BIOQUIMICA FUNDAENTAL

Practica: No 1 Propiedades de los Aminocidos y las Protenas Fecha de realizacion: 21-Febrero-2013 1. INTRODUCCION

Las protenas son biomolculas formadas bsicamente por carbono, hidrgeno, oxgeno y nitrgeno. Pueden adems contener azufre y en algunos tipos de protenas, fsforo, hierro, magnesio y cobre entre otros elementos. Sus subunidades basicas son los que se conocen como aminocidos de las cuales hay mas de 500, aunque solo 20 forman parte de la estructura de las protenas. Para cada uno de estos aminocidos existe uno o ms codones especficos que los codifican en la traduccin gentica, siguiendo el camino universal de: ADN->ARNm->PROTEINA La estructura de los aminocidos proteicos es muy similar, ya que todos tienen el C al que estn unidos 4 sustituyentes como son el NH2, el COOH, el H y el grupo radical R. La diferencia entre uno y otro aminocido radica en la cadena lateral R, dentro de la cual en el caso de que existiesen carbonos se continuaran numerando segn el alfabeto griego: , , ,... PROPIEDADES DE LOS AMINOACIDOS Estereoisomera

Estereoisomera, presentan ismeros que difieren en su orientacin espacial.Todos los aminocidos tienen un carbono asimtrico o quiral, con excepcin de la glicina, y por lo tanto pueden ocupar diversas posiciones en el espacio. Se trata de ismeros pticamente activos, que hacen girar el plano de la luz polarizada. A la derecha -> dextrorrotatorio (+) ; A la izquierda -> Levorrotatorio (-)

-D y L no tienen nada que ver con la polarizacin de la luz. Los estereosimeros tienen idnticas propiedades fsicas y qumicas, con excepcin claro est de la polarizacin de la luz. Propiedades cidobase de los aminocidos

-COOH ->COO +

-NH2 ->NH3 - k se conoce como la constante de disociacin, y el pk es por lo tanto el punto

donde el cido se ha disociado al 50%. Todos los grupos ionizables tienen un pk de manera que en ese pH se dan cantidades equimolares de ambas formas. Todos los aminocidos presentan en solucin acuosa propiedades tanto cido como base, recibiendo por lo tanto el nombre de anfteros o anfolitos. El aminocido puede presentar tambin una forma dipolar que tambin recibe el nombre de ion hbrido. A pH fisiolgico de 7.4 la forma predominante es la bipolar. Se llama punto isoelctrico o pI al punto donde el aminocido presenta carga neta 0. Enlace peptdico

- Se trata de un enlace tipo amida covalente que se establece entre el extremo - carboxilo de un aminocido y el extremo - amida del siguiente. - Tiene lugar conjuntamente con la formacin de una molcula de agua. Nomenclatura de los pptidos

- Los pptidos reciben el nombre de manera que se va del amino terminal al carboxilo terminal. - Los nombre de los distintos residuos se van acabando en -il, con excepcin del ltimo, donde se nombra totalmente el resto. Tipos de pptidos o o Proteicos No proteicos

Propiedades de las protenas Las propiedades de las protenas servirn para clasificarlas. Posee propiedades cido base. Tan slo se pueden ionizar los extremos terminales de las protenas, al igual que las cadenas laterales. La curva de titulacin es demasiado compleja de realizar, por lo que el pI es determinado de manera experimental. Pueden ser solubles, aunque hay una serie de factores que intervienen en esta capacidad. pH En su pI la protena muestra su mnimo de solubilidad. Existe pues la posibilidad de precipitar selectivamente las protenas. Se mantiene la configuracin nativa. Fuerza inica Al colocar una protena en una solucin con una concentracin excesiva de sales, la protena precipita, de manera que se produce una concentracin por salado, ya que la sal secuestra la capa de agua ms prxima a la protena, provocando as que esta precipite. En ocasiones una concentracin de sales baja puede favorecer la solubilidad de la protena. Se conserva la configuracin nativa. Temperatura En el intervalo de 0 a 40 la solubilidad aumenta, pero al pasar de los 40 la protena pierde la configuracin nativa. Disolventes orgnicos Etanol o acetona (0 C) Reducen la solubilidad, provocando la precipitacin. Se mantiene la configuracin nativa. Detergentes Se solubilizan las protenas. Algunos detergentes son: o Tritn X 100. o Tween 20.

