifican para todas las funciones re!ueridas para su replicacin y particin en las clulas hi"as$ %n cambio, plsmidos menores !ue =$. Bb, normalmente no son con"ugati#os y tienen una alto n(mero de copias (entre ;? a .? por bacteria

)entica bacteriana +7

4uchos plsmidos controlan importantes propiedades patognicas de las bacterias patognicas, como la resistencia a los antibiticos, la produccin de toxinas y la sntesis de estructuras celulares de superficie re!ueridas para la adherencia o coloni&acin e in#asin$ /or e"emplo, toxinas representati#as, codificados por plsmidos, incluyen las enterotoxinas termo lbil y termo estable de E. coli, la toxina tetnica de Clostridium tetani y la toxina exfoliati#a de Staphylococcus aureus$ /or otro lado, un plsmido #irulento ha sido reportado en ersinia, en donde el elemento extracromosmico codifica para las protenas CDps re!ueridas en la in#asin de esta bacteria$

Bac+eri6a&*#$ Los bacterifagos (#irus bacterianos son agentes infecciosos !ue se replican como un parsito obligado en bacterias$ %l fago extracelular es metablicamente inerte y consiste principalmente de protenas mas cido nucleico (ADN o A2N $ Las protenas del fago protegen su material gentico (cpside $ %l genoma del fago puede #ariar de ; a ;?? Bb por hebra de ADN y su genoma puede ser una molcula de simple hebra o doble hebra$ 'omo ocurre en los plsmidos, los fagos codifican para las funciones necesarias para su replicacin en bacterias, pero adems, protenas de la cpside y protenas no estructurales re!ueridas para el ensambla"e del fago$ %xisten #arios tipos morfolgicos de fagos, los hay polihdricos, filamentosos y comple"os$ %stos (ltimos, tienen cabe&as polidricas a las cuales se une una cola y a #eces otros apndices$ %l paso inicial de la infeccin de un fago es la adsorcin de ste a receptores especficos en la superficie del hospedero bacteriano susceptible$ La cpside permanece en la superficie celular, y el genoma A2N o ADN entra en la clula blanco (penetracin $ %l genoma del fago es replicado para producir nue#as copias, y las protenas fago-especficas son expresadas$ %n la mayora de los fagos, el ensambla"e de la progenie ocurre en el citoplasma y la liberacin de esta ocurre por lisis celular$ 1in embargo, los fagos filamentosos son formados en la en#oltura celular y liberados con la muerte de la bacteria$ %l n(mero promedio de partculas #ricas producida dentro de cada hospedero es caracterstico de cada fago y frecuentemente #ara entre .? y #arios cientos$ Los fagos son clasificados en dos grandes grupos9 5agos #irulentos y fagos temperados$ %l ciclo de los fagos #irulento en bacterias susceptibles destruye la clula del hospedero$ %n cambio, los fagos temperados pueden seguir un ciclo ltico o lisognico$ %l ciclo ltico de los bacterifagos temperados y #irulentos es similar, terminando con la produccin de la progenie #rica y la muerte del hospedero bacteriano$ %l ciclo lisognico es un tipo especfico de infeccin #iral latente, en la cual el genoma del fago se replica como un profago dentro de la clula bacteriana$ %n la mayora de las bacterias lisognicas los genes re!ueridos para el ciclo ltico no son expresados$ %l estado fsico del profago no es idntico en todos los fagos$ /or e"emplo, el profago del bacterifago 7 en E. coli se encuentra integrado al cromosoide bacteriano, en un sitio especfico y se replica como parte de l, mientras !ue el profago /7 en E. coli se replica como un plsmido extracromosomal$ %n bacterias lisognicas, el profago puede acti#arse entrando al ciclo ltico$ %l estado ltico puede ser inducido en

