Volume 2, 2014

avianinsight
Con la llegada de nuevas generaciones de aceites y surfactantes la tecnologa de las emulsiones aplicada a las vacunas ha sido mejorada considerablemente a travs de los aos. Dependiendo del tipo de aceites y surfactantes empleados, su formulacin y la cantidad de energa agregada, se pueden disear varios tipos diferentes de emulsiones para propsitos especficos.

A LO H M A N N A N I M A L H E A LT H N E W S B R I E F

Vacunas en Emulsin Oleosa

Antecedentes En 1796, se dio uno de los logros ms importantes para la ciencia cuando Edward Jenner descubri que la viruela en humanos puede ser prevenida mediante vacunacin; originndose as el trmino vacuna (1, 4). Aunque el Maria Elena Vazquez, Director of R&D concepto de vacunacin tiene ms de doscientos aos y se han introducido nuevos descubrimientos en la ciencia y la tecnologa, la meta bsica de esta prctica sigue siendo la misma: prevenir o reducir la infeccin mediante la generacin de una respuesta inmune en el hospedador. Hay dos conceptos sobre las vacunas que siguen vigentes: las vacunas vivas atenuadas y las vacunas inactivadas. En las vacunas vivas atenuadas la virulencia del antgeno est reducida y aunque an est vivo y puede ser replicado, los signos clnicos en el hospedador son minimizados. Aunque el concepto de vacuna viva surgi con Jenner al comienzo del siglo XIX, el trmino atenuacin naci con la observacin emprica de que la virulencia de los grmenes se reduca despus de varios pasajes en otra especie animal no hospedadora (lapinizacin). Este procedimiento fue utilizado por Louis Pasteur en 1881 en el desarrollo de la vacuna para erisipela porcina (1). Las vacunas inactivadas eliminan la virulencia del germen inactivndolo con un mtodo qumico o fsico y convirtindolo en un antgeno no vivo. La primera evidencia de inactivacin antignica apareci en 1948 cuando se utiliz formaldehido con la intencin de mejorar la eficacia y seguridad de las vacunas para la fiebre aftosa (1). Pero las vacunas inactivadas actuales no podran existir sin otra contribucin cientfica importante, los adyuvantes. En 1924, Gaston Ramon, un veterinario del Instituto Pasteur y el primer Director General de la Organizacin Mundial de Sanidad Animal (OIE) fue el primero en utilizar hidrxido de aluminio como adyuvante para las vacunas de ttanos y difteria en Europa (1). El concepto de emulsin surgi en 1916, cuando Le Moignie y Pinoy (4) prepararon un uido viscoso y muy inestable. Sin embargo, la verdadera introduccin de la tecnologa de la emulsin ocurri en 1936, cuando Jules Freund desarroll una emulsin agua-aceite que contena micobacterias muertas, que se conocen hoy como adyuvante completo de Freund (3). Vacunas Emulsionadas para Avicultura Una emulsin se define como gotculas de un lquido, en lo que se denomina la fase dispersa, suspendida en una segunda fase lquida denominada la fase continua (3, 5). Con la llegada de nuevas generaciones de aceites y surfactantes la tecnologa de las emulsiones aplicada a las vacunas ha sido mejorada considerablemente a travs de los aos. Dependiendo del tipo de aceites y surfactantes empleados, su formulacin y la cantidad de energa agregada, se pueden disear varios tipos diferentes de emulsiones para propsitos especficos. En avicultura, el tipo ms comn de vacuna emulsionada es la formulacin agua en aceite (WO). En una

