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ANALISIS MICROBIOLOGICOS DE SUELOS CONTAMINADOS CON HIDROCARBUROS Y AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS HIDROCARBONOPLASTOS

ROSA ANGELICA NUMA CASADIEGOS (1650249) LUCERO MORALES (1650254) ANDRES CELIS (1650210)

RESUMEN Gran parte de los estudios en microbiologa depende de la capacidad de cultivar y mantener microorganismos en un laboratorio, y esto es slo posible si se dispone de los medios de cultivo adecuados; los medios especiales son imprescindibles para aislar e identificar los microorganismos; en esta prctica de laboratorio, vamos a conocer los mtodos utilizados para el aislamiento y como realizar el cultivo de bacterias y hongos, adems de la composicin y el uso de los diferentes medios de cultivo, diferenciar las caractersticas de crecimiento de las bacterias y los hongos segn el medio de cultivo utilizado. Esta prctica consisti en analizar un suelo contaminado con hidrocarburo y aislar del los microorganismos hidrocarbonoclastas presentes, se llevo a cabo la cuenta microbiana realizando diluciones en placa de las concentraciones de los microorganismos presentes en el suelo contaminado con hidrocarburo, la cual provee una medicin de la viabilidad microbiana y permite determinar indirectamente el potencial de biodegradacin en el suelo contaminado. Para el aislamiento de los microorganismos provenientes del suelo se utiliz como medio de cultivo agar nutritivo, ya que este proporciona su propagacin, adems de su conservacin; la muestra se extendi por toda la caja petri contenedora del agar, lo que permite que las clulas microbianas se separen, esta placa se incubo bajo las condiciones ambientales apropiadas.

INTRODUCCION Para obtener energa y elaborar nuevos componentes celulares, los organismos tienen que disponer de materias primas o nutrientes; los nutrientes son sustancias que se emplean en la biosntesis y produccin de energa, y por consecuencia, son necesarios para el crecimiento microbiano; adems de los nutrientes, los factores ambientales como la temperatura, nivel de oxgeno, concentracin osmtica y otros, del medio son crticos para cultivar con xito los microorganismos. Para estudiar los microorganismos es necesario hacerlo en conjunto, no se puede individualmente, ya que su tamao es muy pequeo; para manipularlos mejor, lograr que se desarrollen rpidamente y sus poblaciones sean multiplicadas, se realiza la siembra en un medio de cultivo, el cual posee los nutrientes necesarios, ricos en protenas no especificas para su metabolismo, desarrollo y reproduccin. La siembra se debe realizar bajo condiciones rigurosas de asepsia, para que as no haya en el cultivo crecimiento de grmenes provenientes del ambiente, que contaminen el medio a tratar. Si el cultivo tiene un solo tipo de microorganismo se le denomina cultivo puro. Cuando encontramos ms de un tipo de microorganismo se llama entonces cultivo mixto.

Para separar los microorganismos se utiliza un proceso llamado aislamiento y la forma de sembrar puede realizarse de varias formas, dependiendo de la prueba y del medio de cultivo empleado. Los objetivos de esta prctica fueron conocer y manejar las tcnicas de aislamiento de microorganismos, para adquirir la habilidad y destreza de aislar y sembrar microorganismos, trabajando siempre en un ambiente asptico y estril. Aplicar los mtodos de esterilizacin en los determinados materiales METODO El conteo de poblaciones microbianas por dilucin en placa es un mtodo simple y rpido para la cuenta viable de clulas microbianas en el suelo. Sin embargo, la cuenta obtenida es generalmente 10 a 100 veces menos que aquella determinada por cuenta directa por microscopia. Las razones para esta discrepancia incluyen la exclusin de la cuenta no viable directamente en el suelo y la inhabilidad para proveer apropiados nutrimentos en el medio de crecimiento, para obtener la cuenta total en placa. Se realiz el aislamiento de microorganismos por varias tcnicas para obtener as un cultivo puro. Los materiales y equipos utilizados para llevar a cabo la prctica fueron:

Tubos de vidrio de 15 ml para cultivo con 9 ml de solucin salina 0.85% estril. Matraz Erlenmeyer con tapa con 99 ml de solucin salina 0.85% estril. Puntas de micropipeta de 100 1000 microlitros, estriles. Balanza triple brazo. Baja lenguas estriles. Caja de Petri con medio de cultivo-agar. Asa de hockey. Muestra de suelo contaminadas con hidrocarburos. Papel aluminio estril.

