Actividad enzimtica

Integrantes: Edna Viviana Camargo Tocora 2121317 viviana26_1@hotmail.com

Microbiologa y Bioanlisis, Universidad Industrial de Santander, Facultad de Salud,
Escuela de Bacteriologa y Laboratorio Clnico
Objetivos:
Conocer la actividad de las enzimas a!o di"erentes condiciones.
#eterminar de $%& manera a"ecta las di"erentes condiciones la actividad catal'tica de la
enzima.
Conocer la "%nci(n de dos transaminasas ) s%s res*ectivos s%stratos ) *rod%ctos.
Introduccin
En el laoratorio se llevaron a cao c%atro
*rocedimientos di"erentes asados en las
condiciones $%e *%eden a"ectar la actividad
de %na enzima+ ) el com*ortamiento de
esta en las di"erentes variaciones $%e se
hicieron en estos "actores.
,as enzimas son *rote'nas con actividad
catal'tica $%e aceleran la velocidad de la
reacci(n+ e-isten "actores $%e *%eden
a"ectar la actividad de la enzima como lo
son la tem*erat%ra el *. ) la concentraci(n
de enzima o s%strato.
1
Metodologa
/ara cada %na de las asorancias
medidas en cada %no de los e-*erimentos
se "aric( %n lanco $%e ten'a 2012, de
s%strato+ 1112, de m%estra+ 2012, de
reactivo 2+34#56. ) dil%)ente *ara
enzimas 2.0m,+ esta sol%ci(n "%e em*leada
*ara la caliraci(n antes de las medidas
res*ectivas.
Experimento #1 medicin de
transaminasas en condiciones optimas
1
LAU!A, "os# y otros, Bio$u%ica de laguna, editorial
%anual %oderno, &a edici'n, M#(ico, )**+, ,g- 1)+-
7e tom( %n t%o de ensa)o en donde se
de*osit( 2012, de s%strato o reactivo 89 $%e
es %na sol%ci(n de I4as*artato ) :4
cetogl%tarato+ *ara l%ego *roceder a inc%ar
en %n a;o serol(gico $%e se encontraa a
37<C *or 0 min%tos+ l%ego de esto se retir(
del a;o serol(gico ) se a;adi( 0112, de la
m%estra *ro*orcionada *or el docente con
n%mero: =>7>2. ,a m%estra se agito
s%avemente *or inversi(n+ se *rocedi( a
inc%ar *or 31 min%tos a 37<C+ *ara l%ego de
$%e *asaran los 31 min%tos se agregara
2012, de reactivo 2+34#56. se mezcl( ) se
*rocedi( a inc%ar de n%evo *or 11 min%tos
n%evamente a 37<C+ l%ego de este tiem*o se
retir( del a;o serol(gico ) se *rocedi( a
agregar 2.0 m, de dil%)ente *ara enzimas+ se
mezcl( ) l%ego de 2 min%tos de de!arlo
re*osar se le)( la asorancia en %n
es*ectro"ot(metro a 010 nm.
Efecto del tiempo de reaccin sobre la
actividad enzimtica
Experimento #2 lectura inmediata
7e *rocedi( n%evamente a tomar %n t%o de
ensa)o ) marcarlo con la m%estra =>7>2
l%ego se le agrego 2012, de s%strato 87T
l%ego se tomaron 01 2, de m%estra ) se
mezcl(+ se a;adi( 2012, de reactivo 2+34
#56. ) *osteriormente 2+0 m, de dil%)ente
*ara enzimas+ se de!( re*osar 2 min%tos )
se llev( al es*ectro"ot(metro a 010nm *ara
darle lect%ra.
Experimento #3 Doble del tiempo
7e agreg( en %n t%o de ensa)o 2012, de
s%strato 87T marcado con el n?mero de
m%estra =>7>2+ se llev( a enc%ar *or 11
min%tos a 37<C+ *asado este tiem*o se
a;adieron 012, de m%estra+ se mezcl( ) se
inc%o *or 1 hora+ *asada la hora se retir(
del a;o serol(gico ) se le agrego 2012,
de reactivo 2+34#56.+ se mezcl( ) se llev(
a inc%aci(n n%evamente *or 21 min%tos a
37<C+ se agreg( dil%)ente *ara enzimas )
se de!( re*osar *or dos min%tos *ara
*roceder a leer en el es*ectro"ot(metro.
Experimento #4 efecto de la temperatura
sobre la actividad enzimtica
7e tomaron dos t%os de ensa)o ) se les
agrego a cada %no de ellos 2012, de
s%strato @87TA+ se tomaron cada %no de
estos t%os ) se inc%aron a tem*erat%ras
di"erentes+ %no se inc%o a 1<C @t%o 1A ) el
otro se inc%o a 01<C @t%o 2A+ d%rante 0
min%tos+ l%ego+ se *rocedi( a verter 012,
de la m%estra en cada t%o ) llevarlos
n%evamente a inc%aci(n a s%s
tem*erat%ras res*ectivas *or 31 min%tos+
transc%rrida la media hora se tom( 2012,
de reactivo 2+34#56. ) se agreg( esa
cantidad a cada t%o+ *ara llevar
n%evamente a inc%aci(n *or 11 min%tos a
las tem*erat%ras corres*ondientes+ *ara
l%ego retirarlos ) agregar 2+0m, de
dil%)ente *ara enzima+ se de!( re*osar )
se le)eron en el es*ectro"ot(metro.
Discusin de resultados
Medicin de transaminasas en condiciones
optimas
1.26> 73 BCI
1.367 D
1.367 - 73
DE 4444444444444444444444
1.26>
X 1!!"#$ %&'
,os valores normales de esta enzima en
m%!eres es de >420 BICI ) en homres el
valor se enc%entra entre 11431BICI+ dado los
res%ltados otenidos en la lect%ra del t%o a
condiciones estFndares+ se *%ede determinar
$%e la actividad de la enzima ha a%mentado
en el s%ero del *aciente+ lo $%e *%do darse
*or *atolog'as como la I8G @in"arto ag%do de
miocardioA en donde la 87T a%menta+ % otras
*atolog'as como la mio*ericarditis ag%da+
ins%"iciencia cardiaca congestiva+ shocH+
entre otras.
2