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formulacin WO el antgeno est en la fase acuosa y es emulsificado o dispersado en un aceite de alta calidad (fase oleosa). En una emulsin aceite en agua (OW) el antgeno est en la fase acuosa y la proporcin aceite/ agua es baja. A pesar de la excelente uidez de las emulsiones OW no se usan con frecuencia en las vacunas para avicultura debido a la duracin relativamente corta de la inmunidad. Finalmente, las emulsiones agua en-aceite-en agua (WOW) son emulsiones WO que son luego suspendidas en una fase acuosa exterior. Las emulsiones WOW pueden ser preparadas por dos mtodos. Un mtodo es hacer emulsificaciones dobles. En la primera emulsificacin se prepara una emulsin tradicional WO y luego se re-emulsifica en una segunda fase acuosa continua. En el otro mtodo WOW la doble emulsin se realiza en un paso usando una mezcla bien balanceada de emusificantes. La decisin de usar uno u otro mtodo depende del fabricante de la vacuna y de la exibilidad deseada en el momento de formular la vacuna. Si bien cada mtodo tiene sus ventajas y desventajas, los dos procedimientos pueden producir la calidad deseada para la vacuna si se realizan de la manera adecuada. Las vacunas emulsificadas son particularmente adecuadas para avicultura por las siguientes razones: Los pollos parecen ser ms tolerantes al aceite que otras especies animales Las vacunas emulsificadas producen una duracin ms prolongada de la inmunidad que otras preparaciones de vacunas (por ej., adyuvantes de Al(OH)3) y por tanto proveen inmunidad de por vida para el ciclo de produccin de un ao para una gallina. Versatilidad de la formulacin, se pueden incluir antgenos virales y bacterianos y combinaciones de los dos. Capacidad de preparar vacunas multivalentes que contienen antgenos

Fig. 1 Depsitos de emulsin en el cuello de un pollo, despus de 2 semanas de vacunacin subcutnea.

la mayora de los casos la calidad se asegura controlando todos los pasos en el proceso de produccin, incluyendo las materias primas y el mtodo de emulsificacin utilizado. Algunos de los parmetros de control de calidad que se usan generalmente para indicar calidad son: dispersin de la gotcula en agua, viscosidad, uidez en la jeringa, tamao de las partculas y homogeneidad visual del uido despus de incubacin a diferentes temperaturas.

para mltiples enfermedades diferentes permitiendo as la inmunizacin para todas en una inyeccin. Propiedades Las vacunas emulsificadas inducen la formacin de depsitos en el sitio de la inyeccin (Figura 1); el objetivo es que el aceite y el(los) antgeno(s) sea(n) liberado(s) a lo largo de un periodo de tiempo para estimular clulas presentadoras de antgeno. La presentacin inicial del antgeno la realizan los macrfagos por endocitosis y luego los ndulos linfticos (el timo en pollos) liberan linfocitos especficos para el antgeno (3, 4). Dependiendo de la formulacin de la emulsin y de la calidad del aceite, la cintica de la liberacin del antgeno vara de acuerdo con la tolerancia al aceite del hospedador y el grado de inamacin en el sitio de la inyeccin. Los aceites que se metabolizan rpidamente pueden ser ms seguros en lo que hace referencia a la inamacin pero a la vez inducen una respuesta inmune dbil o pasajera. Las emulsiones WOW estn diseadas para tener las mismas caractersticas inmunognicas que las formulaciones WO con la ventaja de tener reacciones adversas mnimas o no tener reacciones adversas o en el sitio de aplicacin. Eficacia y Seguridad La eficacia y seguridad de las vacunas emulsificadas estn directamente relacionadas con la calidad de la emulsin. En

Fig. 2. Demostracin del tipo de emulsin WO. Una gota de la emulsin a probar se pone en una caja de Petri con agua desionizada.

