Efectos hepticos de una dieta de colina-deficiencia de metionina en hepatocitos RXR nulo ratones Maxwell Afari Gyamfi, Yuji Tanaka,

Lin He, Curtis D. Klaassen y Yu-Jui Yvonne Wan Departamento de farmacologa, toxicologa y teraputica, University of Kansas Medical Center, Kansas City, KS 66160 Resumen Receptor retinoide X- (RXR) es un socio obligado para varios receptores nucleares de hormonas que regular importantes procesos fisiolgicos en el hgado. En este estudio el impacto de los hepatocitos La deficiencia de RXR en metionina y colina deficiente (MCD) esteatosis inducida por la dieta, el estrs oxidativo, la inflamacin, y la expresin gnica heptica transportadores se examinaron. El ARNm de esterol genes regulador de la protena de unin al elemento (SREBP) reguladas, es importante para la sntesis de lpidos, no eran alterado de tipo salvaje (WT) ratones, pero se incrementaron de 2.0 a 5.4 veces en los hepatocitos RXR-nula (hRXR- nula) ratones alimentados con una dieta MCD durante 14 das. Adems, los ARNm hepticas y protenas esenciales de cidos grasos -oxidacin no se vio alterada en los ratones WT, pero disminuyeron en el MCD dieta alimentados hRXR- null ratones, lo que resulta en un aumento de los niveles de cidos grasos libres hepticas. Actividad enzimtica CYP2E1 y los niveles de perxido lpido se indujeron slo en ratones WT alimentados-MCD. En contraste, los niveles de ARNm heptico de factores proinflamatorios se incrementaron slo en ratones H-RXR-nulos alimentados con la dieta MCD. Heptico absorcin transportistas Oatp1a1 y niveles Oatp1b2 mRNA se redujeron en ratones WT alimentados con la MCD dieta, mientras que el transportador de eflujo MRP4 se increment. Sin embargo, en los ratones H-RXR-nulos, el MCD dieta moderadamente disminuida Oatp1a1 e indujo tanto Oatp1a4 y la expresin gnica MRP4. Mientras que la dieta MCD aument los niveles de cidos biliares en suero y actividad de la fosfatasa alcalina en tanto WT y ratones H-RXR-nulos, los niveles sricos de ALT fueron inducidas (2,9 veces) slo en el H-RXR-nula ratones. En conclusin, estos datos sugieren un papel crtico para RXR en la homeostasis heptica de cidos grasos y proteccin contra la lesin de los hepatocitos inducida por MCD.(deficiencia metionina-colina) Palabras clave Los receptores nucleares; retinoide X receptor alfa; esteatohepatitis no alcohlica; esterol regulador protena de unin al elemento, hgado graso, metionina y colina dieta deficiente; transportadores hepticos. _________________________________________________

Introduccin La esteatohepatitis no alcohlica (EHNA) es una enfermedad crnica del hgado que tiene caractersticas histolgicas comparable a la esteatohepatitis inducida por el alcohol (Ludwig et al., 1980). Considerando que el celular y los mecanismos moleculares implicados en la patogenia de la EHNA no se entienden completamente, el etapa inicial de la enfermedad se caracteriza por la acumulacin de grasa (esteatosis), especialmente triglicridos , en los hepatocitos . EHNA se observa en pacientes con el sndrome metablico , la obesidad ,hiperlipidemia y diabetes mellitus tipo 2 ( Ludwig et al. , 1980 ) . Adems , la esteatosis es conocido para estimular la lipognesis a travs de disminucin de la expresin de la peroxisoma proliferatoractivated del receptor ( PPAR ) , un receptor nuclear crucial para la oxidacin de cidos grasos ( Wan et al . ,1995 ) . Obligar a las pruebas sugieren que la oxidacin de cidos grasos de deterioro es la causa de la grasa la acumulacin de cido y la esteatosis en el hgado ( Fromenty y Pessayre , 1995 ; Bradbury, 2006 ) .Otro regulador importante de la lipognesis en el hgado es el elemento regulador de esteroles de unin protenas ( SREBPs ), factores de transcripcin que se sabe que tienen un papel importante en los cidos grasos de novo y la sntesis de triglicridos ( Horton et al . , 2002 ) . Las tres isoformas SREBP , SREBP -1a , SREBP - 1c , y de SREBP - 2 , tienen funciones que se superponen , y activar la expresin de ms de 30 genes implicados en la lipognesis ( Horton et al . , 2002 ) . Aumenta la insulina inducida en SREBP -1c ARNm conducen a la sntesis de cidos grasos de