Espectofotometria

CEFET Qumica-RJ
ANLISE INSTRUMENTAL

ESPECTROFOTOMETRIA
CEFET QUMICA RJ Anlise Instrumental - apostila de espectrofotometria molecular

1
SUMRIO

1. INTRODUO

2. PROPRIEDADES ONDULATRIAS E CORPUSCULARES DA LUZ

3. A INTERAO DA LUZ COM A MATRIA

4. COMO E PARA QUE MEDIR A ABSORO DE LUZ

5. A LEI DE LAMBERT-BEER

6. A CURVA DE CALIBRAO EM ESPECTROFOTOMETRIA

7. O MTODO DA ADIO-PADRO EM ESPECTROFOTOMETRIA

8. ANLISE DE MISTURA DE CROMFOROS

9. DESVIOS DA LEI DE BEER

10.BIBLIOGRAFIA

2
1. INTRODUO

Os mtodos ticos so os mtodos que empregam a luz, ou melhor, as propriedades da
interao da luz com a matria, para fazer a anlise qualitativa e quantitativa das substncias. Nos
tpicos que se seguem, sero examinados basicamente os fenmenos de absoro da energia
luminosa. Comear-se- por um breve resumo das propriedades da luz, de acordo com a Fsica
atual, a seguir as diferentes formas de interao que provocaro diferentes fenmenos na estrutura
molecular e, por fim, a definio das tcnicas e equaes matemticas que possibilitam a realizao
de anlises quantitativas.
Essa ltima parte (a anlise quantitativa) a principal nfase do curso. Os tpicos iniciais
so para dar o suporte terico para o entendimento de porque e como a matria absorve luz.

2. PROPRIEDADES ONDULATRIAS E CORPUSCULARES DA LUZ

Atualmente matria e energia no so consideradas entidades distintas e se interconvertem
uma na outra, de acordo com a equao de Einstein: E = mC
2
. Mas mais do que isso. como se
matria e energia fossem duas faces da mesma moeda. Medem-se o comprimento de onda e a
freqncia (propriedades ondulatrias) de partculas como eltron, prton ou nutron. Do mesmo
modo, a luz um conjunto de partculas se deslocando no espao (ftons) com comprimento de
onda e freqncia.
O que caracteriza a energia luminosa a energia dos ftons, determinada pelo
comprimento de onda (l-lmbda) e freqncia (n-ni), pois a velocidade (outro parmetro de
energia) dos diversos ftons a mesma e constante em cada meio.
A luz dita onda eletromagntica porque na Fsica clssica ela foi descrita como uma
oscilao de um campo eltrico e de um campo magntico se propagando no espao. Essa
aproximao permite calcular vrios fenmenos ondulatrios e, paradoxalmente, a energia das
partculas de luz:

3

A energia de um trem de ondas proporcional freqncia, pois quanto maior o nmero de
ondas que passam por segundo (maior freqncia, n), maior a energia transportada. Do mesmo
modo, se a velocidade a mesma, quanto maior a distncia entre as ondas (o comprimento de onda,
l), menor a freqncia e menor a energia. Se n pode ser expressa como c (velocidade da luz)
dividida por l, teremos:
E = hn ou E = hc/l
E energia e h a constante de proporcionalidade (constante de Planck).
Essa a energia da partcula (um fton) de luz. A energia do conjunto de ftons se
deslocando no espao seria dada por E = Nhn, onde "N" seria o nmero de ftons.

3. A INTERAO DA LUZ COM A MATRIA

A teoria quntica, modelo atual da estrutura qumica, informa que os nveis de energia dos
eltrons em tomos neutros so quantizados, isto , os eltrons assumem estados discretos
1
de
energia e s passam de um nvel de energia para outro se receberem uma quantidade exata. Essa
energia pode ser muito alta, e fazer com que o eltron saia da estrutura atmica e o tomo neutro se
torne um on. A partir desse limite, que a energia de ionizao, o tomo neutro passa a poder
receber qualquer quantidade de energia e no mais "pacotes discretos". Cada elemento qumico tem
estrutura eletrnica e nveis de energia diferenciados, tem uma energia de ionizao caracterstica e
absorve uma srie diferente de "pacotes discretos"
2
:

1
Discreto, nesse caso, quer dizer uma energia fixa e definida em cada nvel.
2
A unidade de absoro no espectro, absorbncia, ser explicada mais adiante.

4
Espectro de Absoro
do Vapor de Sdio
200 300 400 500 600
Comprimento de Onda (l) em nm
A
b
s
o
r
b
n
c
i
a

Como ser nas molculas, em que os eltrons estabelecem ligaes qumicas? Uma
molcula tem movimento rotacional e vibracional (a ligao qumica vibra em torno do
comprimento mdio). Esse movimento quantizado e ela no gira nem vibra em qualquer
velocidade. Os nveis de energia rotacionais e vibracionais tambm dependem da estrutura
molecular. Existem estados rotacionais discretos, estados vibracionais discretos e mesmo estados
eletrnicos discretos, antes que o eltron seja ejetado e a ligao qumica se rompa. A partir da
energia de ionizao da molcula qualquer quantidade de energia pode ser absorvida.

Esquema dos nveis de energia na molcula: A-nvel eletrnico, B-nivel vibracional, traos finos-nvel rotacional.
Os ftons de uma determinada freqncia podem ser absorvidos, se eles estiverem
"sintonizados" na freqncia que fornece a energia necessria para a transio de um estado
rotacional para outro, ou de um estado vibracional para outro, ou de um estado eletrnico para outro
numa determinada molcula. Outras possibilidades so:
A transio de um estado eletrnico para outro estado eletrnico, acompanhada tambm de uma
modificao no estado vibracional original.
A transio de um estado vibracional para outro, acompanhada tambm de uma modificao no
estado rotacional original.
A transio de um estado eletrnico para outro acompanhada de modificaes no estado
vibracional e tambm no rotacional.

5
As possibilidades de absoro de energia numa molcula so bem maiores que num tomo
3,4
:
Espectro de Absoro no Infravermelho do n-butanal
0
20
40
60
80
100
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15
Comprimento de Onda (mm)
%

T
r
a
n
s
m
i
t
n
c
i
a

Mesmo na regio do contnuo (a regio aps a ionizao em que se absorve qualquer pacote
de energia), h possibilidades de absoro discreta, isto , um eltron de camada mais interna (fora
da camada de valncia) pode ser colocado num nvel de energia externo camada de valncia.
Nesse nvel, ele pode ainda estar ligado ao tomo ou molcula. Esse fenmeno necessita de uma
quantidade de energia maior do que a energia de ionizao. bvio, tambm, que isso desarranja
toda a estrutura atmica e esse estado instvel, mas a probabilidade de ocorrer uma absoro de
energia nessa faixa maior, pois a molcula tem mais uma maneira de absorver o mesmo fton.
Quando um fton se aproxima ocorrem trs eventos: ele passa direto, ou refletido, ou
absorvido (se possui a freqncia necessria). O fenmeno da absoro ocorre nas freqncias
quantizadas do tomo ou molcula, ou se a energia mais alta que a energia de ionizao.
Mesmo quando a freqncia do fton a correta, existe uma probabilidade da absoro no
ocorrer, pois o fton pode ser refletido ou passar direto. Mas isto no igual para cada freqncia
passvel de ser absorvida. Ao longo do espectro de freqncias existem probabilidades maiores ou
menores de ocorrer absoro. Essa probabilidade, de um modo geral, cai conforme aumenta a
freqncia da radiao eletromagntica. Ftons de alta energia, de modo geral, tm menor
probabilidade de serem absorvidos que os de energia mais baixa, embora hajam inverses.

3
Fica a sugesto de calcular quantas mais possibilidades de estados de energia uma molcula tem do que um tomo.
4
Este espectro numa regio onde s ocorrem excitaes rotacionais e vibracionais e mesmo assim o nmero de bandas
maior que no espectro atmico. A unidade de intensidade, % Transmitncia, ser explicada mais adiante.

