Universidad Veracruzana

Campus Xalapa
Facultad Qumica Farmacutica Biolgica


Practica No. 3

CURVA DOSIS RESPUESTA: DISOLVENTES


Equipo N 2
Integrantes
Daz Abad Juan Pablo
Gmez Cruz Jos Francisco
Herrera Lozano Ana Cristina
Jimnez Gonzlez Azalia
Maldonado Lpez Alberto Alejandro
Ortiz Blanco Erik

Experiencia Educativa:
Laboratorio de Farmacologa
Catedrtico:
Dra. Tania Molina Jimnez
Periodo Escolar:
Agosto 2013 Enero 2014
Fecha de Entrega:
29 de Agosto de 2013




RESUMEN
La curva dosis-respuesta es la representacin de la respuesta teraputica o
txica generada por los frmacos. La relacin entre la concentracin y la
respuesta permite estimar parmetros farmacodinmicos empleados en el
descubrimiento de frmacos. Los parmetros farmacodinmicos comnmente
empleados son la eficacia y la potencia. Los parmetros de potencia y eficacia
pueden ser obtenidos mediante el empleo de diversos modelos matemticos,
entre los que se destaca el modelo de curva dosis respuesta. A nivel de efectos
neurotxicos, los solventes provocan un deterioro en funciones cognitivas
superiores. Alteran los tiempos de respuesta. Deterioran la percepcin visual, las
velocidades de percepcin, la coordinacin mano-ojo y provocan dao auditivo y
del equilibrio. El objetivo general de esta prctica fue aprender a realizar de forma
practica la realizacin de curvas dosis respuestas midiendo los sntomas como:
ataxia, salivacin, convulsiones, temblor y movientes vibrisas causadas por los
disolventes utilizados como el tolueno y benceno. Para esto se utilizaron nueve
ratas hembras y seis ratas macho los cuales fueron repartidos por dos ratas del
mismo gnero sometido cada uno a diferente solventes y a diferente
concentracin por determinado tiempo de inhalacin y de reposo, registrando en
una tabla de resultados la frecuencia y el tiempo de duracin de los sntomas e
interpretando mediante las tablas y grficos la efectividad de toxicidad de cada
disolvente utilizado. Los resultados muestran que la dosis de ambos solventes
incrementa la aparicin de signos y disminuye la latencia, lo que indican la posible
neurotoxicidad de estos, independientemente del que sea, y que no hay
correlacin entre la dosis con el el solvente usado.



INTRODUCCION
Curvas dosis-respuesta
La curva dosis-respuesta es la representacin de la respuesta teraputica o
txica generada por los frmacos se atribuye a las interacciones estructurales con
macromolculas especficas y la modificacin de la actividad funcional de estas.
Se clasifican primero en graduales y cuantales: las cuantales solo miden el efecto
total o ausente, es decir, presencia o ausencia del efecto y las graduales permiten
cuantificar el porcentaje de efecto y establece las relaciones cuantitativas entre la
dosis o concentracin de un frmaco y sus efectos farmacolgicos. La relacin
entre la concentracin y la respuesta permite estimar parmetros
farmacodinmicos empleados en el descubrimiento de frmacos as como en la
prctica clnica. Los parmetros farmacodinmicos comnmente empleados son la
eficacia y la potencia. La eficacia se refiere al efecto mximo (E max) que puede
generar el frmaco. Por otro lado, la potencia est relacionada con la
concentracin necesaria para alcanzar el 50% del mximo efecto (CE50)
generado. Todo esto en el caso de un efecto no letal, para una efecto letal o txico
se emplea el termino DL 50 (dosis letal media) y CL 50 (concentracin letal media)
Un frmaco con menor dosis efectiva media es ms potente. Estos parmetros
permiten predecir el efecto en cualquier concentracin independientemente de
cmo se hayan inducido. Derivado de las relaciones frmaco-receptor, los
parmetros de potencia y eficacia pueden ser obtenidos mediante el empleo de
diversos modelos matemticos, entre los que se destacan el modelo de curva
hiperblica y el modelo de curva sigmoidal. (Aguirre et al, 2010)
En el modelo de curva hiperblica (Ver Ilustracin 1), E max es la respuesta
mxima del frmaco; EC50 es la concentracin de frmaco que produce el 50%
del efecto.
La curva sigmoidal (Ver Ilustracin 2) permite determinar los parmetros de
potencia y eficacia. Adicionalmente permite generar informacin para discernir si
una molcula sinttica o de origen natural ejerce efectos como agonista total o
parcial sobre su blanco molecular (receptor, enzima o canal inico). Por otro lado,
el empleo simultneo de la molcula en estudio con agonistas (totales o parciales)
y antagonistas (reversibles e irreversibles) de receptores, enzimas y/o canales
permite identificar efectos sinrgicos, aditivos, antagnicos, entre otros. En su
conjunto, permiten sugerir una va de sealizacin por la cual la molcula ejerce el
efecto farmacolgico, toxicolgico, entre otros posibles. (Agurre et al, 2010)







