Espectrofotometria. Fonaments Qumics. Univ.

Girona

1.

Apuntes de espectrofotometra.
(ver. maig02)
(por Florencio de la Torre)

Indice
Introduccin. 2 El espectro electromagntico. 2 Las molculas absorben radiacin electromagntica. 5 Cuantificacin. 7 Ley de Beer. 7 Errores de medida. Desviaciones de la ley de Beer. 8 Calibracin. 9 Parmetros de Calidad. 9 El espectrofotmetro. 10 Tipos de espectrofotometras. 13 Espectrofotometria de absorcin molecular VIS-UV. 13 Espectrofotometria de absorcin molecular IR. 15 Espectrofotometria de absorcin y de emisin atmica. 16 Espectrofotometra con atomizadores electrotrmicos. 18 Espectrofotometria de emisin con plasma. 19 Espectrofotometria de fluorescencia molecular. 19 Otros mtodos. 20 Resonancia Magntica Nuclear (RMN). 20 Espectroscopia de masas (MS). 20

Bibliografia.
Fundamentos de qumica analtica. D.A. Skoog. 4 ed. Ed. Revert. 1996 Qumica analtica . Gary D. Christian. 2 ed. Ed. Limusa. 1981 Anlisis qumico cuantitativo. Daniel C. Harris. 2 ed. Ed. Revert. 2001

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2.

Introduccin.
Si observamos una disolucin acuosa de Cu2+ al trasluz percibimos un color azulado. Esta coloracin se debe a la interaccin de los iones cobre con la radiacin lumnica que atraviesa la disolucin. Ms concretamente, se debe a la absorcin de algunas radiaciones lumnicas que corresponden al color complementario (en este caso el amarillo) Las radiaciones no absorbidas son las que atraviesan la disolucin sin obstculo alguno y llegan a nuestro ojo. Estas radiaciones transmitidas corresponden al color azul. Adems, si comparamos el color de dos disoluciones de Cu2+ con diferente concentracin, observamos que a mayor concentracin corresponde una mayor intensidad del color azul de la disolucin. Por lo tanto podemos adivinar la sustancia que hay en una disolucin, segn el color de esta, y an ms podemos saber la cantidad de esa sustancia, segn la intensidad de ese color. Esta propiedad de interaccin de la luz con una gran cantidad de especies qumicas nos permitir identificar y cuantificar analitos, dando lugar a una rama de la Qumica Analtica denominada espectrofotometra. Espectrofotometra significa medida del espectro de la luz y se refiere a la medida del tipo y cantidad de luz que se obtiene de una disolucin. A continuacin explicamos que es el espectro de la luz y como se produce la interaccin con la materia.

El espectro electromagntico.
La luz se puede explicar como un conjunto de radiaciones que se mueven por todo el espacio. Aquellas detectables por nuestro ojo corresponden a la luz visible, pero la mayora son invisibles para nosotros. Estas radiaciones se pueden describir como partculas y como ondas. La descripcin como onda se basa en que la luz son campos elctricos y magnticos que oscilan perpendicularmente a la direccin de traslacin por el espacio dando lugar a ondas transversales. Una radiacin electromagntica (cualquier fenmeno ondulatorio) se define generalmente mediante dos parmetros: Longitud de onda (l): distancia recorrida por un ciclo completo. De cresta a cresta de la onda. Frecuencia (n): nmero de oscilaciones completas que realiza la onda por segundo.

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3.

campo elctrico

z
campo magntico

Figura 1. Radiacin electromagntica. En el vaco, el producto de estos dos parmetros es constante e igual a la velocidad de traslacin de la luz

=c

donde c es la velocidad de la luz en el vaco (3.108 m/s) La longitud de onda se expresa en unidades de longitud y varia entre dcimas de nanmetro a varios metros. La frecuencia se expresa en ciclos por segundo (s-1) o Hertzios (Hz) Un Hz es igual a 1 ciclo/s. Mediante la frmula anterior podemos calcular l a partir de n o viceversa Ejem. 1. Cul es la frecuencia de una radiacin electromagntica de l= 650 nm que corresponde al color rojo?

n=

3 10 8 m / s 10 9 nm = 4,6 1014 s -1 = 4,6 1014 Hz 650 nm 1m

Por otro lado, la luz se puede describir como una partcula. En este caso se dice que es una partcula de energa llamada fotn. Tambin se puede describir como un paquete de energa. La energa que tiene un fotn es proporcional a la frecuencia de la radiacin que forma mediante la ecuacin

E =h
donde h es la constante de Planck (=6,6.10-34 J.s) y tambin se puede relacionar con la longitud de onda

E =h

Ejem. 2. Cul ser la energa del fotn correspondiente a la radiacin roja de l=650 nm? Y la de un fotn de una radiacin ultravioleta de l=50 nm?

