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CROMATOGRAFA

Contenido
Tcnicas cromatogrficas aplicadas al anlisis
farmacutico.
Base fisicoqumicas de la separacin cromatogrfica.
Cromatografa de Gases
CROMATOGRAFA
Introduccin
Cromatografa en papel
Cromatografa en placa fina
Cromatografa en columna
CROMATOGRAFA
Historia
M. TSWEET (1903): Separacin de mezclas de
pigmentos vegetales en columnas empacadas
con adsorbentes slidos y disolventes variados.
ter de
petrleo
CaCO
3
Mezcla de
pigmentos
pigmentos
separados
Cromatografa =
kroma [color] + graph [escribir, registrar]
(griego)
Interacciones
dipolo - dipolo inducido
Fuerzas inicas
Atraccin electrostticas
Interacciones
dipolo - dipolo
dipolo - dipolo
inducido

Fuerzas de dispersin
Factores que afectan la magnitud de la separacin
CROMATOGRAFA
Principio Bsico
2. La distribucin (dispersin) de los picos es
necesaria para que los solutos se pueden
eluir separadamente.
Columna
(Sistema de Distribucin)
Separacin
completa de un pico
Separacin
de picos
Mezcla
(Muestra
1. Los solutos se mueven a diferente
velocidad, a consecuencia de su afinidad
relativa por la fase estacionaria
(dimensiones de la columna,
tamao de partcula,
velocidad de la fase mvil)
(La fase estacionaria ptima
en CG Y la combinacin
ptima entre fase mvil y
fase estacionaria en CL)
Dos procesos ocurren en la columna
CROMATOGRAFA
Principio Bsico
Separacin de mezclas por interaccin diferencial de
los componentes entre una FASE ESTACIONARIA
(lquido o slido) y una FASE MVIL (lquido o gas).
CROMATOGRAFA
Cromatograma
t=0
Tiempo
Volumen
Propiedad
medida
CROMATOGRAFA
Modalidades y Classificacin
FM = Lquido
FM = Gas
Cromatografa
De Lquidos
Cromatografa
De Gases (CG)
En CG la FE
puede ser:
Slida
Lquida
Cromatografa
Gas-Slido (CGS)
Cromatografa
Gas-Lquido (CGL)
CROMATOGRAFIA DE GASES
Historia
Presente:
Ventas de equipos y acessrios para CG en los EUA
estimadas en ms de US$ 750.000.000 (1995).
1940
1950
1960
CGS rudimentario
CGL propuesto (Martin y Synge)
Separacin de cidos orgni-
cos por CGL: primer cro-
matgrafo (Martin y J ames)
Primer equipo comercial
(Griffin & George)
Detector por Densidad de
Gas (Martin y James)
Detector por Ionizacin de
flama (McWillian y Dewar)
Detector por Captura de
Electrones (Lovelock y Lipsky)
Columnas Capilares (Golay)
CROMATOGRAFIA DE GASES
Aplicabilidad
Qu mezclas pueden ser separadas por CG ?
Mezclas cuyos constituyentes sean
VOLATILES (=evaporcin)
(cualquiera sustancia que pueda ser
arrastada por el flujo de un gas y que se pueda
disolver por lo menos parcialmente -
en el gas)
DE FORMA GERAL:
La CG es aplicable para la separacin y el
anlisis de mezclas cuyos componentes
tengan PUNTOS DE EBULLICIN menores a
300
o
C Y que sean trmicamente estables.
-Pruebas antidoping
-deteccin de estimulantes, analgsicos narcticos, y
betabloqueantes, bien por cromatografa de gases (columnas
capilares y deteccin termoinico de nitrgeno-fsforo), bien, tras
una hidrlisis enzimtica y formacin de derivados (silados o
trifluoroacetilados.), por cromatografa de gases o directamente
mediante la cromatografa de gases/espectrometra de masas.

- deteccin de esteroides anabolizantes eliminados en forma libre,
despus de formar derivados silados, mediante la cromatografa de
gases/espectrometra de masas.

- deteccin de diurticos, despus de su metilacin, tanto por HPLC
como por GC/MS
Residuos de frmacos en alimentos.
La cromatografa de gases revel hallazgos tales como presencia de
cloranfenicol en proporcin de 1 ppm en la leche, la sulfametazina
se encontr en tejidos con un lmite inferior de deteccin de 0.01
ppm y la sulfonamida a razn de 0.042 ppm en tejidos crnicos.