Ilustracin 1 Caracteristicas del modelo sigmoideal Ilustracin 2 Curva dosis-respuesta hiperblica

Curva dosis-respuesta de disolventes orgnicos (benceno y tolueno)
Los solventes son hidrocarburos lquidos ms o menos voltiles, entre los
cuales pueden mencionarse compuestos aromticos, alicclicos y alifticos,
alcoholes, cetonas, steres y teres. A nivel de efectos neurotxicos, los solventes
provocan un deterioro en funciones cognitivas superiores. Alteran los tiempos de
respuesta, la memoria a corto plazo, la calidad de operaciones aritmticas
simples. Deterioran la percepcin visual, las velocidades de percepcin, la
coordinacin mano-ojo, la memoria y provocan dao auditivo y del
equilibrio. (SEREMI, 2013)
El benceno es comnmente utilizado como materia prima en la la sntesis de
otros productos qumicos industriales y de importancia medicinal. Se utiliza como
un excelente solvente en diversas industrias incluyendo colorantes, barniz, laca,
cuero y as sucesivamente. El benceno es tambin un componente del humo de
los cigarrillos y la gasolina. Un gran nmero de la poblacin de todo mundo estn
expuestos al benceno ya sea laboral o debido a contaminacin del medio
ambiente. El benceno ha sido confirmado que es un carcingeno humano y
animal. La exposicin crnica a bajas dosis de benceno se asocia con anemia
aplstica y leucemia. Los efectos de la exposicin aguda al benceno incluyen:
irritacin de membranas mucosas, inquietud, convulsiones, excitacin, depresin e
incluso la muerte debido a fallas respiratorias. (Ahmad, 2007) La neurotoxicidad
esta poco estudiada tanto en humanos como en modelos animales. (EPA, 2010)
El tolueno se usa ampliamente en la industria como un disolvente, un aditivo en
motores y combustibles de aviacin, y un intermediario en la fabricacin de
productos qumicos. con el reconocimiento de los peligros de benceno y sus
sustitucin con derivados metilados, el uso de tolueno es cada vez ms
generalizada.
El tolueno es un altamente soluble en lpidos y se dispersa fcilmente en el
Sistema nervioso central. Los sntomas, tales como dolor de cabeza, mareos,
euforia, electroencefalogramas anormales y dficits en el rendimiento psicomotor
se han reportado en trabajadores expuestos a vapor de tolueno o tolueno en lacas
o diluyentes basados este.
El propsito del trabajo es construir curvas de dosis-respuesta de los dos
disolventes utilizando un modelo de ratas Wistar administrndoles via inhalatoria
concentraciones crecientes de solvente para observar la frecuencia y latencia de
diferentes conductas de la rata.
HIPTESIS
Mediante la intoxicacin a ratas con benceno y tolueno el alumno conocer el
concepto de curva dosis-respuesta, y conceptos relacionados como lo son ataxia,
convulsiones, salivacin, entre otros, y observar los efectos que estos producen
en las ratas por medio de la inhalacin.
OBJETIVO GENERAL
El alumno conocer en forma prctica el concepto de la curva dosis-respuesta
trabajando con ratas Wistar.
OBJETIVOS PARTICULARES
a) El alumno conocer el concepto de curva dosis-respuesta, a travs de la
valoracin del efecto farmacolgico producido por sustancias administradas
en cantidades crecientes.

b) El alumno har uso de las vas de administracin por inhalacin y analizar
las ventajas y desventajas de su uso.

c) El alumno observar los efectos motores y vegetativos ocasionados por la
inhalacin de disolventes voltiles.

d) El alumno conocer los conceptos: curva dosis-respuesta, efecto
farmacolgico, dosis, dosis letal, dosis toxica, salivacin, vibrisas, ataxia,
convulsin, muerte, potencia de un frmaco, va de administracin
sistmica y disolventes aromticos.

