Oxidaciones Biológicas (2da Parte)

Instituto Paracelso: Oxidaciones biolgicas
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3.1 EL CICLO DE LOS ACIDOS TRICARBOXILICOS (KREBS)

El ciclo que descubri Hans Krebs puede iniciarse y terminarse en cualquier punto (dado
que es un ciclo); y como se comento anteriormente, siendo anfiblico y el representante
del metabolismo intermedio, funciona tanto para la sntesis como para la degradacin de
compuestos. Nosotros lo iniciaremos con el compuesto que esta en menor concentracin,
el oxalacetato, pues es el aceptor de los 2C acetilos provenientes del acetil-CoA para
formar citrato. Clasificaremos cada una de las enzimas que participan en las reacciones,
dibujaremos el ciclo; y lo desarrollaremos y explicaremos en la clase. Todas las enzimas
estn el la matriz mitocondrial, excepto una que ser mencionada.

1) Citrato sintetasa Irreversible, condensacin.
2) Aconitasa Reversible, actua en dos pasos, deshidratacin e hidratacin
(isomerizacin).
3) Isocitrato deshidrogenasa Irreversible, descarboxilacin oxidativa similar PDH sin
la coASH.
4) cetoglutarato DH Irreversible, descarboxilacion oxidativa, idntica PDH.

Aca se podra decir que termina la mitad del ciclo.

5) Succinil CoA sintetasa Reversible, fosforilacin a nivel de sustrato.
6) Succinato deshidrogenasa Reversible, redox, nica enzima ubicada en membrana
mitocondrial internal.
7) Fumarasa o enolasa (o hidratasa) Reversible, hidratacin
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Paracelso contacto: institutoparacelso@hotmail.com


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8) Malato deshidrogenasa Reversible, redox.
Como consecuencia de la oxidacin de 1 acetil-coA, obtuvimos:

2 CO2
3 NADH
1 FADH2
1 GTP

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3.2 RESUMIENDO CON EL EJ EMPLO DE LA GLUCOSA

Dado que la glucosa es la principal fuente piruvato y nosotros entramos al ciclo de Krebs
por esta va

La glucosa (6C) comenz su degradacin en el citoplasma (glucolisis), se oxido y se
fragmento, dando como resultado neto 2 molculas de piruvato, 2 NADH (reducidos) y 2
ATP. Los piruvatos fueron ingresados a la matriz mitocondrial, gracias a la existencia de
un transportador ubicado en la membrana mitocondrial interna; y una vez all sufri
descarboxilacin oxidativa por el complejo piruvato deshidrogenasa. Gracias a esto, se
obtuvieron 2 grupos acetilo (2C) unidos a coenzimas-A (para formar 2 acetil-CoA), 2
CO
2
y 2 NADH. Resulta evidente, que durante el proceso, la glucosa ha perdido 2
carbonos, pues siendo un compuesto original de 6 carbonos, ha quedado reducido a 2
compuestos de 2 carbonos cada uno. Estos dos grupos acetilos (2C) transportados por la
coenzima A (acetil-CoA) van a entrar a la fase final de la degradacin; donde van a
degradarse oxidativamente los 4 carbonos que vienen quedando de la glucosa. Y s,
lgicamente, se van a eliminar en forma de CO
2
. Es decir, los acetilos, transportados por
la acetil Co-A van a entrar a un sistema de reacciones cclicas que corrern con igual
sentido que las agujas del reloj, para ser completamente triturados. Este conjunto de
reacciones se conoce como ciclo de los cidos tricarboxlicos, ciclo del citrato, del
cido ctrico o simplemente ciclo de Krebs y es la mxima expresin del metabolismo
intermedio que sirve como fase final de la degradacin de varios combustibles, entre ellos
la glucosa.

3.3 BALANCE ENERGETICO DE LA GLUCOSA

Si tenemos en cuenta que tenamos 2 acetil-coA (cada una proviene de 1 piruvato, pero a
partir de la glucosa original habamos obtenido 2 piruvatos en la glucolisis), hay que
multiplicar por 2 los resultados obtenidos (4 CO2, 6 NADH, 2 FADH2 y 2 GTP).
Podemos afirmar, sin temor a equivocarnos, que de la glucosa ya no queda ms nada
pues el producto final de la degradacin de la glucosa ha sido el dixido de carbono
(CO2). Es justamente all donde han ido a parar cada uno de los carbonos que constituan
nuestra glucosa original. Sin embargo, sabemos que haber obtenido 2 ATP en la glucolisis
y 2 GTP durante el ciclo de Krebs es un rendimiento energtico muy pobre de la misma
manera que sabemos que todo este proceso que hemos comentado se ha realizado con la
finalidad de obtener energa Y entonces Qu nos perdimos?.... Bueno, todas las
coenzimas reducidas que se fueron obteniendo a lo largo de la glucolisis, la
descarboxilacin oxidativa y el ciclo de Krebs son como cheques. Si todo sale bien,
podemos ir al banco y cobrarlos, se terminarn transformando en molculas de ATP, que
nos darn un rendimiento total equivalente a 36-38 ATP, dependiendo de la clula en
cuestin. Pero va a ser justo en este momento, cuando se ponga en evidencia la necesidad
de oxgeno. Es cierto hemos oxidado completamente la molcula.

Tengamos en cuenta, no solo la glucosa utiliza al ciclo de Krebs como fase final de su
degradacin (tambin lo hacen los cidos grasos y muchos aminocidos). Y no solo tiene
una funcin de degradacin el ciclo de Krebs, pues como veremos mas adelante
tambin es un punto crtico en la sntesis de numerosos compuestos, tales como el
colesterol, los grupos hemo, ciertos aminocidos y hasta en la sntesis endgena de
glucosa (gluconeogenesis).
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3.4 REGULACION DEL CICLO DE KREBS

Los 3 pasos exergnicos, metablicamente irreversibles, son los regulables del ciclo de
Krebs. En principio se cumple la regla de que toda enzima regulable es inhibida por su
producto.

