Cultivo microbiano: tcnicas de siembra

Resumen:
Se realiz la siembra de muestras tomadas en agua de charco, adems de una muestra bucal,
esto realizado en diferentes medios de cultivo tales como OGY, PCA y EMB, las diferentes
muestras se sembraron en dichos medios, bajo un supuesto de que microorganismos se
pudieran encontrar en dichas muestras, estas muestras se llevaron a incubacin controlada a
37C para su posterior anlisis microscpico.
Palabras clave: siembra, medios de cultivo, OGY, PCA, EMB

Abstract
Seeding samples from pond water, and a buccal swab, this done in different culture media
such as OGY, PCA and EMB, the different samples were inoculated on these media, under an
assumption that microorganisms was performed could found in the samples, these samples
were carried controlled incubation at 37 C for further microscopic analysis.

Keywords: planting, growing media, OGY, PCA, EMB

Introduccin:
Para la realizacin de estudios sobre microorganismos se han diseado numerosos mtodos
que permiten su cultivacin bajo condiciones artificiales, en los que se pueden cultivar bajo
condiciones experimentales adems de manejar un solo tipo de microorganismo. La tcnica
ms utilizada para el estudio de microorganismos consiste en trasferir muestras
microbiolgicas de un ambiente natural a un medio artificial (medio de cultivo) lo que permite
obtener cultivos microbianos. (distancia, 2014) Al efectuar este procedimiento, es importante
considerar que en el rea de trabajo, existe flora bacteriana, debido a esto se hace necesario
tomar precauciones para evitar que estos microorganismos afecten el estudio a realizar.
Adems es necesario tener en cuenta aspectos nutricionales, ambientales de su habitad
natural, es por esto que en el medio de cultivo se hace necesario, ajustar condiciones de tales
como pH, concentraciones de sales adems de las condiciones de incubacin tales como
temperatura, luminosidad etc. (Olivas, 2004)
Las aplicaciones de estos procedimientos han permitido el aislamiento de microorganismos
adems de la obtencin de cultivos puros, que se ha traducido en el estudio, caracterizacin
de estos.

METODOLOGIA
Materiales
Elementos de bioseguridad
Cepa pura de microorganismo
Cinta de enmascarar
Asas bacteriolgicas y micolgicas
Alcohol 70% y 90%
Agua destilada
Escobillones
Agua contaminada
Cajas de Petri con medio de cultivo
Fiolas
Mecheros
Estufa
Procedimiento:
1. Con un escobilln esterilizado en el
autoclave, se procede a tomar una
muestra de la vula de la garganta.
2. El escobilln con la muestra bucal
se inocula en el medio de cultivo
(PCA)
3. Con el asa bacteriana se procede a
realizar una siembra por
agotamiento, est realizada
reduciendo la carga microbiana del
asa con ayuda del mechero
4. La muestra de agua se realiza el
mismo procedimiento de siembra
de agotamiento
5. Inoculando la muestra con un asa
bacteriana en el medio de cultivo
(EMB y OGY)
6. Se realizan las estras en el medio
de cultivo teniendo en cuenta que
esta se debe realizar cada una
disminuyendo la carga microbiana
del asa con ayuda del mechero.
7. Teniendo sembrado las muestras
en los medios de cultivo se lleva al
horno incubadora una
temperatura de 37C por 24 horas
(PCA) los medios de cultivo
donde se sembraron hongos (EMB
y OGY) se colocaron a temperatura
ambiente en el laboratorio de
biotecnologa hasta su posterior
lectura.
Resultados
Se obtuvo de manera general que
en los tres medios de cultivo OGY
(Agar-Oxitetraciclina-glucosa-
extracto de levadura), PCA (Plate
Count Agar) y EMB (eosin azul de
metileno) el inoculo procedente de
las diferentes muestras se esparci
por los cuadrantes dibujados
anteriormente en la caja de Petri la
cual contena los diferentes medios
de cultivo.
En cada medio de cultivo se
observ a contra luz que el inoculo
al transcurrir cada barrido (estra)
se tornaba ms separado el inoculo
hasta llegar a una forma de cola al
final de la siembra.
Se observ agrupaciones
exageradas de colonias de diversos
microorganismos en los diferentes
medios de cultivo tales como
levaduras, hongos y dems.
Anlisis de resultados
Despus del tiempo de incubacin
de los diferentes medios de cultivo
anteriormente mencionados se
observ que el inoculo se esparci
de manera satisfactoria,
observando las diferentes colonias
de microorganismos cada vez ms
separadas en el medio de cultivo.
Esto a causa de que, cada vez que
se realiz una estra.
Es de vital importancia antes de
realizar cada barrido de la muestra
que el asa se flamee con el
objetivo de disminuir carga
microbiana que posee el aza esto
a causa del calor proporcionado
por el mechero esto con el objetivo
de conseguir colonias separadas
en el medio de cultivo
La observacin de agrupamiento
exagerado de colonias en los
medios de cultivo se debe a la poca
experiencia a la hora de sembrar
las muestras problema en los
medios de cultivo.
Conclusiones
La siembra por agotamiento es
vital importancia para separar
colonias de una muestra
microbiolgica, puesto que por
accin de esta siembra se pude
obtener colonias con mayor grado
de pureza lo cual permite
posteriormente un estudio y
reconocimiento de mayor calidad y
menor dificultad.
Conocer los posibles
microorganismos que se pueden
encontrar en las muestras a
analizar es un factor determinante
que puede reducir tiempo y costos
a la hora de realizar un estudio ya
que teniendo este conocimiento se
decidir de manera ptima en qu
medio de cultivo es ms factible
realizar la siembra respectiva.
Los agrupamientos de colonias no
permiten el estudio de su
estructura microbiolgica esto
causado por la inexperiencia de a
la hora de hacer la siembra, lo que
se traduce en perdida de material
tiempo de incubacin etc.

Bibliografa
Distancia, U. N. (5 de 4 de 2014). Siembra
de microorganismos. Obtenido de
http://datateca.unad.edu.co/contenidos/2
01504/contLinea/leccin_28_siembra_de_
microorganismos.html
Olivas, E. (2004). Manual de practicas de
Microbiologa I y II y Parasitologia. Ciudad
De Juazez: Universidad Autonoma de
Ciudad de Juarez.