+; 3iologa de los microorganismos

forma sincrnica cuando la bacteria lisognica es tratada con agentes !ue da>an el ADN (Lu& ultra#ioleta o mitomicina ' $ Algunos fagos temperados contienen genes para caracterstica bacterianas !ue no estn relacionados a ciclo ltico o estado lisognico$ La expresin de tales genes se denomina con#ersin del fago o con#ersin lisognica$ %"emplos de con#ersin lisognica importantes en la #irulencia bacteriana incluyen la produccin de la toxina de la difteria en Corynebacterium diphtheriae, la toxina eritrognica en Streptococcus pyogenes, toxina botulnica en Clostridium botulinum y las toxinas tipo-1higa en E. coli$ Los genes !ue codifican para estas toxinas estn presentes en el genoma del fago temperado$ /or otro lado, la especificidad de los antgenos D en Salmonella puede estar tambin controlado por la con#ersin lisognica$

OTROS ELEMENTOS GENTICOS EN BACTERIAS Adems de los plsmidos y bacterifagos, existen otros elementos genticos presentes en bacterias$ A diferencia de los primeros estos elementos no son capaces de replicarse en forma autnoma$ 1u mantencin en la bacteria depende de otro replicn, como el cromosoide bacteriano, plsmido o bacterifago$ %stos elementos son el transposn y los integrones$ Tra #p*# $ Los transposones son segmentos de ADN, los cuales pueden Emo#erseF desde un sitio en una molcula de ADN a otro sitio blanco en la misma o una diferente la molcula de ADN$ %l proceso se denomina transposicin y ocurre por un mecanismo independiente de la recombinacin generali&ada$ Los transposones son elementos genticos importantes ya !ue pueden causar mutaciones, mediar rearreglos cromosmicos, portar regiones de ADN de homologa gentica, y ad!uirir nue#os genes, los !ue pueden ser diseminados en la poblacin bacteriana$ La insercin de un transposn normalmente interrumpe la secuencia lineal de un gen y los inacti#a$ La mayora de los transposones comparten rasgos en com(n$ *odo transposn codifica las funciones necesarias para su transposicin, incluyendo una en&ima transposasa !ue interact(a con secuencias especficas en los extremos del transposn$ Durante el e#ento de transposicin, una corta secuencia de ADN es duplicada, y el transposn se inserta entre las secuencias repetidas directas$ %l tama>o de esta corta secuencia es #ariable y es caracterstica de cada transposn$ Algunos transposones pueden insertarse en casi cual!uier secuencia blanco, mientras !ue otros son altamente especficos$ 1e reconocen dos tipos de transposicin$ La excisin del transposn desde un sitio, para luego insertarse en otro sitio blanco se denomina transposicin no-replicati#a$ 1i el transposn en un sitio dador es replicado y una copia se inserta en el sitio blanco, el proceso se llama transposicin replicati#a$

)entica bacteriana ++

Los transposones en bacterias pueden ser separado en tres mayores clases (5igura 6-+ $ )7 1ecuencias de Gnsercin (G1 9 %stos elementos son simples en estructura y codifican slo para las funciones necesarias para la transposicin$ 1u tama>o #ara entre =<? a 7.?? pb, tienen repetidos in#ertidos cortos en sus extremos (7.-;. pb $ %l ADN entre los repetidos in#ertidos terminales contiene un gen de la transposasa, excepcionalmente dos$ Los transposones compuestos #aran en longitud de ;??? pb a 6???? bp y tienen secuencias de insercin en sus extremos, normalmente como repetidos in#ertidos$ %n bacterias de inters mdico, los transposones compuestos pueden portar genes !ue determinan la adhesin, produccin de toxinas y otros factores de #irulencia, as como genes de resistencia a uno o ms antibiticos$ /or e"emplo, los transposones *n. y *n7?, determinan la resistencia a Banamicina y tetraciclina, respecti#amente$ 27 *ransposones de la familia *nA9 %stos transposones poseen repetidos terminales in#ertidos de mayor tama>o !ue los transposones compuestos (+. a 6? pb y adems carecen de secuencias de insercin terminales$ *odos los miembros de este tipo de transposn codifica para la transposasa y otra en&ima la resol#asa$ Dos transposones de esta clase son *n+ (resistencia a ampicilina y *n7???, encontrados en el plsmido con"ugati#o 5$ 37 3acteriofago 4u y fagos temperados relacionados9 %l genoma completo de este elemento funciona como un transposn$ La replicacin del ADN del fago, durante el crecimiento #egetati#o, ocurre por transposicin replicati#a$ La integracin del profago puede ocurrir en diferentes sitios del cromosoide bacteriano y frecuentemente causa mutaciones$ /or esta ra&n 4u y los fagos relacionados son a #eces llamado fagos mutadores$ %xiste una cuarta clase de transposones, recientemente descubierta en bacterias )ram (0 $ 1on denominados transposones con"ugati#os$ %l transposn *n@7= pertenece a esta clase$ %stos transposones son totalmente diferentes de los descritos anteriormente$ %stos no generan duplicacin de las secuencias blancos en las cuales se inserta$ Adems, los transposones con"ugati#os, de forma similar a los plsmidos con"ugati#os, tienen la informacin necesaria para ser transferido de una bacteria a otra mediante el proceso de con"ugacin$ 1in embargo, a diferencia de la con"ugacin reali&ada por los plsmidos con"ugati#os, la con"ugacin por transposones con"ugati#os no necesita !ue las bacterias a con"ugar estn relacionadas estrechamente$ %stos transposones son los principales responsables de la diseminacin de resistencia en bacterias )ram (0 $