 Se conserva la configuracin nativa. Agentes qumicos desnaturalizantes. TCA (cido tricloroactico) PCA (cido perclrico) Se pierde la configuracin nativa.

2.

OBJETIVOS:

Se realizan las reacciones indicadas en la prctica y se verifica si las sustancias tienen precipitados, para la identificacin de los aminocidos que constituyen a una protena. Observar el efecto que producen algunos agentes fisicoqumicos sobre la solubilidad de la protenas 3. 4. RESULTADOS OBTENIDOS INTERPRETACION Y CONCLUCIONES DE CADA UNA DE LAS REACCIONES REACCIN DE LA NINHIDRINA Esta reaccin detecta grupos amino libres en un pH alcalino. Esta prueba es positiva tanto para protenas como para aminocidos Por lo anterior se esperaba que todas las muestras diesen positivo con excepcin del agua que no posee aminocidos y por lo tanto tampoco protenas, lo cual indica que los resultados obtenidos fueron correctos. REACCIN DE MILLON La presencia de cantidades relativamente altas de mercurio conduce a la formacin de Nitrato de mercurio (I) Hg2 (NO3)2 el cual en medio fuertemente cido reacciona con el grupo -OH de la tirosina produciendo una coloracin roja caracterstica Por lo anterior lo esperado es que aquellas protenas con tirosina y desde luego la tirosina diesen positivo cosa que sucedi con la albmina, gelatina y ya mencionada Tirosina el resultado obtenido es correcto. REACCIN DEL PLOMO PARA CISTEINA Es una prueba para identificar aminocidos azufrados y las protenas que los contienen, Se reconocen por la formacin de una coloracin negra o gris. La albmina contiene una cierta concentracin de grupo sulfhidrilio, y como lo dice la prueba es para identificar grupos azufrados por lo cual se espera que esta y la cistena dieran positivo, confirmado por el resultado obtenido. REACCIN DE BIURET En aquellos casos donde no da positiva la prueba de biuret y da positiva la de ninhidrina, indica que no hay protenas, pero si hay aminocidos libres. Gelatina y albumina dan positivas debido a que son protenas, en el caso del aspartame y la fenilalanina da negativo por que es necesario que se tengan mnimo 2 enlaces peptdicos para que de positivo.

PRECIPITACIN POR EFECTO DEL pH La solubilidad de una protena es mnima en su punto isoelctrico, ya que su carga neta es cero y desaparece cualquier fuerza de repulsin electrosttica que pudiera dificultar la formacin de agregados. Por lo anterior se esperaba que el a un pH cercano al punto isoelctrico de en este caso la clara de huevo la solubilidad fuese mnima esto es a un pH alrededor de 4.7 mientras que a un pH ms bsico la solubilidad aumento. Este resultado se puede concluir como correcto comparando con la teora: *la clara de huevo tiene alto contenido de albmina y esta tiene un punto isoelctrico de 4.7 PRECIPITACIN POR MODIFICACIONE DE LA CONSTANTE DIELCTRICA La presencia de solventes orgnicos como la acetona, etanol, metanol, etc., afecta la solubilidad de las protenas debido a que disminuye la capacidad de los solventes acuosos para separar y solubilizar a los grupos cargados de las protenas. Por lo anterior el hecho de que la prueba con etanol diese positiva con un precipitado confirma la teora. EFECTO DE ADICIN DE METALES Las protenas cuando se encuentran en solucin a pH superiores a su punto isoelctrico son capaces de reaccionar con diferentes metales pesados formndolos correspondientes pretinados insolubles en agua. Debido a que el plomo y el mercurio se consideran metales pesados estos dieron positivo a esta prueba, sin embargo tambin hubo un ligero cambio en el nitrato de plata esto debido a que la plata es un metal. DETERMINACION DEL PUNTO ISOELCTRICO DE LA INSULINA Punto isoelctrico de la insulina (entre 5.45 y 5.55) pero este se reduce a 3 para poder ser suministrado a los pacientes que dependen de la insulina. Por diversas circunstancias como lo fue una mala proporcin de las soluciones el pI obtenido mediante la observacin de precipitado estuvo alejado del valor real.

5.

