INSTITUTO DEL MAR DEL PER

SEDE REGIONAL DE TUMBES

REA DE ESTUDIOS AMBIENTALES







CURSO TALLER



RECOLECCIN Y CONSERVACIN DE MUESTRAS EN
CAMPO DESPUS DE ORIGINADO ALGN DAO O PERJUICIO
SOBRE UN CUERPO DE AGUA Y SU ENTORNO




12 Y 13 DE MARZO DEL 2009







DISEADO Y EXPUESTO POR:

Percy A. Montero Rodrguez
Bilogo Pesquero
Karina L. Agurto Romero
Qumica




TUMBES
PER
Taller: Recoleccin y Conservacin de muestras en campo despus de originado algn dao o perjuicio sobre en un
cuerpo de agua y su entorno.
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IMARPE, Sede Regional de Tumbes, rea de Estudios Ambientales.
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1. FUNDAMENTO:

Debido a los accidentes ocurridos el ao 2008 y especialmente a fines de enero del presente ao,
en que se avistaron peces muertos (Mugil cephalus, lisa en su mayora) en un canal de marea
llamado Nicasio, ubicado a la margen izquierda del ro Zarumilla, y cercano a la zona Puerto
25, han quedado algunas dudas por aclarar a cerca de las posibles causas que originaron tal
accidente, tanto en la poblacin extractiva artesanal de la zona, como de las instituciones
encargadas del cuidado, administracin y estudio del ecosistema de manglar ubicado dentro del
Santuario Nacional Los Manglares de Tumbes (SNLMT), muestra nica de este tipo ecosistema
en nuestro pas.

Una de las razones por la que no se pueden realizar investigaciones cientficas que resuelvan o
esclarezcan las posibles causas de mortandad de organismos acuticos, derrames o presencia de
agentes extraos y contaminantes en los cuerpos de agua naturales, es la falta o inoportuna
comunicacin. Dicho de otro modo, debido a una comunicacin poco eficiente y muchas veces
no veraz de los hechos. Tambin influye la falta de accin anticipada, con conocimiento y
nociones bsicas de muestreo, y coordinacin conjunta frente a una eventualidad de este tipo.

En tal sentido, y para poder tener una respuesta eficaz y eficiente luego de ocurrir un futuro
accidente ecolgico en los ecosistemas acuticos de la Regin Tumbes, el personal del
IMARPE, Sede Regional Tumbes, rea de Estudios Ambientales, en coordinacin con MEDA,
DESA, PRODUCE y SERNANP realizarn el Taller de capacitacin para el personal de campo
y guarda parques del Santuario Nacional Los Manglares de Tumbes (SNLMT) y Zona de
Amortiguamiento (ZA), el cual se titula: Recoleccin y conservacin de muestras en Campo
despus de originado algn dao o perjuicio sobre en un cuerpo de agua y su entorno, el cual
se enfocar y brindar algunas pautas bsicas de muestreo al pblico interesado en participar.


2. PARTES DEL TALLER:

Este taller est diseado para brindar un conocimiento bsico de muestreo en campo y tambin
para brindar algunas nociones acerca de las variables fsicas, qumicas y biolgicas que influyen
en la calidad de un cuerpo de agua.

El taller constar de dos partes; una terica (12 de marzo), la que se dictar en el auditorio de
conferencias del IMARPE, Sede Regional de Tumbes, en donde que se dar a conocer:

2.1. Las fases de accin de las instituciones o involucrados directos ante un eventual
accidente.
2.2. Las etapas de un muestreo en campo frente al eventual accidente.
2.3. Los materiales de campo necesarios para un recolector de informacin y muestras en
campo.
2.4. Los instructivos de muestreo de las variables ambientales y agentes contaminantes.
2.4.1. Instructivo para recoleccin de muestras Biolgicas.
2.4.2. Instructivo para recoleccin de muestras Microbiolgicas y para anlisis
Qumicos.
2.4.3. Instructivo para recoleccin de muestras para determinar Agentes
Contaminantes.
2.4.4. Instructivo para recolectar muestras para anlisis Fsicos.
2.5. Anexos, que brindan informacin complementaria.