La prueba de la gotcula determina el tipo (WO, OW y WOW) de la emulsin formada. Una gotcula de emulsin WO en una caja de Petri con agua permanecer en la superficie mientras que en una emulsin OW se dispersar en el agua (Figura 2). Como la fase externa de las emulsiones WOW es agua y la fase interna es WO el resultado esperado en la prueba de la gotcula es una combinacin de las dos anteriores: parte de la gota ser dispersada y parte permanecer en la superficie del agua. La viscosidad y uidez en la jeringa de las emulsiones estn ligadas con el balance hidrfilo-lipfilo (HLB). Un balance inadecuado en la proporcin de los surfactantes o en las fases de la emulsin puede producir una emulsin cremosa y muy viscosa. El balance de los surfactantes, el proceso de emulsificacin y la calidad de los antgenos

tiene una inuencia directa en el tamao de partcula de la emulsin. Por lo general se cree que las emulsiones con menor tamao de partcula y una distribucin homognea mantienen las partculas (micelas) en suspensin por ms tiempo y por tanto son estables por un periodo ms prolongado

Propiedades de la Emulsin Viscosidad Fluidez en la Jeringa Estabilidad Liberacin del Antgeno Duracion de la Inmunidad Reacciones en el Sitio de Inyeccin

OW Baja Baja Larga Rpida Corta Ninguna

WO Mediana Mediana Larga Lenta Larga Baja-fuerte

WOW Baja Baja Mediana Rpida y lenta Mediana-larga Ninguna-baja

Fig. 3. El proceso de emulsificacin tiene influencia directa en el tamao de las gotculas. La nica diferencia entre el proceso A y el proceso B es el proceso de emulsificacin.

(Figura 3). La estabilidad en tiempo real de las emulsiones es determinada generalmente a 4C, pero con el fin de predecir estabilidad a largo plazo la emulsin puede ser estresada a 37C (Figura 4). Diferencias Entre Emulsions Con frecuencia los productores avcolas

preguntan por qu el mismo tipo de emulsin puede presentar variaciones en color u otras caractersticas. En la mayora de los casos el color de la emulsin est dado por el color del antgeno usado en la formulacin. Los antgenos bacterianos y virales tienen diferentes colores e intensidades como resultado del medio en el que fueron propagados. Por ejemplo, una emulsin de antgenos virales propagados en cultivos celulares ser probablemente de diferente color que una hecha con antgeno bacteriano propagado en caldo de cultivo. La intensidad del color blanco en la emulsin puede tambin variar de acuerdo con el tipo de emulsin (WO-WOW). Por ejemplo, las emulsiones WO son un poquito ms viscosas que las emulsiones WOW y por tanto pueden

parecer ms blancas. El Mejor Tipo de Emulsin para Avicultura Definir el mejor tipo de emulsin para una vacuna aviar es una tarea compleja. Esta decisin debe basarse en las necesidades especficas y los desafos de la granja avcola, aunque algunas veces la decisin se basa ms en factores econmicos que en el desempeo de la vacuna. Aun as, un buen comienzo es identificar las ventajas y desventajas que las vacunas emulsificadas pueden ofrecer. Eficacia de la Vacuna y Duracin de la Inmunidad en Emulsiones Aviares Algunas veces se tienen expectativas poco realistas del desempeo de las emulsiones en el campo. Esta falsas expectativas se originan porque se malinterpretan los trminos eficacia de la vacuna y duracin de la inmunidad. La eficacia de la vacuna est determinada o definida por comparacin directa entre pollos vacunados y pollos no vacunados en condiciones similares de prueba. Se basa en la evaluacin de un indicador protectivo que puede ser la tasa de infeccin, signos clnicos, mortalidad o cualquier otra variable adecuada. Este estudio se realiza generalmente durante el proceso de obtencin de la licencia. Por otro lado, la duracin de la inmunidad puede ser definida como el periodo de tiempo en el cual la