CALCULOS DE pH EN LA DETERMINACION DEL PUNTO ISOLECTRICO DE LA INSULINA. Relaciones empleadas en el anlisis. =+ .ec. 1 (Henderson-Hasselbach)

=log[].ec.2 =log[].ec.3 pH+pOH=14ec.4

[Concentracin]= Masa= volumen x Molalidad

Tubo 1

Molalidad= 0.2 Volumen de CH3COONa= 0.02 Volumen de CH3-COOH =0.23 Volumen total de la solucin =0.25 Masa del CH3COONa= (0.02ml)(0.2M)=4x10-3gr [CH3COONa]=0.0040.25=0.016M Masa de CH3-COOH= (0.23ml)(0.2M)=0.046gr [CH3-COOH]=0.0460.25=0.184M p.H=4.76+log0.0160.184= 3.77 Tubo 2

Molalidad= 0.2 Volumen de CH3COONa= 0.10 Volumen de CH3-COOH =0.15 Volumen total de la solucin =0.25 Masa del CH3COONa= 0.2gr [CH3COONa]=0.08M Masa de CH3-COOH= 0.3gr [CH3-COOH]=0.12 M pH= 4.60 Tubo 3

Molalidad= 0.2

Volumen de CH3COONa= 0.2 Volumen de CH3-COOH =0.05 Volumen total de la solucin =0.25 Masa del CH3COONa= 0.04gr [CH3COONa]=0.16 M Masa de CH3-COOH= 0.01gr [CH3-COOH]=0.04 M pH=5.36 Tubo 4

Molalidad= 0.2 Volumen de CH3COONa= 0.24 Volumen de CH3-COOH =0.01 Volumen total de la solucin =0.25 Masa del CH3COONa= 0.048gr [CH3COONa]=0.0040.25=0.192M Masa de CH3-COOH= 0.002gr [CH3-COOH]=0.008 M pH=6.140 Tubo 5

Molalidad= 0.2 Volumen de CH3COONa= 0.25ml Volumen de CH3-COOH = 0ml Volumen total de la solucin =0.25 =log[0.2]=0.698 pH+pOH=14

pH+0.698=14 pH=14-0.698 pH=13.302 6.-DISCUSIN Por los resultados obtenidos y mediante la teora se puede observar que la practica se realizo adecuadamente, obteniendo en cada caso los valores o cambios esperados, la mayora de errores que pueden existir o interferencias se deben en muchos casos a la contaminacin de alguna sustancia con otra o que se halla agregado un poco mas de sustancia que la debera; este pequeo hecho puede hacer que una prueba de positiva en donde se supone que no habra protenas o aminocidos. En el caso muy particular de la determinacin del punto isoelctrico de la insulina existi una gran variacin de los volmenes por un error; porque en nuestras muestras no haba cambios alguno en las muestras, asi que le agregamos un poco mas de insulina, y esto cambia las proporciones y en definitiva cambia el pH ya que las concentraciones no son las mismas que las indicadas y en las que se basa el calculo. 7.- CONCLUSIN Para la materia es indispensable conocer, separar e identificar los aminocidos y protenas mediante sus propiedades, pero para la carrera de ingeniera en sistemas ambientales tambin resulta de gran importancia ya que se utilizara en muchas investigaciones porque se basan en estas, como lo es la transformaciones enzimticas o microbiolgicas de muchos contaminantes como los pesticidas e hidrocarburos, tambin el diseo de nuevos biocatalizadores se basa en la modificacin qumica de protenas o la simple identificacin de contaminantes. 8.BIBLIOGRAFIA http://www.ibt.unam.mx/computo/pdfs/libro_25_aniv/capitulo_30.pdf http://es.scribd.com/doc/15958125/1-PROPIEDADES-QUIMICAS-Y-FISICOQUIMICAS-DE-LASPROTEINAS http://books.google.com.mx/books?id=NJhzDTwqchkC&pg=PA317&dq=punto+isoelectrico+de+la+i nsulina&hl=es&sa=X&ei=xxNPT-H_F2CsALU8pmcDg&ved=0CDsQ6AEwAg#v=onepage&q=punto%20isoelectrico%20de%20la%20insulin a&f=false http://books.google.com.mx/books?id=a0q3bMk5UrgC&pg=PA1209&dq=punto+isoelectrico+de+la +insulina&hl=es&sa=X&ei=xxNPT-H_F2CsALU8pmcDg&ved=0CEAQ6AEwAw#v=onepage&q=punto%20isoelectrico%20de%20la%20insulin a&f=false http://www.aibarra.org/Apuntes/Biofisica_Bioquimica/Bioquimica.pdf