Citrato sintetasa Activada por ADP. Inhibida por ATP y por succinil-coA.
Isocitrato DH y -Cetoglutarato DH Estimuladas por calcio, una seal de
bajo ATP intracelular. Inhibidas por una alta relacin NADH/NAD+. La
cetoglutarato DH se inhibe adems por succinil-CoA (su producto).

En resumen, la velocidad oxidativa del ciclo de Krebs esta determinada por las relaciones
ATP/ADP y NADH/NAD. Cuando estas son elevadas la velocidad del ciclo disminuye.

NUEVAMENTE: ANTES DE CONTINUAR CON LOS TEMAS
SIGUIENTES, ASEGURATE DE HABER ENTENDIDO BIEN LOS
CONCEPTOS FUNDAMENTALES QUE EXPLICAMOS HASTA ESTE
PUNTO DEL APUNTE. SI NO LO HICISTE EN LA PRIMER PARTE
ES TU ULTIMA OPORTUNIDAD!

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4.1 COMPONENTES DE LA CADENA DE ELECTRONES

La cadena de electrones est constituida por un conjunto de complejos metal- protecos
que se encuentra ubicado en la membrana mitocondrial interna. La finalidad principal
de este sistema es la reoxidacin de los cofactores reducidos (NADH, FADH2) que se
generaron en el ciclo de Krebs; y tambin en otros procesos, como ser la glucolisis y
la -oxidacin (degradacin de cidos grasos). Para cumplir con este cometido, los
cofactores reducidos van a ceder sus electrones a travs de los complejos protecos de la
cadena de electrones; de manera tal, que los mismos pasan a estar nuevamente en
estado oxidado. La otra funcin de importancia que tiene este sistema, es la generacin
y mantenimiento de un gradiente de protones (H+), con una concentracin mayor
de los mismos en el espacio intermembrana que en la matriz mitocondrial.
En ningn momento se genera energa en forma de ATP ni de ningn otro
intermediario de alta energa durante el transcurso de la cadena de electrones.

Describiremos a continuacin los distintos tipos de componentes que constituyen la
cadena; y que estn involucrados en el transporte de electrones:

Flavoprotenas Son cadenas polipeptdicas que tienen unido al grupo
prosttico FMN (flavina-mononucletido) a su estructura. La FMN funciona
como una coenzima, captado y cediendo electrones (es decir, reducindose y
oxidndose), pero se diferencia de estas por estar fuertemente unido a la
protena/enzima y no desprenderse nunca de ella. Como se comento anteriormente
al hablar de cofactores, su estructura es muy similar a la del FAD.

Protenas con hierro (Fe) y azufre (S) Son protenas que presentan
aminocidos cisterna, a cuyo grupo sulfidrilo (-SH) se unen tomos de hierro. El
hierro tiene la capacidad de captar y ceder electrones, dado que puede encontrarse
en distintas valencias: 1) cuando se encuentra oxidado, se presenta en estado
frrico (Fe
3+
); 2) cuando capta un electrn, pasa al estado ferroso (Fe
3+
+1 e
-

Fe
2+
).

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Citocromos Los citocromos son hemoprotenas. Esto quiere decir, que son
protenas que contienen un grupo prosttico hemo, constituido por un anillo de
protoporfirina con un tomo central de hierro. Vale remarcar, que este hierro se
encuentra formando parte de un grupo hemo; y por lo tanto se lo denomina hierro
hmico. En cambio, las protenas hierro-azufre (S-Fe) comentadas con
anterioridad, presentan hierro no hmico. Dentro de la cadena de electrones
existen distintos tipos de citocromos, que difieren no solo en la parte proteica, sino
en el tipo de grupo Hemo que tienen unido. Los citocromos tipo B, presentan
un grupo hemo estructuralmente idntico al de la hemoglobina y la
mioglobina (es decir, con los mismos sustituyentes propionilo, vinilo y metilo);
sin embargo, la porcin proteca de los citocromos B difiere notablemente de estas
ltimas en su composicin de aminocidos. Otros citocromos que se encuentran
en la cadena de electrones son los tipo C y A, que difieren en los sustituyentes
qumicos del grupo hemo, entre s, con respecto al citocromo B y lgicamente,
tambin con el de la hemoglobina.

Coenzima Q o Ubiquinona A diferencia de los componentes antes
mencionados, no contiene porcin proteica. De hecho es una quinona con una
larga cola isoprenoide, de caractersticas altamente hidrofbicas, que le permite
encontrarse en el seno de la membrana mitocondrial interna, y desplazarse a travs
de ella con facilidad. Sin embargo, puede captar y ceder electrones, gracias a la
presencia de 2 funciones cetona (carbonilos) en su estructura, que pueden
reducirse a funcin alcohol; y viceversa. Cuando la coenzima se encuentra
reducida, gracias a la formacin de la funcin alcohol, se suele denominar como
ubiquinol (no confundirla con ubiquitina).

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4.2 COMPLEJ OS DE LA CADENA DE ELECTRONES

Ahora estamos en condiciones de ver como se organizan realmente los distintos
componentes de la cadena de electrones. Todos ellos estn ubicados en la membrana
mitocondrial interna, formando principalmente 3 o 4 grandes complejos, segn el autor
que se considere. Estos son:

COMPLEJO I: NADH DESHIDROGENASA o NADH-CoQ REDUCTASA

Recibe electrones directamente desde la coenzima reducida NADH. Est constituido por
una flavoprotena (FMN) unida a una protena hierro-azufre (Fe-S). Puede ser inhibida
por rotenona y/o amital, aunque en rigor de verdad, la rotenona bloquea a la
flavoproteina y el amital a la protena Fe-S.

El complejo I se contina funcionalmente con el complejo II gracias a la existencia de la
coenzima Q o ubiquinona (tambin llamada QH2 ubiquinol).

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Aca mencionaremos que algunos autores consideran como complejo II a la enzima
succinato deshidrogenasa del ciclo de Krebs, ubicada en la membrana mitocondrial
interna y vinculada al FAD-FADH2. Segn se considere asi o no, depender la
numeracin de los otros complejos.