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4.

E = h = 6,6 10 -34 4,6 1014 = 3,0 10 -19 J

E =h

= 6,6 10 -34

3 10 8 m/s = 4,0 10 -18 J -9 50 10 m

vemos como las radiaciones ultravioletas (con menor l) son ms energticas que las visibles. Por lo tanto la energa es inversamente proporcional a la longitud de onda y directamente proporcional a la frecuencia. La luz roja (con mayor l y menor n) es menos energtica que la luz azul (con menor l y mayor n) El conjunto de radiaciones electromagnticas se llama espectro electromagntico y es conveniente agruparlas en regiones para poder conocer sus propiedades. En la fig. siguiente se muestran las zonas del espectro segn la clasificacin ms aceptada. Como se puede observar la zona del visible (radiaciones percibidas por nuestro ojo) es muy pequea en comparacin con la gran amplitud del espectro. Ten en cuenta, tambin, que aunque hablamos de una radiacin determinada (l), fsicamente es imposible aislar dicha radiacin. Siempre podremos obtener un rango de radiaciones pequeo segn la exactitud del dispositivo de seleccin (difractores de radiacin y filtros), pero nunca una sola. De la misma manera que no podemos obtener o aislar un punto de una recta, sino un trozo pequeo (un conjunto de puntos)

Figura 2. Espectro de radiaciones electromagnticas.

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5.

Las radiaciones ms importantes con aplicacin al anlisis qumico son: Rayos X Ultravioleta (UV) Visible (VIS) Infrarrojo (IR) Microondas Radio 0,1-10 nm 10-380 nm 380-780 780 nm- 300 mm 300 mm 0,01 m 0,01 10 m fluorescencia absorcin/emisin absorcin/emisin/colorimetras infrarrojos resonancia electrnica /nuclear

Las molculas absorben radiacin electromagntica.

Cuando una molcula absorbe un fotn su energa interna aumenta y pasa a un estado inestable, por lo que rpidamente vuelve a liberar esa energa sobrante y vuelve al estado inicial que es ms estable. El estado inicial se denomina estado fundamental y el estado ms energtico se llama estado excitado. La absorcin de radiacin produce un paso del estado fundamental al excitado (excitacin) y en el proceso contrario (llamado relajacin) hay una liberacin de energa. Esta energa liberada en la relajacin puede ser en forma de calor o en forma de radiacin electromagntica otra vez. Este ltimo proceso de desprendimiento de radiacin se llama emisin. Estos procesos se pueden representar como una reaccin qumica y en un diagrama de energa

absorcin

M + h n

emisin

M*

estados excitados

Que le pasa a la molcula al absorber una radiacin electromagntica? El aumento del nivel energtico interno de la molcula produce unos cambios en los enlaces intramoleculares y/o en el movimiento de los electrones alrededor del tomo. Estos cambios se llaman transiciones y se clasifican en tres tipos:

energ a absorcin emisin

estado fundamental

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6.

transiciones electrnicas transiciones rotacionales

tomos energa requerida molculas o iones

transiciones vibracionales molculas o iones

As, las radiaciones ms energticas (VIS, UV y mayores) comunican suficiente energa como para alterar el movimiento orbital de los electrones, tanto alrededor de un tomo slo como de los orbitales de enlace entre dos tomos. Las radiaciones menos energticas (IR) producen cambios en los movimientos de vibracin y rotacin de la molcula. Estas ltimas son muy especficas de cada enlace y por lo tanto de cada molcula por lo que se utilizan como tcnica de identificacin. Para realizar una identificacin generalmente se hace incidir sobre la sustancia estudiada radiaciones electromagnticas de diferente energa. Normalmente se estudia un rango de radiaciones y se va aumentando (o disminuyendo) la longitud de onda de las radiaciones incidentes desde un extremo del rango hasta el extremo opuesto. As se obtiene un espectro de absorcin de la sustancia, que se puede representar grficamente como se muestra en la figura. Cada uno de los picos del espectrograma corresponde aproximadamente a una transicin energtica de un enlace molecular, por lo tanto el espectro es nico de cada molcula. Es como una huella digital de esa molcula donde quedan registrados todos los enlaces y sus transiciones correspondientes. Entonces, si tenemos el espectro de absorcin de una molcula podemos identificarla con bastante exactitud.