MATERIAL
Guantes
Cubrebocas
Algodn
Frasco de vidrio de boca ancha con tapa o desecador
Pipetas graduadas de 5 ml
Cronmetro

REACTIVOS
Benceno
Tolueno


PROCEDIMIENTO
1. La Docente expuso todos los conceptos relacionados con el concepto de
curva dosis respuesta, como lo son ataxia, convulsin, vibrisas, etc.
2. Seguidamente se le asignaron dos ratas a cada equipo.
3. Cada equipo tom sus dos ratas y les asign un nmero; posteriormente se
pesaron.
4. Se tom la primera rata y se coloc en un frasco de boca ancha con tapa, el
cual contena algodn con 0.0 de tolueno (control) se tom el tiempo (5min)
para observar la conducta de la rata, posteriormente se dej reposar a la
rata durante 7 min, y se procedi a agregar 0.2ml de tolueno y observar los
efectos en la rata, as se sigui con las cantidades de 0.4, 0.8, 1.6 y 3.2.
5. Se procedi a hacer lo mismo con la segunda rata pero con benceno,
observando los efectos que ste produca en la rata.
6. Se anot en una tabla el tiempo de latencia y la frecuencia en que present
los diferentes efectos.
7. Al trmino de la prctica las ratas fueron puestas en sus jaulas y cada
equipo limpio su rea de trabajo.
DIAGRAMA DEL PROCEDIMIENTO

OBSERVACIONES
A cada equipo se le asignaron 2 ratas de la cepa Wistar, hembras en nuestro
caso. Cada una de ellas fueron intoxicadas por 5 minutos con diferentes dosis, de
tolueno en la rata No. 1 y benceno en la rata No. 2, dejando entre cada dosis 7
minutos de descanso para que el animal pudiera recuperarse. Sin embargo, la
primera rata no mostr ningn tipo de alteracin dentro de 5 dosis de las 6
cantidades administradas.

La mayora de los animales hembras y machos estudiados comenzaron a alterar
su comportamiento en la dosis 0.4 ml. A partir de ah algunos animales incluso
comenzaron con ataxias.

* Ataxia
* Salivacion
*Convulsiones
*Temblor
* Mov vibrisas
Frecuencia (#)
Latencia (seg)
tolueno, benceno
(0,0.2,0.4,0.8,1.6,3.2)
inhalacin
15 ratas
RESULTADOS