Identificacin de Solventes Orgnicos Residuales en
formas farmacuticas slidas, expresado como producto
terminado, por medio de la tcnica analtica "head - space
esttico" asociado a cromatografa de gases con detector de
ionizacin de llama (F.I.D.)
CROMATOGRAFIA DE GASES
Aplicabilidad
El Cromatgrafo de
Gases
1
2
3
4
6
5
1 Contenedor de Gas y Valvulas de Paso y Controles
de Presin.
2 - Inyector (Vaporizador) de la muestra.
3 - Columna Cromatogrfica y Horno de la Columna.
4 - Detector.
5 - Tratamiento (Amplificacin) de la Seal.
6 - Registro de la Seal (Registrador o Computadora).
Obs: En rosa se marcan los componentes a temperatura controlada
INSTRUMENTACIN
Gas de Arraste
Fase Mvil en CG: NO debe interactuar con la
muestra slo debe transportar la muestra a
travs de la columna. Tambin se le nombra
como GAS DE ARRASTE
Requisitos:
INERTE No debe reaccionar con la muestra,
con la fase estacionaria o con la superfcie del
equipo.
PURO No debe presentar impurezas que
puedan degradar la fase estacionaria.
Impurezas tpicas en gases o sus efectos:
oxida / hidroliza algunas FE
incompatible con el DCE
H
2
O, O
2
hidrocarburos

rudo en la seal del
DIF
INSTRUMENTACIN
Gas de Arraste
Requisitos:
COSTO Gases de alta pureza pueden ser muy
caros.
COMPATIBLE CON EL DETECTOR Cada
detector requiere de un gas de arraste especfico
para un mejor funcionamiento.
Selecin del Gas de Arraste en Funcin del Detector:
He , H
2

DCT

DIF

N
2
, H
2

DCE

N
2
(SS), Ar + 5% CH
4

C
O
S
T
O

PUREZA
A
B
C
A = 99,995 % (4.5)
B = 99,999 % (5.0)
C = 99,9999 % (6.0)
INSTRUMENTACIN
Alimentacin del Gas de Arraste
Componentes necesrios de la linea de gas:
controladores de presin del gas
dispositivos para purificacin de gas (trampas)
1
2
3
4
5
6
1 - Cilindro contenedor del Gas
2 - Regulador de Presin Primario
3 - Trampas para eliminar impurezas del gas
4 - Regulador de Presin Secundario
5 - Regulador de salida (Controlador Diferencial de Flujo)
6 - Medidor de flujo (Rotmetro)
Nota: Tubos y Conexones: Acero Inoxidable o Cobre
INSTRUMENTACIN
Dispositivos de Inyecin de la Muetra
Los dispositivos para inyeccin (INJECTORES
o VAPORIZADORES) deben proveer medio
de introduccin INSTANTANEA de la muestra
en la columna cromatogrfica
Injecin instantanea:
Injecin lenta:
t = 0
t = x
t = 0
t = x
INSTRUMENTACIN
Inyector on-column Convencional
1
2
3
4
1 - Septum (silicn)
2 - Alimentacin del gas de arraste
3 - Bloque metlico caliente
4 - Punta de la columna cromatogrfica
INSTRUMENTACIN
Inyeccin on-column de lquidos
1 2 3
1 - La punta de la aguja de la microjeringa es
introducida en el inicio de la columna.
2 - La muestra es inyectada y vaporizada
instantneamente en el inicio de la columna.
3 La muestra vaporizada es forzada por el gas de
arrastre a fluir por la columna.
INSTRUMENTACIN
Parmetros de Inyecin
TEMPERATURA DEL INYECTOR Debe ser
sufi-cientemente elevada para que la muestra
se vaporice istantaneamente, pero sin sufrir
descomposicin
Regla Geral: T
inj
= 50
o
C por arriba de la
temperatura de ebullicin del componente
menos voltil
VOLUME INYECTADO Depende del tipo de
columna y del estado fsico de la muestra
Columna
Muestras
Gaseosas
Muestras
Lquidas
empacada
C = 3,2 mm (
1
/
4
)
0.1 ml ... 50 mL 0.2 L ... 20 L
capilar
C = 0,25 mm
0.001 ml ... 0.1 mL 0.01 L ... 3 L
Slidos: convencionalmente se disuelve en un
disolvente adequado y se inyecta la disolucin
INSTRUMENTACIN
Microjeringas para Inyeccin
LQUIDOS Capacidades tpicas: 1 L, 5 L e 10 L
mbolo
cuerpo
(pirex)
aguja (inox 316)
Microjeringa de 10 L:
Microjeringa de 1 L (seccin ampliada):
cuerpo
gua
mbolo (punta de
acero soldado a la
guia)
aguja
INSTRUMENTACIN
Columnas: Definiciones Bsicas
EMPACADA
C = 3 a 6 mm
L = 0,5 m a 5 m
Empacada con slido pul-
verizado (FE slida o FE
lquida depositada sobre
las partculas del slido)
CAPILAR
C = 0,1 a 0,5 mm
L = 5 m a 100 m
Paredes internas
recubiertas con una
pelcula fina (grosor de
m) de FE lquida o slida
INSTRUMENTACIN
Temperatura de la columna
Adems de la interacin con la FE, el tiempo que
un analito demora para recorrer la columna
depende de su PRESIN DE VAPOR (p
0
).
p
0
= f
Estrutura qumica
del analito
Temperatura
de la columna
Temperatura
de la
columna
Presin
de
vapor
Velocidad
de
migracin
EL ANALITO SE ELUYE MS
RPIDAMENTE (MENOR
RETENCIN)
INSTRUMENTACIN
Temperatura de la columna
T
E
M
P
E
R
A
T
U
R
A