COMPLEJO III o II: CoQ-CITOCROMO C REDUCTASA

Est constituido por el citocromo b, unido a una protena Fe-S, unida a su vez al
citocromo c1. Puede ser inhibida por antimicina, que acta a nivel de la protena hierro
azufre.

Este complejo se comunica con el complejo siguiente a travs del citocromo C.

COMPLEJO IV o III: CITOCROMO OXIDASA

Est constituido por el citocromo a, unido al citocromo a3, siendo este ltimo el
responsable de entregarle electrones al oxgeno.El complejo tiene 3 subunidades y la
unin entre el citocromo a y el a3 se realiza a travs de hierro y cobre (Cu). Puede ser
inhibido por cianuro, azida y monxido de carbono (CO), aunque en rigor de verdad,
bloquean al hierro del grupo hemo de los citocromos.

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La organizacin mencionada se refleja en el grfico que sigue a continuacin:

4.3 LA CADENA DE ELECTRONES EN FUNCIONAMIENTO

Utilizaremos la clasificacin de 3 complejos, aunque en clase marcaremos cuando
conviene utilizar cada criterio.

Los 2 electrones que contiene el NADH son cedidos al complejo I, recibidos
inmediatamente por la FMN protena. Esto hace que el NADH se reoxide a NAD,
quedando nuevamente disponible para participar en reacciones de la glucolisis, ciclo de
Krebs u otras. Casi simultneamente, los electrones pasan hacia el hierro de la Fe-S
protena. Desde all pasarn a la coenzima Q, responsable de comunicar funcionalmente
los complejos I y II. Al producirse el salto de electrones, ocurre un cambio
conformacional en las estructuras protecas del complejo I, llevando a un bombeo de
protones desde la matriz mitocondrial hacia el espacio intermembrana. El uso de los
frmacos rotenona o amital, bloquea a los complejos, impidiendo el flujo de electrones;
y tambin el bombeo de protones. En consecuencia, el complejo deja de bombear protones
y las coenzimas dejan de reoxidarse.

La coenzima Q descarga sus electrones en la primer porcin del complejo II, constituido
por el citocromo b. Desde este pasan a la protena Fe-S y de ah al citocromo c1.
Nuevamente, esto lleva a un bombeo de protones desde la matriz mitocondrial hacia el
espacio intermembrana. El uso del bloqueantes como la antimicina, detienen el bombeo
de protones y el flujo de electrones. Si el flujo de electrones se detiene, los mismos
comienzan a estancarse en los complejos anteriores, lo que en definitiva detiene el
bombeo de protones en el complejo I y la reoxidacin de coenzimas.

Los electrones saltan del complejo II al citocromo C; y desde ah pasan al complejo III.
Primero los recibe el citocromo a; y finalmente pasan al citocromo a3, usando cobre como
intermediario. El uso de cianuro o monxido de carbono (CO) provoca idnticas
consecuencias que el caso anterior, como consecuencia del estancamiento de electrones.

Por ltimo, los electrones fluyen desde el citocromo a3 del complejo III hacia el oxgeno.
El oxgeno es el aceptor final de los electrones, segn se detalla en la. siguiente
ecuacin:
O
2
+2 H
+
+2 e
-
H
2
O

Es recin en este punto donde se hace evidente la necesidad del oxgeno en la respiracin
celular, llevando a la formacin de agua en la matriz mitocondrial.

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El motivo por el cual los electrones van fluyendo desde el complejo I hacia el complejo
III no responde solamente a la ubicacin estratgica de estos complejos. De hecho, cada
componente tiene una determinada tendencia a aceptar electrones, que se conoce como
potencial de reduccin estndar. A pesar de que muchos componentes tienen hierro en
su estructura, se encuentra asociado a diferentes cadenas polipeptdicas; y por lo tanto el
potencial de reduccin estndar aumenta a medida que nos acercamos al citocromo
a3 del complejo III.

Todas las funciones y consecuencias de la cadena de electrones ser discutida en clase.
No creamos que la nica funcin de la misma es el transporte de electrones. Explicaremos
tambin la reoxidacin del FADH2 y el bombeo de protones que se asocia al mismo.

5.1 FOSFORILACION OXIDATIVA

La fosforilacin oxidativa es el proceso de sntesis de ATP por excelencia.

Los cofactores reducidos (NADH, FADH2) que se generaron durante diversos procesos
oxidativos fueron reoxidados en la cadena de electrones. Los electrones finalmente fueron
aceptados por el oxgeno para formar agua, pero sirvieron para producir un bombeo de
protones (H+) desde la matriz hacia el espacio intermembrana. Esto determino la
formacin del gradiente electroqumico y de pH.

Los protones concentrados en el espacio intermembrana buscarn volver a la matriz
mitocondrial, y de esta forma, disipar un gradiente en forma espontnea, liberando
grandes cantidades de energa libre que podr ser acoplada para producir la unin del
ADP +Pi (proceso que, por si solo, no est favorecido termodinmicamente) y terminar
formando ATP. Esto constituye la teora quimiosmtica de Mitchell, que explica que la
fosforilacin oxidativa est acoplada a la cadena de electrones para la sntesis de
ATP. La energa electroqumica contenida en la diferencia de concentracin de protones
(H+), y por lo tanto tambin de cargas elctricas, se llama fuerza protn motriz. La
integridad de la membrana mitocondrial interna es fundamental para que pueda
sintetizarse ATP.

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Describiremos a continuacin la enzima responsable de este proceso

5.2 COMPLEJ O ATP-SINTASA

El complejo ATP sintasa es multiproteco y se encuentra ubicado en la membrana
mitocondrial interna. Esta constituido por 2 porciones: la porcin Fo y la porcin F1.
La porcin F1 tiene forma de cabeza y mira hacia la matriz mitocondrial, mientras que
la porcin Fo tiene forma de canal y mira hacia el espacio intermembrana.