elevado y el hgado graso ( Shimomura et al. ,1999 ) . Se ha sugerido que la actividad de SREBP es un factor clave que participa en la acumulacin de lpidos en la enfermedad de hgado graso no alcohlico ( NAFLD ) , y que la activacin de PPAR y activada por AMP protena quinasa ( AMPK ) , que puede suprimir la actividad de SREBP , puede servir como tratamiento potencial opcin para EHNA ( Zhou et al , 2001 ; . Ahmed y Byrne , 2007 ) . Mientras que la etiologa de la EHNA puede ser , evidencia emergente multifactorial y complejo indica que los receptores nucleares son importantes en la patogenia de la EHNA ( Caldwell et al . , 2001 , Dai et al, 2003 ; . . Ip et al, 2004 ; George y Liddle, 2008 ) . Por ejemplo , tiazolidinedionas, la familia de frmacos ms prometedores para el tratamiento de la EHNA , activan la nuclear receptor de PPAR , que conduce a una mayor sensibilizacin a la insulina en pacientes NASH y de ese modo la disminucin de la esteatohepatitis ( Caldwell et al . , 2001 ) . La activacin de PPAR tambin tiene antiinflamatorio efectos ( Jiang et al . , 1998 ) . Adems , WY - 14 , 643 , un agonista de PPAR potente ,disminuye las concentraciones de triglicridos heptica y disminuye la hepatotoxicidad en un modelo animalde la EHNA (Ip et al . , 2004 ) . Curiosamente , los ismeros de PPAR y otros de tipo II receptores nucleares requerir retinoide receptor alfa X ( RXR ) como el socio heterodimeric obligado para la transcripcin de sus genes diana ( Ulven et al . , 1998 ) . Los retinoides tienen efectos anti- inflamatorios profundos ( Nozaki et al. , 2006). La capacidad de los

retinoides para inhibir la produccin de citoquinas est mediada por sus receptores nucleares ( Uchimuraet al . , 2001 ) . En modelos de ratn de la diabetes mellitus y la obesidad no insulino - dependiente, el RXR agonistas , LG100268 y LG100324 , funcionan como sensibilizadores a la insulina y disminucin hiperglucemia , hipertrigliceridemia , e hiperinsulinemia ( Mukherjee et al , 1997 ; . Liuet al . , 2000 ) . Adminstration crnica de LG100268 y LG100324 a ratas redujo la ingesta de alimentos y la ganancia de peso corporal ( Liu et al . , 2000 ) . Esto sugiere que los retinoides y sus receptores desempean un papel en la homeostasis de los lpidos ( Mukherjee et al , 1997 ; . Liu et al , 2000 ; . Thacher et al , 2000 . ) . En una reciente informe , indicamos que ( H- RXR - nulos ) los ratones - RXR nula hepatocitos exhiban mejorado la lesin heptica en asociacin con tanto el aumento de cidos grasos libres hepticas y produccin de citoquinas pro- inflamatorias ( Gyamfi et al. , 2008b ) . Adems, los niveles bajos de retinol srico estn asociados con carcinoma hepatocelular en pacientes con enfermedad heptica crnica ( Newsome et al . , 2000 ) . Hasta la fecha, no existen informes sobre el papel de RXR , los ms abundantes entre los tres isoformas de RXR ( , , ) en el hgado , en el develpoment de la EHNA ( Ulven et al . , 1998 ) . nosotros la hiptesis de que un compromiso en la va de sealizacin de retinoides / RXR tiene una significativa impacto negativo en la patogenia de la EHNA. La dieta MCD es un modelo de roedor nutricional estndar para EHNA que produce las caractersticas clave de EHNA humana , incluyendo esteatosis , inflamacin heptica , y fibrosis ( Weltman et al , 1996 . ; Ip et al . , 2004 ) . Los niveles elevados de fosfatasa alcalina (ALP ) , un marcador bioqumico para colestasis , se observan en sujetos con EHNA ( Sorrentino et al. , 2005 ) . En los estudios con roedores , reducida expresin de los transportadores canalicular resulta en colestasis ( Trauner et al . , 1999 ) . Adems ,