D
E

L
A

C
O
L
U
M
N
A

EL CONTROL CONFIBLE DE LA
TEMPERATURA DE LA COLUMNA ES
ESENCIAL PARA OBTER UNA BUENA
SEPARACIN EN CG
INSTRUMENTACIN
Horno de la columna
Caractersticas Deseables de un Horno:
AMPLIO INTERVALO DE TEMPERATURA Por
lo menos de T
ambiente
a 400
o
C. Sistemas
criognicos (T < T
ambiente
) puede ser necesario en
casos especiales.
TEMPERATURA INDEPENDENTE DE LOS
DEMAS MDULOS No debe ser afectada por la
temperatura del inyector o del detector.
TEMPERATURA UNIFORME EN SU INTERIOR
Sistema de ventilacin interna muy eficiente para
manter la temperatura homognea en todo el
horno.
INSTRUMENTAcin
Horno de la Columna
Caractersticas Deseables de un Horno:
FCIL ACESSO A LA COLUMNA La
operacin de cambio de columna puede
ser frequente.
CALENTAMIENTO Y ENFRIAMIENTO
RPIDO Importante tanto en anlisis de
rutina y durante el desarrollo de metodos
analticos nuevos.
TEMPERATURA ESTABLE Y
REPRODUCIBLE
La temperatura debe ser mantenida con
exactitud y precisin de 0,1C.
En cromatgrafos modernos (posterior a 1980),
los controles de temperatura del horno son
totalmente operado por microprocesadores.
INSTRUMENTACIN
Programacin Lineal de la Temperatura
Mezclas complejas (constituyentes con
volatilidades muy diferentes) separadas
ISOTRMICAMENTE:
T
COL
BAJA:
- Componentes ms
voltiles son separados
- Componentes menos vol-
teis demoram en eluir,
saliendo como picos mal
definidos
T
COL
ALTA:
- Componentes ms vol-
tiles no son separados
- Componentes menos
voltiles eluyen ms
rpidamente
INSTRUMENTACIN
Programacin Lineal de la Temperatura
La temperatura del horno puede ser
variada linearmente durante la separacin:
Se consigue una
buena separacin
de los componentes
de la muestra en
menor tiempo
TIEMPO
T
E
M
P
E
R
A
T
U
R
A

