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Anexo IV Instructivo para la preparacin de los colorantes en el

laboratorio (27):
1.1 Preparacin de la HEMATOI!I"A de HA##I$ :
Reactivos para preparar 1000 ml de hematoxilina de Harris.
- Hematoxilina (cristales oscuros) CI 75290.................. 5
- !tanol al 100"......................................................50 ml
- #ul$ato de amonio % aluminio...................................100
- &ua destilada...................................................1000 ml
- 'xido merc(rico (H')...........................................2.5
- &cido ac)tico lacial************* *.....+o, o -0 ml .
(22)
- ./ara Hx Harris $uer0a total con 1cido ac)tico - " (t)cnica proresiva2 tiempo
coloraci3n -5 4).
- ,/ara Hx Harris $uer0a media es diluida con iual volumen de H2' destilada2 sin
1cido ac)tico (t)cnica reresiva2 tiempo coloraci3n 5 minutos).
Instructivo para preparar la hematoxilina6
a. 7isolver los cristales de hematoxilina en etanol.
8. 7isolver el sul$ato de amonio % aluminio en aua destilada por
calentamiento.
c. &9adir la soluci3n de hematoxilina a la soluci3n de sul$ato.
d. Hacer :ue la me0cla anterior alcance la temperatura de 95;C.
e. Retirar de la llama2 a9adir lentamente % aitando el 3xido merc(rico
hasta :ue la soluci3n tome un color p(rpura oscuro.
$. Introducir inmediatamente la soluci3n en un 8a9o de aua $r<a.
. =iltrar la soluci3n cuando este $r<a.
h. >uardar la soluci3n en $rascos de color marr3n oscuro % de?ar en
reposo durante cuarenta % ocho horas.
1.% Preparacin del O& '
!xisten al menos dos $3rmulas para la tinci3n 'rane >2 una de las cuales
es '> 5 % la otra '> modi$icado. #e detalla a continuaci3n la $3rmula '>
5.
Reactivos para preparar 1000 ml de 'rane > 56
- Cristales de 'rane > CI 152@0.......10
- &ua destilada............................100 ml
- !tanol al 95 ".................hasta 1000 ml
- &cido $os$ot(nstico.....................0.15
/rocedimiento para preparar 'rane > 56
a. #oluci3n madre +; 16
/reparar una soluci3n acuosa de 'rane > al 10" del siuiente
modo6 disolver 10 de cristales de 'rane > (Color Index
+um8er 152@0) en 100 ml de aua destilada. &itar 8ien %
de?ar en reposo durante una semana antes del uso.
8. #oluci3n madre +; 26
/reparar una soluci3n al 025 " del siuiente modo 6 tomar 50
ml de la soluci3n madre +; 1 % a9adir etanol al 95 " hasta un
volumen de 1000 ml.
c. Colorante $inal6
Aomar 1000 ml de la soluci3n madre +; 2 % a9adir 0215 de
1cido $os$ot(nstico. Be0clar 8ien. Conservar en un $rasco de
color marr3n oscuro con tap3n.
1.( Preparacin de Eosina Alco)ol *+ ,EA *+ en adelante-:
!xisten varias $3rmulas para preparar el colorante !&. #e descri8en a
continuaci3n la preparaci3n de !& 506
Reactivos para preparar 2000 ml de !& 506
C !osina (amarillenta) *...................10
C /ardo DismarE (amarillento)...........10
C Ferde lu0 #= amarillento *.............10
C &ua destilada *........................ @00 ml
C !tanol al 95" *........................2000 ml
C &cido $os$ot(nstico....................... -
C Car8onato de litio saturado *........ 20 otas
Instructivo para prepara !& 506
a. #oluciones acuosas madres6
/reparar soluciones al 10 " separadas de cada uno de los colorantes del
siuiente modo6
- 7isolver 10 de eosina G en 100 ml de aua destilada.
- 7isolver 10 de pardo DismarE G en 100 ml de aua destilada.
- 7isolver 10 de verde lu0 #= en 100ml de aua destilada.
8. Colorante $inal6
#oluciones alcoh3licas preparadas en 8ase a las soluciones acuosas.
C Aomar 50 ml de soluci3n madre de eosina G2 10 ml de soluci3n madre
de pardo DismarE G % 1225 ml de soluci3n madre de de verde lu0 #= %
a9adir etanol al 95 " hasta o8tener un volumen de la me0cla de 2000
ml.
C &9adir - de 1cido $os$ot(nstico % 20 otas de soluci3n de car8onato
de litio saturada. Be0clar 8ien.
C Conservar la soluci3n en $rascos de color marr3n oscuro
herm)ticamente cerrados.
C Htili0ar la concentraci3n m1xima. =iltrar antes del uso.
!a solucin .adre saturada de carbonato de litio se prepara con6
- Car8onato de litio (Ii2C'@)................1.5
- &ua destilada.................................100 ml
Ia soluci3n de tra8a?o saturada de car8onato de litio se prepara
areando @0 otas de soluci3n madre a 1000 ml de aua destilada.
1./ Preparacin de la He.atoxilina de Harris ,Hx Harris en
adelante- sin Oxido de Mercurio :
Aomado de Barluce Di88o (5).
Hx Harris Hx Harris (Case
Jestern Reserve
Hniversit%),
Hx CI 75290 5 r K r
Betanol
a8soluto
50 ml K0 ml
&ua destilada 1000 ml 15K0 ml
&ente
oxidante
'xido H 2.5 r Iodato +a 550 m
(0.55 r)
&lum8re
(sul$ato
aluminio
amonio)
100 r 150 r
&cido ac)tico
lacial
+o (o -0 ml) 20 ml
# Hx Harris instrucciones (5):
Usar agitador magntico para lo siguiente:
1- disolver sulfato aluminio amonio en agua destilada sin la ayuda de calor por 1 hora
- agregar hematoxilina a la soluci!n de sulfato
"- agregar alcohol a#soluto a la soluci!n
$- despacio agregar iodato de sodio mientras se revuelve
5- de%ar reposar la soluci!n por "& min
'- agregar & ml de (cido actico en )& ml de agua destilada a la soluci!n final
*ota: +he,uear al microscopio coloraci!n nuclear-