Figura 3. Espectro de infrarojos del agua pura.

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7.

Cuantificacin.
Ley de Beer.
La cantidad de radiacin electromagntica absorbida por un analito se puede relacionar cuantitativamente con la concentracin de dicha sustancia en disolucin. Se define la transmitancia (T) como la fraccin de radiacin incidente transmitida por la disolucin. Si la potencia radiante que incide sobre la disolucin es Po i P la potencia radiante que sale, entonces

T=

Po c

P Po

Adems se observa que la potencia de la energa transmitida disminuye geomtricamente b (exponencialmente) con la concentracin c y con la distancia b recorrida a travs de la disolucin.

T = 10 -kc

T = 10-k'b

c
donde k y k son ctes de proporcionalidad, logaritmos

b
y combinando ambas y aplicando

T = 10-abc
- log T = a b c = A
que es la expresin matemtica de la Ley de Beer y que indica la relacin directa entre la absorbancia de un analito y su concentracin en disolucin. a es la absortividad. Es una constante e indica la absorcin de cada analito por unidad de concentracin y unidad de distancia recorrida por el haz. Cuando se usan unidades molares se llama absortividad molar (e) y se expresa en L/mol.cm

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8.

Ejemplo: Cual ser la transmitancia y la absorbancia de una disolucin de 1,00 mg de Fe en 100 mL en una celda espectrofotomtrica de 1 cm. Absortividad del Fe es 15,5 L/g.cm

A = a b c = 15,5

g L 1cm 0,01 = 0,155 unidades de absorbancia g cm L

T = 10 -A = 10 -0,155 = 0,70 unidades de transmitan cia

En la prctica esta ley no se cumple exactamente y para determinar la concentracin de un analito a partir de las medidas de absorbancia, es preciso realizar un proceso de calibracin.

Errores de medida. Desviaciones de la ley de Beer.

Errores instrumentales: Hay dos errores de lectura inherentes al detector espectromtrico. El primero se produce cuando hay una gran cantidad de analito y, por lo tanto, una gran absorbancia de radiacin. Al detector llega muy poca potencia radiante y se encuentra en la zona lmite de deteccin, con lo que no responde bien a pequesimas variaciones de absorbancia. El segundo se produce cuando hay muy poco analito y, por tanto, muy poca absorbancia. Esto implica que casi toda la potencia incidente atraviesa la disolucin y llega al detector. Entonces, el detector espectromtrico esta en la zona de saturacin y no aprecia bien pequeas variaciones en la absorcin. En la grfica se muestra el error (en %) que se calcula matemticamente para toda la escala del espectro.

En la figura se observa que hay un error mnimo entre el 20 y el 65% de T (0,200 a 0,700 unidades de absorbancia). Los espectrofotmetros ms sensibles permiten medidas con un error aceptable entre 0,100 y 1,500 unidades de absorbancia. Otros errores relacionados con el aparato son los debidos a que los espectrofotmetros no

Figura 4. Error relativo del espectrofotmetro.

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9.

pueden seleccionar una radiacin de una nica l, sino un rango. Esto introduce un error ya que hay interacciones con otras absorciones . En la medida que el aparato sea ms exacto en la seleccin de la l, este error se minimiza. Errores qumicos: Hay analitos que tienen una ionizacin parcial y la especie ionizada puede tener diferente absorbancia que la especie molecular. Esto condiciona la absorbancia al desplazamiento del equilibrio AH A- + H+ absorbe transparent En este caso el error se puede evitar fijando el pH de la disolucin con un tampn. Otro error esta relacionado con la variaciones en el ndice de refraccin de la disolucin. Este efecto es significativo en disoluciones de elevada concentracin. En estos casos una manera de evitar el error es realizar la calibracin de la tcnica con patrones que se mezclan con la disolucin problema. Ver el mtodo de Calibracin mediante Adiciones Mltiples. De esta manera los efectos afectan por igual al analito que a los patrones.