+6 3iologa de los microorganismos

1ecuencia de Gnsercin

Tra #p*#a#a

)
*ransposn compuesto (*n. G1.?L Tra #p*#a#a 2esistencia a Banamicina Hm G1.?2 Tra #p*#a#a

5amilia *n A (*n+

Tra #p*#a#a

Re#*l-a#a

Ap 2esistencia a ampicilina

5ago

Tra #p*#a#a

)enes 5ago (cabe&aIcola

%i&'ra 4(3$

'lases de transposones representati#os, integrados en el genoma bacteriano$ %l rectngulo con barras oblicuas representa la repetido terminales in#ertidos$ Las puntas de flecha en blanco corresponde al sitio de insercin del transposn, repetido en la misma orientacin$

I +e&r* e#$ %stos elementos genticos son importantes en la e#olucin de los transposones$ La primera indicacin de su importancia pro#ienen de la comparacin de los miembros de la familia *n;7 (5igura 6-6 $ Los integrones tienen en com(n repetidos in#ertidos en sus extremos y una gen !ue codifica para la en&ima integrasa$ %sta en&ima media la insercin de genes de resistencia a antibiticos (cassette gnicos en una secuencia especfica )**$ *odos los integrones poseen un promotor fuerte, denominado sitio /, !ue controla la expresin de los genes de resistencia integrados$ %n la 5igura 6-6, se muestran tres integrones, los cuales son similares, excepto !ue ellos tienen diferentes genes de resistencia a antibiticos, insertados exactamente en el mismo sitio /$ %l transposn Gn? no contiene ning(n gen de resistencia a antibitico en el sitio /, mientras !ue Gn+ tiene un gen para resistencia a trimethoprim en este sitio$ Gn;, el cual es realmente un transposn insertado dentro del *n;7, tiene un gen de resistencia a streptomicina y espectinomicina en el sitio /$

)entica bacteriana +.

GTT

GTT

89 p0

GTT 89 p0

%i&'ra 4(4$

Gntegrones de la familia *n;7$ IR, representa una secuencia repetida in#ertida de ;. pb: int, gen de la integrasa: sul1, resistencia a sulfonamida: dhfr, resistencia a trimetoprim: aadA , resistencia a estreptomicina y espectinomicina: GTT, 1itio de insercin del casset gnico de resistencia: 89 p0, elemento de .@ pb in#olucrado en los e#entos de recombinacin mediada por la integrasa: P:P27, promotor fuerte$