La porcin F1 est implicada en la sntesis de ATP, a partir de la reaccin ADP
+Pi ATP (fosforilacin). Su cabeza est constituida por 6 subunidades: 3
subunidades y 3 subunidades . Descanza sobre una tallo constituido por las
subunidades delta (), gamma () y epsilon (). Cuando se encuentra asociada a la
porcin Fo, cataliza la sntesis de ATP. Sin embargo, si se aisla la porcin F1 de
la porcin Fo, se comprueba que, en cambio, degrada ATP. Por ese motivo, se la
suele denominar a la porcin F1 como F1-ATPasa.
La porcin Fo es una protena canal formada por 4 subunidades diferentes,
ubicadas en la membrana mitocondrial interna, mirando hacia el espacio
intermembrana. A travs de ella, retornan los protones (H+) desde el espacio
intermembrana hacia la matriz mitocondrial. La disipacin de ese gradiente
electroqumico, provee la energa necesaria para que la porcin F1 pueda catalizar
la sntesis de ATP. Es decir La fuerza protn motriz es suficiente para
inducir la sntesis de ATP.

Cabe remarcar que el nombre de esta porcin no es F cero, sino que es Fo. Esto se debe
a que esta parte de la enzima puede ser inhibida por el antibitico oligomicina. Cuando
se utiliza el mismo, se detiene el flujo de protones y por lo tanto se detiene la sntesis de
ATP. Al mismo tiempo, los protones comienzan a acumularse notablemente en el espacio
intermembrana, disminuyendo notablemente el pH en este lugar, lo que detiene la cadena
de electrones. El uso de oligomicina fue utilizado por Mitchell para demostrar que la
fosforilacin oxidativa est acoplada a la cadena de electrones Si se detiene la
fosforilacin oxidativa, tambin lo hace la cadena de electrones. Puesto que el oxgeno se
consume en las mitocondrias, por se el aceptor final de los electrones, detener la cadena
de electrones detiene el consumo de oxgeno Por lo tanto, si se detiene la
fosforilacin oxidativa, no solo se detiene la sntesis de ATP, sino tambin la cadena
de electrones y el consumo de oxgeno.
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Actualmente, hay una tendencia a modificar la teora de Mitchell. Se dice que, si
bien la sntesis de ATP es un proceso con un valor de G muy positivo (lo que indica
que la reaccin no es espontnea), este concepto no sera aplicable por que la ATP
sintetasa se encuentra inmersa en un medio muy hidrofbico, mientras que los
valores de energa libre se calcular en medios acuosos. Este planteo indicara que la
ATP sintetiza es capaz de sintetizar ATP espontneamente, sin depender de la
disipacin de protones, pero necesita de ellos para poder liberar el ATP. Segn este
concepto, el ATP se sintetiza espontneamente en la partcula F1, pero permanece
muy fuertemente unido a la enzima. De esta forma, necesita la corriente de protones
que pasan a travs de la partcula Fo, para que empuje al ATP y lo desprenda de la
enzima.

Antiguamente, se crea que durante la transferencia de electrones se formaba un compuesto
intermediario de alta energa, cuya energa podra ser utilizada para la sntesis de ATP. Esta se
llamo teora del acoplamiento qumico. La teora del acoplamiento qumico no habla de
acoplamiento entre la cadena de electrones y fosforilacin oxidativa, como lo hace la teora
quimiosmtica de Mitchell (no confundirse).

5.3 REGULACION DE LA ATP SINTASA

La velocidad de la respiracin celular est limitada por la disponibilidad de ADP y
fosfato inorgnico (Pi) como sustrato de la fosforilacin.

ADP y Pi (+) ATP (-)

Por ese motivo, suele utilizarse la relacin ATP/ADP como un indicador. Una alta
relacin ATP/ADP indica que la clula tiene suficiente cantidad de energa; y por lo
tanto, se inhibe la fosforilacin oxidativa.

Sin embargo, otro determinante no menos importante (quizs el principal regulador) es la
velocidad de la cadena de electrones, ya que en condiciones fisiolgicas, una
disminucin en el aporte de O
2
disminuye la velocidad de la cadena, la generacin de la
fuerza protn motriz y por lo tanto la sntesis de ATP. Mencionaremos tambin que
existen otras cadenas de electrones que no tienen por finalidad obtener energa y se
denominan cadenas de electrones no fosforilantes. Las veremos mas adelante.

A nivel del corazn se observa que el ATP recin sintetizado, es utilizado para fosforilar
a la creatina, dando lugar a la formacin de creatina fosfato segn la siguiente reaccin:
ATP +creatina ADP +creatina fosfato. Esto permite que pueda sintetizarse ATP con
mayor velocidad, ya que el ADP estimula a la fosforilacin oxidativa. La enzima
responsable de esa reaccin es la creatina kinasa (isoenzima mitocondrial). Luego en el
citoplasma, la fosfo-creatina es utilizada para formar ATP, gracias a otra isoenzima
creatina kinasa (citoplasmtica, asociada a las miofibrillas) que acta de manera inversa.
La falta de ATP en el msculo cardaco afecta a la membrana plasmtica provocando un
ingreso de Na+y Ca
2+
. Si bien el calcio en concentraciones normales estimula la
descarboxilacin oxidativa y el ciclo de Krebs, en excesivas concentraciones activa a una
fosfolipasa que degrada lpidos de membrana, llevando a la muerte de las fibras
musculares.

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Para poder regular la cantidad de ATP y ADP, asi como de fosfatos disponibles en la
matriz mitocondrial existen mecanismos transportadores especficos en la membrana
mitocondrial interna.

5.4 TRANSPORTADORES

Se sabe que la membrana mitocondrial externa no representa ningn problema para el
pasaje de la mayora de las molculas, pues presenta una protenas canales, denominadas
porinas en su estructura.

No tiene la misma suerte la membrana mitocondrial interna, que es relativamente
impermeable a una gran cantidad de molculas, especialmente a aquellas que tienen
nucletidos en su estructura. Dentro de este grupo, se encuentran los intermediarios
energticos ATP y ADP, as como los cofactores. Recordemos que todos estos
compuestos presentan adenina en su estructura.

De esta forma, el primer impedimento que se presenta es Cmo hace el ATP recin
sintetizado, para pasar al citoplasma?; y Cmo hace el ADP para ingresar a la matriz
mitocondrial, para ser finalmente fosforilado a ATP?