6
O espectro de freqncias, ou espectro eletromagntico, arbitrariamente dividido em:

A-Ondas de rdio - de 10
13
nm a10
8
nm de l E-Ultravioleta - de 400 nm a 10 nm de l
B-Microondas - de 10
8
nm a 10
6
nm de l F-Raios-X - de 10 nm a 1nm de l
C-Infravermelho - de 10
6
nm a 10
3
nm de l G-Raios-g - de 1nm e menor.
D-Luz visvel - de 400 nm a 750 nm de l
As ondas de rdio tm baixa energia e no costumam ser estudadas em Qumica.
As microondas j tm energia suficiente para provocar mudanas no estado rotacional das
molculas. Isso tem aplicaes analticas e tecnolgicas
5
.
O infravermelho pode alterar o estado vibracional das ligaes qumicas. Como cada tipo de
ligao tem o seu prprio espectro de freqncias de absoro, o infravermelho valioso para
decifrar estruturas moleculares.
A luz visvel provoca alteraes no nvel de energia dos eltrons da camada de valncia. capaz
de romper ligaes qumicas mais instveis. muito utilizada na anlise quantitativa de vrias
substncias que, para o olho humano, so coloridas.
A partir do ultravioleta, as radiaes so ionizantes e efetivamente rompem ligaes
6
. Podem
provocar profundas alteraes na estrutura molecular e iniciarem vrias reaes qumicas.
Os raios-X podem alterar a energia de eltrons de camadas internas (K e L). Quanto mais interno
o efeito, maior o desarranjo na molcula quando ocorre absoro
7
. Essas alteraes em eltrons
no-ligados fazem o raio-X excelente para descobrir a composio atmica de uma substncia.
Os raios-g tambm excitam as camada K e L. Podem afetar o ncleo atmico e provocar reaes
nucleares, mas a probabilidade de absoro bem menor.

5
O forno de microondas uma fonte de microondas sintonizada numa freqncia em que molculas de gua absorvem.
O aumento do movimento rotacional da gua faz com que, por coliso, as molculas da comida aumentem o seu estado
de movimento e a comida se aquece. O prato no esquenta por quase no conter molculas de gua na sua estrutura.
6
Por ser de freqncia mais baixa que as outras radiaes ionizantes, o ultravioleta tem maior probabilidade de
absoro. Ele , na prtica, absorvido totalmente na pele e no consegue chegar nas clulas mais internas. A sua maior
incidncia nos dias atuais, pela destruio da camada de oznio, aumenta o nmero de casos de cncer de pele.
7
O raio-X mais "penetrante" que o ultravioleta, pela sua probabilidade de absoro ser menor. A matria tem que ser
mais compacta (densa) para que haja razovel absoro ou reflexo. Por isso ele usado para fotografar o os ossos.

7
EXERCCIOS

1)Qual a principal diferena entre um espectro atmico e um espectro molecular?

2)Se o tomo ou molcula absorve, ele tambm pode liberar a energia absorvida sob a forma de
ftons. Como isso acontece? Pesquise.

3)Defina transio eletrnica, transio vibracional, transio rotacional, energia de ionizao,
regio do contnuo.

4)Quais os fenmenos bsicos que podem ocorrer quando um fton vai ao encontro de um tomo ou
molcula?

5)Por que razo a regio do visvel a mais utilizada em anlise qumica?

6)Qual a diferena entre espectrofotometria de emisso e espectrofotometria de absoro?

4. COMO E PARA QUE MEDIR A ABSORO DE LUZ

Como visto anteriormente, cada faixa de comprimento de onda (freqncias) origina um tipo
de informao diferente. A intensidade de absoro nos diferentes comprimentos de onda na faixa
do microonda e no infravermelho d informaes sobre a estrutura molecular (quem est ligado
com quem e com que tipo de ligao qumica). O visvel no to rico em informaes estruturais,
mas pode dar valiosas informaes quantitativas. Do ultravioleta em diante, podemos obter
informaes sobre a composio elementar (pois so as camadas internas do tomo, no-ligadas,
que absorvem). Vamos nos deter sobre a anlise da absoro no visvel.
Num raciocnio intuitivo, a concentrao de uma substncia colorida, dissolvida num
solvente incolor (como a gua), proporcional intensidade de cor da soluo. Desse modo, a
intensidade de cor uma medida da concentrao da soluo.
Como medir quantitativamente a intensidade da cor de uma soluo? Como a relao exata
disso com a concentrao? Analisemos por que certas substncias so coloridas e tambm por que
as substncias podem ter cores diferentes:

8
As substncias so coloridas porque absorvem luz visvel. Desse modo, a luz que emerge de uma
substncia s vai ter os comprimentos de onda (freqncias) que ela no absorveu.
A retina ver, ento, mais fortemente as cores que deixaram de ser absorvidas. O preto existir
quando a substncia (ou mistura de) absorve todas as cores da luz visvel.

Cada substncia, pela sua estrutura molecular, absorve um padro de cores especfico. Desse
modo, o padro de cores refletido e absorvido determinar a cor final da substncia.
Pode-se concluir que a cor da substncia a luz que ela no absorveu. A luz que interage e
que tem relao com a estrutura eletrnica a cor que no se v. Por exemplo, uma substncia que
amarela aos olhos humanos tem como cor mais fortemente absorvida o azul. Uma substncia azul
tem como cor complementar o amarelo, que a cor mais fortemente absorvida.

RELAO APROXIMADA ENTRE ABSORO DE LUZ E COR
l (nm) Cor visvel Cor da radiao absorvida
<400 - ultravioleta
400-435 verde, verde-amarelado violeta
435-480 amarelo azul
480-490 laranja azul esverdeado
490-500 vermelho verde azulado
500-560 prpura verde
560-580 violeta amarelo esverdeado
580-595 azul amarelo
595-650 azul esverdeado laranja
650-750 verde azulado vermelho
>750 - infravermelho

Para medir a concentrao mede-se a luz absorvida e no a refletida. Melhor ainda, incide-se
sobre a amostra apenas a luz que interessa (aquela que absorvida) e exclui-se os outros
comprimentos de onda.
O que se mede diretamente no a quantidade de luz absorvida. S se poderia fazer isto se
houvesse um detetor junto a cada molcula, para ver se ela absorveu ou no o fton. O que se faz
normalmente medir a luz que consegue passar, e no a luz que absorvida.

9
Se incide-se um feixe de luz com intensidade P
o
, aps passar pela amostra ele ter uma nova
intensidade P, menor do que P
o
, pois uma parte da luz foi absorvida. A nova intensidade
detectada.

A intensidade de P depende da intensidade de P
o
, da concentrao do analito (C), do
dimetro do tubo
8
(caminho tico-b), do l que incide e, claro, de que espcie a amostra.

amostra de concentrao C
Para medir concentrao, os outros fatores no podem variar e deve-se manter:
o mesmo comprimento de onda para o mesmo tipo de amostra.
a mesma espessura de cubeta.
a mesma intensidade de P
o
.
Como P depende de P
o
, h que se garantir que P
o
sempre igual nas diferentes
medies. Para escapar desse problema, mede-se a razo P/P
o
, e no P sozinho. Essa razo
chamada de transmitncia (T), definida como:
T =
P
P
o

Essa razo independe da intensidade isolada de P ou de P
o
. Utiliza-se tambm a
porcentagem de transmitncia (%T), onde %T = 100 T. Os valores de T vo de 0 a 1, e a
porcentagem
9
de T vai de 0 a 100. A medida de P
o
feita com a cubeta contendo s solvente, por
exemplo. Dessa forma, o decrscimo de transmitncia ser devido nica e exclusivamente ao da
substncia absorvente.
Pode-se tentar imaginar um aparelho que fosse concebido para medir a transmitncia.
Haveria uma fonte de luz. Aps essa fonte de luz, haveria um monocromador, um dispositivo que
selecionasse o comprimento de onda que incide sobre a amostra. Depois do monocromador,
existiria a amostra propriamente dita. Aps a cubeta com a amostra, existiria um detetor que

8
Quanto maior o dimetro do tubo, maior a distncia que os ftons percorrem e maior a chance de colidir com as
molculas capazes de absorver.
9
Se a amostra nada absorve, P = P
o
e T = 1. Se a amostra tudo absorve, P = 0 e T = 0.

10
gerasse um sinal eltrico proporcional intensidade de luz percebida. Esse sinal eltrico seria
repassado a um registrador qualquer (voltmetro, ampermetro, etc.), dependendo do tipo de sinal
eltrico gerado.

Os aparelhos mais simples que medem a transmitncia, utilizam como fonte de luz uma
lmpada de tungstnio similar quela utilizada na iluminao residencial.
O monocromador mais simples o filtro, isto , uma pelcula que s deixa passar uma certa
faixa de comprimento de onda e aparelhos com essa construo so chamados de fotocolormetros.
Os monocromadores mais sofisticados so aquels que contm prisma ou rede de difrao
como elementos de disperso. Um monocromador com prisma teria o seguinte esquema:

Para intensificar e obter um feixe de luz branca, pode-se utilizar um conjunto de
fendas e lentes entre a lmpada e o prisma. Desse modo pode-se separar uma faixa de comprimento
de onda com maior seletividade que usando um filtro. Para selecionar uma outra faixa de
comprimento de onda, basta que o prisma esteja montado em uma base giratria. Ao girar o prisma,
outros comprimentos de onda vo incidir sobre a fenda seletora. O mesmo efeito obtido ao se girar
a fenda ou mudar-se o ngulo de incidncia do feixe de luz branca. Todo o conjunto
fonte/monocromador/amostra tem que estar fechado para evitar a interferncia da luz ambiente.