Calibracin.
Dado que hay una serie de fenmenos que no permiten la aplicacin de la ley de Beer, en la prctica se realiza siempre una calibracin de la tcnica de medida, con la cual obtenemos una relacin matemtica entre la concentracin y la absorbancia. El procedimiento de la calibracin se basa en medir la absorbancia de varias disoluciones patron (de concentracin conocida), en las mismas condiciones que se mide la absorbancia de la disolucion problema, y se hace una interpolacin. En de la asignatura: Mtodos de Cuantificacin en Espectrofotometras, se describe con detalle todo el procedimiento y se incluyen problemas numricos de ejemplo. los apuntes

Parmetros de Calidad.
La calidad de una tcnica espectrofotomtrica expresada en trminos de incertidumbre, se basa esencialmente en tres parmetros: sensibilidad, lmite de deteccin y rango de linealidad.

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10.

Sensibilidad: Es la concentracin requerida para dar un 1% de absorbancia (99% de transmitancia o lo que es lo mismo 0,0044 unidades de absorbancia. A medida que esta concentracion es menor, la sensibilidad de la tcnica es mayor porque es necesaria menos concentracin para producir una seal en el detector. Lmite de deteccin: Es la mnima concentracin que se puede medir con la tcnica y con un elevado nivel de certidumbre. Est relacionado con el ruido de fondo del aparato, es decir la seal que mide el aparato cuando se introduce un blanco. Una manera de calcularlo es multiplicar por tres la seal correspondiente al ruido de fondo. Rango de linealidad: Es el intervalo de concentraciones dentro del cual podemos medir una muestra problema con un elevado nivel de certidumbre. Generalmente a partir del valor mximo de este rango, la seal (absorbancia) deja de tener una relacin lineal con la concentracin y la curva se hace horizontal, tendiendo a un valor mximo de absorbancia. Las muestras o patrones que estan fuera de este rango no se pueden medir con seguridad con la tcnica empleada.

El espectrofotmetro.
Es el nombre genrico de todos los aparatos basados en esta tcnica. A este trmino se le aaden los adjetivos adecuados a la subtcnica adecuada, ej. espectrofotmetro de absorcin atmica. El espectrofotmetro tiene un generador de radiacin lmnica (policrmica), un separador para obtener la radiacin adecuada y luego mide la potencia radiante obtenida. Los componentes fundamentales que tienen todos los espectrmetros son:
detector (transductor)

fuent e

monocromador

muestra

registrador

Fuente: es el dispositivo emisor de radiacin electromgnetica. Generalmente emite una banda muy amplia de radiaciones contnuas alrededor de la l deseada. Segn la zona del espectro que emite hay tres tipos: Visible: Lmparas de filamento de Tungsteno incandescente o de Wolframio (halgeno). Son similares a las bombillas comunes. Ultravioleta: Tubo de hidrgeno o de descarga de deuterio. A veces estn refrigerados con agua para disipar el elevado calor que producen.

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Infrarojos: Fuentes especiales de xidos de tierras raras (disprosio, holmio, erbio) o carburos (de silicio). Estos emiten radiacin en IR (1,5 a 2,0 mm) a elevadas temperaturas (1000-2000C). Monocromador o selector de l: tiene como objetivo controlar la pureza de la radiacin emitida consiguiendo el menor ancho de banda de longitud de onda posible. Consta de un conjunto de lentes, espejos y rendijas para dispersar y separar, enfocar y restringir la radiacin no deseada. Los componentes de los monocromadores son: PRISMAS: producen la refraccin de la luz, siendo el ngulo de refraccin mayor cuanto menor es la l de la radiacin. Despus del prisma hay una rendija por donde se rojo hace pasar la radiacin deseada. policromat. Segn el tipo de radiaciones se usan prismas de vidrio (VIS), cuarzo o slice (UV) y cristales de viole NaCl para IR. t

PRISMA
REDES DE DIFRACCION: Es una lmina metlica (Al) altamente pulida sobre la que se han hecho una gran cantidad de estras (lneas paralelas). Estas estras actuan como centros de dispersin de todas las radiaciones incidentes. Hay una dispersin lineal de las l de una determinada banda cromtica, por lo tanto se puede usar en todas las regiones del espectro. Funciona mejor que el prisma en el IR.