cambios en la expresin y localizacin de los transportadores hepticos han sido reportados en pacientes con enfermedad heptica colesttica crnica ( Keitel et al . , 2005 ) . Adems , el aumento de expresin de citoquinas proinflamatorias implicadas en la EHNA pueden alterar la expresin de los transportadores hepticos que conduce a un fenotipo colesttica ( Geier y col . , 2003 ) . Hemos informado anteriormente de que el MCD dieta puede inducir colestasis , sin embargo , existen pocos datos sobre la influencia de la dieta sobre MCD transportadores xenobiticos ( Lickteig et al , 2007 ; . . Gyamfi et al, 2008a ) . En este estudio se utiliz una dieta MCD para el tratamiento de ratones WT y H- RXR - nulos para investigar el papel de RXR de los hepatocitos en la patognesis de hgado graso no alcohlico . Los resultados de este estudio indican un aumento la susceptibilidad de los ratones H - RXR - nulos a la esteatohepatitis inducidos por la dieta MCD . nuestro hallazgos muestran que los factores de oxidacin de cidos grasos alterada e inflamatorias , en lugar de los factores implicados en el estrs oxidativo , juega un papel importante en la patogenia de la EHNA en H- RXR null ratones . Por otra parte, la baja regulacin de Oatp1a1 heptica y Oatp1b2 , as como la regulacin positiva del transportador de eflujo basolateral MRP4 puede ser caractersticas patolgicas crticas de la MCD dieta ingestin , adems de la esteatosis y la fibrosis.

MATERIALES Y METODOS Animales Los ratones que llevan la mutacin en los hepatocitos RXR se han descrito anteriormente ( Wan et . al, 2000 ) . PESO emparejados por edad ( de mezcla de antecedentes genticos de C57/BL/6 , 129/SvEvTac y Se utilizaron DBA -2) y H- RXR - nulo ratones ( 10-12 semanas de edad) en todos los experimentos ( Wan et al, 2000 ; . Wan et al , 2003 ) . . Los ratones fueron alojados en jaulas de acero microisolator a 22 C con un 12 - h/12-h , ciclo de luz / oscuridad. Debido a la tendencia de los animales para reducir su ingesta de alimentos slidos durante la administracin de una dieta MCD , los ratones se les dio una dieta lquida. Despus de 2 das de alimentacin los ratones una dieta lquida de control , los ratones fueron distribuidos aleatoriamente en dos grupos de la dieta (n = 8 ) , y se alimenta ya sea una metionina -colina suficiente ( control) o una dieta MCD durante 14 das . Las dietas fueron adquiridos desde Dyets Inc. (Bethlehem , PA). La dieta MCD fue similar a la dieta de control a excepcin de la eliminacin completa de la metionina y colina . Para la dieta de control , se proporcion metionina en

1,18 g / L y de colina a 0,66 g / L. La protena fue de 18,9 % de caloras de grasa , was16.5 % de las caloras , y 64,5 % de las caloras eran de hidratos de carbono. Los ratones se les dio libre acceso a los alimentos . Durante el perodo experimental , los pesos corporales individuales fueron registrados en la salida y una vez por semana despus de eso. Todos los procedimientos se llevaron a cabo en conformidad con las directrices del NIH para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio y fueron aprobado por la Universidad de Kansas Medical Center Institucional Cuidado de Animales y Uso Comit . Despus de 2 semanas de alimentacin , se obtuvieron muestras de sangre y se centrifugaron a 3000 rpm durante 15 min para recoger el suero . Los hgados se extirparon rpidamente , se pesaron y una porcin snapfrozen en nitrgeno lquido y se mantiene a -80 C , y posteriormente se utiliza para la extraccin de ARN , lpidos peroxidacin (LPO ) de ensayo, o la extraccin de los lpidos. El resto del tejido heptico fresco fue inmediatamente homogeneizada para el aislamiento de microsomas y citosol . Una porcin de cada hgado se fij en 10 % de formalina para hematoxilina y eosina ( H & E ) tincin . Niveles de alanina aminotransferasa srica (ALT ) , fosfatasa alcalina , colesterol , triglicridos y de cidos biliares El suero se almacen a -20 C y se utiliz para ensayo de ALT y actividades de ALP , as como el colesterol , las concentraciones de triglicridos , y cidos biliares . ALT en suero se determin usando ALT Liquid Kit de reactivos ( Pointe Scientific Inc. , Bruselas , Blgica). Serum ALP actividad se determin usando ALP (Liquid ) Juego de reactivos ( Pointe Scientific Inc. , Canton , MI). El colesterol srico y los niveles de triglicridos se determinaron por el colesterol E -test y juegos de E-test de triglicridos (Wako Pure Chemical Industries , Richmond, VA ), respectivamente. Suero concentraciones de cido de bilis fueron determinada utilizando un kit disponible comercialmente ( colorimtrico total de cidos biliares Kit de ensayo ; Bioquant , San Diego, CA ) .