;ARIACIN GENTICA EN BACTERIAS A pesar !ue las bacterias se multiplican clonalmente, por fisin binaria, en las poblaciones bacterianas la existencia de #ariabilidad gentica es un hecho irrefutable$ %xisten bsicamente dos mecanismos por los cuales las bacterias ad!uieren #ariabilidad9 la mutacin y la transferencia gentica hori&ontal$ M'+aci* e#$ Las mutaciones son cambios heredables en el genoma$ Jstas pueden ocurrir en forma espontnea durante la replicacin, o ser inducidas por agentes mutagnicos !umicos (etilmetanosulfanato o fsicos (lu& ultra#ioleta $ Las mutaciones pueden causar cambios en las caractersticas fenotpicas de una bacteria y constituyen la fuente primordial de #ariabilidad gentica en todos los seres #i#os$ /ara !ue una mutacin se estable&ca en

+A 3iologa de los microorganismos

trminos poblacionales, debe conferir una me"or adaptacin de la bacteria a su entorno, de tal forma !ue ocurra seleccin positi#a del nue#o clon$ Las mutaciones son clasificadas sobre la base de los cambios estructurales !ue pueden ocurrir en el ADN$ Algunas mutaciones son locali&adas dentro de cortos segmentos de ADN (substituciones nucleotdicas, microdeleciones y microinserciones $ Dtras, en cambio, in#olucran grandes regiones del ADN e incluyen las deleciones, inserciones o rearreglos cromosmicos$ Tra #6ere cia <*ri=* +al /e i 6*r.aci &e >+ica$ La transferencia hori&ontal de informacin gentica pro#ee a las bacterias de un mecanismo de sexualidad$ La interaccin gentica entre los microorganismos permite !ue sus genomas e#olucionen mucho ms rpidamente !ue por el proceso de mutacin y seleccin (nicamente$ %l intercambio de informacin gentica entre bacterias ha tenido gran impacto en biomedicina, a tra#s de la emergencia y diseminacin de plsmidos de resistencia a antibiticos, #ariacin de fase flagelar en Salmonella y #ariacin antignica de antgenos de superficie en !eisseria y Borrelia$ La transferencia hori&ontal en bacterias in#olucra el intercambio de informacin gentica desde una clula dadora a otra clula recipiente$ La transformacin, transduccin y con"ugacin son procesos sexuales !ue utili&an diferentes mecanismos para introducir ADN donador en una bacteria recipiente$ Debido a !ue el ADN donador no puede persistir en la bacteria recipiente, a menos !ue sea parte de un replicn (plsmido, bacterifago , la recombinacin entre los genomas dador y recipiente es re!uerida frecuentemente para producir progenie hbrida estable$ Tra #6*r.aci $ %n la transformacin, las molculas de ADN pro#enientes desde la bacteria donadora son captadas directamente desde el ambiente extracelular por la bacteria recipiente$ La recombinacin ocurre entre las molculas simples del ADN transformante y el cromosoide bacteriano$ %l ADN transformante debe ser al menos de .?? pb y corresponde a fragmentos pe!ue>os del cromosoma bacteriano$ La transformacin fue descubierta primero en Streptococcus pneumoniae, pero puede darse en otros gneros de bacterias como "aemophilus, !eisseria, Bacillus y Staphylococcus$ La habilidad de la bacteria para captar ADN extracelular y llegar a ser transformada se denomina competencia y depende del estado fisiolgico de la bacteria$ %n algunas bacterias la captacin de ADN depende de la presencia de secuencias especficas en el ADN transformante ("aemophilus y !eisseria , mientras !ue en otros gneros no se re!uiere una secuencia especfica (Streptococcus pneumoniae $ La bacteria competente puede adems captar ADN intacto, como el presente en bacterifago (transfeccin o plsmidos, los cuales pueden replicarse como elementos extracromosmicos en la bacteria recipiente$