Celdas para la muestra: recipientes donde se coloca la muestra a analizar. Varian mucho segn la tcnica a ulilizar, pero como caracterstica comun deben ser transparentes en la regin de l que se va a medir. VIS y UV cubetas cuadradas de vidrio, cuarzo de 1 cm de lado. IR cubetas de NaCl, AgCl. Detector (transductor): Produce una seal elctrica cuando recibe un fotn. Esta seal elctrica luego es convertida en unidades de potencia radiante transmitida o absorbida. Los detectores tambin dependen de la regin de l en la que se trabaja: FOTOTUBO. Para la zona del VIS y UV. Con el mismo principio de funcionamiento que la clula fotoelctrica. Al golpear un fotn en el ctodo, este emite un electrn hacia el nodo, lo cual provoca un flujo de corriente elctrica que es medida por un voltmetro. La respuesta

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del material fotoemisivo depende de la l, por tanto se usan diferentes tipos de fototubos segn la l en la que se trabaja. Cuando se utilizan radiaciones de baja intensidad la seal elctrica es muy dbil y sujeta a un gran error. En este caso se utiliza el TUBO FOTOMULTIPLICADOR, que incluye varios fototubos en serie. En este caso, el choque de un fotn forma una cascada de electrones que dan una seal ms intensa. FOTODIODO ARRAY: Sobre un semiconductor se fabrican diodos en serie paralelos, de manera que al incidir sobre l una radiacin difractada, se puede tener una seal instantnea para un amplio rango de l. INFRAROJOS. Los detectores de infrarojos se basan en la propiedad trmica de estas radiaciones y traducen el calor asociado a la radiacin transmitida en una seal elctrica. Los ms utilizados son los TERMOPARES y BOLOMETROS, formados por metales cuya resistencia elctrica cambia con la temperatura.

Registrador: En los instrumentos ms antiguos la seal se mostraba en un medidor de aguja que tenia una escala en unidades de transmitancia y de absorbancia. Los instrumentos ms modernos tienen un display digital, en el que aparece el valor nmerico de absorbancia o el valor de concentracin cuando puede realizar automticamente los clculos de calibracin. En el caso de obtener el espectro de absorcin (en un intrvalo de l) de una sustancia, el registrador nos muestra un grfico con el valor de l en abcisas y la absorbancia en ordenadas.

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13.

Tipos de espectrofotometras.
En la tabla siguiente se muestra una clasificacin de los principales tipos de espectrofotometrias agrupados segn el tipo de interaccin luz-molcula (absorcin o emisin) y segn la zona del espectro en la que se trabaja. Y a continuacin se describen las caractersticas principales de cada tipo, los instrumentos utilizados y las aplicaciones analticas ms importantes. Clasificacin

molecular ABSORCION atmica

UV VIS IR RMN

llama (EAA) electrotrmica (GF)

atmica EMISION molecular

llama (EEA) plasma (ICP)

fluorescencia (FS, XRF)

OTROS

turbidimetria refractometria polarimetria espectroscopia masas (EM)

Espectrofotometria de absorcin molecular VIS-UV.

Hay un proceso de absorcin de radiacin por parte de las molculas pasando a un estado excitado.

M + h n

absorcin

M*

y en un tiempo muy breve se produce la relajacin con emisin de energa en forma de calor

M*

relajacin

M + calor

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14.

El aumento de energa interna conlleva transiciones electrnicas. Estas transiciones son de electrones compartidos que forman enlaces o de electrones de orbitales atmicos externos (no compartidos). Los principales tipos de moleculas que experimentan este fenmeno son: - compuestos orgnicos con grupos no saturados (dobles y triples enlaces), donde hay electrones de enlace que pueden saltar a otros orbitales de enlace. Estos grupos funcionales que absorben en VIS o UV se llaman cromforos. - compuestos de coordinacin (complejos) de metales de transicin. Ej. Fe(SCN)2- rojo intenso. - iones de metales de transicin, de lantnidos y de actnidos. Ej. color azul de la disolucin de Cu2+