Fig. 4. Efecto de la temperatura de almacenamiento sobre el tamao de partcula de la emulsin

emulsin es capaz de inducir en el ave inmunidad adecuada para reducir la incidencia de la enfermedad. La infeccin natural o la vacunacin no siempre proporcionan inmunidad de por vida; por tanto, la duracin de la inmunidad vara de acuerdo con el tipo de emulsin, calidad de aplicacin de la vacuna, raza del ave, estado de salud general de la parvada, condiciones climticas, edad, desafos infecciosos y combinaciones de lo anterior. Es por ello que el diseo y puesta en marcha de un programa adecuado de vacunacin, de acuerdo con las necesidades del complejo avcola juega un papel definitivo. Resumen Hace cien aos, Le Moignie y Pinoy introdujeron la primera formulacin emulsificada y todava sigue en uso. Las emulsiones se usan generalmente para realzar la respuesta inmune a antgenos que son malos inmungenos o para prolongar la duracin de la respuesta inmune a un antgeno. En avicultura los tres tipos de emulsiones usados con mayor frecuencia son OW, WO y WOW. La seleccin del tipo de emulsin o sus combinaciones debe basarse en las necesidades de la operacin avcola. Algunas razas aviares pueden ser ms sensibles que otras a ciertos aceites y formulaciones: reproductoras pesadas comparadas con ponedoras. El conocimiento de la clase de microorganismos prevalente en la granja junto con el nivel de desafo bacteriano/viral son tambin variables importantes a considerar para definir los programas de vacunacin y las combinaciones de vacunas.

Deben definirse enfermedades especficas, zonas endmicas o reas de alto desafo, equilibrio entre efectos secundarios y duracin de la inmunidad. La inmunidad de por vida no es una expectativa muy realista, pero con el desarrollo de un programa adecuado de vacunacin junto con una combinacin de vacunas de buena calidad y el establecimiento de sistemas de bioseguridad adecuados en la granja es muy posible que las parvadas de aves desarrollen la mejor proteccin inmune para cubrir el periodo de la vida en el cual las aves son ms vulnerables a adquirir la enfermedad. Referencias 1. Lombard M., Pastoret P.P., and Moulin A.M. A brief history of vaccines and vaccination. 2007. Rev. sci. tech. Off. int. Epiz. 26(1):2948. 2. Petrovsky N. and Aguilar J.C. 2004. Vaccine adjuvants: Current state and future trends. Immunology and Cell Biology. 82: 488-496. 3. Aucouturier J., Dupuis L. and Ganne V. 2001. Adjuvants designed for veterinary and human vaccines. Vaccine 19: 266-2672 4. Marciani D.J. 2003. Vaccine adjuvants, role and mechanisms of action in vaccine immunogenicity. Drug discovery today. 8(20):934943. 5. Robins M.M., Watson A.D. and Wilde P.J. 2002. Emulsions creaming and rheology. Current opinion in Colloid and Interface Science. 7:419-425.

Notas del Director de Ventas

La produccin de vacunas para generar una respuesta inmune segura y efectiva es muy compleja. Las vacunas inactivadas han sido y seguirn siendo una parte clave de la lnea de productos elaborados en las instalaciones de Winslow, Maine. La emulsin en las vacunas inactivadas es un ingrediente tan esencial en el producto terminado como el(los) antgeno(s) utilizado(s). La industria avcola acudi primero a las vacunas inactivadas para mejorar la salud de las aves y la salud de la progenie. Ms recientemente estas vacunas se ven como una intervencin para mejorar la seguridad alimentaria. La necesidad de que las aves desarrollen inmunidad ante ms antgenos pone mayor presin en que tengamos la mejor emulsin posible. Esa presin es la razn por la cual Lohmann Animal Health dedica mucha atencin, recursos y sistemas a la produccin y mejora de emulsiones y vacunas de alta calidad. Para mayor informacin acerca de nuestras emulsiones y vacunas, visite nuestro sitio web en www.lahinternational.com o acuda a uno de nuestros gerentes regionales o gerentes del servicio tcnico. Como siempre, estamos muy agradecidos con nuestros clientes.

Tim Hopson Director de Ventas, para EE.UU. & Canada Lohmann Animal Health International, Inc.

La tecnologa, la calidad y los sistemas utilizados en la elaboracin de las vacunas avcolas y las emulsiones deben seguir avanzando.

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