ATAXIA
Dosis /
Disolventes
TOLUENO BENCENO TOTAL
D- 0 300.000 300.000 300.000
D - 0.2 247.429 300.000 273.714
D -0.4 231.143 261.714 246.429
D -0.8 196.714 231.571 214.143
D - 1.6 203.143 193.000 198.071
D - 3.2 129.143 159.571 144.357
TOTAL 217.929 240.976
Tabla 1. Prueba de Ataxia. Existieron diferencias significativas entre la dosis
administrados de benceno y tolueno F
2
(5,60)= 11.376 P<0.001*, no hubo
diferencias significativas entre solventes F
1
(1,60)= 0.419 P=0.530, NS, ni de la
interaccin dosis vs solvente F(5,60)= 0.500 P= 0.775, NS
SALIVACIN
Dosis /
Disolventes
TOLUENO BENCENO TOTAL
D- 0 300.000 300.000 300.000
D - 0.2 300.000 296.429 298.214
D -0.4 267.000 300.000 283.500
D -0.8 300.000 287.000 293.500
D - 1.6 262.286 260.857 261.571
D - 3.2 222.286 270.000 246.143
TOTAL 275.262 285.714
Tabla 2. Prueba de Salivacin. No hubo diferencias significativas entre los
grupos de benceno y tolueno F
1
(1,60)= 0.303 P= 0.592, NS, de la dosis F
2
(5,60)=
2.105 P= 0.077, NS ni de la interaccin de Dosis vs Solvente F(5,60)= 0.632 P=
0.676 NS
CONVULSIONES
Dosis /
Disolventes
TOLUENO BENCENO TOTAL
D- 0 300.000 300.000 300.000
D - 0.2 300.000 300.000 300.000
D -0.4 300.000 300.000 300.000
D -0.8 300.000 300.000 300.000
D - 1.6 300.000 300.000 300.000
D - 3.2 216.429 295.000 255.714
TOTAL 286.071 299.167
Tabla 3. Prueba de convulsiones. Existen diferencias significativas entre la dosis
administrada de benceno y tolueno F
2
(5,60)= 4.759 P= <0.001, no hubo
diferencias en cuanto al solvente F
1
(1,60)= 3.745 P= 0.077, NS y la interaccin de
dosis vs solvente no fue significativa F(5,60)= 3.745 P= 0.005, NS
TEMBLOR
Dosis /
Disolventes
TOLUENO BENCENO TOTAL
D- 0 300.000 300.000 300.000
D - 0.2 245.714 300.000 272.857
D -0.4 238.429 287.857 263.143
D -0.8 204.571 248.286 226.429
D - 1.6 174.429 182.857 178.643
D - 3.2 167.286 143.143 155.214
TOTAL 221.738 243.690
Tabla 4. Prueba de temblor. Se muestran las medias de los tiempos y dosis que
tardaron las ratas en tener sus primeros temblores. F1= disolvente, F2= Dosis,
Interacciones: Dosis x Disolvente.
F
1
(1,60)= 0.418 P= 0.530, NS
F
2
(5,60)= 7.366 P<0.001
Interacciones: F(5,60)= 0.582 P= 0.714, NS
MOVIMIENTO DE VIBRISAS
Dosis /
Disolventes
TOLUENO BENCENO TOTAL
D- 0 300.000 300.000 300.000
D - 0.2 211.857 128.571 170.214
D -0.4 126.429 90.143 108.286
D -0.8 107.071 67.714 87.393
D - 1.6 129.571 44.143 86.857
D - 3.2 68.071 75.143 71.607
TOTAL 157.167 117.619
Tabla 5. Prueba de movimiento de vibrisas. Se muestran las medias de los
tiempos y dosis que tard cada rata en observar sus primeros movimientos de
vibrisas.F1= disolvente, F2= Dosis, Interacciones: Dosis x Disolvente.
F1(1,60)= 0.825 P= 0.382, NS
F2(5,60)= 22.686 P<0.001
Interacciones: F(5,60)= 1.167 P= 0.336, NS
DISCUSIN
De acuerdo con los resultados obtenidos, los disolventes aromticos en el caso
del Tolueno y Benceno, producen efectos txicos de acuerdo a la cantidad a la
que las ratas fueron sometidas, si la cantidad es menor afecta de menor forma a
las ratos, pero cuando se va aumentando la concentracin sus efectos se vuelven
ms potentes, es decir, el tiempo de muestra de los signos secundarios es menor
entre mayor es la dosis administrada.
Se ha demostrado en otros estudios realizados con la inhalacin de tolueno, que
adems de presentar los sntomas que nosotros evaluamos, tambin se presenta
aumento de los ganglios linfticos, hepatomegalia, disfuncin renal con
disminucin del volumen de orina y cambios en la especificidad celular de la
vejiga, al cabo de dos semanas de exposicin, esto es muy similar a lo que un
humano podra presentar expuesto en las mismas condiciones. (Carmelo-Maquez,
1999)
Tambin puede haber factores para que los resultados difieran que pueden ser:
que ya se haya experimentado con los animales anteriormente, que no estn
alimentados correctamente, tengan alguna enfermedad, su gnero, ya que el
ltimo punto se demostr experimentalmente ya que las ratas hembra pusieron
ms resistencia para presentar los sntomas de ataxia, salivacin, etc. Al contrario
de los machos que a partir de la dosis de 0.8 ya empezaron a mostrar sus
primeros sntomas.
.
CONCLUSION
Pudimos conocer los conceptos de curva dosis respuesta as como los
significados de ataxia, salivacin, temblor, convulsiones y movimiento de vibrisas,
tambin supimos que los inhalantes aromticos (tolueno y benceno) tienen efectos
secundarios/laterales en los organismos en este caso de las ratas de acuerdo a
las dosis a las que se someten.
BIBLIOGRAFA
Aguirre, e. a. (2010). Qu sabe usted acerca de la curva dosis.respuesta?
Revista Mxicana de Ciencias Farmacuticas.
Chile, S. R. (s.f.). www.paritarios.cl. Recuperado el 28 de agosto de 2013, de
http://www.paritarios.cl/especial_intoxicacion_solventes.htm
EPA. (2002). TOXICOLOGICAL REVIEW OF BENZENE (NONCANCER
EFFECTS. U.S. Environmental Protection Agency, 12, 117.
Khan, H. A. (2007). Benzenes toxicity: a consolidated short. Human &
Experimental Toxicology, 1,2.
Kishi, E. a. (1988). Neurobehavioural effects and pharmacokinetics of toluene
in rats and their relevance to man. British Journal ofIndustrial Medicine, 1,2.
Recuperado de efectos de la inhalacin aguda y crnica de pegante de
contacto con tolueno en el aprendizaje espacial de un grupo de ratones
machos, Camelo Roa, Marquez Granados, et al., Universidad de la Sabana
http://intellectum.unisabana.edu.co:8080/jspui/bitstream/10818/4592/1/13084
6.pdf