Generalmente la absorcin de estos compuestos se produce en varias l o amplias bandas de absorcin, por lo que no hay picos bien definidos. Sobre todo cuando hay interacciones con el disolvente. Esto confiere poca selectividad a la tcnica para identificacin de especies, siendo ms util en anlisis cuantitativo. El instrumento utilizado en la tcnica es el espectrofotmetro visible-ultravioleta. Que permiten trabajar con una gran cantidad de l, incluso hay algunos que hacen un barrido en una region del espectro dando un grfico del espectro de absorcin de una sustancia. Estos aparatos constan de un selector de l, y una cubeta transparente de 1 cm de lado y 3 cm de alto donde se coloca la disolucin a medir. Normalmente hay dos huecos para dos cubetas, uno para la muestra y otra para una disolucin de referencia o blanco, frente a la cual se hacen todas las medidas. Cuando la especie qumica a medir absorbe en el visible (y la disolucin tiene color) la tcnica se llama vulgarmente colorimetra. Y los aparatos utilizados se llaman colormetros. Tambin se comercializan kits de anlisis rpidos que tienen unas tablas de comparacin de colores (o disoluciones prepararadas y de color estable) en lugar de un aparato como el descrito. La disolucin problema se mezcla con los reactivos adecuados en un pequeo tubo de ensayo y se compara con la tabla de colores. En esta tabla est asignada la concentracin de analito que corresponde a cada color, con lo cual es puede determinar la concentracin en el problema. Este mtodo no tiene una gran exactitud pero en muchas aplicaciones es suficiente (cloro en piscinas, nitratos en aguas de embalses, NaCl en aguas para riego, etc). En muchos casos la especie estudiada no absorbe en el VIS-UV, pero s un complejo formado con otro compuesto. Por ej. el in fosfato no absorbe en el VIS, pero forma un complejo con el in molibdato y el vanadato (fosfomolibdovanadato) que tiene una gran intensidad de absorcin a 430 nm (azul), y se emplea para anlisis de fsforo en aguas, suelos, etc. En estos casos la determinacin espectromtrica no es directa, sino que previamente se hace reaccionar la muestra con unos reactivos adecuados (reaccin colorimtrica) y posteriormente se mide la absorbancia de la mezcla.

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Especies qumicas determinadas: P, B nitritos, nitratos Fe, Co, Mo Ti, Va, Cr Bi, Pd, Te Cu, Pb, Ni , Fe Ventajas y aplicaciones. gran aplicabilidad, ya que hay muchas especies absorbentes y posibilidades de formar complejos con las que no lo son elevada sensibilidad, se pueden determinar conc hasta 10-5 M selectividad media, interacciones cuando hay grupos que absorben a la misma l permite automatizacin del proceso, se usa en sistemas de anlisis en contnuo sistema no destructivo en medidas directas mediante formacin de complejos directamente, o con complejos con SCNcon H2O2 con Icon complejos aguas, suelos, fertilizantes aguas suelos contaminantes contaminantes suelos

Como principal desventaja de la tcnica las interacciones por partculas que interfieran el paso de luz. Las disoluciones han de ser exentas de slidos en suspensin.

Espectrofotometria de absorcin molecular IR.

La absorcin molecular de radiaciones de esta zona del espectro produce transiciones vibracionales y rotacionales. Por lo tanto, todas las molculas absorben en IR, excepto algunas diatmicas (O2, N2, Cl2) de elevada simetra. Las bandas de absorcin son muy estrechas y corresponden a enlaces muy especficos, y a menudo dependen de los atomos ms prximos. Un espectro de IR es como una huella dactilar de la molcula y esto implica que es una tcnica idnea para identificar compuestos orgnicos o inorgnicos puros, pero no es tan adecuada para cuantificar. Los instrumentos ms utilizados son: Espectrofotomtros IR. Similares al VIS-UV, pero con componentes diferentes. Hacen un barrido de l y recogen el espectro. Los ms utilizados son los llamados NIR (near infrared) que trabajan con zonas del espectro en el infrarojo cercano. Espectrometros de transformada de Fourier. Recoge datos de una zona del espectro simultneamente y en varias pasadas, posteriormente por un proceso matemtico muy complejo se resuelven los picos del espectro con una gran sensibilidad. Son los ms usados actualmente.

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Fotmetros de filtro. Con un filtro adecuado se selecciona una l deseada. Sirven para monitorizar la concentracin de una especie qumica en un punto fijo. Se usan mucho para contaminantes atmosfricos: CO, nitrobenceno, cloruro de vinilo, HCN, piridina,etc. En algunos instrumentos se usan para determinar CO2, SO2, etc. Aplicaciones. Se usa en la identificacin de compuestos en investigacin de medicamentos, bioqumica, biologa, fisiologa. En la industria farmaceutica, pesticidas, alimentacin, contaminantes, etc.

Espectrofotometria de absorcin y de emisin atmica.

Permite la determinacin (cuantificacin) de unos 70 elementos qumicos en concentraciones que oscilan entre ppb a ppm. La medida de los elementos qumicos se hace en estado atmico mediante una atomizacin de la muestra en estado gaseoso. Estos tomos experimentan absorcin, emisin o fluorescencia de radiaciones VIS, UV o rayos X, debidas a transiciones electrnicas entre orbitales atmicos. Esta tcnica no da informacin sobre enlaces moleculares en absoluto y nos da informacin especfica sobre un elemento qumico. La principal diferencia con las otras espectrometrias es la atomizacin, proceso por el cual la muestra se introduce en un mechero, junto con el combustible, y se quema a elevada temperatura. Las molculas del analito se rompen totalmente liberando los elementos qumicos en estado atmico, y estos pueden experimentar fenmenos de absorcin, emisin o fluorescencia. En la figura siguiente se muestra un esquema de estas posibilidades. Segn el sistema de atomizacin, y la temperatura a la que se produce, se tienen los siguientes mtodos de espectrofotometra atmica: llama, electrotrmico, plasma, arco voltaico y chispa elctrica.