t
INI
t
FIM

T
INI

T
FIM

R
Parmetros de una programacin de temperatura:
T
INI
Temperatura Inicial
T
FIN
Temperatura Final
t
INI
Tiempo Isotrmico Inicial
t
FIM
Tiempo Final do Programa
R Velocidad de calentamiento
INSTRUMENTACIN
Programacin Lineal de la Temperatura
Posibles problemas associados a la PLT:
VARIACIONES DE VELOCIDAD DE FLUJO DEL
GAS DE ARRASTRE La viscosidad de un
gas aumenta con la temperatura.
viscosidad velocidad
DERIVA (DRIFT) EN LA LNEA BASE Debido
a un aumento de volatilizacin de la FE
lquida
INSTRUMENTACIN
Detectores
Dispositivos que examinan continuamente el
material eluido, generando una seal cuando se da
el paso de una sustancias diferente al gas de arraste
Grfico Seal=f(Tiempo) = CROMATOGRAMA
Idealmente: cada sustancia separada aparece
como un PICO en el cromatograma.
INSTRUMENTACIN
Detectores
Ms Importantes:
DETECTOR POR CAPTURA DE ELECTRONES
(DCE O ECD) Supresin de la corriente
causada por la absorcin de electrones
por los eluatos altamente electroflicos.
DETECTOR POR CONDUTIVIDAD TRMICA
(DCT O TCD) Variacin de la conductividad
trmica del gas de arraste.
DETECTOR POR IONIZACIN DE FLAMA (DIF O
FID) Los iones generados durante la
combustin de los eluatos en una flama de
H
2
+ Ar.
REGISTRO
DE LA
SEAL
ANALGICO
Registradores XY
DIGITAL
Integradores
Computadoras
TEORA BSICA
Tiempo de Retencin Ajustado, t
R

t
R

t
M

t
R
= t
R
- t
M

Tiempo
S
E

A
L

t
R
= Tiempo de Retencin (tiempo recorrido entre la
inyeccin y el puntomximo del pico cromatogrfico)
t
M
= Tiempo de Retencin del Compuesto no Retenido
(tiempo mnimo para que un compuesto que no interactua
con la FE atraviese la columna)
t
R
= Tiempo de Retencin Ajustado (tiempo medio que las
molculas del analito pasan adsorbidas en la FE)
El parmetro directamente medible de retencin
de un analito es el
TIEMPO DE RETENCIN AJUSTADO, t
R
:
TEORIA BSICA
Volumen de Retencin Ajustado, V
R

Apesar de no ser directamente medible, el
parmetro fundamental de retencin y el
VOLUMEN DE RETENCIN AJUSTADO, V
R
:
velocidad del gas de
arraste
M R R
t t t =
'
x
C
F
V
R
= volumen de Retencin (volumen de gas de
arraste necesario para eluir un analito)
V
M
= volumen de Fase Mvil (volumen de gas de
arrraste contenido en la Columna; volumen muerto)
V
R
= volumen de Retencin Ajustado (volumen de
gas de arraste consumido durante el tiempo que el
analito est retenido en la FE)
V
R
= f
Factores termodinmicos
Pmetros dimensionales de la
columna
TEORIA BSICA
Constante de Distribuicin, K
C

Columna cromatogrfica: srie de etapas
independientes donde ocurre el equilbrio entre el
analito disuelto en la fase estacionaria y en el gas de
arraste:
Ocurre un semi-equilbrio entre
el analito retenido en la FE y el
disuelto en el gas de arraste.
M
S
C
A
A
K =
K
C
= Constante de Distribuicin
[A]
S
= concentracin del analito en la FE
[A]
M
= concentracin del analito en el gas
MENOR RETENCIN !!!
Volatilidad
[A]
M

Afinidade por la FE
[A]
S

TEORIA BSICA
Fator de Retencin, k
Expresando el equilbrio en terminos de la cantidad del
analito en cada fase, en funcin de la concentracin:
M
S
W
W
k =
FACTOR DE RETENCIN, k:
relacin entre las
cantidades del analito
contenidas en la FE (W
s
) y
en el gas de arraste (W
M
)
S
M
V
V
= |
RELACIN DE FASES, |:
relacin entre volumenes
de FE y gas de arraste en
la Columna
El fator de retencin k depen-
de de la constante termodi-
nmica de distribuicin K
C
y
de la relacin de fases | en
la Columna
TEORA BSICA
Relacin de Fases,
Depende de las DIMENSIONES de la Columna:
L = longitud de la Columna
r
C
= radio
de la
Columna
d
f
= espesor de
la pelcula de
FE
f C
f C
d r
d r
2
2