La respuesta a esta pregunta existe en un transportador especfico ubicado en la membrana
mitocondrial interna, denominado antiporte traslocasa ATP/ADP. Este transportador
saca un ATP
4-
e ingresa un ADP
3-
, utilizando la energa que le provee la fuerza protn
motriz. De esta manera, el balance neto es la salida de una carga elctrica negativa desde
las mitocondrias hacia el espacio intermembrana y luego al citosol. El atrctilosido es
un glucsido capaz de inhibir el transportador; y de esta forma perjudicar a todos los
procesos que requieran ATP en el citoplasma, como por ejemplo, la sntesis proteca.

Tambin existe en la membrana mitocondrial interna una traslocasa de fosfatos que
transporta H
2
PO
4
y H+(simporte) hacia la matriz mitocondrial. Este mecanismo, tambin
esta favorecido por el gradiente de protones.

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Ya hemos mencionado con anterioridad que algunas clulas como las del corazn,
musculo esqueltico y neuronas forman creatina fosfato para disminuir el ATP al mismo
tiempo que aumenta el ADP de manera veloz en la matriz mitocondrial. Obviamente
existe un transportador especifico para este compuesto.

Adems, muchas veces los cofactores formados no lo hacen en la mitocondria (como en
la descarboxilacin oxidativa y ciclo de Krebs, o -oxidacin de acidos grasos). El
ejemplo mas caracterstico sera la glucolisis, que es citoplasmtica. Ya se menciono que
todo compuesto con adenina en su estructura tiene dificultades para atravesar membranas,
y las coenzimas formadas en la glucolisis deben utilizar un sistema de lanzaderas para
poder transferir sus electrones a la cadena de electrones.

Otros transportadores son los llamados agentes desacoplantes, que con escasas
excepciones como la termogenina, no suelen ser fisiolgicos.

6.1 CASOS CLINICOS

Ejercicio fsico

El ejercicio aerbico, prcticado de manera frecuente y por perodos suficientes, lleva a
cambios intracelulares, dentro de los cuales se destacan: 1) aumento en el nmero, tamao
y actividad de las mitocondrias del msculo esqueltico y; 2) aumento de la cantidad de
enzimas del ciclo de Krebs. Esto lleva a un aumento en la capacidad oxidativa del
msculo en el ejercicio.

Cuando se practica ejercicio en condiciones anaerbicas, la compresin muscular
dificulta el riego sanguneo y por lo tanto el aporte de oxgeno a las fibras musculares.
Por lo tanto, en estas clulas, se produce un bloqueo de la cadenas electrones, ya que es
justamente en el complejo citocromo oxidasa donde se hace necesaria la presencia de
oxgeno, como aceptor final de los electrones para la formacin de agua. Dado que la
cantidad de coenzimas oxidadas se torna mnima, el exceso de NADH que no puede
reoxidarse bloquea el ciclo de Krebs y la cadena de electrones. Si no existiese un
mecanismo citoplasmtico capaz de reoxidar los NADH, tambin se detendra la
glucolisis. En ese momento, se destaca la siguiente reaccin, catalizada por la enzima
lactato deshidrogenasa:

NADH NAD+

PIRUVATO LACTATO
Lactato DHG (en anaerobiosis)

De esta forma, aprovechando que el piruvato no puede entrar a la descarboxilacin
oxidativa, se lo convierte en cido lctico (lactato) y se reoxidan los NADH
citoplasmticos, permitiendo que al menos la glucolisis siga funcionando. El rendimiento
energtico de la oxidacin anaerbica de la glucosa va a ser de 2 ATP por mol, una
cantidad muy baja si se la compara con los 36-38 ATP que se obtienen con la oxidacin
aerbica. El cido lctico puede pasar a la circulacin.

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Deficiencia vitamnica y alcoholismo

Se sabe la importancia de las vitaminas, desde que se conoce que forman parte de las
coenzimas y los grupos prostticos que interaccionan con las enzimas:

Tiamina (B1) pirofosfato de tiamina piruvato deshidrogenasa
Riboflavina (B2) FAD/FADH2 y FMN succinato deshidrogenasa,
glicerofosfato deshidrogenasa, dihidrolipoil-deshidrogenasa (piruvato
deshidrogenasa), NADH deshidrogenasa (complejo I)

Niacina (B3) nicotinamina NAD/NADH y NADP/NADPH Glucolisis,
piruvato deshidrogenasa, isocitrato deshidrogenasa, -cetoglutarato
deshidrogenasa, malato deshidrogenasa, lactato deshidrogenasa, glutamato
deshidrogenasa.
Acido pantotnico o pantoteina (B5) Acetil-coA Descarboxilacin
oxidativa, -oxidacin de cidos grasos
Biotina (vitamina H) Piruvato carboxilasa (vas anaplerticas).

Una deficiencia dietaria de pantotenato, riboflavina, niacina y tiamina ocasiona en todos
los casos fatiga. La explicacin a esto radica en que estas vitaminas son necesarias para
las reacciones de oxidaciones de combustibles titulares (como por ejemplo, la glucosa) y
en consecuencia, las clulas tendrn dificultades para obtener energa. Es raro encontrar
una deficiencia dietaria de biotina, dado que puede ser fabricada por bacterias intestinales.
Se ha observado esta deficiencia cuando hay ingesta de clara de huevo crudo en grandes
cantidades (inhibe la absorcin intestinal) o con tratamientos antibiticos prolongados.

En el alcoholismo hay una deficiencia puntual de vitamina tiamina, debido a que el
alcohol inhibe la absorcin intestinal de esta vitamina. Como esta vitamina tiene un
recambio muy rpido, su deficiencia se nota apenas a las 2 semanas de deficiencia dietaria
o consumo de alcohol. Dado que esta vitamina es fundamental para la descarboxilacin
oxidativa, el piruvato no podr transformarse en acetil-coA. Esto llevar a un aumento de
-cetocidos (especialmente piruvato), que en concentraciones excesivamente elevadas
se relaciona con dao cardaco (cardiomiopata). Parte del piruvato se transformar en
cido lctico y pasar a la circulacin. Esta patologa debe tratarse con la inyeccin
endovenosa de tiamina, pues no puede esperarse lo suficiente para que se recupere la
funcin intestinal.