EXERCCIOS

1) De que cor nos pareceria um objeto amarelo puro:
a) num estdio de fotografia iluminado por luz azul?
b) se usssemos culos com lentes azuis num dia de sol?
c) se usssemos culos de lentes amarelas num local sem nenhuma iluminao?


11
2) A figura abaixo representa as principais partes de um fotocolormetro, o aparelho mais simples
para medir absoro de luz:

Complete o esquema com outros apetrechos e adaptaes visando:
a) Minimizar a perda do poder radiante.
b) Ajustar o 100 % de transmitncia.
c) Analisar uma soluo com colorao verde.

3) Uma soluo de [FeCl
4
]
-
apresenta-se amarela, logo:
( ) no absorve luz visvel.
( ) absorve muito a luz azul.
( ) no interage com a luz branca.
( ) tem um mximo de absoro na regio amarela do espectro.
( ) iluminada por luz azul.

4) Uma vantagem do espectrofotmetro sobre o fotocolormetro :

( ) Dispensar o uso de fenda para selecionar radiao.
( ) Menor custo na compra do equipamento.
( ) Maior simplicidade.
( ) Permitir a leitura de transmitncia s em funo de P.
( ) Maior seletividade no comprimento de onda.


12
5) Uma luz branca proveniente de uma fonte de radiao foi dispersa em seus comprimentos de
onda e ento todo o feixe foi dirigido para um frasco transparente contendo soluo de sulfato de
cobre amoniacal diludo (cor azul). As radiaes que saem da soluo foram dirigida para um
anteparo branco. Observe o desenho e assinale a alternativa correta para aquilo que se observou no
anteparo.

( ) ausncia de luz.
( ) luz branca.
( ) uma faixa de luz amarela.
( ) uma faixa de luz azul.
( ) todas as cores do arco ris.

6)Por que se mede a intensidade do feixe com a amostra e sem a amostra? Qual a vantagem? Por
que o feixe sem a amostra medido com a cubeta s com o solvente?


13
5. A LEI DE LAMBERT-BEER

Suponha-se um aparelho que capaz de medir a transmitncia de uma amostra e que se
encontram disposio vrias solues-padro da mesma substncia. Como seria o grfico
experimental da transmitncia dessas solues versus a concentrao de cada uma? Como a
transmitncia deve diminuir quando aumenta a concentrao, o grfico obtido ser da forma:
0
1
0
Concentrao
T

A relao experimental entre transmitncia e concentrao tem a forma de uma exponencial
inversa. Para se ter o grfico de uma reta, basta aplicar o logaritmo. Como os valores so menores
que 1, para no ter nmeros negativos, aplica-se o logaritmo do inverso (log 1/T). Ento:
Concentrao
l
o
g

(
1
/
T
)

Essa nova grandeza (log 1/T) diretamente proporcional concentrao e denominada
absorbncia (simbolizada por A). Como se comporta a absorbncia, se a concentrao mantida
constante e o caminho tico (dimetro da cubeta) b varia? Experimentalmente se obtm o grfico:
b
A

=

l
o
g

(
1
/
T
)


14
Logo, a absorbncia depende da concentrao e do caminho tico. Pode-se definir uma
equao para a absorbncia levando em conta essa dependncia e o fato de que, quando o caminho
tico zero (ou a concentrao zero), a absorbncia tambm zero. Essa equao da forma:
A = ebC
Essa a Lei de Lambert-Beer
10
, onde e (psilon) a constante de proporcionalidade. Para
saber o significado dessa constante, constri-se o grfico A l (comprimento de onda), mantendo
todas as outras variveis (b, C, tipo de amostra) constantes. Tomando uma substncia prpura,
como o permanganato de potssio, sua intensidade mxima de absoro no verde. O grfico da
forma:
Espectro de Absoro do KMnO4
400 450 500 550 600
l (nm)
A
l1
l2
l3

Esse o grfico de varredura da amostra (pois "varre-se" todos os l).
Repetindo o grfico A C para os comprimentos de onda l
1
, l
2
e l
3
, nas mesmas condies
de anlise, e colocando-se as 3 retas no mesmo par de eixos, v-se que l
1
ter sempre uma
absorbncia maior que l
2
, que ter absorbncia maior que l
3
(apesar de termos l
1
<l
2
<l
3
em
nanmetros). O grfico resultante ser:
Concentrao
A
l1
l2
l3

10
Os pesquisadores Lambert e Beer fizeram formulaes independentes dessa lei.

15
Qual a melhor reta para anlise quantitativa? a que fornece a melhor sensibilidade. Ou
seja, a que melhor distingue entre duas concentraes muito prximas e que d maior sinal para
amostras diludas. Claramente v-se que l
1
atende a esses requisitos. Duas concentraes prximas
tero em l
1
a maior diferena em absorbncia. l
1
o comprimento de onda de absoro mxima
para a substncia, simbolizada como l
max
.
Agora pode-se definir claramente qual o significado da constante e. Se b e C so os mesmos
para cada reta, e tem que ser diferente, para que o valor de A se modifique. e uma constante que
s depende da amostra, do solvente e do comprimento de onda. No depende do caminho tico ou
da concentrao, uma propriedade daquela substncia em relao ao meio em que est dissolvida
e ao comprimento de onda usado. e chamada de absortividade molar, quando a concentrao
expressa em mol/L (seria a absorbncia por mol e por centmetro). A unidade de e L/mol.cm.
Quando a concentrao expressa em g/L, o smbolo se modifica, passa a ser a, chamada
de absortividade especfica (absorbncia por grama e por centmetro). A lei de Lambert-Beer nesse
caso ser escrita como:
A = abC
Onde a concentrao est expressa em g/L. A unidade de a L/g.cm.

EXERCCIOS

1) Para uma concentrao C de um cromforo, trabalhando-se com uma cubeta de 1,00 cm de
dimetro interno, leu-se um valor A de absorbncia. Considerando experimentos isolados, responda,
matematicamente, o que aconteceria com:
a) A absorbncia, se reduzssemos a concentrao tera parte?____________
b) A transmitncia, se a concentrao dobrar?___________
c) A absorbncia, se dobrarmos o caminho tico?____________

2) Correlacione a coluna da esquerda com a coluna da direita:

1- lmpada de tungstnio ( ) Seleciona a luz branca em seus vrios (nm)
2- prisma ( ) Transforma sinal luminoso em sinal eltrico
3- cubeta ( ) Concentra o feixe de radiao em um ponto
4- filtro ( ) Atua como fonte de radiao
5- lente de focalizao ( ) Suporte para a soluo a ser analisada
6- registrador ( ) Transforma o sinal luminoso em sinal eltrico
7- detector ( fotoclula)
8- lente de colimao


16
3)Os valores da tabela abaixo so pertinentes a um determinado cromforo. Complete as lacunas
em branco, admitindo que o sistema segue a lei de Lambert-Beer. Se for impossvel calcular,
assinale o quadro correspondente com um X.
l
(nm)
e
(L.mol
-1
cm
-1
)
a
(L.g
-1
cm
-1
)
massa
molar
(g.mol
-1
)
C
(g/L)
C
(mol/L)
b
(cm)
A %T

640 4000 40,0 1,5 x 10
-5
50
500 2000 2,5 x 10
-5
2,0
20,0 168 1,5 0,60

4) Uma soluo colorida possui transmitncia T sob determinadas condies espectrofotomtricas.
Se dobrarmos a sua concentrao a nova transmitncia nas mesmas condies ser (deduzir a
expresso):
a-( ) Log 2T b-( ) 2T c-( ) 1/2 T d-( ) T
2

e-( ) T
1/2

5) Sabe-se que uma amostra absorve do poder radiante incidente num determinado comprimento
de onda. Calcule a sua absorbncia.
6) Sabe-se que o espectro de absoro do derivado nitrogenado B dissolvido em etanol tem l
max
=
420 nm. Indique qual a cor da soluo alcolica de B e qual a cor do filtro ideal para sua
determinao quantitativa.
N N NO
2
N
CH
3
CH
3
CH(CH
3
)
2 B

a) B violeta e o filtro amarelo. b) B violeta e o filtro azul.
c) B violeta e o filtro branco. d) B amarelo e o filtro amarelo.
e) B amarelo e o filtro azul.