= |
r
C
>> d
f

d
C
/ mm d
f
/ m
|
0.10 0.10 250
0.20 0.11 455
0.20 0.33 152
0.25 0.25 250
0.25 1.00 63
0.32 0.17 471
0.32 0.52 154
0.32 1.00 80
0.53 0.88 151
0.53 2.65 50
0.53 5.00 27
Valores de | para
Columnas capilares
de dimensiones
comnes:
Empacadas:
5 < | < 50
TEORIA BSICA
Relacin entre V
R
, K
C
y
V
R
puede ser definido en funcin de K
C
y |:
V
R
depende directamente de la constante de dis-
tribuicin del soluto entre la FE y el gas de arraste
y de las dimensiones de la Columna.
Otra
combinacin
posible:
Es posible estimar
tanto el factor de
retencin como la
constante de
distribuicin a partir
del cromatograma
TEORA BSICA
Eficiencia del Sistema Cromatogrfico
La migracin de un
analito por la
columna provoca
inevitablemente el
alargamiento de su
banda:
TIEMPO
Efectos del alargamiento excesivo de picos:
Separacin deficiente de
analitos con retenciones
prximas.
Picos ms largos y
menos intensos = menor
detectabilidad
EFICIENCIA Capacidad de eluicin con un
mnimo de dispersin del analito.
TEORIA BSICA
Cuantificacin de la Eficiencia
Ejemplificando una columna cromatogrfica como
una srie de estapas separadas donde ocurre el
equilbrio entre el analito, la FE y el gas de arraste:
Cada etpa de
equilbrio es llamado
PLATO TERICO
El nmero de platos te-
ricos de una columna
(N) puede ser calculado
por:
columna ms
eficiente
t
R

w
b

N
TEORIA BSICA
Cuantificacin de la Eficiencia
ALTURA EQUIVALENTE DE PLATO TERICO
(H) Tamao de cada etapa de equilbrio
Valores tpicos de H y N:
d
C
d
f
H N
0.10 0.25 0.081 370370
0.25 0.25 0.156 192308
0.32 0.32 0.200 150000
0.32 0.50 0.228 131579
0.32 1.00 0.294 102041
0.32 5.00 0.435 68966
0.53 1.00 0.426 70423
0.53 5.00 0.683 43924
2.16 10% 0.549 3643
2.16 5% 0.500 4000
Capilares, L = 30 m
Empacadas, L = 2 m
Valores de H para columnas capilares y empacadas
son prximos, ms como L para las capilares es
mucho mayor entonces son ms eficientes
(L = longitud de la columna)
TEORIA BSICA
Otimizacin de la Eficiencia
La altura equivalente a un plato torico es funcin de la
velocidad lineal media del gas de arraste u:
H

u
u
MAX

H
MIN

El valor de H
puede ser
minimizado
otimizando la
velacidad de
gas de
arraste
Relaciones algbricas entre H y u:
- columnas Empacadas: Equacin de van Deemter
- columnas Capilares: Equacin de Golay
(A, B, C = constantes)
(B, C
M
, C
S
= constantes)
FASES ESTACIONARIAS
Conceptos Generales
LQUIDOS Adsorbidos sobre una superfcie de: s-
lidos porosos inertes (columnas empacadas) o de
tubos finos de material inerte (columnas capilares)
FE
lquida
SOPORTE
Slido inerte
poroso
Tubo capilar de
material inerte
SLIDOS columnas empacadas con material
finamente granulado (empacadas) o depositado sobre
la superfcie interna del tubo (capilar)
Para minimizar a prdida de FE lquida por
volatilizacin, normalmente son:
Entrecruzada: las
cadenas
polimricas estan
quimicamente
ligadas entre si
Quimicamente ligadas:
las cadenas polimricas
se enlazan al suporte
por enlaces qumicos
FASES ESTACIONARIAS
Caractersticas de una FE ideal
SELECTIVA Debe interactuar de forma
diferencial con los componentes de la muestra.
Regla geral: una FE debe tener caractersticas
similares a las propiedades de los solutos a separar
(polar, apolar, aromtico ...)
FE Selectiva:
separacin
adequada de dos
constituyentes de
la muestra
FE poco Selectiva:
mala resolucin
comparada con una
columna de buena
eficiencia
FASES ESTACIONRIAS
Caractersticas de una FE ideal
AMPLIO INTERVALO DE
TEMPERATURAS DE USO
Mayor flexibilidad para una optimizacin de la
separacin.
BUENA ESTABILIDADE QUMICA Y
TRMICA Mayor durabilidad de la
columna, no reaccione con los componentes
de la muestra
POCO VISCOSA columnas ms
eficientes (menor resistencia a la
transferencia del analito entre fases)
DISPONBLE CON UN ALTO GRADO
DE PUREZA columnas reproducibles;
ausencia de picos fantasma en los
cromatogramas.
FASES ESTACIONRIAS
FE Slidas: Adsorcin
Los fenmenos fsico-qumicos responsables
de la interacin analito + FE slida es la
ADSORCIN
La adsorcin ocurre en la interface entre el gas
de arraste y la FE slida
ADSORCIN
Slidos con grandes
reas superficiais
(partculas finas, poros)
Solutos polares
Slidos con grande
nmero de stios ativos
(hidroxilos, pares de
electrones...)
FASES ESTACIONARIAS
FE Slidas
Caractersticas Gerales:
- Slidos finamente granulados (dimetros de
partculas entre 105 m a 420 m).
- Grandes reas superficiales (mas de 10
2
m
2
/g).
ms usados:
Polmeros Porosos Porapak (copolmero estireno-divi-
nilbenceno), Tenax (polixido de difenileno)
Slidos Inorgnicos Carboplot, Carboxen (carbn
ativado grafitizado), Alumina, Malla Molecular (argila
microporosa)
GASES DE REFINARIA
columna:Carboxen-1000 60-80
mesh; 15 x 1/8
T
COL
: 35
o
C a 225
o
C / 20
o
C. min
-1

