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LOS MEDIOS DE CULTIVO EN MICROBIOLOGA

Uno de los sistemas ms importantes para la identificacin de microorganismos es observar


su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El
material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el
crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Se han preparado ms de 10.000 medios
de cultivo diferentes.
Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir
una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presin de oxgeno
adecuadas, as como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe
contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo
microorganismo contaminante.
La mayora de las bacterias patgenas requieren nutrientes complejos similares en
composicin a los lquidos orgnicos del cuerpo humano. Por eso, la base de muchos
medios de cultivo es una infusin de extractos de carne y Peptona a la que se aadirn otros
ingredientes.
El agar es un elemento solidificante muy empleado para la preparacin de medios de
cultivo. Se lica completamente a la temperatura del agua hirviendo y se solidifica al
enfriarse a 40 grados. Con mnimas excepciones no tiene efecto sobre el crecimiento de las
bacterias y no es atacado por aquellas que crecen en l.
La Gelatina es otro agente solidificante pero se emplea mucho menos ya que bastantes
bacterias provocan su licuacin.
En los diferentes medios de cultivo se encuentran numerosos materiales de enriquecimiento
como hidratos de carbono, suero, sangre completa, bilis, etc. Los hidratos de Carbono se
adicionan por dos motivos fundamentales: para incrementar el valor nutritivo del medio y
para detectar reacciones de fermentacin de los microorganismos que ayuden a
identificarlos. El suero y la sangre completa se aaden para promover el crecimiento de los
microorganismos menos resistentes.

Tambin se aaden colorantes que actan como indicadores para detectar, por ejemplo, la
formacin de cido o como inhibidores del crecimiento de unas bacterias y no de otras (el
Rojo Fenol se usa como indicador ya que es rojo en pH bsico y amarillo en pH cido. La
Violeta de Genciana se usa como inhibidor ya que impide el crecimiento de la mayoria de
las bacterias Gram-positivas).
CARACTERSTICAS
Un microorganismo se puede sembrar en un medio lquido o en la superficie de un medio
slido de agar. Los medios de cultivo contienen distintos nutrientes que van, desde azcares
simples hasta sustancias complejas como la sangre o el extracto de caldo de carne. Para
aislar o purificar una especie bacteriana a partir de una muestra formada por muchos tipos
de bacterias, se siembra en un medio de cultivo slido donde las clulas que se multiplican
no cambian de localizacin; tras muchos ciclos reproductivos, cada bacteria individual
genera por escisin binaria una colonia macroscpica compuesta por decenas de millones
de clulas similares a la original. Si esta colonia individual se siembra a su vez en un nuevo
medio crecer como cultivo puro de un solo tipo de bacteria.
La principal diferencia entre un medio de cultivo slido y uno lquido es que el medio de
cultivo slido contiene un 1,52% de agar-agar, mientras que el medio lquido no contiene
agar-agar.
Muchas especies bacterianas son tan parecidas morfolgicamente que es imposible
diferenciarlas slo con el uso del microscopio. En este caso, para identificar cada tipo de
bacteria, se estudian sus caractersticas bioqumicas sembrndolas en medios de cultivo
especiales. As, algunos medios contienen un producto que inhibe el crecimiento de la
mayora de las especies bacterianas, pero no la del tipo que se desea averiguar si est
presente. Otras veces, el medio de cultivo contiene determinados azcares especiales que
slo pueden utilizar algunas bacterias. En algunos medios se aaden indicadores de pH que
cambian de color cuando uno de los nutrientes del medio es fermentado y se generan
catabolismos cidos. Si las bacterias son capaces de producir fermentacin, generan gases
que pueden ser detectados cuando el cultivo se realiza en un tubo cerrado.

Con otros medios de cultivo se puede identificar si las bacterias producen determinadas
enzimas que digieren los nutrientes. As, algunas bacterias con enzimas hemolticas
(capaces de romper los glbulos rojos) producen hidrlisis y cambios apreciables
prosaicamente en las placas de agar-sangre.
Los diferentes medios y tcnicas de cultivo son Esenciales en un laboratorio de
microbiologa de un hospital, pues sirven para identificar las bacterias causantes de las
enfermedades infecciosas y los antibiticos a los que son sensibles esas bacterias. Los
cultivos suelen usarse en medicina para determinar la presencia de agentes patgenos en
fluidos corporales (como por ejemplo la sangre o la orina).

