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MTODOS
DE
DETERMINACIN.
MTODOS DE
EVALUACIN DE CALIDAD
CURSO: ANLISIS DE PAI
INDICE
Consideraciones generales
Cuantificacin de protenas
Determinacin de la calidad de las protenas.
CONSIDERACIONES GENERALES
Componentes abundantes en las clulas.
Importantes para funciones biolgicas y
estructura de las clulas.
Las protenas estn formadas por 20 -
aminocidos en configuracin L.
Los aminocidos estn compuestos por C, H, N,
O, S.
Los aminocidos se caracterizan por poseer:
grupo carboxilo (-COOH)
grupo amino (-NH2).
CONSIDERACIONES GENERALES
Elemento mas abundante: N (13.4 - 19.1%).
Clasificacin:
Composicin
Estructura
Funcin biolgica
Solubilidad
Presentan conformaciones nicas, pueden
cambiar por:
Calor
cidos
Bases
Disolventes orgnicos
Detergentes
FUENTES DE NITRGENO NO PROTEICO
Aminocidos libres
Pequeos pptidos
cidos nucleicos
Fosfolpidos
Azcares aminas
Porfirina
Algunas vitaminas
Alcaloides
cido rico
Urea
Iones de amonio
MACRO COMPONENTES DE LOS ALIMENTOS
QUE PUEDEN INTERFERIR CON EL ANLISIS
DE PROTENAS
Lpidos
Carbohidratos
MTODOS DESARROLLADOS PARA MEDIR
EL CONTENIDO PROTEICO
Fundamentos:
Determinaciones de nitrgeno
Enlaces peptdicos
cidos aromticos
Absortividad UV de las protenas
Grupos amino libres
Propiedades de dispersin de la luz
Capacidad de adhesin de colorantes
IMPORTANCIA DEL ANLISIS
DE PROTENAS
Determinacin de actividad biolgica. Ejemplo:
pectinasas durante la maduracin de frutos.
Investigacin sobre propiedades funcionales.
Ejemplo: gliadina y gluteninas para la
elaboracin del pan.
Etiquetado nutricional
NECESIDAD DEL ANLISIS DE PROTENAS
Contenido proteico total
Composicin de aminocidos
Contenido de alguna protena particular en una
mezcla
Contenido proteico durante el aislamiento y
purificacin de una protena
Nitrgeno no proteico
Valor nutritivo (digestibilidad, balance proteico.
CONTENIDO PROTEICO
EN LOS ALIMENTOS
MTODOS DE DETERMINACIN DE
PROTENAS
Mtodo de Kjeldahl
Mtodo de Biuret
Mtodo de Lowry
Mtodo del cido bicinconnico (bca)
Mtodo de absorcin UV a 280nm
Mtodo de adhesin de colorante
Mtodo de Bradford
Mtodo de la ninhidrina
Mtodo turbidimtrico
MTODO KJELDAHL
Fundamento:
Protenas y otros componentes son digeridos con cido
sulfrico en presencia de catalizadores.
Contenido total de nitrgeno orgnico es transformado a
sulfato de amonio.
El digerido se neutraliza con lcali y se destila sobre una
solucin de cido brico.
Aniones borato formados se titulan con cido valorado, el
cul a su vez se convierte en nitrgeno.
Resultado: nitrgeno bruto.
MTODO KJELDAHL
Preparacin de la muestra:
Triturar la muestra seca y homogenea.
Tamizar por una mala de 20 mesh.
Determinacin de protenas en leche.
http://www.youtube.com/watch?v=3n2RAKK1xmQ
DIGESTIN
PROTENA
cido Sulfrico
Calor, catalizador
(NH4)2 SO4
MODIFICACIONES EN LA DIGESTIN
Se han aadido catalizadores como: Hg, Cu, Se, Ti al H
2
SO
4
para lograr una digestin completa.
Hg es mas satisfactorio.
El dixido de selenio y el sulfato de cobre en proporcin 3:1
son muy efectivos en la digestin.
El sulfato de potasio se utiliza para aumentar el punto de
ebullicin del cido sulfrico para acelerar la digestin.
El sulfuro o tiosulfato de sodio se aaden a la digesta
diluida para ayudar a liberar el nitrgeno del Hg el cual
tiende a adherir amonio.
REACCIONES DE LA NEUTRALIZACIN Y LA
DESTILACIN
(NH)
2
SO
4
+ 2NaOH 2NH
3
+Na
2
SO
4
+2H
2
O
NH
3
+ H
3
BO
3
NH
4
+ H
2
BO
3
-
(cido brico) (in borato)
REACCIONES DE LA TITULACIN
El anin borato (proporcional a la cantidad de
nitrgeno) se titula con HCl estandarizado:
H
2
BO
3
-
+ H
+
H
3
BO
3
MODIFICACIONES EN LA TITULACIN
Se utilizan la colorimetra y la cromatografa
inica para determinar el contenido de nitrgeno
posterior a la digestin.
FUNCIN DEL BLANCO EN LA
DETERMINACIN DE PROTENAS
Se debe utilizar un blanco con reactivos para
sustraer el nitrgeno reactivo del nitrgeno de la
muestra.
CLCULOS
N HCl = Normalidad del HCl en moles /1000 mL
Vol. cido corregido = mL de cido estndar para
la muestra) (mL de cido estndar para el
blanco)
14 = peso atmico del nitrgeno
%N = N HCl X VOLUMEN DE CID CORR. X 14g/Mol N
2
X 100
g. DE MUESTRA
FACTOR
Se utiliza un factor de conversin de % de N a % de
protena cruda.
La mayora de las protenas contienen 16% de N
El factor de conversin es:
16 . 0
%
Pr %
25 . 6 % Pr %
25 . 6 16 100 25 . 6
N
oteina
Nx oteina