Existe una patologa peditrica rara, llamada dficit congnito de piruvato
deshidrogenasa, que presenta caractersticas similares a las del alcoholismo, pero mucho
mas graves. Aqu, el dficit de piruvato deshidrogenasa es congnito; y su funcin no se
restablece por la inyeccin endovenosa de tiamina. Los niveles de piruvato y lactato estn
notablemente aumentados; y el nivel de bicarbonato plasmtico disminuido
(posiblemente porque se ha utilizado para neutralizar el lactato y los -cetocidos). Si
bien, la acetil-coA necesaria para ingresar al ciclo de Krebs puede obtenerse en muchos
tejidos de la -oxidacin de cidos grasos, el SNC se ve muy perjudicado, pues tiene a la
glucosa como combustible casi excluyente. De esta manera, se observa enfermedad
neurolgica generalizada, microencefalia y atrofia ptica severa.

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Intoxicacin con cianuro y arsenito

El cianuro bloquea la cadena de electrones, actuando sobre el complejo citocromo
oxidasa. Si se diagnostica rpidamente, puede tratarse con agentes
metahemoglobinizantes como los nitritos, que convierten la hemoglobina ferrosa (Fe2+)
en hemoglobina (Fe3+), que compite con el cianuro para unirse a los citocromos a y a3.

El arsenito (ASO
2
-
) se compleja con la forma reducida del lipoato del complejo piruvato
deshidrogenasa, bloqueando la descarboxilacin oxidativa. En realidad, cualquier
agente que oxide o compleje a los grupos tioles (-SH) ser un inhibidor potente del
complejo.

7.1 AGENTES DESACOPLANTES

Se comento anteriormente que Mitchell desarrollo la teora quimiosmtica, donde
explicaba que la cadena de electrones estaba acoplada a la fosforilacin oxidativa. Cuando
detenan la fosforilacin oxidativa usando el antibitico oligomicina, se detena tambin
la cadena de electrones y por lo tanto el consumo de oxgeno. De la misma manera,
cuando utilizaba un bloqueante de los complejos de la cadena de electrones (rotenona,
amital, antimicina, cianuro o monxido de carbono), se detena el bombeo de protones
(H+) y por lo tanto, tambin se detena la sntesis de ATP. Esto era bien claro
Funcionaba la cadena de electrones y la fosforilacin oxidativa; o no funcionaba ninguna
de las dos Porque la cadena de electrones est acoplada a la fosforilacin oxidativa.

Sin embargo, utilizando algunos compuestos qumicos, a los cuales denomin agentes
desacoplantes, poda desacoplar ambos procesos.

1) Si utilizaba oligomicina para detener la fosforilacin oxidativa; se detena
tambin la cadena de electrones y el consumo de oxgeno. Al agregar un
agente desacoplante, se reestableca la cadena de electrones y el consumo de
oxgeno; pero no la fosforilacin oxidativa. Esto indicaba que ambos procesos
haban quedado desacoplados; y poda existir uno sin la complicidad del otro.
2) Si utilizaba un bloqueante de la cadena de electrones, se detena la cadena de
electrones, el consumo de oxgeno y la fosforilacin oxidativa. Sin embargo,
en este caso, el agregado de un desacoplante no restableca ninguno de los
procesos.

El fundamento por el cual actan los agentes desacoplantes es el siguiente permiten
que los protones regresen, desde el espacio intermembrana hacia la matriz
mitocondrial, pero sin pasar por el complejo ATP-sintetasa. Muchos de los agentes
desacoplantes son cidos dbiles, capaces de captar protones y ayudarlos a atravesar la
membrana mitocondrial interna (recordar que los iones cargados no atraviezan las
membranas). Son ejemplos de este tipo de desacoplantes, el 2,4 dinitrofenol (DNP) y el
dicumarol.

Instituto


17
Otros desacoplantes son ionforos como la valinomicina, que forma un complejo
lipdico con iones potasio (K+) ayudndolo a atravezar la membrana mitocondrial. Si bien
no transporta especficamente protones, al transportar K+hacia la matriz mitocondrial,
compensa el gradiente elctrico (K+tiene las mismas cargas electricas que H+); y de esta
forma restablece el funcionamiento de la cadena de electrones. Por otro lado, la
termogenina es un desacoplante natural, que se encuentra presente en el tejido adiposo
pardo, altamente desarrollado en neonatos y animales que hibernan. La termogenina es
una protena canal, que permite el regreso de protones a la matriz mitocondrial, evitando
que estos puedan retornar por el complejo ATP sintetasa. De esta manera, la disipacin
del gradiente electroqumico est asociada a una liberacin de energa en forma de
calor, pero no acoplada a la sntesis de ATP. Por ltimo, se vio que el cido acetil-
saliclico (aspirina) tiene un efecto desacoplante cuando se administra en altas dosis a los
nios, responsable de un aumento de la temperatura corporal (efecto paradojal, se supone
que la aspirina debe bajar la fiebre).

Por lo tanto, son desacoplantes:

Acidos dbiles DINITROFENOL DICUMAROL - ASPIRINA
Ionforos VALINOMICINA
Protenas canales TERMOGENINA

8.1 LANZADERAS

No existe protena transportadora especfica de la membrana mitocondrial interna
capaz de transportar los NADH formados en citoplasma. Por ese motivo, existe un
sistema de lanzaderas, destinado a lanzar los equivalentes de reduccin (es decir, sus
electrones) hacia la matriz mitocondrial, para poder reoxidarlas. Obviamente, esos
electrones van a ir a parar a la cadena de electrones; y acoplada a la fosforilacin oxidativa
servir para la sntesis de ATP.