CONDICIONES GENERALES PARA EL CULTIVO DE MICROORGANISMOS
El desarrollo adecuado de los microorganismos en un medio de cultivo se ve afectado por
una serie de factores de gran importancia y que, en algunos casos, son ajenos por completo
al propio medio.
1- Disponibilidad De Nutrientes Adecuados
Un medio de cultivo adecuado para la investigacin microbiolgica ha de contener, como
mnimo, carbono, nitrgeno, azufre, fsforo y sales inorgnicas. En muchos casos sern
necesarias ciertas vitaminas y otras sustancia inductoras del crecimiento. Siempre han de
estar presentes las sustancias adecuadas para ejercer de donantes o captadores de electrones
para las reacciones qumicas que tengan lugar.
Todas estas sustancias se suministraban originalmente en forma de infusiones de carne,
extractos de carne o extractos de levadura. Sin embargo, la preparacin de estas sustancias
para su aplicacin a los medios de cultivo provocaban la prdida de los factores nutritivos
lbiles.
Actualmente, la forma ms extendida de aportar estas sustancias a los medios es utilizar
peptona que, adems, representa una fuente fcilmente asequible de nitrgeno y carbn ya
que la mayora de los microorganismos, que no suelen utilizar directamente las protenas
naturales, tienen capacidad de atacar los aminocidos y otros compuestos ms simples de
nitrgeno presentes en la peptona.
Ciertas bacterias tienen necesidades nutritivas especficas por lo que se aade a muchos
medios sustancias como suero, sangre, lquido asctico, etc. Igualmente pueden ser
necesarios ciertos carbohidratos y sales minerales como las de calcio, magnesio,
manganeso, sodio o potasio y sustancias promotoras del crecimiento, generalmente de
naturaleza vitamnica.

Muy a menudo se aaden al medio de cultivo ciertos colorantes, bien como indicadores de
ciertas actividades metablicas o bien por sus capacidades de ejercer de inhibidores
selectivos de ciertos microorganismos.
2- Consistencia Adecuada Del Medio
Partiendo de un medio lquido podemos modificar su consistencia aadiendo productos
como albmina, gelatina o agar, con lo que obtendramos medios en estado semislido o
slido.
Los medios solidificados con gelatina tienen el gran inconveniente de que muchos
microorganismos no se desarrollan adecuadamente a temperaturas inferiores al punto de
fusin de este solidificante y de que otros tienen la capacidad de licuarla.
Actualmente los medios slidos son de uso universal, por su versatilidad y comodidad, pero
hay tambin gran cantidad de medios lquidos cuyo uso est ampliamente extendido en el
laboratorio.
3- PRESENCIA (O AUSENCIA) DE OXGENO Y OTROS GASES
Gran cantidad de bacterias pueden crecer en una atmsfera con tensin de oxgeno normal.
Algunas pueden obtener el oxgeno directamente de variados sustratos. Pero los
microorganismos anaerobios estrictos slo se desarrollarn adecuadamente en una
atmsfera sin oxgeno ambiental. En un punto intermedio, los microorganismos
microaerfilos crecen mejor en condiciones atmosfricas parcialmente anaerobias (tensin
de oxgeno muy reducida), mientras los anaerobios facultativos tienen un metabolismo
capaz de adaptarse a cualquiera de las citadas condiciones.

4- CONDICIONES ADECUADAS DE HUMEDAD
Un nivel mnimo de humedad, tanto en el medio como en la atmsfera, es imprescindible
para un buen desarrollo de las clulas vegetativas microbianas en los cultivos. Hay que
prever el mantenimiento de estas condiciones mnimas en las estufas de cultivo a 35-37C
proporcionando una fuente adecuada de agua que mantenga la humedad necesaria para el
crecimiento de los cultivos y evitar as que se deseque el medio.
5- LUZ AMBIENTAL
La mayora de los microorganismos crecen mucho mejor en la oscuridad que en presencia
de luz solar. Hay excepciones evidentes como sera el caso de los microorganismos
fotosintticos.

6- pH
La concentracin de iones hidrgeno es muy importante para el crecimiento de los
microorganismos. La mayora de ellos se desarrollan mejor en medios con un pH neutro,
aunque los hay que requieren medios ms o menos cidos. No se debe olvidar que la
presencia de cidos o bases en cantidades que no impiden el crecimiento bacteriano pueden
sin embargo inhibirlo o incluso alterar sus procesos metablicos normales.

7- TEMPERATURA
Los microorganismos mesfilos crecen de forma ptima a temperaturas entre 15 y 43C.
Otros como los psicrfilos crecen a 0C y los temfilos a 80C o incluso a temperaturas
superiores (hipertemfilos). En lneas generales, los patgenos humanos crecen en rangos
de temperatura mucho ms cortos, alrededor de 37C, y los saproftos tienen rangos ms
amplios.