Medicin inmediata (efecto del tiempo de
reaccin sobre la actividad enzimtica)
1.1>6 36
1.1>2 D
1.1>2-36
DE444444444444444444
1.1>6
D E 30.16 BCI
Como se oserva en los res%ltados+ la
actividad enzimFtica se vio dismin%ida )a $%e
la enzima catalizo %na cantidad menor de
*rod%cto+ esto *%do oc%rrir *or la alteraci(n
de la tem*erat%ra o*tima a la $%e traa!a la
enzima ) tami&n *or el *oco tiem*o $%e se
le dio a la enzima *ara $%e interact%ara con
el s%strato a"ectando la catFlisis del
*rod%cto.
3
Doble del tiempo
)
"IME!E., Luis, y otros, Medicina de urgencias y
e%ergencias/ gua diagnostica y ,rotocolos de actuaci'n,
editorial elsevier, 01 edici'n, Barcelona, Es,a2a, )*1*, ,g-
0&
3
4E5A, Antonio y otros, Bio$u%ica, editorial li%usa, )da edici'n,
M#(ico, )**0, ,g- 160-
1+26> 73
1.31> D
1.31> - 73
DE 4444444444444444
1.26>
DE 110.26 BCI
En este e-*erimento el tiem*o de
inc%aci(n se dol(+ al *arecer dando
ma)or actividad enzimFtica+ *or lo tanto
%na ma)or concentraci(n de *rod%cto+
a%n$%e este res%ltado *%do haer sido
in"l%enciado *or el mal estado de %no de
los e$%i*os $%e se %s( *ara la medici(n de
los vol?menes )a $%e no agregaa el
vol%men adec%ado si no %no menor.
Te(ricamente el *rod%cto "ormado dee
ser directamente *ro*orcional al tiem*o de
inc%aci(n+ la concentraci(n no contin%a
creciendo *or varios "actores entre estos
$%e el s%strato se ha)a terminado )
ocasionando as' $%e no se catalice mas
*rod%cto+ tami&n $%e *or ser %na *rote'na
catal'tica con el tiem*o em*iece a
desnat%ralizarse ) *or lo tanto *ierda s%
"%nci(n o $%e el *rod%cto "ormado tenga
"%nci(n inhiidora en la actividad de la
enzima c%ando alcance determinada
concentraci(n.
3