H & E tincin de secciones de hgado y el anlisis de la morfologa Despus de la fijacin de los hgados con formol al 10% / solucin salina tamponada con fosfato, hgados fueron seccionadas y teidas con H & E para el examen histolgico . Las lminas fueron vistos a ciegas y anotado para esteatosis , la inflamacin , la necrosis y la fibrosis utilizando nuestros criterios descritos anteriormente ( Dai et al . , 2003 ) . La patologa del hgado se obtuvo de la siguiente manera : esteatosis ( el porcentaje de hgado clulas que contienen grasa ) , < 25 % = 1 + , < 50 % = 2 + , < 75 % = 3 + , > 75 % = 4 + ; la inflamacin , la necrosis , y la fibrosis , 1 foco = 1 + , 2 o ms focos = 2 + .

Heptica de triglicridos , cidos grasos no esterificados ( NEFA ) , y el cido tiobarbitrico reactivos Niveles ( TBARS) Total de lpidos del hgado se extrajeron a partir de 100 mg de homogeneizado de hgado usando metanol y cloroformo como se ha descrito previamente ( Folch et al , 1957 ; . . Zhou et al , 2006 ) . triglicridos heptica se cuantific usando un kit de prueba de triglicridos ( Wako Pure Chemical Industries, Richmond, VA ) . Niveles de NEFA hepticos se determinaron utilizando el kit de prueba NEFA C ( Wako Pure Qumica Industries, Richmond , VA) . Para la determinacin de perxidos de lpidos , 50 mg de hgado era homogeneizaron en 1,15 % de KCl . TBARS se miden en 200 l homogeneizado de hgado tal como se describe previamente ( Gyamfi y Wan , 2006 ) . Actividad heptica CYP2E1 Fracciones microsomales se separaron del tejido heptico fresco como se describi previamente ( Gyamfi et al . , 2006 ) . Actividad CYP2E1 en microsomas hepticos se estim colorimtricamente midiendo la hidroxilacin de p- nitrofenol a 4 - nitrocathecol ( Reinke y Moyer , 1985 ) . Anlisis de transferencia Western Fracciones citoslicas y microsomales se extrajeron como se ha descrito previamente ( Gyamfi et al . , 2006 ) . Homogeneizado de hgado ( 50 g / carril ) , microsomas ( 30 g / carril ) y citosol ( 30 mg / carril) se separadas por 10 o 15 % en geles de SDS-PAGE , se electrotransfirieron sobre difluoruro de polivinilideno (PVDF ) membranas y a inmunotransferencia con anti -acil- coenzima A oxidasa 1 ( ACOX1 ) ( Abgent , San Diego, CA ) , anti - interleucina - 1 ( IL - 1 ) ( Chemicon International , Temecula, CA , EE.UU. ) o anti- CYP4A14 y protena de unin de cidos grasos anti- hgado ( L - FABP ) ( Santa Cruz Biotechnology , Santa Cruz , CA, EE.UU. ) de anticuerpos . Las transferencias se incubaron a continuacin con la apropiada peroxidaseconjugated anti- IgG de conejo (Santa Cruz Biotechnology , Santa Cruz, CA, EE.UU. ) diluido en Trisbuffered solucin salina con 0,1 % de Tween 20 ( TBST ) ms 1 % de leche en polvo sin grasa durante 1 h en la sala de temperatura . Despus de sondaje , blots fueron despojados y reprobed con anti- -actina (Santa Cruz Biotecnologa , Santa Cruz, CA, EE.UU. ) o anti- GAPDH ( Abcam Inc. , Cambridge, MA, EE.UU. ) anticuerpo . Las protenas fueron vistos usando quimioluminiscencia aumentada . Las concentraciones de protenas se determinaron por el mtodo de Bradford ( Bradford , 1976 ) . La cuantificacin de los niveles de ARNm usando la reaccin en cadena de la polimerasa en tiempo real ( PCR) y amplificacin de seal de ADN ramificado ( bDNA ) de ensayo