)entica bacteriana +=

Tra #/'cci $ %n la transduccin, los bacterifagos funcionan como #ectores para introducir ADN desde una bacteria dadora en una bacteria recipiente por infeccin$ /ara algunos fagos, llamados fagos de transduccin generali&ada, una pe!ue>a fraccin de los fagos producidos durante el ciclo ltico son aberrantes y contienen fragmentos aleatorios del cromosoide bacteriano, en lugar del ADN del fago$ 'ada fago transductante indi#idual puede transportar sets diferentes de genes estrechamente ligados, !ue representan un pe!ue>o segmento del genoma bacteriano$ La transduccin mediada por una poblacin de tales fagos es llamada transduccin generali&ada, debido a !ue cual!uier regin del genoma bacteriano tiene aproximadamente la misma probabilidad de ser transferido desde una bacteria dadora a una recipiente$ La transduccin especiali&ada difiere de la transduccin generali&ada en #arios puntos$ %s mediada slo por fagos temperados especficos, y slo unos pocos genes dadores especficos pueden ser transferidos a la bacteria recipiente$ Los fagos transductantes especiali&ados son formados slo cuando la bacteria lisognica dadora entra el ciclo ltico, liberando la progenie de fagos$ C* ?'&aci $ %n la con"ugacin, el contacto celular entre la bacteria dadora y recipiente conduce al establecimiento de un puente citoplasmtico entre ambas y transfiere parte o todo el genoma de la bacteria dadora a la recipiente$ La habilidad de la bacteria dadora est determinada por los plsmidos con"ugati#os, llamados tambin plsmidos de fertilidad o plsmidos sexuales$ %l plsmido 5 (tambin factor 5 de E. coli, es el prototipo para los plsmido de fertilidad en bacterias )ram (- $ Las cepas de E. coli con un plsmido 5 extracromosomal es llamado 50 y funciona como dadores de ADN$ %n cambio, las cepas !ue carecen del plsmido 5 son denominados 5- y se comportan como recipientes$ Las funciones con"ugati#as de los plsmidos D son especificados por un EclusterF de al menos ;. genes de transferencia (tra los cuales determinan la expresin del pili sexual, sntesis y transferencia del ADN durante el apareamiento, interferencia con la habilidad de las bacterias 50 para ser#ir como recipiente, y otras funciones$ 'ada bacteria 50 tiene de 7 a + pili sexuales !ue se unen a una protena de membrana externa especfica en la bacteria recipiente$ Luego se forma un puente citoplasmtico intercelular y una hebra del ADN del plsmido 5 es transferido desde la bacteria dadora a la bacteria recipiente, comen&ando en un sitio (nico y progresando en la direccin ., a +,$ La hebra transferida a la bacteria recipiente es con#ertida a una doble hebra circular, constituyendo un nue#o plsmido 5$ %l plsmido 5 en E. coli puede existir como un elemento extracromosmico o ser integrado en el cromosoide bacteriano$ E. coli, posee m(ltiples copias de diferentes elementos genticos llamados secuencias de insercin (G1 , en #arios sitios de su cromosoide$ 1e ha obser#ado !ue el plsmido 5 se integra preferentemente en a!uellas regiones !ue contienen secuencias de insercin$ 8na cepa de E. coli con un plsmido 5 integrado mantiene su

+< 3iologa de los microorganismos

habilidad para funcionar como una dador de ADN$ Debido a !ue las cepas con factores 5 integrado pueden transferir genes cromosomales a bacteria recipientes con una alta frecuencia, son llamadas cepas Kfr$ La transferencia mediada por el factor 5 integrado, tambin in#olucra una sola hebra, pero en este caso el replicn es hbrido, pues se transfiere parte del ADN del factor 5 y parte del ADN del cromosoide bacteriano$ Los plsmidos 5 integrados en cepas Kfr pueden algunas #eces ser excendidos desde el cromosoide bacteriano$ 1i el proceso de excisin es preciso, se generan clulas 50 nue#amente$ 1in embargo, en raras ocasiones la excisin no es perfecta y fragmentos del ADN bacteriano pueden ser incorporadas al plsmido 5, formndose un replicn hbrido, llamado plsmido 5,$ La con"ugacin tambin ocurre en bacterias )ram (0 $ La bacteria )ram (0 , dadora de ADN, produce adhesinas !ue causan su agregacin con clulas recipientes, pero el pili sexual no est in#olucrado$ %n alguna especies de Streptococcus, la bacteria recipiente produce ferohormonas sexuales, extracelulares, !ue pro#ocan !ue el fenotipo donador sea expresado en a!uellas bacterias !ue contienen un plsmido con"ugati#o apropiado$

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