gas de Arraste: He @ 30 ml.min
-1
Detector: TCD
Principales
Aplicaciones:
- Separacin de gases fijos
- Compostos leves
- Sries homlogas
FASES ESTACIONARIAS
Familias de FE Lquidas
POLIGLICOLES Muy polares; sensbles a
humedad y oxidacin; aun son muy importantes.
Principal: Polietilenglicol (nombres comerciales:
Carbowax, DB-Wax, Supelcowax, HP-Wax, etc.)
CH
2
CH
2
O H OH
n
Estrutura Qumica:
AMINAS ALIFTICAS
Columna: 4 % Carbowax 20M s/ Carbopack B + 0,8% KOH
T
COL
: 200
o
C (isotrmico) gas de Arraste: N
2
@ 20 mL.min
-1
Detector: FID muestra: 0,01 L de la mezcla de aminas
FASES ESTACIONARIAS
Familias de FE Lquidas
Mayor parte de las aplicaciones en CG moderna
Cuatro grandes grupos estruturales:
PARAFINAS Apolares; alta inercia qumica;
praticamente abandonadas. Principales:
esqualeno (C
30
H
62
), Apiezon (grasas para
vacio).
POLISTERES steres de dialcoholes con
dicidos. Polares; altamente sensbles a
humedad y oxidacin; uso en declve.
Principales: DEGS, EGA, EGS.
STERES METLICOS DE
CIDOS GRASOS
columna:5%DEGS-PS s/ Supel-
coport 100/120 mesh; 6 x 1/8
T
COL
: 200
o
C (isotrmico)
Gas de Arraste: N
2
@ 20 ml.min
-1
Detector: FID
Muestra: 0,5 L de solucin en
clorofrmo conteniendo 0.5 g
de cada ster
FASES ESTACIONRIAS
FE Lquidas: Absorcin
El fenmemo fsicoqumico responsable para la
interacin analito + FE lquida es la
ABSORCIN
La absorcin ocurre en el interior de la pelcula
de FE lquida (fenmeno INTRAFACIAL)
ABSORCIN
Peculas Filmes densas
de FE lquida
Interacin fuerte entre la
FE lquida y el analito
(alta solubilidad)
Grandes superfcie
lquida expuesta al gas
de arraste
FASES ESTACIONRIAS
Famlias de FE Lquidas
SILICONES (polisiloxanos) Las FE ms
utilizadas en CG. Abarcan una ampla gama de
polaridades y propiedades qumicas diversas.
Si
CH
3
H
3
C
CH
3
O Si
R
1
R
2
O Si
CH
3
CH
3
CH
3
n
R
1
, R
2
= cualquier
radical orgnico
- Enlaces Si-O altamente estables = elevada estabilidad
trmica y qumica de las FE.
- Silicones son fabricados en larga escala para
diversas aplicaciones = minimizacin de costo del
producto + tecnologia de producin y purificacin
largamente estudiada y conocida.
- Prticamente cualquier radical orgnico o inorgnico
puede ser unido a la cadena polimrica = FE
modificable para separaciones especficas +
facilidad de imobilizacin por entrecruzamiento y
unin qumica a los soportes
FASES ESTACIONRIAS
Famlias de FE Lquidas
FE derivadas de polidimetilsiloxano (PDMS) por
sustituicin de -CH
3
por radicales orgnicos, en
orden creciente aproximado de polaridad:
Diferencia entre FE de composicin similar
proviene de provedores diferentes: pureza,
viscosidad.
Sustituyentes Nombres Comerciales Observaciones
- - SE-30 OV-1 OV-101 SP-
2100
+ no polares de la serie
poco selectivas
carborano ? - Dexsil 300GC similar a PDMS
estable a > 400C
fenil 5 % - SE-52 SE-54 OV-3 OV-5
OV-73
poco polar
cianopropil 7% fenil 7% OV-1701 SPB-7 CP-Sil
19CB
moderadamente polar
fenil 50 % - OV-17 SP-2250 HP-50+
SPB-50
moderadamente polar
retiene aromticos
trifluoropropil 50% - OV-210 QF-1 moderadamente polar
retiene compuestos
carbonlicos
cianopropil 50% fenil 50% OV-225 SP-2300 CP-Sil
43CB
polar
retiene donadores de
electrones
cianopropil 100% - SP-2340 SP-2330
Silar-9 CP
altamente polar
FASES ESTACIONARIAS
Familias de FE Lquidas
Separacin de pesticidas - FE = 100 % PDMS
1 - TCNB
2 - Dichloram
