DIVISIN ACADMICA DE INGIENERA Y ARQUITECTURA

ASIGNATURA: BIOQUIMICA GENERAL.

Formas De Anlisis De La Proteina (identificacin y cuantificacin

CATEDRTICO: DR.ROSENDO LOPEZ A. NOMBRE DEL ALUMNO: MIGUEL DE LA O OVANDO

SEMESTRE: 8

GRUPO: S

Cunduacan, Tabasco, a 19 de Marzo del 2014

Desnaturalizacin (bioqumica)
desnaturalizado redirige aqu. Para otras acepciones, vase contra natura. En bioqumica, la desnaturalizacin es un cambio estructural de las protenas o cidos nucleicos, donde pierden su estructura nativa, y de esta forma su ptimo funcionamiento y a veces tambin cambian sus propiedades fsico-qumicas.

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1 Desnaturalizacin de una protena

o o o o

1.1 Cmo la desnaturalizacin afecta a los distintos niveles 1.2 Prdida de funcin 1.3 Reversibilidad e irreversibilidad 1.4 Algunos ejemplos comunes

2 Desnaturalizacin de cidos nucleicos 3 Factores desnaturalizantes

o o o o

3.1 Efecto de la polaridad del disolvente sobre la estructura de las protenas 3.2 Estructura de las protenas 3.3 Efecto del pH sobre la estructura de las protenas 3.4 Efecto de la temperatura sobre la estructura de las protenas

4 Historia 5 Vase tambin

Desnaturalizacin de una protena[editar]

Desnaturalizacinirreversible de la protena de la clara de huevo y prdida de solubilidad, causadas por la alta temperatura (mientras se la fre).
Las protenas se desnaturalizan cuando pierden su estructura tridimensional (conformacin espacial) y as el caracterstico plegamiento de su estructura.

Las protenas son filamentos largos de aminocidos unidos en una secuencia especfica. Son creadas por los ribosomas que "leen" codones de los genes y ensamblan la combinacin requerida de aminocidos por la instruccin gentica, en un proceso conocido como transcripcin gentica. Las protenas recin creadas experimentan una modificacin posmodificacin en la que se agregan tomos o molculas adicionales, como el cobre, zinc e hierro. Una vez que finaliza este proceso, la protena comienza a plegarse sin alterar su secuencia (espontneamente, y a veces con asistencia de enzimas) de forma tal que los residuoshidrfobos de la protena quedan encerrados dentro de su estructura y los elementos hidrfilos quedan expuestos al exterior. La forma final de la protena determina cmo interaccionar con el entorno. Si la forma de la protena es alterada por algn factor externo (por ejemplo, aplicndole calor, cidos o lcalis), no es capaz de cumplir su funcin celular. ste es el proceso llamado desnaturalizacin.

Cmo la desnaturalizacin afecta a los distintos niveles[editar]

En la desnaturalizacin de la estructura cuaternaria, las subunidades de protenas se separan o su posicin espacial se corrompen.

La desnaturalizacin de la estructura terciaria implica la interrupcin de:

Enlaces covalentes entre las cadenas laterales de los aminocidos (como los puentes disulfuros entre las Cistenas).

Enlaces no covalentes dipolo-dipolo entre cadenas laterales polares de aminocidos. Enlaces dipolo inducidos por fuerzas de Van Der Waals entre cadenas laterales no polares de aminocidos.

En la desnaturalizacin de la estructura secundaria las protenas pierden todos los patrones de repeticin regulares como las hlices alfa y adoptan formas aleatorias.

La estructura primaria, la secuencia de aminocidos ligados por enlaces peptdicos, no es interrumpida por la desnaturalizacin.

ejemplos:los ceviches o cuando pones alguna carne en un cido como el limn

Prdida de funcin[editar]
La mayora de las protenas pierden su funcin biolgica cuando estn desnaturalizadas, por ejemplo, las enzimas pierden su actividad cataltica, porque los sustratos no pueden unirse ms al centro activo, y porque los residuos del aminocido implicados en la estabilizacin de los sustratos no estn posicionados para hacerlo.

Reversibilidad e irreversibilidad[editar]

Proteina cuya desnaturalizacin es reversible.

