5 - CINTICA DE FORMAO DE PRODUTO Formao de produto metablito pode ser relacionada a consumo de nutriente.

Alm do mais, formao de produto no pode ocorrer sem a presena de clulas. Assim, esperado que crescimento e formao de produto esto intimamente relacionados utilizao de nutrientes que dependendo dos controles metablitos regulatrios, formao de produto ser ligada a crescimento e/ou concentrao celular. A relao cintica entre crescimento e formao de produto depende do papel do produto no metabolismo celular. As duas cinticas mais comuns so aquelas que descre em a s!ntese do produto durante o crescimento e aps o crescimento ter cessado. "m e#emplo menos comum aplica ao caso onde o crescimento inicialmente ocorre sem formao de produto, mas aps algum per!odo de tempo o produto comea a aparecer enquanto o crescimento continua. $ $ $ % & % & % & ' ' '

(a)

(b)

(c)

*o grfico (a), a formao de produto associado ao crescimento celular. *o grfico (b), temos formao de produto associado ao crescimento, de uma forma mais ou menos confusa, c+amada de formao de produto parcialmente associada ao crescimento. *o grfico (c), temos formao de produto no associada ao crescimento. A elocidade de formao de produto a deri ada de ' em cada ponto d'/dt. ,a mesma forma que d$/dt e d-/dt no usado, d'/dt ( elocidade de formao de protuto) pode ser transformada em .elocidade /spec!fica de Formao de 'roduto (p) que definido da seguinte maneira0
p=
1 d' $ dt

onde0

' 1 concentrao de produto (g/2) $ 1 concentrao celular (g/2) t 1 tempo (+) p 1 elocidade espec!fica de consumo de nutrientes (+ 34)

uma ez admensionalizados pelos seus alores m#imos ma# e pma#, podemos mostrar graficamente0

53

/ma# 4 p/pma# 4

/ma# p/pma#

(d)

t /ma# 4

(e)

p/pma#

(f)

5s grficos acima mostram0 (d) formao de produto associada ao crescimento6 (e) formao de produto parcialmente associada ao crescimento e (f) formao de produto no associada ao crescimento. 6 - FATORES DE CONVERSO 7rescimento e formao de produto por microrganismos so processos de biocon erso nos quais os nutrientes qu!micos alimentados fermentao so con ertidos a massa celular e metablitos. 7ada uma dessas con ers8es pode ser quantificada por um coeficiente de rendimentos, e#presso como massa de clula ou produto formado por unidade de massa de nutriente consumido, 9#/s e 9p/s, para clula e produto, respecti amente. Assim, o coeficiente de rendimento representa a efici:ncia de con erso. *os processos cu;o produto a clula (e#. obteno de le edura de panificao) o grfico representati o da fermentao mostrado abai#o

[]

s
$

'

s
tempo

54

onde ma#imizado o crescimento celular e minimizado a formao de subprodutos. 5 coeficiente de rendimento de clula por nutriente torna3se Yx/s = X/ S *os processos cu;o ob;eti o a formao de um produto e no a clula (e#. obteno de etanol, antibiticos) o grfico representati o da fermentao mostrado abai#o

[]

s
'

$ '

s
tempo

onde ma#imizado a formao de produtos e minimizado o crescimento celular. 5 coeficiente de rendimento do produto por nutriente ser0 Yp/s = P/ S A maneira usual de calcular rendimentos medir a massa celular ou produto produzido e substrato consumido sob um per!odo de tempo e calcular 9#/s e 9p/s. 5bs.0 <uando no meio + mais de um substrato de carbono, considera3se o substrato limitante do crescimento. 7 - INFLU NCIA DA CONCENTRAO DE NUTRIENTES NA VELOCIDADE ESPEC!FICA DE CRESCIMENTO" ,urante a maioria das fermenta8es descont!nuas t!picas, a elocidade espec!fica de crescimento constante e independente da concentrao de nutrientes que est ariando. =oda ia, elocidade de crescimento, como uma elocidade de reao qu!mica, uma funo da concentrao de compostos qu!micos. 5s compostos qu!micos nesse caso so os nutrientes essenciais para o crescimento. A forma da relao entre elocidade de crescimento e concentrao de nutriente foi obser ada em

55

4>?> por @onod, sendo similar cintica de saturao e#ibida por adsoro monomolecular de 2angmuir. 5 modelo de @onod tem a forma0 = max. S 1 el. espec!fica de crescimento6 KS + S ma# 1 el. espec. de crescimento m#imo6 - 1 concentrao de nutriente6 A-1 constante de saturao e igual a -, quando 1 B,C.ma#
.

