TINCIN DE GRAM

UNIVERSIDAD DE CARTAGENA
Facultad de Ingeniera
Programa de Ingeniera de Alimentos
Cartagena de Indias
07 de Agosto del 2014

D. Aparicio
1
; C. Gutierrez
2
; K. Rodriguez
2
; J. Yate
2
.
1. Docente Universidad de Cartagena; 2.Estudiantes Universidad de Cartagena

RESUMEN
La prctica se realiz el anlisis de organismos e identificacin de bacilos Gram-positivo
(violeta) y Gram-negativo se tien rosado con un procedimiento diferencial de tincin que
tuvo como objetivo aprender las tcnicas de coloracin mediante las cuales se clasifican la
mayora de las bacterias, dependiendo de la composicin qumica de la pared celular y a su
vez conocer su diagnstico en procesos infecciosos, se cubri el cristal violeta durante un
minuto luego se lav con agua destilada para eliminar el exceso de colorantes, se cubri con
lugol por un tiempo de un minuto, se lav el exceso de este con agua y posteriormente se
cubri con la preparacin por un minuto. Los bacilos no cido alcohol resistente toman el
colorante de contraste al igual que las otras estructuras que aparecen en la preparacin.
PALABRAS CLAVE: Bacilos Tincin Gram positivo, tincin Gram negativo
ABSTRACT
The practice analysis and identification of bacilli organisms "Gram-positive" (purple) and
"Gram-negative" pink stain was performed with a differential staining procedure that aimed
to learn coloring techniques which are classified by the most bacteria, depending on the
chemical composition of the cell wall and in turn their diagnosis in infectious processes
covered crystal violet for one minute then washed with distilled water to remove excess dye
with lugol covered by a time of one minute, this excess was washed with water and then
covered with the preparation for a minute. The acid alcohol resistant bacilli not take the
contrast dye as well as other structures that appear in the preparation.
KEYWORDS: Gram positive bacilli staining, Gram staining negative

INTRODUCCION
Tincin diferencial
La tincin diferencial requiere ms de un tipo de colorante y se utiliza para distinguir entre
varios tipos de clulas bacterianas. Una tincin diferencial tpicamente consiste de tres pasos
principales: primero un colorante primario, el cual se utiliza para teir a todas las clulas en
la tincin; enseguida un paso de decoloracin, el cual remueve el colorante solo de ciertos
tipos de clulas y finalmente un colorante de contraste, el cual tie las clulas recin
decoloradas pero no tiene efecto sobre las clulas que an retienen el colorante primario.
Coloracin de Gram
La tincin propuesta por el mdico dans Christian Gram en 1884, es una de las tinciones
diferenciales ms utilizadas en bacteriologa, que clasifica los cultivos bacterianos de menos
de 24 horas en Gram positivas y Gram negativas. La reaccin de la tincin de Gram se basa
en la cantidad de peptidoglucano que se encuentra en las paredes celulares de estas bacterias.
Las bacterias Gram positivas tienen muchas capas de peptidoglucano, las cuales a su vez,
sostienen molculas de cido teicoico. El cido teicoico reacciona con el cristal violeta y el
yodo utilizado en este proceso de tincin. Un complejo de las molculas cristal violeta-yodo-
cido teicoico es muy difcil de remover. Como la pared celular de las clulas Gram
positivas retiene estos compuestos, es ms difcil decolorar una clula Gram positiva que
una Gram negativa. Una mezcla de alcohol remueve el cristal violeta de la clula Gram
negativa, pero no de la Gram positiva. Esta mezcla de alcohol tambin disuelve mucho de la
capa exterior de lipopolisacrido de la pared celular de la pared Gram negativa, lo cual
acelera la remocin del colorante primario cristal violeta de estas clulas.