3 - Lindano
4 - PCNB
5 - Pentacloroanilina
6 - Ronilano
7 - Antor
8 - pp-DDE
9 - Rovral
10 - Cypermetrin
11 - Decametrin
columna: CP-Sil 5 (25 m x 0,32 mm x 0,12 m)
T
COL
:195
o
C (6,5 min) / 195
o
C a 275
o
C (10
o
C.min
-1
)
Gas de Arraste: He @ 35 cm.min
-1
Detector: FID
Muestra: 2L de solucin de los pesticidas
17 min
FASES ESTACIONARIAS
Familias de FE Lquidas
Separacin de piridinas - FE = 100 % CNpropilsilicone
1 - piridina
2 - 2-metilpiridina
3 - 2,6-dimetilpiridina
4 - 2-etilpiridina
5 - 3-metilpiridina
6 - 4-metilpiridina
3 min
columna: CP-Sil 43CB (10 m x 0,10 mm x 0,2 m)
T
COL
:110
o
C (isotrmico)
gas de Arraste: N
2
@ 16 cm.min
-1
Detector: FID
Amostra: 0,1L de solucin 1-2% das piridinas em 3-
metilpiridina
FASES ESTACIONARIAS
Familias de FE Lquidas
Separacin de fenoles - FE = fenilmetilsilicones
50% Ph
50% Me
5% Ph
95% Me
FASES ESTACIONARIAS
FE Quirales
Separacin de ismeros pticos:
FRMACOS En muchos frmacos slo uno de los
ismeros pticos tiene atividad farmacolgica.
PRODUTOS BIOLGICOS Distincin entre
productos de origen sinttico y natural (natural =
normalmente substancias opticamente puras; sinttico
= muchas veces son mezclas racmicas).
Propiedades fsicoqumicas de ismeros pticos son
MUY SIMILARES
FE convencionales no interctuan de manera diferencial
con ismeros pticos
Separacin de mezclas de ismeros
pticos s es posible con FE
opticamente activas
=
FE Quirales
FASES ESTACIONRIAS
FE Quirais
FE pticamente activas ms importantes:
O Si
CH
3
CH
2
CH CH
3
C
O N
H
C*
C
O
H
CH CH
3
CH
3
NH C
CH
3
CH
3
CH
3
Si
CH
3
CH
3
O
n
Chiralsil-Val
Derivados de aminocidos:
Mezclas de compuestos
formadores de puentes
de hidrgeno.
Organometlicos:
Separacin de
enantimeros formadores
de complejos.
n
O Si
CH
3
CH
2
Si
CH
3
CH
3
O
CH
2
O
O
Ni
C
3
F
7
/ 2
Chiralsil-Metal
FASES ESTACIONARIAS
FE Quirales
Derivados de ciclodextrinas alquiladas:
|-ciclodextrina:
oligosacardos
cclicos quirales
Chiralsil-Dex
- Introducidas en 1983
- Cuando se enlazan a cadenas de polisiloxano: uso
extremamente favorable como FE lquida (baja
viscosidad, estabilidad ...)
- Pueden ser quimicamente imobilizadas en las
columnas
- columnas disponbles comercialmente
FASES ESTACIONRIAS
FE Quirales: Aplicaciones
Aceite esencial artificial de limn: separacin de
terpenos primrios
1 - (+/-) o-pineno
2 - sabineno
3 - (+/-) |-pineno
4 - (+/-) limoneno
Columna: Rt-DEXsm (30 m x 0.32 mm x 0.25 m)
T
COL
: 1 min a 40C / 2C min
-1
/ 3 min a 200C
Gas de Arraste: H
2
@ 80 cm.min
-1
Detector: FID
FASES ESTACIONARIAS
FE Quirales: Aplicaciones
Aceite esencial natural Esencia artificial
Aroma de bergamota: distincin entre aroma
natural y artificial
columna: Rt-DEXse (30 m x 0.32 mm x 0.25 m)
T
COL
: 1 min a 40C / 4C min
-1
/ 200C
Gas de Arraste: He @ 80 cm.min
-1
Detector: MS
FASES ESTACIONARIAS
FE Quirales: Aplicaciones
Anfetaminas: resolucin de los ismeros
columna: Rt-DEXcst (30 m x 0.25 mm x 0.25 m)
T
COL
: 1 min a 120C / 1,5C min
-1
/ 3 min A 175C
Gas de Arraste: He @ 25 cm.min
-1
Detector: MS
COLUMNAS EMPACADAS
Definiciones Bsicas
Tubo de material inerte rellenado con FE slida
granulada o FE lquida depositada sobre un soporte
slido.
MATERIAL
DEL
TUBO
= 3 mm a 6 mm
L = 0,5 m a 5 m
acero inox
vidro pirex
nquel
TEFLON
Granulometra
del
relleno
80 - 100 mesh
149 - 177 m
100 - 120 mesh
125 - 149 m
60 - 80 mesh
177 - 250 m
MESH d
p