7) A sensibilidade na espectrofotometria diretamente relacionada com a escolha do comprimento
de onda, portanto, a sensibilidade maior quando:
a) As determinaes da absorbncia dos padres e da amostra forem feitas no l
max
.
b)
O grfico for feito no l
max

com a transmitncia contra a concentrao.

c) O analista visualizar algum indcio de colorao na soluo no l
max
.
d) Valores da absorbncia dos padres forem maiores que 0,2 no l
max
.
e) A determinao da absorbncia dos padres e da amostra feita no l de transmitncia mxima.

17
8) O monocromador, parte fundamental do espectrofotmetro, tem a funo de:
a) Transformar o poder radiante em sinal eltrico.
b) Converter o sinal eltrico em um sinal grfico.
c) Dividir o poder radiante proveniente da fonte em dois feixes luminosos, sendo que um deles ir
de encontro amostra e o outro de encontro referncia.
d) Separar e selecionar a radiao policromtica que vem da fonte luminosa no comprimento de
onda desejado.
e) Calibrar o 100% de transmitncia na escala do registrador.

9)Analisando o comportamento espectrofotomtrico de duas solues de permanganato de potssio,
verificou-se que na primeira soluo o valor de P foi trs vezes menor que P
o
e a segunda soluo
teve um poder radiante emergente duas vezes menor que o da primeira soluo, no mesmo aparelho.
a) Qual valor da transmitncia e absorbncia das duas solues?
b) Qual das duas tem maior concentrao e quantas vezes mais?
10) Em espectrofotometria na regio do visvel deve-se operar com filtro cuja cor seja:
( ) igual a da soluo colorida a ser analisada.
( ) complementar a da soluo colorida a ser analisada.
( ) a que gere o menor valor para a absortividade do cromforo.
( ) proporcional intensidade luminosa da fonte.
( ) proporcional concentrao do cromforo e ao caminho tico.

11) A 452 nm, uma soluo com 1,68 10
-3
g/L de clorofila B em etanol, apresentou transmitncia
igual a 49,7%. Sabendo que sua absortividade molar nesse comprimento de onda de 1,63 10
5

L/mol.cm, calcule o peso molecular da clorofila B, considerando b = 1,00 cm.

12) 50,00 mL de gua de caldeira reagiram com molibdato de amnio
(reduo a azul de molibdnio) e foram avolumados a 250,00 mL. Preparou-
se uma soluo padro cuja concentrao em fosfato era igual a 0,150 g/L.
No sistema indicado ao lado (colormetro Dubosq) adicionou-se o padro
num tubo, a amostra no outro tubo e se observou tonalidades iguais quando a
altura da amostra foi trs vezes a altura do padro.
Calcule a quantidade de fosfato na amostra original.


18
13) 0,200g de cobre metlico puro foram dissolvidos em cido ntrico, um excesso de amnia foi
adicionado para formar o cromforo Cu(NH
4
)
4
+2
e a soluo resultante diluda a um litro em b.v.
Uma alquota foi para um copo do colormetro Dubosq at encher 10,0 mm.
Uma amostra de 0,500 g foi tratada com cido ntrico, excesso de amnia e diluda a 500,00
mL. Essa soluo foi colocada no outro copo do colormetro Dubosq e, para obter igualdade de
colorao, a profundidade foi ajustada para 16,0 mm. Calcule o teor de cobre na amostra.

14) Uma soluo padro de ferro foi preparada com 350 mg de Fe(NH
4
)
2
(SO
4
)
2
.6H
2
O e dissolvidos
em 500,00 mL (sol. A). Uma alquota de 2,00 mL de A foi misturada com 5 mL de cloridrato de
hidroxilamina a 5%, 5 mL de o-fenantrolina a 5 %, o pH foi ajustado at 2 e a soluo resultante foi
avolumada a 100,00 mL (sol. B). A absorbncia de B a 510 nm foi 0,361 numa clula de 1,00 cm.
100,00 mL de uma gua de poo foram evaporados a 80C at restar 5 mL, em seguida
acrescentou-se 5 mL de cloridrato de hidroxilamina a 5%, 5 mL de o-fenantrolina a 5 %, o pH foi
ajustado at 2 e a soluo resultante foi avolumada a 50,00 mL (sol C). A absorbncia de C a 510
nm foi 0,248 numa clula de 1,00 cm. Calcule a concentrao de Fe em ppm na gua do poo e a
absortividade molar do complexo Feo-fenantrolina.
15) Um fotocolormetro porttil com resposta linear ao poder radiante, foi utilizado para a
anlise absorciomtrica. O seu registrador estava defeituoso, porm os demais componentes do
aparelho estavam em boas condies. Utilizou-se um micro-ampermetro para medir a corrente
eltrica proveniente do sistema de deteco e cubeta com 20 mm de caminho tico. Foram feitas
avaliaes do branco e dos padres nos filtros vermelho e azul conforme a tabela abaixo:
FILTRO VERMELHO FILTRO AZUL
corrente % T ABS Corrente % T ABS
Branco

145,4 mA 78,2 mA
Padro
1,00 mg/L
80,0 mA
Padro
2,00 mg/L
69,3 mA
A) Complete adequadamente, as lacunas da tabela.
B) Considerando MM do soluto = 200, a absortividade molar _______ L.mol
-1
Cm
-1
no filtro
vermelho e _______ L.mol
-1
Cm
-1
no filtro azul.
C) Pode-se afirmar que a cor da soluo analisada no ________________(vermelha ou azul).
Justifique.
D) Uma amostra, diluda 50 vezes, apresentou uma corrente de 100,0 mA, no filtro de maior
sensibilidade. A sua concentrao em mmol/L ______.


19
6. A CURVA DE CALIBRAO EM ESPECTROFOTOMETRIA

Procedimento para calibrar aparelhos para anlise em espectrofotometria:
Primeiramente ajustar o 100 %T do aparelho com a cubeta contendo somente o solvente
utilizado (normalmente gua).
Ajustar o 0 (zero) %T com o feixe de luz totalmente obstrudo.
Fazer a varredura da soluo da substncia em questo
11
.
Com o comprimento de onda escolhido, fazem-se as medidas de transmitncia de uma srie de
padres da substncia.
Calculando as absorbncias, constri-se o grfico de A C, que servir de base para a anlise da
amostra desconhecida:
Curva de Calibrao A x Conc (ppm Mn)
A = 0,0219 C (ppm Mn) - 0,0037
R
2
= 0,9995
-0,1
0
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
0,6
0,7
0,8
0 5 10 15 20 25 30 35 40
Conc (ppm Mn)
A
l = 525 nm
b = 10 mm

De posse do grfico (ou da equao da reta calculada a partir dos pontos experimentais) pode-se
fazer, por interpolao, a leitura da amostra, ou calcular pela equao. A absorbncia da amostra
desconhecida permitir a obteno da concentrao desejada.
Nem sempre possvel a leitura direta da amostra, por vrias razes:
a amostra pode conter mais de um cromforo (substncia que absorve luz).

11
Esse ltimo procedimento permite escolher o l
max
, que o melhor comprimento de onda para proceder a anlise.
Essa varredura consiste em ler a transmitncia a cada comprimento de onda selecionado. Nos aparelhos de feixe simples
mais antigos, o ajuste do 0 e do 100% tem que ser feito a cada comprimento de onda, pois a fonte de luz no bem
estabilizada.


20
as condies de pH, agentes complexantes, solventes, etc., podem no ser reprodutveis nos
padres, e esses fatores podem afetar a absortividade da substncia.
a amostra pode estar diluda demais e fora da faixa tima de leitura.
Contornar esses e outros fatores exige o emprego de tcnicas que sero estudadas adiante.
O uso de vrios padres para se fazer uma curva de calibrao diminui a possibilidade de
erros grosseiros que poderiam acontecer com o uso de um s padro. A curva de calibrao permite
tambm o clculo de e ou a para o comprimento de onda utilizado, pois eb (ou ab) coeficiente
angular da reta de calibrao. Para calcular e ou a, basta dividir o coeficiente angular pelo valor de
b.
Para diminuir o erro, muitas vezes o branco da amostra no simplesmente o solvente. Em
vrias anlises, o composto que se quer analisar no colorido, isto , no absorve no visvel. Como
existem muitos mtodos sensveis e especficos para desenvolver cor em vrios tipos de analitos, a
cor desenvolvida na amostra para o analito que se quer medir. O branco, no caso, pode ser a
prpria amostra com todas as etapas do tratamento, menos aquela que d cor ao analito. Com isso,
qualquer outro componente da amostra que possa ter alguma absorbncia descontado no branco.
O composto que absorve luz chamado de cromforo, e importante distinguir que muitas vezes o
cromforo no o analito, e sim um composto derivado dele.
O espectro de varredura importante, pois, como j foi dito, muitas vezes a amostra tem
algum componente colorido que interfere na anlise. Nesse caso, pelo espectro de varredura, pode-
se escolher um outro comprimento de onda que tenha boa sensibilidade (alto valor de e) mas que
no sofra a interferncia do componente colorido. Outras tcnicas para driblar esse problema sero
mostradas adiante.

