Krtki opis pracy Bakterie kwasu mlekowego wystpuj powszechnie w produktach mlecznych.

Maj one zdolno do przeprowadzania obligatoryjnej fermentacji wglowodan w z wytworzeniem kwasu mlekowego jako ostatecznego produktu. !dgrywaj one niebagateln rol w przemyle spo"ywczym. #ziki zdolnoci tych bakterii do przeprowadzania fermentacji mlekowej uczestnicz w produkcji wyrob w mlecznych nadajc im odpowiedni konsystencj oraz walory smakowe. $elem pracy by%a identyfikacja genotypowa wyizolowanych szczep w tych bakterii z sera typu bryndza pochodzcego z regionu &arpat 'krai(skich. ) celu identyfikacji gatunk w otrzymanych szczep w zastosowano technik rybotypowania *+, r-./ 0$-1-230. 4en *+, r#./ koduje *+, r-./5 kt ry buduje ma% podjednostk rybosomu prokariotycznego. 6e wzgldu na jego podstawow funkcj5 wszechobecno i w%aciwoci ewolucyjne u prokariot w5 gen *+, r#./ jest wysoce konserwatywny. )szystkie te cechy pozwoli%y mu sta si jednym z najczciej i najpowszechniej stosowanym markerem molekularnym w genotypowaniu mikroorganizm w. .iewielkie r "nice wystpujce w sekwencji genu *+, r#./ u mikroorganizm w czyli polimorfizmy genetyczne pozwalaj na r "nicowanie gatunk w. 6asadnicz czci pracy by%y dwa etapy7 reakcja %a(cuchowa polimerazy oraz trawienie otrzymanego w wyniku amplifikacji produktu. 6anim jednak mo"na to by%o przeprowadzi wyizolowano genomowe #./ z czystych kultur bakterii kwasu mlekowego otrzymanych z badanego materia%u. 6astosowano metod izolacji i oczyszczania wykorzystujc zdolno wizania si #./ do z% " krzemionkowych w wysokich st"eniach soli chaotropowych u"ywajc zestawu 4enomic Mini. 'da%o si uzyska 89 reprezentatywnych pr bek charakteryzujcych si zadawalajcym st"eniem oraz czystoci. ) celu amplifikacji genu *+, r#./ przeprowadzono reakcj 0$- z wykorzystaniem powszechnie znanych starter w :4:* oraz *;<8-. 'zyskano produkt o wielkoci oko%o *=>> pz kt ry odpowiada d%ugoci genu *+, r#./ i jest charakterystyczny dla pary zastosowanych starter w i warunk w przeprowadzonej reakcji. Bardzo zbli"ony wynik uzyskano w pracy ?:scalante i in.

8>>*@ stosujc startery f#* i r#* kt re przy%czaj si do miejsca startowego w zbli"onych miejscach w sekwencji genu *+, r#./ co startery :4:* i *;<8-. !statecznym celem pracy by%o uzyskanie profili restrykcyjnych zamplifikowanego produktu przy pomocy dw ch enzym w RsaA oraz HinfA. /naliza tych profili dostarczy%a bardzo ciekawych informacji. ) sumie uzyskano B r "nych profili restrykcyjnych ?; w przypadku trawienia enzymem RsaA i C w przypadku trawienia enzymem HinfA@. Biorc pod uwag5 "e trawieniu tymi enzymami poddany zosta% bardzo konserwatywny region5 mo"na przypuszcza5 "e uda%o si zr "nicowa flor bakteryjn wykorzystywan w produkcji sera na B r "nych grupDgatunk wDszczep w. )nioski takie mo"na wycign na podstawie faktu5 "e mutacje czy polimorfizmy w badanym regionie w obrbie jednego rodzaju bakterii wystpuj niezwykle rzadko. Eak wic r "nice w profilach restrykcyjnych z du" doz pewnoci wiadcz o tym5 "e uda%o si wyizolowa #./ z r "nych grup bakterii. )arto zaznaczy5 "e strategia trawienia akurat tymi dwoma enzymami nie by%a stosowana nigdy wczeniej w pracach dotyczcych genotypowania bakterii kwasu mlekowego. !trzymane wyniki pokazuj5 "e ta strategia jest bardzo dobra poniewa" profile restrykcyjne otrzymane z u"yciem tych dw ch enzym w nie pokrywaj si co pozwala na bogatsze r "nicowanie analizowanych mikroorganizm w. .ie mniej5 wzory restrykcyjne5 kt re uda%o si otrzyma dla pr b badanych nie znajduj odzwierciedlenia w tych uzyskanych dla szczep w odniesienia. )obec tego nie mo"emy stwierdzi jakie dok%adnie gatunki bakterii kwasu mlekowego uda%o si wyizolowa. .a pewno nasz wiedz na temat jakociowego sk%adu flory bakteryjnej badanego materia%u wzbogaci%oby wykorzystanie wikszej iloci szczep w referencyjnychDodniesienia. )arto jednak pamita5 "e ostatecznym potwierdzeniem przynale"noci danej bakterii do okrelonej grupy jest reakcja sekwencjonowania genu *+, r-./. Eaka analiza jednoznacznie powiedzia%aby nam z jakimi bakteriami mamy do czynienia.