Preparacion y Dilucion de Muestras

UNFV- FIIS- AGROINDUSTRIAL

UNIVERSDIAD NACIONAL FEDERICO VILLAREAL

MICROBIOLOGIA APLICADA Preparacin y dilucin de muestras Blga. Msc Alicia decheco egusquiza INTEGRANTES:
Herrera Echevarria pamela Castillo Diaz Candy Fiorella Huaman Romero Marcos Llacsa Gomez Miguel Angel Aladino Brandan Hector

Blga. MsC Alicia Decheco Eguzquiza

Microbiologa aplicada

Preparacion y Dilucion de Muestras I. INTRODUCCION:

UNFV- FIIS- AGROINDUSTRIAL

Las aguas residuales tienen una composicin variada proveniente de las descargas municipales, industriales, comerciales, de servicios, agrcolas, pecuarios, domsticos, incluyendo fraccionamientos y en general de cualquier uso, as como la mezcla de ellas, contienen diferentes tipos de

microorganismos contaminantes y las diferentes concentraciones, dependiendo de su fuente. La variada poblacin de microorganismos en esta agua, proviene del suelo y de origen intestinal, incluyen aerobios y anaerobios estrictos y facultativos as como tambin numerosos virus como: Poliovirus y virus de la hepatitis. Igualmente pueden contener formas parasitarias variables como quistes de Protozoarios y huevecillos de Helmintos (Metazoarios). Asimismo, existe en nuestro pas el grave problema de contaminacin de ros, lagos acuferos y costas debido a que estos son utilizados como depsito de todos los desechos generados por las actividades humanas. Estos

microorganismos pueden sobrevivir al tratamiento, por lo que su propuso por .ej., en riego agrcola, actividades recreativas: Aguas de piscinas, baos de hidromasaje, aguas potables naturales, actividades pisccolas y aguas marinas superficiales (playas), representan un riesgo potencial a la salud pblica. La presencia y extensin de contaminacin fecal es un factor importante en la determinacin de la calidad de un cuerpo de agua. Las heces contienen una variedad de microorganismos y formas de resistencia de los mismos, involucrando organismos patgenos, los cuales son un riesgo para la salud pblica al estar en contacto con el ser humano.

II. OBJETIVOS: Preparar adecuadamente las muestras de los alimentos bajo estudio, asi como las diluciones que les permitan investigar su contenido microbiolgico. Determinar el nmero de diluciones adecuado, con base en las caractersticas y datos de la muestra y de los organismos que sern investigados.

Blga. MsC Alicia Decheco Eguzquiza

Microbiologa aplicada

Preparacion y Dilucion de Muestras III. MATERIALES:

UNFV- FIIS- AGROINDUSTRIAL

Triptona

lactosa

Caldo Nutritivo

Muestra de agua (agua de lavado)

Tubos de Ensayo (11unidades)

Tubos Durham (9 unidades)

Blga. MsC Alicia Decheco Eguzquiza

Microbiologa aplicada

Preparacion y Dilucion de Muestras

UNFV- FIIS- AGROINDUSTRIAL

Pipetas de 5 ml

Mechero

Gradilla

Balanza

Blga. MsC Alicia Decheco Eguzquiza

Microbiologa aplicada

Preparacion y Dilucion de Muestras IV. PROCEDIMIENTO:

PROCEDIMIENTO 1. PREPARACION DE LA DILUCION PRIMARIA: 1.1 MUESTRAS LIQUIDAS NO VISCOSAS

UNFV- FIIS- AGROINDUSTRIAL

Como agua , leche , refrescos , etc. En las cuales la distribucin de microorganismos es homognea o fcilmente homogeneizable por medios mecnicos como agitacin)

a) Agitar la muestra manualmente en un arco de 30 cm , con 25 movimientos de arriba , abajo , efectuados en un tiempo de 7 segundos

Blga. MsC Alicia Decheco Eguzquiza

Microbiologa aplicada

Preparacion y Dilucion de Muestras

UNFV- FIIS- AGROINDUSTRIAL

b) En condiciones aspticas , tomar 10.0 ml de la muestra y c) Diluir con 90.0 ml de diluyente el cual debe encontrarse a una temperatura similar a esta , evitando el contacto entre la pipeta y el diluyente.