21
EXERCCIOS

1)Determinou-se a absorbncia de uma srie de
padres de permanganato de potssio, em
espectrofotmetro a 525 nm, fornecendo os
seguintes resultados na tabela ao lado:
C (ppm de Mn) Absorbncia
1,0 0,014
2,0 0,032
5,0 0,108
10,0 0,216
20,0 0,444
25,0 0,544
35,0 0,754
Uma amostra de 2,53 g de ao foi dissolvida em 20 mL de HNO
3
1:3, tratada com agente
oxidante para que o mangans fosse permanganato e diluda 50,00 mL com gua destilada. 2,00
mL dessa soluo foram avolumados a 50,00 mL com gua destilada. A transmitncia, lida nas
mesma condies dos padres, foi de 55,2%. Faa o grfico da curva de calibrao do mangans e
determine a absortividade do permanganato e o teor de mangans no ao.

2)Um analista analisou algumas amostras de uma
substncia que absorve na luz visvel. Fez uma srie
de medidas que lhe permitiram obter o l
max
daquela
substncia, preparou uma srie de padres e,
utilizando o l
max
, obteve os resultados ao lado:
C (mol/L) % T
1,00 10
-5
62,6
1,50 10
-5
50,6
2,00 10
-5
40,0
2,50 10
-5
31,3
3,00 10
-5
25,3
Sabe-se que para cada amostra ele tomou alquotas de 10,00 mL, utilizou reagentes que
desenvolviam cor e avolumou em b.v. de 100,00 mL. Quando terminou, avaliou que as amostras
estavam mais escuras que os padres, tomou alquotas de 25,00 mL de cada b.v. e avolumou
novamente a 100,00 mL. As leituras das amostras foram de 45,0 %T, 28,5 %T e 52,4%T.
a)Construa o grfico e ache as concentraes das amostras nas solues de origem.
b)O aparelho usado para medir o l
max
foi um espectrofotmetro ou um fotocolormetro? Explique.
c)O que aconteceria com a transmitncia, se o analista medisse fora do l
max
? Porqu?
d)Qual o e da substncia em questo, sabendo que b = 1,00 cm (calcule pelo grfico)?


22
3)Para analisar o contedo de nitrito, uma massa de 20,048 g de uma amostra de presunto foi
cortada, moda, tratada e filtrada quantitativamente para que o nitrito fosse extrado, reagisse e
formasse o composto colorido. O filtrado foi avolumado a 100,00 mL, mas a soluo apresentou
transmitncia pequena. Sendo assim, pipetou-se 25,00 mL da soluo e diluiu-se a 50,00 mL.
Novamente a transmitncia apresentou-se pequena. Fez-se nova diluio, pipetando 10,00 mL dessa
ltima soluo e diluindo-se a 50,00 mL. Leu-se, ento uma transmitncia de 65,8%.
De uma soluo estoque de NaNO
2
a 0,450 g/L,
foram feitos padres retirando-se alquotas com uma bureta,
acrescentando-se 10 mL do reagente colorimtrico e
avolumando com gua em b.v. de 500,00 mL. Os dados
esto na tabela ao lado.
V (mL) de NaNO
2
T (%)
1,00 88,2
5,00 51,4
8,00 36,0
10,00 28,8
14,00 16,0
a) Qual o teor de nitrito na amostra original?
b) Qual seria o melhor branco para a leitura da amostra?
c) Se a anlise fosse efetuada em um fotmetro de filtro, qual o filtro escolhido?

4)Um analista testou dois fotocolormetros
preparando padres de KMnO
4
. Fez a
leitura das absorbncias em cada aparelho,
utilizando cubetas com o mesmo b. Os
resultados esto na tabela ao lado:
ppm de Mn A (aparelho 1) A (aparelho 2)
5,00 0,105 0,080
10,0 0,207 0,165
15,0 0,310 0,235
20,0 0,425 0,315
25,0 0,530
0,405
a) Faa um grfico que contenha as duas curvas de calibrao.
b) Calcule as absortividades molar e especfica de cada aparelho (b = 1,50 cm).
c) Qual o aparelho com maior sensibilidade para essa anlise? Justifique.
d) Sabendo que a absorbncia de uma amostra foi de 0,380, no aparelho de maior sensibilidade,
calcule a sua concentrao em mol/L e a leitura de transmitncia que essa soluo apresentaria
no aparelho de menor sensibilidade.
e) Explique por que as absortividades foram diferentes em cada aparelho.


23
5)O grfico e a tabela abaixo correspondem s varreduras de solues 4,0 10
-4
mol/L, realizadas
num espectrofotmetro, de um indicador submetido a diversos valores de pH.
400
460
520
580
640
700
1,0
3,0
5,0
7,0
0,000
0,200
0,400
0,600
0,800
A
b
s
o
r
b
n
c
i
a
l (nm)
pH
Espectro do Indicador a Diferentes pH's

l(nm) pH = 1,0 pH = 2,0 pH = 3,0 pH = 4,0 pH = 5,0 pH = 6,0 pH = 7,0
400 0,004 0,006 0,180 0,300 0,280 0,360 0,368
420 0,002 0,002 0,300 0,380 0,480 0,454 0,492
440 0,004 0,004 0,536 0,728 0,722 0,726 0,728
460 0,006 0,006 0,542 0,720 0,726 0,724 0,726
480 0,004 0,008 0,288 0,440 0,550 0,472 0,502
500 0,002 0,008 0,120 0,200 0,222 0,198 0,228
520 0,004 0,010 0,060 0,100 0,120 0,070 0,104
540 0,010 0,010 0,010 0,022 0,030 0,020 0,030
560 0,028 0,030 0,012 0,006 0,008 0,004 0,008
580 0,080 0,076 0,040 0,004 0,008 0,006 0,004
600 0,194 0,204 0,100 0,006 0,004 0 0,004
620 0,330 0,332 0,182 0 0,006 0 0
640 0,332 0,332 0,190 0 0 0 0
660 0,122 0,146 0,080 0 0 0 0
680 0,030 0,050 0,030 0 0 0 0
700 0,010 0,018 0,010 0 0 0 0

a) Determine o valor do mximo de absoro em cada curva.
b) Calcule o e
max
de cada uma das formas do indicador, sabendo que b = 1,00 cm.
c) Qual a zona de viragem do indicador? Qual a cor provvel de cada uma das formas?
d) Explique por que no possvel realizar esse experimento num fotocolormetro.

24
7. O MTODO DE ADIO-PADRO EM ABSORCIOMETRIA

O mtodo de adio-padro consiste na adio de uma determinada quantidade de padro
amostra. Deve-se medir a absorbncia da amostra antes e aps a adio do padro, nas mesmas
condies espectrofotomtricas. Desse modo, pode-se minimizar a ao de interferentes contidos na
amostra. O efeito dos interferentes praticamente o mesmo nas solues de amostra e de amostra
mais padres.
Um constituinte indesejvel pode interferir, quer devido s suas prprias propriedade ticas,
quer por sofrer interaes com o cromforo a ser analisado, ou com os vrios reagentes empregados
na determinao. Manifestaes dessa natureza podem acarretar o desaparecimento da cor, a no
obteno da absorbncia terica, etc.
O reconhecimento e a eliminao de interferentes numa anlise grandemente facilitado
quando se tem conhecimento da natureza dos componentes presentes na soluo em anlise, o que
nem sempre possvel quando a amostra muito complexa.
H uma variedade de tcnicas para eliminar, ou minimizar, os efeitos dos constituintes no
desejados. As separaes do tipo lquido-lquido (extrao por solventes, absoro em coluna, etc.)
so ainda muito utilizadas, por representarem processos simples e rpidos de anlise. No entanto,
podem ocorrer perdas no processo. A separao fsica do constituinte desejado daqueles que
interferem nem sempre to satisfatria na prtica como na teoria, devido s fontes de erros e
desperdcios de tempo nos processos.
A converso qumica do interferente numa espcie oticamente inerte um mtodo
geralmente preferido separao fsica, pois pode ser feito in loco. Reaes de oxirreduo e
complexao so comumente efetuadas para sistemas inorgnicos, ao passo que reaes de
oxirreduo e condensao so freqentemente aplicadas a sistemas orgnicos.
A tcnica de adio-padro uma tcnica instrumental muito utilizada pela rapidez e
simplicidade de anlise e por dispensar toda essa srie de procedimentos de eliminao de
interferentes que seriam dispendiosos em tempo e dinheiro.
Para fazer a adio padro, toma-se uma alquota conhecida (V
x
) de amostra e faz-se uma
diluio a um certo volume final (V
T
) e mede-se a absorbncia. Em seguida, toma-se outra alquota
de amostra de mesmo volume (V
x
), adiciona-se um certo volume de padro (V
p
), dilui-se ao mesmo
volume final (V
T
) e mede-se a absorbncia. Com essa tcnica, a absorbncia lida aps a adio do
padro ser, necessariamente, maior do que a absorbncia antes da adio.