Veamos ahora, los mecanismos que permiten a las coenzimas citoslicas ingresar a la
matriz mitocondrial; o por lo menos, transferir sus electrones hacia este destino:
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8.2 DEL GLICEROL 3 FOSFATO

Es el sistema que utiliza principalmente el msculo esqueltico y el cerebro para
reoxidar los NADH provenientes de reacciones citoslicas.

La enzima glicerol 3 fosfato deshidrogenasa (G3PDH) se encuentra en el citosol y
cataliza la siguiente reaccin:

Dihidroxiacetona-fosfato (DHAP) +NADH Glicerol 3 fosfato (G3P) +NAD
+

De esta manera, se ve que los 2 electrones que originalmente se encontraban en el NADH
en el citosol, fueron transferidos en forma de ion hidruro (hidronio) a un compuesto, la
dihidroxiacetona-fosfato, que acepto los 2 electrones y se transformo en G3P. El Glicerol
3P se dirige a la membrana mitocondrial interna (MMI); y cede sus electrones al grupo
prosttico FAD que se encuentra en la enzima glicerofosfato deshidrogenasa que se
encuentra en esta ubicacin. En consecuencia, el grupo prosttico FAD, al captar los
electrones, se transforma en FADH2.
Esta enzima, al estar ubicada en la MMI, cede sus electrones directamente a la coenzima
Q (ubiquinona ubiquinol), para que continuen su trayectoria a travs de la cadena de
electrones.

Algo parecido es lo que ocurre con la enzima succinato deshidrogenasa del ciclo de
Krebs (que convierte succinato en fumarato). Si bien se encuentra en la matriz
mitocondrial; y por ese motivo no puede ser considerada una lanzadera, tiene el grupo
prosttico FAD, que se reduce a FADH cuando el succinato se oxida a fumarato. Luego,
descarga loes electrones directamente sobre la coenzima Q.

En ambos casos, como los electrones ingresan a la cadena salteando el primer complejo
(NADH deshidrogenasa), se produce un menor bombeo de protones (H+) hacia el espacio
intermembrana; lo cual esta asociado a un rendimiento energtico menor.

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Se estima que por cada mol de FADH2 que se reoxida en la cadena de electrones, se
termina obteniendo 2 moles de ATP en la fosforilacin oxidativa. En cambio, al
ingresar directamente por el complejo I, cada mol de NADH termina produciendo
3 moles de ATP.

En el caso particular del msculo esqueltico y el cerebro, el balance total de la oxidacin
completa en condiciones aerbicas de 1 mol de glucosa se traduce en 36 moles de ATP,
pues los NADH generados durante la glucolisis (citoplasmtica) deben transferir sus
electrones al FADH2 para poder ingresar a la cadena de electrones.

8.3 DEL MALATO-ASPARTATO

El NADH obtenido en las reacciones citoplasmticas en reoxidado gracias a la enzima
malato deshidrogenasa citoslica. Esta enzima posee caractersticas muy similares a la
del ciclo de Krebs, pero en esta oportunidad, la vamos a ver actuando en el sentido
contrario:

OXALACETATO +NADH MALATO +NAD

Esto es lgicamente posible, porque la reaccin catalizada por esta enzima es una reaccin
reversible. El malato es transportado a la matriz mitocondrial por una protena
transportadora, e ingresa a la parte final del ciclo de Krebs. La misma enzima malato
deshidrogenasa, pero en su isoforma mitocondrial, convierte el malato en oxalacetato,
segn se detalla a continuacin:

MALATO +NAD OXALACETATO +NADH

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En consecuencia, logramos introducir indirectamente el NADH en la matriz mitocondrial
(bueno, en realidad introducimos los electrones). Como el NADH es capaz de ingresar a
la cadena de electrones a travs del complejo I, va a rendir 3 moles de ATP por cada mol
de NADH. Este sistema es muy activo en hgado y corazn, donde el rendimiento
energtico por la oxidacin total de un mol de glucosa es de 38 ATP. Excluyendo los
rganos que se han nombrado hasta aqu, los dems tejidos utilizan un sistema mixto de
lanzaderas (es decir, tienen los dos tipos), y tienen un balance energtico de 36-38 moles
de ATP por cada mol de glucosa.

Para terminar de cerrar esto, habra que reponer el oxalacetato que sacamos del citoplasma (revisar
nuevamente las reacciones). Sin embargo, el oxalacetato no tiene un transportador en la
membrana mitocondrial interna; y para poder regresar tiene que convertirse primero en aspartato
por una reaccin de transaminacin. El aspartato atravieza la membrana mitocondrial
(transportador aspartato/glutamato),; y una vez en el citoplasma, es transformado nuevamente en
oxalacetato por una transaminacin.

9.1 FASE DE SINTESIS DEL CICLO DE KREBS

Si bien, con anterioridad hemos explicado el ciclo de Krebs en su fase oxidativa,
degradando grupos acetilos provenientes de la acetil-coA, lo cierto es que el ciclo de
Krebs tambin sirve para sintetizar importantes compuestos para el organismo. Esto se
debe en gran parte, a la reversibilidad que presentan la mayora de las reacciones del ciclo
de Krebs. A continuacin mencionamos los principales compuestos que pueden
sintetizarse, a partir de sus respectivos precursores:

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Sin embargo, hay que tener presente que los intermediarios del ciclo de Krebs tienen que
mantenerse mas o menos constantes (recuerden que durante la fase oxidativa del ciclo de
Krebs, lo nico que se consume realmente son los grupos acetilos descargados por la
acetil-coA); y por lo tanto, si se utilizan intermediarios para la sntesis de otros
compuestos (por ejemplo: citrato para la sntesis de colesterol), debern reponerse por
otro mecanismo. Dado que durante el ciclo los intermediarios se van transformando, no
necesariamente hay que reponer el mismo compuesto que se quit para la sntesis de
alguna molcula.