8- ESTERILIDAD DEL MEDIO
Todos los medios de cultivo han de estar perfectamente estriles para evitar la aparicin de
formas de vida que puedan alterar, enmascarar o incluso impedir el crecimiento microbiano
normal del o de los especimenes inoculados en dichos medios. El sistema clsico para
esterilizar los medios de cultivo es el autoclave (que utiliza vapor de agua a presin como
agente esterilizante)

LA EVOLUCIN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

Podemos decir que la microbiologa empieza su verdadero desarrollo como ciencia en el
momento en que se descubre el microscopio y comienza la observacin de los primeros
microorganismos, pero es indudable que la puesta a punto de los medios de cultivo y la
utilizacin del agar como solidificante, marcan dos importantes puntos de inflexin en su
evolucin.
La primera noticia de la utilizacin de medios de cultivo nos llega del miclogo Brefeld,
que consigui aislar y cultivar esporas de hongos en medios slidos realizados a base de
gelatina.
Sin embargo este sistema no era adecuado para las bacterias (por su menor tamao) y no
fue hasta el ao 1878 cuando Lister populariz un mtodo enfocado al cultivo puro basado
en diluciones seriadas en un medio lquido.
Koch realiz sus investigaciones utilizando en un primer momento rodajas de patata como
soporte nutritivo slido, pero no tard en recurrir al caldo de carne lquido, diseado por
Loeffler, al que, en 1881, aadi gelatina, logrando un medio slido transparente ideal para
la observacin de la morfologa macroscpica de las colonias microbianas.
En el ao 1882 tiene lugar uno de los grandes avances de la microbiologa en relacin con
los medios de cultivo: el mdico alemn Walter Hesse introduce el agar-agar (polisacrido
extrado de algas rojas) como solidificante.
En 1887 un ayudante de Koch llamado Petri, comienza a utilizar placas de cristal planas,
que se llaman desde entonces placas de Petri, para sustituir a las clsicas bandejas de vidrio
cubiertas con campanas que se usaban hasta entonces.
Beijerinck y Winogradsky, que desde de 1888 realizaron sus investigaciones sobre las
bacterias quimioauttrofas (utilizacin de nitrgeno y azufre sobre todo) tuvieron gran
importancia en el desarrollo de los medios selectivos y de enriquecimiento. Disearon este
tipo de medios de tal forma que su especial composicin qumica favoreca el crecimiento
de ciertos tipos de microorganismos que, en funcin de sus procesos metablicos, eran los
nicos capaces de utilizar para su desarrollo ciertos nutrientes del medio.
En 1892 Wrtz impuls el uso de los medios diferenciales, incorporando indicadores de pH
a la composicin de ciertos medios con lo cual se poda observar la produccin de cidos en
la fermentacin en ciertos microorganismos.

TIPOS BSICOS DE MEDIOS DE CULTIVO
atendiendo a su estado fsico:
lquidos
semislidos
slidos
atendiendo a su utilidad prctica:
Medios para aislamientos primarios:
Para usos generales: no selectivos, para cultivo de una amplia variedad de organismos
difciles de hacer crecer. A menudo estn enriquecidos con materiales como: sangre, suero,
Hemoglobina, FX, FV, glutamina, u otros factores accesorios para el crecimiento de las
bacterias (Agar Sangre, Schaeadler, etc)
Selectivos: (pueden ser de moderada o de alta selectividad) se aaden sustancias que
inhiban el crecimiento de ciertos grupos de bacterias, permitiendo a la vez el crecimiento de
otras. Variando las sustancia aadidas, se vara el tipo y grado de selectividad (Mac
Conkey, Kanamicina-Vancomicina)
Enriquecidos: ralentizan/suprimen el crecimiento de la flora competitiva normal
potenciando el cultivo y crecimiento deseado (Selenito, medio con Vitamina K).

Para aislamientos especializados: formulaciones nutritivas especiales que satisfacen
requerimientos de grupos especficos de bacterias, ayudando a su identificacin
(Lowenstein).
MEDIOS PARA IDENTIFICACIN:
Diferenciales: formulaciones especiales en las que se estudian las peculiaridades
fisiolgicas (nutricin y respiracin sobre todo) especficas de las bacterias. Seleccionando
los medios adecuados se puede llegar a la identificacin de casi cualquier bacteria
(Oxidacin-Fermentacin).

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