25

A absorbncia da soluo de amostra diluda expressa pela relao
A b
C V
V
o
x x
T
= e . Onde C
x
a concentrao da amostra e C
x
V
x
/V
T
a nova
concentrao aps a diluio.

A absorbncia da soluo tambm com a adio do padro expressa
por A b
C V C V
V
x x p p
T
=
+
e . Onde C
p
a concentrao do padro e (C
x
V
x
+
C
p
V
p
)/V
T
a nova concentrao da soluo.
Essa ltima equao pode ser desdobrada em dois termos:
A b
C V
V
b
C
V
V
x x
T
p
T
p
= + e e
O primeiro termo da equao o termo que aparece na equao da absorbncia antes da
adio do padro e uma constante para qualquer V
p
, desde que e, b, V
x
e V
T
sejam sempre os
mesmos. No segundo termo, a expresso que multiplica V
p
tambm uma constante. Se medirmos
vrias solues, com diferentes adies de padro, e fizermos um grfico de A V
p
, teremos uma
reta em que o coeficiente angular eb
C
V
p
T
permite o clculo de eb, j que C

p
e V
T
so conhecidos.
O coeficiente linear eb
C V
V
x x
T
contm a concentrao procurada (C

x
) e os outros termos so
conhecidos. A seguir temos um exemplo de uma curva de adio-padro para a anlise de Fe (II)
em gua, por meio do desenvolvimento de cor com o tiocianato:
Anlise de Fe (II) por Adio-Padro
em Espectrofotometria
A = 0,0382 Vp + 0,241
0,000
0,200
0,400
0,600
0,800
1,000
1,200
0,00 5,00 10,00 15,00 20,00
Vp (mL)
A

V
p
(mL) A
0,00 0,240
5,00 0,437
10,00 0,621
15,00 0,809
20,00 1,009

V
x
= 10,00 mL
C
p
= 10,0 ppm
V
T
= 50,00 mL
eb = (coef.ang. Vt)/C
p
= 0,191
C
x
(ppm) = (coef.linearV
t
)/(ebV
x
) = 1,00


26
Uma outra maneira de fazer esse mesmo clculo dividir o coeficiente linear pelo
coeficiente angular, que, calculando pelas expresses anteriores, equivale a C
x
V
x
/C
p
. Substituindo-
se os valores de V
x
e C
p
, pode-se achar o valor de C
x
.
Esse problema tambm pode ser resolvido de maneira grfica, prolongando-se a reta e
achando o V
p
negativo em que a absorbncia cairia a zero (tcnica da extrapolao). O clculo
utilizando esse modo de resoluo deixado como exerccio.
12

Esse mtodo se torna mais preciso quanto maior o nmero de solues utilizadas para
anlise. Quando no se quer tanta preciso, pode-se utilizar uma adio nica de padro e fazer o
clculo com os valores obtidos antes e aps a adio. Tambm se pode fazer a adio sem respeitar
o volume constante, o que operacionalmente mais simples. Um nmero menor de solues
preparadas com a amostra pode ser desejvel, quando a quantidade de amostra pequena.
Deixamos tambm a deduo matemtica desses dois casos para o estudante
13
.
Esses dois mtodos (adio mltipla e adio nica) se prestam principalmente a anlises de
apenas um cromforo em soluo.

EXERCCIOS

1)Para determinar a concentrao de ferro em sistemas aquticos, um analista tomou cinco alquotas
de 10,00 mL de gua de um lago e adicionou a cada uma delas, respectivamente, exatamente 0,
5,00, 10,00, 15,00 e 20,00 mL de uma soluo-padro contendo 10,0 ppm de Fe
+3
, completando a
seguir os volumes a 50,00 mL com gua deionizada e excesso de SCN
-
, de modo a formar o
complexo [FeSCN]
+2
(vermelho). Em um determinado comprimento de onda, as absorbncias
medidas para as cinco solues foram, respectivamente, 0,240; 0,437; 0,621; 0,809; 1,009. Pede-se:
a) A equao da curva de adio padro e a concentrao de ferro na amostra original.
b) Sabendo-se que b = 1,00 cm, a absortividade molar do complexo no comprimento de onda.

2)Como parte da investigao de chumbo em ecossistemas biolgicos, algumas sementes foram
colhidas ao longo de estradas onde ficaram expostas aos gases emitidos por motores movidos
gasolina, a qual continha chumbo. Uma amostra representativa de semente, pesando 6,250g, foi
incinerada para destruir a matria orgnica, e o resduo inorgnico foi tratado convenientemente. A
amostra foi ento diluda a 100,00 mL. Uma alquota da soluo foi lida a 283 nm, e a absorbncia
foi 0,125.

12
Nos exerccios aps este tpico existem casos que podem ser resolvidos desta maneira.
13
Os exerccios 7 e 8 obrigatoriamente tm que ser resolvidos desta ltima forma.

27
Aps isto, 0,100 mL de soluo padro contendo 55,00 mg/mL de Pb foi adicionada a
50,00 mL da soluo de amostra. A absorbncia encontrada para essa nova soluo foi de 0,180.
Calcule o teor de Pb no material em mg/g (ppm). Observe que no houve diluio a um volume
final, mas o volume de adio desprezvel comparado ao volume de amostra.

3)2,00 mL de urina so analisados para obter o teor de fosfato, adicionando-se reagentes que
desenvolvem cor, diluindo a 100,00 mL, medindo sua absorbncia a 700 nm e obtendo um valor
de 0,375. A uma segunda alquota de 2,00 mL so adicionados 5,00 mL de uma soluo padro de
fosfato contendo 45,0 mg/L de fosfato. Depois do desenvolvimento de cor e diluio a 100,00 mL,
a absorbncia foi de 0,506 a 700 nm. Calcular a concentrao de fosfato na amostra em mg/L.

4)Para a determinao de glicose no sangue, foram adequadamente tratados 5,00 mL de amostra.
Adicionou-se, ento, soluo de o-toluidina a 10%, diluiu-se a 25,00 mL com gua destilada,
obtendo-se o complexo de colorao verde, segundo a reao:
+
N
+ C
6
H
12
O
6
NH
2
CH
3
CH
2
OH(CHOH)
4
CH
CH
3
H
2
O

2,00 mL dessa ltima soluo foram tomados e avolumados a 100,00 mL. A absorbncia
lida para a soluo diluda foi 0,470. Foram retirados mais 2,00 mL dos 25,00 mL iniciais, aos quais
se adicionou 4,00 mL de uma soluo-padro do complexo com concentrao de 15,0 ppm de
glicose e tambm diluiu-se a 100,00 mL. A absorbncia para essa soluo foi 0,610.
a) Qual o melhor filtro para medir a absorbncia dessa amostra em fotocolormetro?
b) Qual a concentrao em mg% de glicose na amostra de sangue?

5)2,00 mL de uma soluo 2,00 x 10
-4
mol/L de um corante foram transferidos para uma clula de
absoro com 2,00 cm de dimetro interno e capacidade at 5 mL. A absorbncia da soluo no
l
max

foi 0,500. Em seguida 2,00 mL de uma soluo 3,00 x 10
-4
mol/L do corante foram misturados
com a soluo que estava na cubeta e homogeneizou-se a soluo resultante. Qual a absorbncia
lida?