Este mtodo se llevo a cabo en condiciones estriles de la siguiente manera: 1. Dilucin 10-1: Se adicionaron 11 g del suelo contaminado a una botella con 99 ml de solucin salina isotnica estril, agitando varias veces para lograr dispersar y homogenizar el suelo. 2. Dilucin 10-2: se tomaron 10 ml de la dilucin anterior y se transfirieron al tubo con los 9 ml de solucin salina estril, as sucesivamente hasta completar diluciones de 10-6. 3. Se tomaron 100 microlitros de cada dilucin y se vertieron cada uno en el centro de las respectivas cajas Petri segn la disolucin realizada, cada dilucin por duplicado, con la varilla de vidrio esterilizada se extendi por completo. 4. Se procedi a incubar las placas a 30 C en ausencia de luz.

Procedimiento N1 Primero se realiz las diluciones en placa, este mtodo se fundamenta en que cualquier clula viable inoculada en un medio de cultivo se multiplica y produce datos de fcil identificacin, como la formacin de colonias en placas de agar. El medio de cultivo estaba compuesto dependiendo del microorganismo que se quera aislar ya fuera hongo o bacteria del y adems: Agua destilada Fosfato de potasio monobsico Fosfato de potasio dibsico Cloruro de amonio Cloruro de magnesio sextahidratado Cloruro de Calcio deshidratado Solucin mineral

1. Se impregno pedacitos de papel filtro del petrleo crudo ligero estril. 2. Se coloco en la parte interna de la caja petri. As sucesivamente para todas las diluciones del suelo contaminado con hidrocarburos contenidos en cada caja de Petri.

Procedimiento N2 Luego se procedi a agregar el petrleo a cada caja de petri.

RESULTADOS Para obtener los resultados del crecimiento de los microorganismos en los medios de cultivo, se realizo observaciones por dos semanas, una por cada semana. AMH Diluciones 10-3 En este cultivo se pudo observar crecimiento pequeo, mas en segunda dilucin, aunque no colonias dispersas como esperaba. un la en se

Diluciones 10-4 En esta placa pudimos detallar un crecimiento mnimo de los microorganismos.

AMB Diluciones 10-5 En este cultivo observamos una pequea lnea, la cual cremos que era crecimiento de las bacterias, pero en la segunda semana se desapareci

Diluciones 10-6 Al parecer se present un leve crecimiento de bacterias, pero en la segunda dilucin no se observ crecimiento, por mnimo que fuera

DISCUSIONES Los resultados no fueron los esperados, ya que no hubo el crecimiento deseado y la formacin de colonia necesarias, esto pueda que se deba, al momento de llevar a cabo la dilucin se presentaron varios posibles errores los cuales puede que sean los que hayan afectado a nuestros resultados.

CONCLUSIONES

Es necesario una investigacin y caracterizacin de la contaminacin y del emplazamiento de forma rigurosa para evaluar y elegir la medida biocorrectiva ms adecuada y disear el sistema de manera ptima, as como es necesario llevar a cabo un control y seguimiento del mismo. Las tcnicas biolgicas y qumicas combinadas ayudan a mejorar considerablemente los contaminantes del suelo obteniendo una efectividad del 80% en la renovacin de los lodos en pocas semanas. Un buen anlisis microbiolgico nos ayuda a determinar el porcentaje de contaminacin e identificar que tcnicas podemos utilizar para descontaminarlo, tambin podemos analizar los diferentes tipos de componentes que contiene este suelo.

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