ARN total fue aislado de los tejidos del hgado congelados utilizando el reactivo TRIzol de acuerdo con la el protocolo del fabricante ( Invitrogen, Carlsbard , CA). Concentracin de ARN y la calidad eran determinado espectrofotomtricamente a 260 nm y la relacin A260/A280 , respectivamente . Realtime Se utiliz PCR para cuantificar el nivel de ARNm de protena inflamatoria de macrfagos - 2 ( MIP- 2 ) , IL - 1 , factor de necrosis tumoral ( TNF ) , - actina de msculo liso ( - SMA ) , L FABP , carnitina palmitoiltransferasa 1 , ACOX1 , regulador de la protena de unin al elemento de esteroles (CPT- 1 ) ( SREBP ) -1c , SREBP - 2 , PPAR , inhibidores de la HMG - CoA reductasa , la acetil CoA carboxilasa 1a (ACC- 1a) , cido graso sintasa ( FAS) , translocasa de cidos grasos ( FAT/CD36 ) , CYP4A14 , CYP7A1 , CYP8B1 ,actina , y GAPDH como se describi previamente ( Gyamfi et al . , 2008b ) . Los cebadores y las sondas ( Tabla 1 ) fueron diseados utilizando Primer Express 2.0 (Applied Biosystems , Foster City, CA). la reacciones de amplificacin se llevaron a cabo en un sistema de deteccin de secuencias ABI Prism 7900 (Applied Biosystems, Foster City, CA ) como se describe previamente ( Gyamfi et al . , 2008b ) . la ARNm de los transportadores hepticos se cuantific usando el ensayo bDNA ( QuantiGene , alta Volumen de ADNr de amplificacin de seal Kit ; Panomics , Fremont , CA) con modificaciones ( Hartley y Klaassen , 2000 ) . Sonda fija transportador especficos fueron diseados como anteriormente descrito : . Mrp2 , 3 , y 4 ( . Maher et al , 2005 ) ; Ntcp , Bsep , Mdr2 , y Mdr1b ( Maher et al , 2006 ) , y polipptido de transporte de aniones orgnicos ( Oatp ) 1a1 , 1a4 , 1b2 ( Cheng et al , 2005 ) . . Todos los reactivos para el anlisis (es decir , tampn de lisis , tampn amplificador de sonda / etiqueta, y la solucin de sustrato) fueron suministrados por el fabricante ( QuantiGene , High Volume bDNA amplificacin de seal Kit ; Panomics , Fremont, CA ) . El ARN total ( 1 g / l ; 10 l / pocillo ) se aadi a cada pocillo de una Placa de 96 pocillos que contena tampn de captura por hibridacin y 50 l de cada sonda conjunto diluida. total ARN se dej hibridar con cada sonda conjunto durante la noche a 53 C. hibridacin posterior las etapas se llevaron a cabo segn el protocolo del fabricante y la luminiscencia se cuantific con un Quantiplex 320 bDNA Luminometer interfaz con Quantiplex Software de gestin de datos Versin 5.02 para el anlisis de la luminiscencia a partir de placas de 96 pocillos . La luminiscencia para cada pocillo se inform como unidades relativas de luz (RLU) por 10 g de ARN total. Anlisis estadstico Los datos se presentan como medias SEM (n = 4-8) y se analizaron usando el software SigmaStat 3.5 (Systat Software, Inc. de Chicago, IL). Efecto del genotipo, la dieta MCD, y su interaccin fueron analizados mediante un anlisis de dos vas de la varianza (ANOVA), con pruebas post-hoc de Bonferroni. la Valor de p <0,05 fue considerado estadsticamente significativo.