28
6)Para a anlise de nitrito no salame, 10,08 g da amostra de salame foram
tratados convenientemente e diludos at 250,00 mL. Cinco alquotas de
10,00 mL foram transferidas, cada uma para bales volumtricos de 100,00
mL. Ao primeiro balo volumtrico, adicionou-se 5,00 mL de um reagente
colorimtrico adequado a fim de formar o cromforo e completou-se com
gua destilada, enquanto nos demais, alm dos 10,00 mL da soluo amostra
e do regente colorimtrico, foram adicionados respectivamente, 1,00; 3,00,
5,00 e 8,00 mL de uma soluo padro de nitrito a 2,00 ppm e s ento o
volume final foi ajustado a 100,00 mL. Aps o preparo das solues,
procedeu-se a determinao a 435 nm, obtendo-se os resultados ao lado:
T (%) V (mL)
61,8 0
53,6 1,00
39,0 3,00
29,8 5,00
18,6 8,00

a) Construa a curva de calibrao A x V
p
e determine o teor de nitrito no salame a partir do grfico
extrapolando at o V
p
em que a absorbncia zero. Expresse em ppm ponderal.
b) Calcule a transmitncia, se na alquota de 10,00 mL da amostra fossem adicionados 20,00 mL da
soluo padro a 2,00 ppm, seguido de diluio a 50,00 mL.

7)Considere no exerccio 3 que 5,00 mL de padro foram adicionados diretamente nos 100,00 mL
contendo outra amostra e obtiveram-se as mesmas leituras de absorbncia. Calcule a concentrao
de fosfato. Nesse caso a variao de volume no desprezvel.

8)No exerccio 4, considere que os 4,00 mL de padro foram acrescentados a 50,00 mL da soluo
de outra amostra e foram obtidas as mesmas leituras. Calcule a concentrao de glicose. Novamente
a variao de volume no desprezvel.

8. ANLISE DE MISTURA DE CROMFOROS

Esse mtodo aplicado quando se quer analisar dois ou mais cromforos em soluo
simultaneamente e, o que a situao mais comum, os espectros possuem regies de superposio.
Se na soluo de amostra existe mais de um cromforo, os espectros de absoro desses
cromforos podem se sobrepor numa dada extenso de comprimento de onda. Ento, a anlise dessa
amostra em apenas um comprimento de onda, quando se escolhe um l
max
, dever corresponder a
um dos cromforos e o(s) outro(s) provavelmente no estar(o) na regio de absorbncia mxima.
Mas isso gera uma impreciso na medida, pois a absorbncia nesse l corresponde no s ao

29
cromforo em questo, mas tambm a absorbncia do(s) outro(s) em soluo. A seguir apresenta-se
os espectros de dois cromforos denominados x e y, misturados numa dada concentrao C
x
e C
y
.
Grfico de uma Mistura de Cromforos
l (nm)
A
cromforo X
cromforo Y
absorbncia total

Como podemos ver, no l
max
de x existe uma contribuio de y e no l
max
de y existe uma
contribuio de x. Nesse caso, em cada l:
A
total
= A
x
+ A
y

Escolhe-se os l
max
de cada um dos compostos, onde cada um deles tem a maior
sensibilidade. l
x
ser o l
max
do composto x, e l
y
o do l
max
do composto y. Pela lei de Lambert-
Beer, a contribuio de cada um deles para a absorbncia total em cada comprimento de onda ser:
A bC bC
total x x
x
x x
y
y
( ) l e e = +
A bC bC
total y y
x
x y
y
y
( ) l e e = +
e
x
x
e e
x
y
so as absortividades de x e y no l
x
, e e
y
x
e e
y
y
so as absortividades de x e y no l
y
.
Se os e so conhecidos em cada l (podem ser obtidos medindo-se padres de cada
cromforo) e o b tambm, as nicas incgnitas das equaes so C
x
e C
y
. Tem-se ento um sistema
de equaes do primeiro grau de fcil resoluo, onde pode-se calcular as duas concentraes. Fica
como exerccio para o estudante o desenvolvimento de um sistema para trs cromforos
14
.

14
Esse tipo de anlise tem limitaes: a amostra tem que ter todos os cromforos determinados, com o e conhecido em
cada l necessrio e a incerteza na determinao de um cromforo aumenta com o aumento do nmero de cromforos.


30
EXERCCIOS

1) A figura abaixo ilustra as espcies da fenolftalena em funo do pH.

C
O
O
HO OH
C
COOH
O HO
8,2 (incolor) - 10,0 (vermelho, l
max
553 nm)
Faixa de pH (zona de viragem)
I
II

De acordo com a faixa de pH da fenolftalena, faa um esboo dos espectros de absoro da
fenolftalena nas condies de pH estabelecidas nos grficos abaixo. Considere que a concentrao
nominal da fenolftaleina em todos os casos de 4,00 x 10
-3
mg/mL , a absortividade molar da
espcie II 3,5 x 10
4
L mol
-1
cm
-1
a 553 nm, 7,0 x 10
2
a 480 nm e 1,5 x 10
3
a 620 nm, o caminho
tico de 2,00 cm e MM da fenolftalena 318 g/mol.
Espectro de absoro - pH 8,0
0,0
0,2
0,4
0,6
0,8
1,0
400 500 600 700 800
comp de onda (nm)
A
b
s
0,0
0,2
0,4
0,6
0,8
1,0
400 500 600 700 800
comp de onda (nm)
A
b
s
0,0
0,2
0,4
0,6
0,8
1,0
400 500 600 700 800
comp de onda (nm)
A
b
s
0,0
0,2
0,4
0,6
0,8
1,0
400 500 600 700 800
comp de onda (nm)
A
b
s


31

2)Os complexos de cobalto e nquel com
2,3-quinoxalineditiol tm as absortividades
tabeladas:
510 nm 656nm
Co 3,64 10
4
L/molcm 1,24 10
3

L/molcm
Ni 5,52 10
3

L/molcm 1,75 10
4
L/molcm
250,00 mg de amostra de um solo perto de uma indstria de processamento de metal so
dissolvidos, agentes mascarantes adicionados para evitar interferncias de outros complexos, a cor
desenvolvida com adio de 2,3-quinoxalineditiol e o volume final levado a 100,00 mL. A
absorbncia 0,517 a 510 nm e 0,405 a 656 nm em cubeta de 1,00 cm. Calcule a porcentagem em
peso do Co e do Ni no solo.

3)A salicilaldoxima forma em clorofrmio
complexos com Ni
+2
e Co
+2
. Os e de cada um
deles nos l
max
so:
500 nm 400 nm
Ni 10 L/mol cm 5,00 10
3
L/mol cm
Co 1000 L/mol cm 5,00 10
3
L/mol cm
Se uma soluo numa cubeta de 1,00 cm apresenta absorbncias de 0,091 a 500 nm e 0,615
a 400 nm, calcule as concentraes de Ni
+2
e Co
+2
.

4) ons de terras raras tm picos de absoro finos e
baixo e. Para Dy
+3

e Eu
+3

temos os e nos l
max
:
e
Dy
(L/mol.cm) e
Eu
(L/mol.cm)
394 nm 0,50 306
908 nm 2,46 0,00
Se uma soluo contendo esses ons tem uma absorbncia de 0,206 a 394 nm e 0,201 a 908
nm numa cubeta de 5,00 cm, calcule as concentraes desses ons.

5)A tabela ao lado fornece as absortividades molares em
mol/L.cm para o Cr
2
O
7
-2
e MnO
4
-
em dois comprimentos
de onda:
440 nm 545 nm
Cr
2
O
7
-2
369 11
MnO
4
-
95 2350
1,000 g de uma amostra de ao dissolvido numa mistura de H
2
SO
4
, HNO
3
e H
3
PO
4
, e
tratado com persulfato e periodato para oxidar o Mn a MnO
4
-
e o Cr a Cr
2
O
7
-2
. A soluo final
diluda a 100,00 mL e a absorbncia 0,108 a 440 nm e 1,296 a 545 nm em cubeta de 1,00 cm.
Calcule as porcentagens de Cr e Mn no ao.