Eficiencia maximizada con:
- Diminucin de d
C

- Diminucin de d
p

- Empaquetamiento
regular
Limitados por la
resistencia al paso del
gas de arraste
COLUNAS EMPACADAS
FE Lquidas: Soporte
La FE lquida debe
ser adsorbida sobre
un SOPORTE slido
rea superficial entre 0,5 y 10 m
2
.g
-1

Microporos regulares (~ 1 m)
NO interactuar con la muestra
Buena resistencia mecnica
Uso casi universal: TIERRA DIATOMCEAS
Esqueletos fsiles
(SiO
2
+ xidos
metlicos) de algas
microscpicas
Chromosorb
Anachrom
Supelcoport
...
secado
calcinacin
fusin con sosa
lavado con cido
silanizacin
COLUMNAS EMPACADAS
FE Lquidas: Soporte
Chromosorb - caractersticas gerales

r
e
a

S
u
p
e
r
f
i
c
i
a
l
D
e
n
s
i
d
a
d
e

A
p
a
r
e
n
t
e
T
a
m
a
n
h
o

d
e

P
o
r
o
%

M

x
.

d
e

F
E
NOME
m
2
.g
-1
g.ml
-1
m
Chromosorb P 4,0 0,47 0,4 - 2 30
Chromosorb W 1,0 0,24 8 - 9 15
Chromosorb G 0,5 0,58 - 5
O
r
d
e
m

c
r
e
s
c
i
e
n
t
e

d
e

i
n

r
c
i
a

Tratamientos especiales:
AW Lavado con cido, para remocin de metales
HP o DMCS o HDMS Silanizados (menor adsorcin)
NAW Sin lavar con cido
Chromosorb P Rojo, muy activo.
Chromosorb W Blanco, ms inerte que el P.
Chromosorb G Similar al W, mayor resistencia mecnica
COLUMNAS EMPACADAS
FE Lquida: Carga de FE
% FE = 1 % a 30 % del relleno
Mayores volumes de la muestra
Mayor proteccin de los stios activos del soporte
Mayor reproducibilidad en la preparacin del
empacaquetamiento
Mayor eficiencia (d
f
= N)
Menor sangra de la FE con temperatura programada
Separaciones rpidas a temperaturas menores
% FE
d
f
= f (% FE en el
soporte)

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