Espectrofotometra de absorcin atmica con llama.

Es el mtodo ms utilizado de la espectrofotometria atmica. Muy adecuado para la determinacin de ppm de Fe, Cd, Au, Pb, Zn, Cu, Mn en disoluciones acuosas de aguas, fertilizantes, suelos, extractos vegetales, etc. Los tomos en la llama absorben radiacin de determinadas l (VIS y UV) segn su naturaleza, por lo que es una tcnica muy especfica para cada elemento. La absorcin en la llama sigue la ley de Beer, pero en la prctica es necesario hacer un

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tomo en la llama

emisin

monocromado

detector

absorcin lmpara monocromado detector

fluorescencia monocromado

laser llama
transicin no radiante

detector

estados excitados

energa

estado fundamental transicin absorcin atmica transicin emisin atmica transicin fluorescencia atmica

calibrado con disoluciones patrn de las que se obtienen valores de absorbancia y que permiten calcular la recta de calibrado. El instrumento se denomina Espectrofotmetro de Absorcin Atmica (EAA). En ingls: Flame Atomic Absorption Spectrophotometer (F)AAS. Como fuente de radiacin se usa una lampara de catodo hueco que contiene el mismo metal que se va a analizar y que emite una radiacin con una banda de l entorno a la que se va a absorber. En lugar de una cubeta o recipiente para poner la muestra lleva un mechero donde se produce la llama con la que se atomiza la muestra. Esta llama suele ser de propano, acetileno o hidrgeno y oxgeno o xido nitroso (N2O). Las temperaturas que alcanza varian entre 1500 y 3000C.

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Espectrofotometra de emisin atmica con llama.

Es una tcnica muy utilizada para la determinacin de metales alcalinos y alcalinotrreos: Na, K, Li, Ca, etc, en concentracines del orden de ppm. Se utiliza con los mismos materiales ya comentados: aguas, fertilizantes, suelos, material vegetal, alimentos, contaminantes, etc. Se basa en el mismo principio que la absorcin, pero en este caso la temperatura de la llama es suficiente para que haya una excitacin atmica y una emisin posterior. CaCl2(dis) CaCl2(s) Ca(g) + Cl(g)

hY emisin Ca*(g) Los instrumentos utilizados en esta tcnica se denominan Espectrofotmetros de Emisin Atmica (EEA) y en ingles con las siglas AES. A diferencia de los anteriores (absorcin) no tienen fuente de radiacin. El resto de componentes es igual, as como el procedimiento de calibracin y clculo de resultados.

Espectrofotometra con atomizadores electrotrmicos.

Se utiliza para determinar concentraciones muy pequeas (ppb) de metales contaminantes: Pb, Cd, Cr, Zn, Cu, Co, Mn, Pt, Hg, etc. En las tcnicas anteriores el rendimiento de la atomizacin (molculas atomizadas con respecto al total) es muy bajo: aprox del 0,1%. Esto hace que la sensibilidad de la tcnica sea baja. El atomizador electrotrmico consta de un pequeo minihorno, que es un cilindro de grafito de 50mm10mm f, que se calienta con una resistencia elctrica hasta 3000C. Con una pequea cantidad de muestra (varios mL) se obtiene una gran cantidad de particulas atomizadas (eficiencia del 100%) y una gran seal que da una gran sensibilidad a la tcnica. Por el contrario la precisin no es tan buena y hay un gran nmero de interferencias. El proceso de calibrado es muy delicado y solo es til en determinaciones de concentraciones muy bajas de algunos metales. El instrumento utilizado se llama Espectrometria con Horno de Grafito o GFS (Graphit Furnace Spectrometry).

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19.

Espectrofotometria de emisin con plasma.