32
9. DESVIOS DA LEI DE LAMBERT-BEER

A lei de Lambert-Beer nem sempre vlida. Os desvios encontrados so classificados em
desvios por limitao da lei, desvios qumicos e desvios causados pela instrumentao:
Os desvios por limitao da lei so aqueles em que as interaes do analito com o solvente e
demais solutos variam com o aumento da concentrao. O e, por exemplo, funo do ndice de
refrao. O ndice de refrao sofre grandes variaes em solues muito concentradas, alterando
o e. Em solues concentradas do analito ou outros solutos, as interaes soluto-soluto alteram a
estrutura do analito e tambm modificam sua absortividade. Esses efeitos geralmente ocorrem
em concentraes maiores que 0,01 mol/L das espcies presentes na amostra. Os desvios so
positivos ou negativos conforme as alteraes aumentem ou diminuam a absortividade.
Os desvios qumicos ocorrem por reaes no-completas (K, constante de equilbrio, baixa) em
que a espcie absorvente o reagentes ou o produto em reaes de complexao, equilbrio
cido-base e formao de dmeros. Alm da concentrao analtica, a concentrao real da
espcie absorvente tambm ser ditada por K. Se K favorece o cromforo nas concentraes
analticas mais altas, o desvio positivo. Ao contrrio, se K favorece o cromforo nas
concentraes mais baixas, o desvio negativo.
Nos desvios causados pela instrumentao, h que se lembrar que a lei de Beer aplicvel para
luz monocromtica. Filtros, por abrangerem faixas largas de comprimento de onda, apresentam
desvios negativos facilmente, pela mistura de comprimentos de onda que absorvem menos que o
l
max
. Esse efeito maior se medirmos fora do l
max
, onde a diferena de absortividade entre os
vrios l maior. Outro fator de desvio de instrumentao a luz espalhada internamente no
aparelho por qualquer superfcie refletora. Como parte dessa luz ter l diferente do l
max
, o
desvio sempre negativo. Cubetas sujas e no uniformes tambm afetam os resultados.
Ao ocorrer um desvio da lei de Beer, ainda pode-se trabalhar com a curva de calibrao,
embora ela no seja uma reta. O comportamento da curva pode ser mostrado no grfico a seguir:


33
Desvios da Lei de Beer
Concentrao
A
b
s
o
r
b
n
c
i
a
Desvio
Positivo
Desvio
Negativo

Como desvios da lei de Beer normalmente ocorrem em concentraes mais altas, uma das
solues mais comuns diluir mais a amostra, para que a anlise ocorra na faixa linear da curva,
desde que o valor de e (que d a sensibilidade do cromforo naquele comprimento de onda) e a
sensibilidade do aparelho que mede a absoro permitam. A faixa de trabalho normal dos mtodos
espectrofotomtricos vai de 10
-2
mol/L a 10
-7
mol/L, com vrias excees.
muito importante conhecer em que faixa de concentrao ocorre um desvio significativo
da lei de Beer. Essa mais uma das razes por que nunca se deve extrapolar os resultados de uma
curva de calibrao para calcular a concentrao de uma amostra, cujo valor de absorbncia caiu
fora dos limites dos valores de absorbncia dos padres.
Outro fator da instrumentao que pode causar desvios aparentes da lei de Beer a mudana
de sensibilidade do detector com o tempo.

EXERCCIOS

1)Para cada uma das seguintes situaes, preveja em qual a Lei de Beer mostrar um desvio
aparente negativo, um desvio positivo ou praticamente nenhum.
a) A substncia absorvente a forma no-dissociada de um cido fraco.
b) A entidade absorvente o ction em equilbrio com a base fraca.
c) Um metal est sendo determinado atravs de um reagente que desenvolve cor, medido em um
colormetro fotoeltrico com o filtro apropriado. No mesmo sistema adicionada uma
quantidade igual e insuficiente do reagente para reagir completamente com trs padres mais
concentrados, entre os dez examinados.


34
2)Preparou-se uma soluo de um complexo que apresenta o seguinte equilbrio:
M
+n

+ L (ML)
+n

sendo o complexo ML o cromforo do sistema. Que tipo de Desvio da Lei de Beer deve
ocorrer, se, no preparo das solues padres, para maiores concentraes do M
+n
a quantidade de
ligante L adicionada no suficiente ? Esboce o grfico e justifique.

3)Em uma anlise espectrofotomtrica na regio do ultravioleta de uma amostra gasosa, verificou-
se um desvio da Lei de Beer. A anlise media a concentrao de NO
2
em uma amostra de ar. Essa
substncia encontra-se no seguinte equilbrio:
2 NO
2
N
2
O
4
A absorbncia no varia linearmente com a concentrao analtica do NO
2
. Com o incremento da
concentrao, a absorbncia no aumenta proporcionalmente. Justifique por que ocorre esse desvio
e mostre graficamente como se observa o mesmo.

BIBLIOGRAFIA
1. Christian, G.D., Analytical Chemistry, John Wiley & Sons, Inc., 5
a
edio, 1994.
2. Skoog, D.A., West, D.M., Holler, F.J., Fundamentals of Analytical Chemistry, Saunders College
Publishing, 7
a
edio, 1995.
3. Gonalves, M
a
de L., Mtodos Instrumentais para Anlise de Solues, Fundao Calouste
Gulbenkian, Lisboa, 1983.
4. Willard, H. , Merrit Jr., L., Dean, J., Anlise Instrumental, Fundao Calouste Gulbenkian, 2
a

edio, Lisboa, 1979.
5. Kennedy, J.H., Analytical Chemistry-Principles, Harcout Brace Jovanovitch, Flrida, 1984.
6. Pecsok, R.L. & Shields, L.D., Modern Methods of Chemical Analysis, John Wiley & Sons, Inc.,
Nova Iorque, 1968.
7. Ohlweiler, O.A., Fundamentos da Anlise Instrumental, L.T.C., Rio de Janeiro, 2
a
edio, 1972.
8. Jeffrey, G.H. et alii, Vogel - Anlise Qumica Quantitativa, traduo de Horcio Macedo, 5
a

edio, Guanabara Koogan, Rio de Janeiro, (c.1992).
9. Zaidel, A.N., Ostrovskaya, G.V., Ostrovski, Yu.I., Tcnica y Prctica de Espectroscopia,
traduo de Rodriguez, L.G., Editorial Mir, Moscou, 1979.
10.Meehan, E.J., Seitz, W.R., Optical Methods of Analysis.
11.French, A.P., Vibraciones y Ondas, traduo de Peris, J.A. & Pacheco, J. de la R., Editorial
Revert, Barcelona, 1982.

35

Item D:
1- preto; preto; preto.
2- a) espelhos; b)fendas;
c) filtro vermelho.
3- b) absorve muito a luz azul.
4- e) maior seletividade no .
5- d) uma faixa de luz azul

Item E:
1- a) A / 3 b) T
2
ou 10
-2A
c)
2 A.
2- X, 7, 5, 1, 3, 7.
3-
4- (x) T
2
.
5- A = 0,602.
6- (x) B amarelo e o filtro azul
(para = 450nm).
7- (a)
8- (d)
9- a) 16,6% A = 0,780
33 % A = 0,481
b) c= 1,7 c.
10- (b) complementar
11- MM = 902 ou 912
12- C = 0,25 g/L.
13- 12,5%
14- 0,686 mg/L.
15-
a) Filtro vermelho
Branco 100%T e 0 ABS
Padro 1 55%T e 0,26 ABS
Padro 2 43,6 mA; 30%T e 0,52 ABS

Filtro azul
Branco 100%T e 0 ABS
Padro 1 73,5 mA; 94%T e 0,026 ABS
Padro 2 88%T e 0,053 ABS

b) filtro vermelho e=52.000 Lmol
-1
cm
-1

filtro azul e=5.200 Lmol
-1
cm
-1

c) vermelha
d) 8,7 x 10
-3
mmol/L

Item F:
1- a = 22 L/g.cm
teor de Mn = 0,59%
2- a) grfico
b) espectrofotmetro
c) transmitncia seria maior
d) e = 19.920 L.mol
-1
cm
-1
.
3- a) 0,0147%
b) gua + .... + ....
c) verde
4- a) grfico
b) e
1
= 783,2 L.mol
-1
cm
-1
; a
1
= 14,2
L.g
-1
cm
-1
; e
2
= 586,8 L.mol
-1
cm
-1
; a
2
= 10,7
L.g
-1
cm
-1
.
c) aparelho 1.
d) c = 3,23 x 10
-4
mol/L; T = 52%.
5- c) pH = 3

Item G:
1- a) y = 0,032 x + 0,241 c = 6,31
mg/L
b) a = 191 L.g
-1
cm
-1

e = 10.700 L.mol
-1
cm
-1
.
2- 3,97 g/g (considerando Cp = 55,0
g/mL).
3- 322 mg/L
4- b) 50,35 mg %
5- A = 0,625
6- a) 15,95 g/g
b) T = 0,10%
7- C
0
= 270 mg/L

Item H:
2- Teor de Co = 0,025%; teor de Ni =
0,053%
3- C
Ni
= 2,98 x 10
-5
mol/L;
C
Co
= 9,32 x 10
-5
mol/L.
4- C
Dy
= 1,6 x 10
-2
mol/L;
C
Eu
= 1,1 x 10
-4
mol/L
5- % Cr = 0,16%; %Mn = 0,30%.

Item I:
1- a) negativo; b) positivo;
c) negativo.
2- negativo
3- negativo

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