(+34) m#

B,Cm#

A-

concetrao de -

5utra forma grfica de determinar as constantes da equao de @onod c+amado 2ineDea er3EurF, resultando da in erso da equao de @onod. 4
1

Ama#

4 -

4 m#

4/ A-/m#

Hnterpolao 34/A-

4/m# 4/-

Alguns alores para As no modelo de @onod para crescimento *utriente Ilicose Ilicose Ilicose A- (mg/2) 4,B J,B3?,B JC,B @icrorganismo Enterobacter aerogenes Escherichia coli Sacharomyces cerevisiae
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5bser a8es0 a) 5s alores de As so muito pequenos em relao concentrao do nutriente nas fermenta8es industriais. b) ma#, quando -K 4B Ac) para -L 4B A-, uma forte funo da concentrao de nutriente. d) ,urante a fase e#ponencial constante . # - EVOLUO DE CALOR DURANTE A FERMENTAO A e oluo de calor durante a fermentao est intimamente relacionada utilizao da fonte de carbono e energia. a) <uando a fonte de carbono est sendo ati amente incorporada massa celular ia crescimento, tipicamente cerca de ?B3CBM da entalpia dispon! el conser ada na biomassa e o restante, perdido como calor (CB3 NBM). b) <uando a fonte de carbono est sendo metabolizada para manuteno celular, toda a entalpia associada com combusto desprendida como calor. c) -e um produto est sendo formado, ento o calor en ol ido por unidade de fonte de carbono metabolizada est entre os dois e#tremos. 5 interesse na e oluo do calor est na necessidade de remo :3lo durante o processo de fermentao e da utilidade do calor como indicador da iabilidade metablica. $ - INFLU NCIA DO AM%IENTE NO CRESCIMENTO CELULAR A +abilidade de um microrganismo crescer e sintetizar produtos em um dado ambiente determinado pelo microrganismo (m.o). 5 desen ol imento bem sucedido de processos de fermentao dependente, primeiro da obteno de boas lin+agens por isolamento e mutao, segundo, dos parOmetros ambientais no crescimento celular e formao de produto, tais como0 $"& ' E()*+, -. T)/p)0.+10. 2, C0)s3*/)2+, C)414.0 7rescimento microbiano e formao de produto so resultados de uma comple#a srie de rea8es qu!micas. 7omo elas, eles so influenciados pela temperatura da seguinte forma0 =r:s tipos de cur as crescimento3temperatura normalmente ocorrem0

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'sicrfilos /ma#

@esfilos

=ermfilos

4B ?Bo7.

JB

PB

?B

CB

NB

QB

(= o)

A maioria dos m.os crescem num inter alo de temperatura entre JB e A elocidade de crescimento cresce rapidamente quando a temperatura aumenta at a temperatura tima, mas a partir dessa, o crescimento cai tambm rapidamente. A maioria dos m.o. apresenta o seguinte comportamento0 @orte ma# 7rescimento

(4/=) pode ser dado pela equao de Arr+enius0 1 Ae3/a/R= 1 ASe3/aS/R= A e AS 1 constante (+34) /a e /aS 1 energia de ati ao (cal/mol) R 1 4,>T cal/mol A = 1 temperatura (A) 1 elocidade espec!fica de morte (+34). 1 elocidade espec!fica de crescimento (+34) A energia de ati ao para crescimento aria de 4C3JBFcal/mol e para morte de NB3QBFcal/mol. Assim a elocidade espec!fica de morte muito mais sens! el temperatura que a de crescimento.
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A temperatura tambm pode afetar outros aspectos importantes do crescimento microbiano como 9#/s. *a produo de biomassa o importante atingir a m#ima con erso de substrato massa celular. Assim o coeficiente de rendimento 9#/s celular de principal interesse. /sse coeficiente de rendimento mostrado na figura a seguir para crescimento de bactrias em metanol, em funo da temperatura. 9#/s

?C

CB

CC

NB

NC

=(o7)

$"5 ' E()*+, -, p6 2, C0)s3*/)2+, C)414.0 pU do meio afeta o crescimento e a formao de produtos. 5s m.os. trabal+am com uma ariao m#ima de P a ? unidades de pU do alor timo. / a elocidade m#ima de crescimento se d para inter alos de 4 a 4,C unidades de pU ma# Escherichia coli (bactria)

/#.0

C,B

N,B

Q,B

T,B >,B

4B,B

pU

Eactrias pU ? V T 2e eduras pU P V N @ofos pU P V Q 'rocaiotos superiores pU N,C V Q,C 7omo consequ:ncia o pU de e ser controlado nos seus alores timos para mel+orar a performance do processo. ,urante a fermentao, o pU tem uma tend:ncia a mudar por rias raz8es.
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<uando a fonte de * um sal de amWnio *U ?G o m.o. incorpora da forma R3*UPG liberando UG, portanto o pU diminui. <uando a fonte de * *5P3, o m.o. remo e UG do meio para reduzir o *5P3 a R3*UPG logo o pU aumenta. 5utra razo para ariao do pU ocorre quando cidos orgOnicos so produzidos (cido ltico, pirX ico, actico e etc.). Atra s da medida do cido ou lcali adicionado para neutralizar a mudana de pU, poss! el obter informa8es sobre crescimento ($) e formao de produto ('). A figura abai#o mostra a relao entre a massa de *U?5U adicionado ao culti o para controle de pU e a concentrao celular. 5 m.o. utilizado foi E. coli E2J4(,/P)p2Ys- para produo da prote!na recombinante =roponina 7 $ (g/2) $ 1 B,NT G B,TC(*U?5U) E. coli E2J4(,/P)p2Ys-

*U?5U (g)

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