Resultados Efecto de la dieta y la deficiencia de MCD RXR en el peso corporal , peso del hgado y suero heptica los niveles de lpidos , los niveles de perxido de lpidos , actividad CYP2E1 , esteatosis y la inflamacin. La dieta MCD disminuy el peso corporal tanto en el WT y ratones H - RXR - nulos ( Tabla 2 ) . Sin embargo , la disminucin en el peso corporal fue mayor en ratones H - RXR - nulos que en los ratones WT( Tabla 2 ) . La dieta MCD tambin disminuy el peso del hgado en ambos genotipos de los ratones , sin embargo , una se encontr diferencia estadsticamente significativa slo en ratones H- RXR - nulos (Tabla 2) . Cuando el hgado de peso se expres como por ciento de peso corporal , se encontr ningn cambio significativo en tanto genotipos de los ratones alimentados con la dieta MCD ( Tabla 2 ) . El genotipo influy en el colesterol sricoy los niveles de triglicridos, que fueron mayores en los ratones H- RXR - nulos que en ratones WT (Tabla 2 ) . La dieta MCD disminucin de los niveles de colesterol y de triglicridos en suero en ambos genotipos de los ratones ( Tabla 2 ) . Dos vas ANOVA revel efectos significativos (P < 0.05 ) de genotipo y el MCD dieta sobre el colesterol srico y los niveles de triglicridos . Los niveles de triglicridos hepticos se incrementaron en la dieta MCD en ambos WT y en H- RXR nulo ratones (Tabla 2 ) . Los niveles basales de NEFA hepticas entre WT y ratones H - RXR - nulos no fueron diferentes ( Tabla 2 ) . Adems , la dieta MCD no aument los niveles de NEFA en ratones WT , pero lo hizo en los hgados de los ratones H- RXR - nulos (Tabla 2 ) . Ratones WT alimentados con la dieta MCD haba aumentado LPO heptica tal como se cuantifica por el ensayo TBARS ( Tabla 2 ) . Los ratones H- RXR - nulos no slo tenan TBARS constitutivamente ms bajos, la dieta MCD no aument TBARS en el hgado (Tabla 2) . CYP2E1 est involucrado en LPO , y sus niveles se aumentan en un modelo de rata de la dieta de la esteatohepatitis ( Weltman y col . , 1996 ) . de acuerdo con un aumento de la LPO en los ratones WT alimentados - MCD , actividad de la enzima CYP2E1 se aument ( Tabla 2 ) . Este aumento en la actividad de CYP2E1 no se observ en los ratones H - RXR - nulos alimentados con la dieta MCD ( Tabla 2 ) . El aumento en los niveles de TBARS y la actividad de CYP2E1 por la dieta MCD en ratones WT fue mayor que en los ratones H - RXR - nulos (Tabla 2 ) . Para determinar la acumulacin de lpidos en el hgado , Se llev a cabo la tincin H & E . Secciones hepticas indicaron que las gotas de lpidos fueron raros en los hgados de los ratones alimentados con la dieta de control . Independientemente del genotipo, las gotas de lpidos fueron comunes en ambos WT y ratones H - RXR - nulos alimentados con la dieta MCD ( fig. 1 ) . La puntuacin histolgico indic la presencia de esteatosis en los dos genotipos de los ratones alimentados con la dieta MCD ( Tabla 2 y . Fig. 1 ) . mientras una inflamacin leve fue observado por puntuacin de la histologa en slo ratones H-RXR-nulos (Tabla 2),

Sin embargo, la necrosis y la fibrosis estaban ausentes en los dos genotipos de los ratones (datos no presentados). Efecto de la dieta y la deficiencia de MCD RXR en los niveles de mRNA de los genes lipognicos El nivel basal de ARNm de SREBP - 1c no fue diferente entre WT y ratones H - RXR - nulos ( Fig. 2 ) . Adems , la dieta MCD no alter significativamente la expresin del gen de SREBP - 1c en ya sea WT o ratones H - RXR - nulos ( fig. 2 ) . La dieta MCD no aument los niveles de mRNA de FAS y el CAC -1a , meta genes para SREBP -1c en ratones WT , mientras que se incrementaron 4.8 y 2,0 veces, respectivamente , en ratones H - RXR - nulos administr la dieta MCD ( fig. 2 ) . Adems , el aumento de los niveles de mRNA de la FAS y el CAC - 1a por la dieta MCD en ratones H - RXR nula fue