Efecto de la temperatura sobre la actividad
enzimtica
El t%o inc%ado a 1<C
1.26> 73
1.310 D
1.310-73
DE 444444444444444444
1.26>
DE 113.16 BCI
0
4E5A, Antonio y otros, Bio$u%ica, editorial li%usa, )da
edici'n, M#(ico, )**0, ,g- 167
8l *arecer la t&cnica est%vo mal ) eso inc%rri(
en %n error en la asorancia+ )a $%e el dato
no conc%erda con lo te(rico $%e dice $%e a
tem*erat%ras a!as el movimiento de las
mol&c%las es mFs lento *or lo tanto la
velocidad de reacci(n dismin%)e o se
desnat%raliza la mol&c%la *roteica *or lo tanto
la concentraci(n de *rod%cto no *%ede ser
tan alto.
En el caso del t%o inc%ado a 01<C+ no *%do
leerse )a $%e invol%ntariamente en s%
mani*%laci(n se derramo el contenido de la
sol%ci(n+ *ero al a%mentar la tem*erat%ra la
velocidad de reacci(n a%menta ) la actividad
enzimFtica tami&n hasta llegar a %na
tem*erat%ra determinada en donde se *%ede
dar la desnat%ralizaci(n o inactivaci(n de la
enzima+ esta tem*erat%ra critica es
caracter'stica de cada enzima ) *%ede estar
entre 01 a 61<C
0
Preguntas
%na unidad de actividad enzimtica*
+a cuntos ,atales (-) e.uivale/
1 Hatal E 61 - 11
6
BCI
6
1BCI E 1+7-11
4=
I
Mencione tres estados patol0icos en
los cuales la concentracin de las
transaminasas se encentren elevadas"
4.e*atitis J cr(nica @eta*a re*licativaA
elevaci(n de las transaminasas s&ricas
4 ictericia ag%da de origen he*atocel%lar
4 coledocolitiasis @incremento de hasta 21
veces el valor normal.
7
7
489:ILL8, "acobo, y otros, as,ectos bsicos de
bio$u%ica clnica, editorial ;a< de Santos, Madrid,
Es,a2a, 166+, ,g- 1**-
&
MACA9ULLA "os# M, y otros, bio$u%ica cuantitativa,
editorial reverte, Barcelona, Es,a2a, )**) ,g- )=6=-
+
489:ILL8, "acobo, y otros, as,ectos bsicos de
bio$u%ica clnica, editorial ;a< de Santos, Madrid,
Es,a2a, 166+, ,g- 116-
Dibu1e el espectro de absorcin de
23D 4 23D5
Fig 1/ es,ectro de absorci'n !A; > !A;?
=
+6mo se determina normalmente
la cantidad de una enzima en suero/
C. midiendo s% actividad en el s%ero
El espectro de absorcin del 237 4
23D5 se diferencian en8
C- !A;? absorbe lu< a 30*n% y !A;? no-
9as transaminasas (37: 4 39:)

#. se elevan en la he*atitis v'rica
>
=
B9A;LE> Fran@, Bio$u%ica, editorial reverte, s-a ,
Barcelona, Es,a2a, 16=) ,g- 1)=-
6
A9E!:E, ?oracio, y otros, se%iologa %edica/
Aisio,atologa, se%iotecnia y ,ro,ed#utica, editorial
%edica ,ana%ericana, Buenos aires, Argentina, )**=,
,g- =*)-