En muchas protenas la desnaturalizacion no es reversible; esto depende del grado de modificacin de las estructuras de la protena. Aunque se ha podido revertir procesos de desnaturalizacin quitando el agente desnaturalizante, en un proceso que puede tardar varias horas, incluso das; esto se debe a que el proceso de reestructuracin de la protena es tentativo, es decir, no asume su forma original inmediatamente, as muchas veces se obtienen protenas distintas a la inicial, adems con otras caractersticas como insolubilidad (debido a los agregados polares que puedan unrsele). Recientemente se ha descubierto que, para una correcta renaturalizacin, es necesario agregar trazas del agente desnaturalizante. Esto fue importante histricamente, porque condujo a la nocin de que toda la informacin necesaria para que la protena adopte su forma nativa se encuentra en la estructura primaria de la protena, y por lo tanto en el ADN que la codifica.

Algunos ejemplos comunes[editar]

Cuando se cocina el alimento, algunas de sus protenas se desnaturalizan. Esta es la razn por la cual los huevos hervidos llegan a ser duros y la carne cocinada llega a ser firme. Un ejemplo clsico de desnaturalizacin de protenas se da en la clara de los huevos, que son en gran parte albminas en agua. En los huevos frescos, la clara es transparente y lquida; pero al cocinarse se torna opaca y blanca, formando una masa slida intercomunicada. Esa misma desnaturalizacin puede producirse a travs de una desnaturalizacin qumica, por ejemplo volcndola en un recipiente con acetona. Otro ejemplo es la nata (nombre que proviene de la desnaturalizacin[cita requerida]), que se produce por calentamiento de la lactoalbmina de la leche (y que no tiene nada que ver con la crema) La protena de la leche se llama casena y se desnaturaliza cuando el pH de la leche se modifica. Esto se le conoce en lo cotidiano Se cort la leche. La casena se desnaturaliza cuando le agregas a un vaso de leche suficiente jugo de limn para modificar el pH de la leche.

Desnaturalizacin de cidos nucleicos[editar]

La desnaturalizacin de cidos nucleicos como el ADN por altas temperaturas produce una separacin de la doble hlice, que ocurre porque los enlaces o puentes de hidrgeno se rompen. Esto puede ocurrir durante la reaccin en cadena de la polimerasa; las cadenas del cido nucleico vuelven a unirse

(renaturalizarse) una vez que las condiciones "normales" se restauran. Si las condiciones son restauradas rpidamente, las cadenas pueden no alinearse correctamente.

Factores desnaturalizantes[editar]
Los agentes que provocan la desnaturalizacin de una protena se llaman agentes desnaturalizantes. Se distinguen agentes fsicos (calor) y qumicos (detergentes, disolventes orgnicos, pH,fuerza inica). Como en algunos casos el fenmeno de la desnaturalizacin es reversible, es posible precipitar protenas de manera selectiva mediante cambios en: 1. La polaridad del disolvente. 2. La fuerza inica. 3. El pH. 4. La temperatura.

Efecto de la polaridad del disolvente sobre la estructura de las protenas[editar]

La polaridad del disolvente disminuye cuando se le aaden sustancias menos polares que el agua como el etanol o la acetona. Con ello disminuye el grado de hidratacin de los grupos inicos superficiales de la molcula proteica, provocando la agregacin y precipitacin. Los disolventes orgnicos interaccionan con el interior hidrfobo de las protenas y desorganizan la estructura terciaria, provocando su desnaturalizacin y precipitacin. La accin de los detergentes es similar a la de los disolventes orgnicos.

Estructura de las protenas[editar]

Un aumento de la fuerza inica del medio (por adicin de sulfato de amonio, urea o cloruro de guanidinio, por ejemplo) tambin provoca una disminucin en el grado de hidratacin de los grupos inicos superficiales de la protena, ya que estos solutos (1) compiten por el agua y (2) rompen los puentes de hidrgeno o las interacciones electrostticas, de forma que las molculas proteicas se agregan y precipitan. En muchos casos, la precipitacin provocada por el aumento de la fuerza inica es reversible. Mediante una simple dilisis se puede eliminar el exceso de soluto y recuperar tanto la estructura como la funcin original. A veces es una disminucin en la fuerza inica la que provoca la precipitacin. As, las protenas que se disuelven en medios salinos pueden desnaturalizarse al dializarlas frente a agua destilada, y se renaturalizan cuando se restaura la fuerza inica original...