mayor que en los ratones WT alimentados con la dieta MCD ( fig. 2 ) . Dos vas ANOVA indic que el aumento de la FAS y los niveles de mRNA ACC -1a en los ratones H- RXR - nula fue influenciado por la la interaccin del genotipo y la dieta MCD . Los niveles de mRNA de SREBP - 2 no fueron diferentes entre el WT y ratones H - RXR - nulos alimentados con la dieta de control (Fig. 2 ) . Mientras que la dieta MCD no alter SREBP - 2 niveles de mRNA en los ratones WT , aument SREBP - 2 niveles de mRNA de 2,2 veces en ratones H- RXR - nulos (Fig. 2) . El inhibidor de la HMG CoA reductasa gen SREBP - 2 reductasa objetivo no era aumentado significativamente en los ratones PESO por la dieta MCD . Sin embargo , inhibidores de la HMG CoA reductasa los niveles de mRNA se incrementaron 5,4 veces en los ratones H - RXR - nulos alimentados con la dieta MCD ( fig. 2 ) . ANOVA de dos vas indic que el incremento en la SREBP - 2 , pero no los niveles de inhibidor de la HMG CoA reductasa de mRNA en los ratones H - RXR - nula fue influenciado por el efecto combinado del genotipo y del MCD dieta . La dieta MCD aument la absorcin de cidos grasos transportador CD36 libre 3.7 veces mayor en los ratones WT pero no en H - RXR - nulos ratones ( Fig. 2 ) . Efecto de la dieta y la deficiencia de MCD RXR en los niveles de mRNA de los genes de oxidacin de cidos grasos La deficiencia de hepatocitos RXR no cambi los niveles de ARNm de PPAR basales (Fig. 3) . Adems , la dieta MCD no alter los niveles de ARNm de PPAR en ratones WT , pero la dieta MCD disminuy Niveles de ARNm de PPAR en ratones H- RXR - nulos (Fig. 3 ). El nivel de la CPT- 1 mRNA fue similar entre WT y ratones H - RXR - nulos ( fig. 3 ) . La dieta MCD no cambi el gen de CPT- 1 expresin en ratones WT , sin embargo , la dieta MCD marcadamente disminuida de CPT- 1 la expresin gnica en los ratones H - RXR - nulo (Fig. 3 ) . Adems , tanto el ARNm y ACOX1 constitutiva los niveles de protena fueron menores en los ratones H- RXR - nulos que en ratones WT (Fig. 3) . La dieta MCD no afect ni el ARNm ACOX1 o los niveles de protena en los ratones WT , mientras que ambos eran

disminuido en los ratones H - RXR - nulos (Fig. 3 ) . La expresin basal de la L - FABP ARNm y protena fueron menores en los ratones H- RXR - nulos que en ratones WT (Fig. 3 ) . Adems , el MCD dieta no alter la L - FABP ARNm o niveles de protena en ratones WT (Fig. 3 ) . El H- RXR - nula ratones tenan aproximadamente un 50 % menos de L - FABP ARNm y protenas que los ratones WT , y la dieta MCD disminuy an ms en los ratones H- RXR - nulos (Fig. 3) . CYP4A14 ARNm y los niveles de protena fueron mucho menor en ratones H - RXR - nulos que en los ratones WT (Fig. 3 ) . El ARNm fue CYP4A14 aumento de 1,8 veces , pero no la protena en ratones WT alimentados con la dieta MCD . La dieta MCD no lo hizo aumentar ya sea CYP4A14 ARNm o niveles de protena en los ratones H - RXR - nulos ( fig. 3 ) y el niveles fueron ms bajos en comparacin con los ratones WT alimentados con la dieta MCD (Fig. 3) . Efecto de la dieta y la deficiencia de MCD RXR en los niveles de ARNm y protenas de proinflamatoria genes La dieta MCD no indujo los niveles de MIP- 2 , TNF , IL- 1 , y -SMA mRNA en la Ratones WT (Fig. 4 ). Sin embargo , la dieta aument MCD MIP- 2 , TNF , IL - 1 , y - SMA ARNm por 2,5 , 1,7 , 2,0 y 1,7 veces, respectivamente , en los ratones H- RXR - nulos (Fig. 4 ) . El aumento en MIP - 2 e IL - 1 los niveles de mRNA de la dieta MCD en ratones H - RXR - nula fue mayor que en WT ratones alimentados con la dieta MCD ( fig. 4 ) . Deficiencia de hepatocitos RXR no cambi basal de IL- 1 niveles de ARNm , pero aument la protena IL- 1 en ratones H- RXR - nulos (Fig. 4 ) . La dieta MCD hizo no aumenta los niveles de protena IL - 1 en ratones WT (Fig. 4) . Sin embargo , la dieta aument MCD