9.2 VIAS ANAPLEROTICAS

Las vias anaplerticas o reacciones de relleno son las reacciones destinadas a reponer
o sintetizar los intermediarios del ciclo de Krebs, pero no a partir de acetil-coA pues esta
se consume normalmente durante el ciclo. Tampoco son vlidas las reacciones donde un
intermediario del ciclo se transforma en otro (por ejemplo, malato en oxalacetato), pues
no se estn aportando carbonos nuevos al ciclo. Por definicin, una va anaplertica
sintetiza un compuesto del ciclo de Krebs a partir de una molcula que no forma
parte del ciclo, y que es diferente de la acetil-coA.

1) Reaccin de la piruvato carboxilasa
La enzima piruvato carboxilasa cataliza la
conversin de PIRUVATO (3C) +CO2 +
ATP OXALOACETATO (4C). Se
trata de una reaccin de carboxilacin,
pues un compuesto de 3 carbonos se
transforma en uno de 4 carbonos por el
agregado de CO2. Esta enzima requiere
biotina como cofactor y es estimulada
por acetil-coA. Se trata de una reaccin
irreversible. La reaccin tiene gasto de
energa en forma de ATP. Podemos decir
que lo mas comn es que el piruvato se
transforme en acetil-coA por accin del
complejo enzimtico piruvato
deshidrogenasa (descarboxilacin
oxidativa), pero cuando la concentracin
de acetil-coA es muy elevada, acta
inhibiendo al complejo PDH (inhibicin
por producto final), al mismo tiempo que
estimula a la enzima piruvato carboxilasa.
El piruvato toma un destino alternativo, ya
que ingresa al ciclo de Krebs como
oxalacetato y no como acetil-coA.

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2) Reaccin de la enzima mlica de Ochoa La enzima mlica cataliza la
conversin de PIRUVATO (3C) +CO2 +NADPH MALATO (4C) +NADP.
En esta reaccin, se utiliza al piruvato para reponer otro intermediario del ciclo de
Krebs, en este caso, el malato. Para esta reaccin se gasta una coenzima reducida
NADPH, pero no tiene implicancias en el rendimiento energtico de la clula
porque el NADPH no se utiliza en la cadena de electrones fosforilante.

3) Reaccin de la glutamato deshidrogenasa Esta enzima cataliza la sntesis de
-cetoglutarato, a partir del aminocido glutamato (GLUTAMATO +NAD -
CETOGLUTARATO + NADH + NH3). Se trata de una reaccin de
desaminacin.

4) Reaccin de la glutmico-pirvico transaminasa (GPT) o Alanina
transaminasa (ALAT) Se trata de una reaccin de transaminacin, donde un
aminocido intercambia su grupo amino, con el grupo cetona o carbonilo
proveniente de un -cetocido. Cataliza la siguiente reaccin: GLUTAMATO +
PIRUVATO -CETOGLUTARATO +ALANINA.

Existen otras reacciones de transaminacin catalizadas por
otras enzimas, que no constituyen vias anaplerticas pues
invierten intermediarios del ciclo de Krebs para formar otro
intermediario del ciclo. Un ejemplo lo constituye la enzima
glutmico-oxalactico transaminasa (GOT), que hace
reaccionar al glutamato + oxalacetato para formar -
cetoglutarato y aspartato. Dado que oxalacetato y -
cetoglutarato forman parte del ciclo de Krebs, se estara
cambiando un compuesto por otro.

Las ltimas 3 reacciones mencionadas (enzima mlica de Ochoa, -cetoglutarato
deshidrogenasa y GPT o ALAT) constituyen reacciones reversibles. Por lo tanto, solo
se consideran anaplerticas en el sentido en el que reponen intermediarios del ciclo y no
a la inversa, donde constituiran reacciones de la fase biosinttica del ciclo de Krebs.

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10.1 CADENAS DE ELECTRONES NO FOSFORILANTES

Adems de la cadena de transporte de electrones que describimos con anterioridad, la cual
se encuentra acoplada a la fosforilacin oxidativa, lo cual lleva a la sntesis de ATP,
existen otras cadenas de electrones que tienen una finalidad diferente, y no se asocia a la
obtencin de energa.

Para poder explicar este tema, necesitamos presentar a los diversos tipos de enzimas, que
pueden utilizar oxgeno como sustrato:

Oxidasas Transfieren electrones al oxgeno, el cual es reducido a agua o
peroxido de hidrgeno (H2O2).
Oxigenasas Incorporan oxgeno al sustrato. Las que incorporar solo un
tomo de oxgeno al sustrato se llaman monoxigenasas (tambin llamadas
hidroxilasas u oxigenasas de funcin mixta) mientras que las que incorporan
los dos tomos de oxgeno al sustrato se llaman dioxigenasas. Los citocromos
p450 son un conjunto de monoxigenasas que hidroxilan muchos compuestos
fisiolgicos (esteroides y cidos grasos) o xenobiticos (frmacos y agentes
cancergenos). Incorporan un solo tomo de oxgeno al sustrato, mientras que el
otro tomo de oxgeno se reduce con formacin de agua.

Sistema de monoxigenasas del citocromo p450 microsomal

Su funcin es catalizar la hidroxilacin de diferentes frmacos, para facilitar su
eliminacin. Es decir, participan principalmente en la detoxificacin de compuestos. Por
lo tanto, se encuentra muy desarrollada en el retculo endoplasmico rugoso de las clulas
hepticas (localizacin heptica microsomal). Puede ser inducible, lo que significa que
a medida que se ingieren mas drogas, aumenta la capacidad y velocidad de detoxificacin,
requirindose una dosis mayor del frmaco para lograr el mismo efecto. El dador de
equivalentes de reduccin puede ser el NADPH o el NADH. Utiliza, citocromos p450;
y protenas hierro-azufre, flavoprotenas +citocromosb5.

Sistema de monoxigenasas del citocromo p450 mitocondrial

Su funcin principal es la hidroxilacin de esteroides, para sintetizar progesterona,
aldosterona, cortisol, etc. Se localiza en la membrana mitocondrial interna de tejidos
esteroideognicos, tales como la glndula suprarrenal, el testculo y el ovario. Los
equivalentes de reduccin son provistos exclusivamente por el NADPH. Adems del
citocromo p450, utiliza protenas hierro-azufre y una flavoproteina muy importante
llamada adrenoxina.

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