Se consigue una llama de altsima temperatura que transforma la mezcla de combustible y muestra al estado de plasma: una mezcla gaseosa con una concentracin muy alta de cationes y electrones. Esto permite una elevada eficiencia en la atomizacin, una intensa emisin de los tomos y la determinacin de una gran cantidad de elementos qumicos metlicos (y algunos no metales) con algo menos de sensiblidad que el Horno de Grafito, pero con ms precisin. Adems la combinacin de esta tcnica con un sistema informtico potente, permite la determinacin de la concentracin de varias decenas de elementos qumicos en unos segundos. Los diferentes aparatos se basan en la fuente de energa para obtener el plasma en el mechero. Los ms comunes son: - DCP: plasma generado por una corriente contnua. - ICP: (induced coupled plasm) plasma acoplado por induccin de un generador de radiofrecuencias. - plasma generado por frecuencias de microondas. Entre los nometales que pueden ser determinados por esta tcnica se encuentra el P y el B. Se obtienen lmites de deteccin entre 0,1 y 100 ppm, y el acoplamiento de esta tcnica con otras muy sensibles permite llegar hasta 1 ppb. Ej. ICP-EM o ICP espectrometro de masas.

Espectrofotometria de fluorescencia molecular.

Se basa en el fenmeno que experimentan algunas molculas de absorber una radiacin determinada y en el proceso de relajacin, liberar parte de la energia como calor (radiacin trmica) y otra parte como radiacin electromagntica de una longitud de onda mayor a la incidente. Este fenmeno se produce en un intervalo de tiempo muy pequeo despus de la absorcin (10-5 s) a diferencia de la fosforescencia que puede durar minutos y horas. Este fenmeno permite una tcnica muy sensible ya que no todas las molculas fluorescen y las l pueden cambiar segn las condiciones. Los lmites de deteccin son inferiores a la absorcion molecular VIS-UV. El instrumento ms usado es el espectrofluormetro, y la tcnica ms comun se denomina Fluorescencia de Rayos X, ya que son estos los utilizados como fuente de energia. Tiene una gran aplicabilidad en la cuantificacin de molculas orgnicas en productos alimenticios, farmaceuticos, clnicos y naturales.

Espectrofotometria. Fonaments Qumics. Univ. Girona

20.

Otros mtodos. Resonancia Magntica Nuclear (RMN).

Se produce una absorcin de radiacin electromagntica por los ncleos atmicos. Estos tienen un movimiento de giro, que es cambiado en el proceso de absorcin. El tipo de radiaciones que se utilizan son de gran l (microondas de baja energia), y la absorcin depende de la configuracin electrnica que rodea al nucleo y de las interacciones intramoleculares. Por lo tanto da informacion sobre los enlaces que tiene un tomo, y el tipo de molcula que se estudia. Las radiaciones involucradas en esta tcnica no alteran los materiales estudiados (dada su baja energia), por lo que tiene una gran aplicacin en seres vivos, productos fcilmente alterables, etc. Los elementos qumicos que se detectan por esta tcnica son H, F, P, B, Cl, N. Mientras que el C y el O no tienen un momento cintico de giro nuclear. Esto hace que la tcnica sea muy interesante para identificar molculas orgnicas, opteniendo espectros de los tomos de H, de los que se deduce todos los enlaces del H en la molcula. Esta tcnica tiene una gran aplicacin en medicina (estudios no destructivos de tejidos de organos del cuerpo humano), determinacin de humedad, estudios de aceites y grasas, estudios de F en plsticos, etc.

Espectroscopia de masas (MS).

No es una tcnica espectrofotomtrica propiamente dicha, pero se utiliza mucho en conjunto con algunos de los instrumentos citados. Se basa en obtener una nube de moleculas gaseosas ionizadas, de manera que quedan los elementos quimicos en forma inica (cationes) en estado gaseoso. Esta nube se acelera mediante un campo elctrico y pasa por un potente imn que separa los iones segn su masa, y finalmente choca sobre un detector sensible a todos los iones. El detector es como una pantalla alargada y los tomos de un mismo elemento chocan en una misma zona, distinguiendose varias regiones o rayas en el detector relacionadas con la masa de los tomos presentes en la muestra. Al final se obtiene una grfica llamada espectrograma o espectro de masas, con los pesos atmicos en abcisas y la frecuencia o cantidad en ordenadas. En este aparecen rayas indicando los elementos qumicos presentes y son ms o menos largas segn la cantidad de tomos que hay. La instrumentacin de esta tcnica es muy sofisticada y solo disponible en muy buenos laboratorios. Da un grado de exactitud muy bueno, siendo la tcnica ms sensible para determinar algunos elementos qumicos. Permite determinar ppb de algunos metales en combinacin con la tcnica ICP.