Efecto del pH sobre la estructura de las protenas[editar]

Los iones H+ y OH- del agua provocan efectos parecidos, pero adems de afectar a la envoltura acuosa de las protenas tambin afectan a la carga elctrica de los grupos cidos y bsicos de las cadenas

laterales de los aminocidos. Esta alteracin de la carga superficial de las protenas elimina las interacciones electrostticas que estabilizan la estructura terciaria y a menudo provoca su precipitacin. La solubilidad de una protena es mnima en su punto isoelctrico, ya que su carga neta es cero y desaparece cualquier fuerza de repulsin electrosttica que pudiera dificultar la formacin de agregados.

Efecto de la temperatura sobre la estructura de las protenas[editar]

Cuando la temperatura es elevada aumenta la energa cintica de las molculas con lo que se desorganiza la envoltura acuosa de las protenas, y se desnaturalizan. Asimismo, un aumento de la temperatura destruye las interacciones dbiles y desorganiza la estructura de la protena, de forma que el interior hidrfobo interacciona con el medio acuoso y se produce la agregacin y precipitacin de la protena desnaturalizada..

Historia[editar]
Gracias a las investigaciones del bioqumico estadounidense Christian B. Anfinsen, en 1957, mediante los experimentos que realiz con la ribonucleasa (comnmente RNasa), demostr que es posible que las protenas se desnaturalicen de manera reversible. Al principio se pensaba que la desnaturalizacin y prdida de funcin en las protenas era irreversible. La ribonucleasa es una protena que est formada por 124 aminocidos de los cuales 8 son cistenas (Cys) que forman 4 enlaces disulfuro. El experimento consisti en que Anfisen agreg a la ribonucleasa urea 8 M (mol/L) y beta-mercaptoetanol, la combinacin entre estas dos sustancias provocan la desnaturalizacin de la protena anulando sus funciones biolgicas. Pero pudo observar que si eliminaba la urea y el beta-mercaptoetanol, la ribonucleasa recuperaba toda su actividad, lo que implica que los puentes de hidrgeno y los puentes disulfuro de las estructuras secundarias y terciarias se volvieron a formar recuperando su funcin. Gracias a esta observacin pudo concluir que el plegamiento es espontneo y es termodinmicamente favorable y que la informacin sobre el plegamiento reside solo en la cadena lineal, es decir, la configuracin estructural de una protena es una informacin que se encuentra codificada en la estructura primaria de dicha protena.

Ejemplos de desnaturalizacion de las proteinas

A continuacin vamos a citar algunos de los ejemplos que son ms comunes sobre el proceso de desnaturalizacion de las proteinas: En nuestra dieta diaria consumimos diferentes tipos de alimentos, la mayora de ellos son ricos en protenas. En el momento de coccin de los alimentos sufren el proceso de desnaturalizacin de protenas. Este proceso es el que otorga una cierta caracterstica a los diversos alimentos, por ejemplo: el huevo que es hervido se pone duro y la carne es mas firme cuando es cocinada. El proceso de desnaturalizacion de las proteinas hace que la protena pierda su funcin y su estructura. Este proceso se hace presente en un gran porcentaje de las protenas, muchas de estas, sufren procesos que resultan ser: Reversibles: es decir, las protenas pueden volver a su estado original.

Este es un proceso lento y tiene lugar en el laboratorio, no en los seres vivos. Irreversibles: se hace referencia a aquellos cambios bruscos que sufre la protena, como es el pH, sustancias acidas, alcalinas etc. en la cual se ve modificada tanto la funcin como la estructura de la protena. Las conclusiones a la que uno puede llegar cuando uno realiza un estudio sobre desnaturalizacion de las proteinas es que la protenas estn compuestas de aminocidos, expuestas a diversos cambios que pueden ocasionar la desnaturalizacin de las mismas. Estas a pueden modo de ser de las evidencias concluir, el proteinas, frente a un de la precipitado, proceso reduce

desnaturalizacion

estructura de la protena a su nivel primario. En muchos casos, como ya hemos mencionado, este proceso puede ser reversible, debido a que es su

estructura primaria es aquella que contiene de manera suficiente la informacin necesaria, para favorecer los niveles siguientes de su estructuracin. No olvidar, que el proceso de desnaturalizacion de las proteinas tambin puede ser irreversible. Recordar que son diversos los factores que pueden modificar la estructura protena. En muchos casos, los cambios estructurales provocan una prdida de la funcin biolgica. Si bien su forma se cambia, su estructura primaria se desnaturaliza, de manera inicial. El agente desnaturalizarte hace que la protena adquiera la forma caracterstica de la protena desnaturalizada, denominada espiral aleatoria