Morfologa Colonial de Bacterias

El crecimiento bacteriano en una superficie slida presenta caractersticas de cultivo
llamadas:
Morfologa colonial. Una colonia se define como una masa visible de microorganismos,
todos originados de una slo clula madre, de manera que una colonia constituye clones de
bacterias, todas genticamente similares.
Los siguientes adjetivos pueden usarse para describir la morfologa colonial o caractersticas
de cultivo:

1. Tamao: medido en milmetros; menos de 1mm = puntiforme
2. Forma: Circula, Irregular, Filamentosa, Rhizoide y Ondulada
3. Margen: (la forma del contorno de la colonia): Entero, Ondulada, Lobada, Irregular,
Concntrica, Arrugado, Circular irradiado, Filamentoso (filiforme), Ciliado.
4. Propiedades pticas: Opaca, Translcida y Transparente y Brillante (mucoide).
5. Elevacin: Elevada, Convexa, Plana, Gotiforme (forma de gota), Umbonada,
Crateriforme.
6. Textura: Suave, Granular, Tenaz, Mucoide.
7. Pigmento: Hialino a colores blanquecinos, y de amarillos a rojos

Para el estudio de los microorganismos existen dos formas de realizar las preparaciones
microscpicas.

Tcnica de Montaje Hmedo: Permite observar las clulas y organismos en general, con
vida y sus movimientos, estructuras, etc. Pueden montarse con soluciones buffer, solucin
salina isotnica, caldos de cultivos

Preparaciones fijas y coloreadas: Las tcnicas de tincin utilizan pelculas o frotis secos
de la muestra, los cuales son sometidos a un proceso de teido, empleando compuestos
orgnicos coloreados.
[4]

Tincin simple

Las tinciones se basan en la utilizacin de colorantes que pueden clasificarse como naturales
o sintticos. Los naturales se utilizan principalmente con fines histolgicos.

La mayor parte de los colorantes que se utilizan para teir bacterias son sintticos,
muchos de ellos son las anilinas y los derivados del benceno.
Se habla de coloracin simple cuando una muestra extendida se tie con un solo colorante.
Si la preparacin se tie con safranina, las bacterias adquiriran un color rojo, si se utiliza
azul de metileno, se teirn de azul, si por el contrario se tien con cristal violeta, las
bacterias aparecern teidas de color violeta, es decir adquirirn el color del nico colorante
que se utiliz.

Este procedimiento permite distinguir la morfologa y estructuras internas de la clula
bacteriana, como por ejemplo, la presencia de endospora bacteriana. Existen coloraciones
especiales que permiten poner de manifiesto estructuras bacterianas como por ejemplo:
flagelo, cpsula, endosporas, etc.
Materiales y reactivos

Cubre objetos
Porta objeto
Microscopio
Hisopo
Safranina
Lugol
Alcohol
Cristal violeta
Mechero
Agua destilada



Procedimiento
1. Tomar las muestras de las criptas amgdalas o amigdalitis con ayuda de un hisopo
2. Colocar la muestra sobre el porta objeto
3. Fijar la muestra con calor con precaucin de no calentar demasiado el porta objeto
pues la clulas pueden deformarse o romperse.
4. Adicionar el reactivo-cristal violeta o azul de metileno (1 minuto)
5. Lavar la muestra con agua corriente
6. Agregar lugol , se deja por 1 minuto.
7. Lavar de nuevo la muestra y adicionar alcohol para eliminar el exceso de complejos
la cual se deja (15-20 segundos)
8. Adicionar safranina (15 segundos) y por ltimo se lava con agua y secar al aire.
9. Examinar con el microscopio con el objetivo de 40x.







Resultado
En esta prctica se obtuvo como resultado que la saliva contena bacterias Gram
positiva (tincin violeta) al observarlas en el microscopio.




Anlisis del resultado

De acuerdo a los resultados observados se estableci que las bacterias encontradas
eran del genero Gram- positivas, y relacionando esto con su forma de cocos unidos
entre si y de acuerdo estas caractersticas se puede establecer pertenece a la especie
de los spp.



Conclusin:
Con esta prctica se concluy que en la boca de una persona, pueden existir o existen ciertas
bacterias, las cuales se pueden diferenciar o identificar por distintos mtodos como lo es el
de la tincin de Gram, el cual sirve para diferenciar las bacterias Gram- negativa(rosado) y
Gram positiva(violetas o azules)




Referencias
Aulton Michael E., Ciencia y diseo de formas farmacuticas, 2 edicin, Ed. Elsevier
Espaa, 2004.
Bergey, David H.; John G. Holt; Noel R. Krieg; Peter H.A. Sneath (1994). Bergey's Manual
of Determinative Bacteriology (9th ed.). Lippincott Williams & Wilkins.ISBN 0-683-00603-7