1.1.1

Alimentos originalmente lquidos o licuables y congelables

a) Fundir por completo en bao de agua entre 40 y 45C en un tiempo mximo de 15 minutos y homogenizar agitando vigorosamente.

b) Proseguir como se indica en el punto 1 para muestras liquidas no viscosas. 1.1.2. Parte liquida de una muestra heterognea que sea considerada suficientemente representativa de la muestra total :

Blga. MsC Alicia Decheco Eguzquiza

Microbiologa aplicada

Preparacion y Dilucion de Muestras

UNFV- FIIS- AGROINDUSTRIAL

a) Proseguir como se indica en el punto 1 para muestras liquidas no viscosas. 1.2. MUESTRAS SOLIDAS O SEMISOLIDAS: 1.2.1. Muestras solidas y semislidas no congeladas:

a) Pesar una cantidad de 10.0g de la muestra por analizar en un recipiente o bolsa plstica estril de tamao adecuado. b) Adicionar un volumen de 90.0 ml del diluyente , segn sea el caso , llevado a una temperatura similar a la de la muestra. c) Operar la licuadora o el homogeneizador peristltico de 1 a 2 minutos hasta obtener una suspensin completa y homognea , segn se indique en la tcnica correspondiente para cada alimento . Aun en los equipos mas lentos , el tiempo de homogenizacin debe ser < 2.5 minutos.

d) Permitir que las partculas grandes se sedimenten , y transferir la cantidad deseada ( alcuota) , tomando esta de las capas superiores de la suspensin.

NOTAS: Cuando la dilucin primaria es muy viscosa o pegajosa , adicionar mas diluyente , lo cual debe tomarse en cuenta para los clculos y expresin de resultados. El homogenizador peristltico (Stomacher) puede ser inadecuado para algunos productos , por ejemplo , aquellos con partculas agudas o constituyentes que no se dispersen fcilmente ; solo debe utilizarse cuando exista evidencia ( publicada o por ensayos comparativos ) de que los resultados obtenidos no difieren significativamente con aquellos obtenidos con licuadora.

Blga. MsC Alicia Decheco Eguzquiza

Microbiologa aplicada

Preparacion y Dilucion de Muestras

UNFV- FIIS- AGROINDUSTRIAL

1.3 . Muestras solidas y semislidas congeladas : a) Descongelar en refrigeracin de 4 a 8C durante 18h y no mas de 24 h . antes de diluir y analizar .

b) Proseguir como se indica en el inciso 1 para muestras solidas y semisolidad no congeladas. NOTAS : En todos los casos , si la cantidad disponible de muestra no permite tomar 10 ml o g , la dilucin primaria puede hacerse con 1 ml de muestra en 9 de diluyente . Despues se prosigue como se indica para las diluciones adicionales.

Blga. MsC Alicia Decheco Eguzquiza

Microbiologa aplicada

Preparacion y Dilucion de Muestras

UNFV- FIIS- AGROINDUSTRIAL

V. RESULTADOS:
Observacin de la generacin de gas depositado en la campana Durham (al menos en 1/10 parte de su volumen)

o Observacin de la muestra de la dilucin 10-1 en 48 horas.

o Observacin de la muestra de la dilucin 10-2 en 48 horas.

o Observacin de la muestra de la dilucin 10-3 en 48 horas.

Blga. MsC Alicia Decheco Eguzquiza

Microbiologa aplicada

Preparacion y Dilucion de Muestras

UNFV- FIIS- AGROINDUSTRIAL

Para dar lectura a los resultados utilizamos la siguiente tabla:

Tabla NMP
Numero de tubos positivos en cada dilucin Dilucin 10-1 0 0 0 1 1 1 1 1 2 2 2 2 2 2 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 Dilucin 10-2 0 0 1 0 0 1 1 2 0 0 1 1 2 2 0 0 0 1 1 2 2 2 3 3 3 Dilucin 10-3 0 1 0 0 1 0 1 0 0 1 0 1 0 1 0 1 2 0 1 0 1 2 0 1 2 NMP por gramo o mililitro <3 3 3 4 7 7 11 11 9 14 15 20 21 28 23 39 64 43 70 90 150 210 200 500 1100

Blga. MsC Alicia Decheco Eguzquiza

Microbiologa aplicada

Preparacion y Dilucion de Muestras

3 3

UNFV- FIIS- AGROINDUSTRIAL

3 >2400

RESULTADOS DE COLIFORMES FECALES: Dilucin 10-1

N tubos positivos (coliformes) 3 Vista general

Dilucin 10-2
3

Dilucin 10-3
3

Interpretacin de los resultados de coliformes fecales: De la siembra de 9 tubos con caldo lactosado se obtuvo los resultados siguiente en un periodo de 48 horas de incubacin los 9 tubos positivos con coliformes fecales dando como resultado (NMP por gramo o mililitro > 2400).

Blga. MsC Alicia Decheco Eguzquiza

Microbiologa aplicada