Y la segunda parte del taller (13 de marzo) constar de una simulacin de recoleccin de
informacin y de muestras de campo en un canal de marea especfico en el SNLMT y ZA.
Taller: Recoleccin y Conservacin de muestras en campo despus de originado algn dao o perjuicio sobre en un
cuerpo de agua y su entorno.
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2.1. FASES DE ACCIN ANTE UN EVENTUAL ACCIDENTE:

DIAGRAMA DE FLUJO


CONOCIMIENTO DEL
ACCIDENTE
TRASLADO A LA
ZONA DEL
ACCIDENTE
Debe ser oportuno!
Debe ser oportuno!
AVISTAMIENTO
Y VERIFICAIN
DEL ACCIDENTE
VERAZ

NO VERAZ


IDENTIFICACIN
DEL ACCIDENTE
MORTANDAD
DE ORGANISMOS
DERRAME O
PRESENCIA DE
AGENTES
EXTRAOS
Por ejemplo:


HCP, AyG
COMUNICACIN
INMEDIATA DE LO
OBSERVADO

Debe ser oportuna y eficaz!
Debe ser imparcial!
AUTORIDAD
INMEDIATA
SUPERIOR
COMPAEROS
DE TRABAJO
MS CERCANOS
COORDINACIN
CONJUNTA CON
INSTITUCIONES
INVOLUCRADAS
RECOLECCIN Y
CONSERVACIN
ADECUADA DE
MUESTRAS
Deben ser oportunos!
TRASLADO DE LAS
MUESTRAS HACIA
LOS LABORATORIOS
DE ANLISIS

Taller: Recoleccin y Conservacin de muestras en campo despus de originado algn dao o perjuicio sobre en un
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2.2. ETAPAS DE UN MUESTREO EN CAMPO FRENTE A UN EVENTUAL ACCIDENTE:

EN EL LUGAR DEL HECHO VERAZ:

A. Registrar de la hora del avistamiento e identificacin de la zona y del cuerpo de agua
afectado.

B. Registrar de algunas variables meteorolgicas, tales como: temperatura ambiental,
cobertura, vientos (escala de Beaufort), presencia o no de precipitacin o humedad en el
entorno.

C. Verificar la presencia de organismos, vegetales o animales, muertos o moribundos,
cercanos o en el cuerpo de agua supuestamente afectado.

D. Identificar a nivel de especie y/o nombre comn (en la zona) de los organismos muertos
o moribundos.

E. Reconocer en lo posible, segn la accesibilidad, la zona del accidente para estimar su
extensin (usar GPS) y la cantidad aproximada de organismos muertos o afectados. A su
vez, tomar nota de algunas caractersticas fsicas del agua tales como el color aparente,
presencia de turbidez, estado de la marea; as como tambin si se avistaron o no algunos
organismos vivos. Si no hubiese agua por efecto de las mareas, observar el sedimento,
tomando nota de su apariencia y color aparente.

F. Observar y reconocer la presencia de algn agente extrao sobre o en el agua, as como en
el sedimento (aceites y grasas e hidrocarburos).

G. Recolectar organismos, de los grupos o especies identificados. Si estuvieran muertos,
recolectar (segn instructivo 1) los de menor grado de descomposicin, aquellos que
presenten seales externas como: lesiones corporales (mordidas o falta de miembros o
apndices), presencia de hidrocarburos o aceites (visualizar y oler). Si estuvieran
moribundos recolectar los ms saludables y dividirlos en dos grupos; uno en un balde con
agua del canal afectado y otro en un balde con agua de algn otro canal aparentemente no
afectado. Tambin recolectar algunos peces muertos (frescos) para luego extraerles las
branquias (laboratorio de anlisis) y descartar la posibilidad de muerte por barbasco.

H. Recolectar una muestra representativa de agua y de sedimento, en un balde previamente
enjuagado (10 a 20 L) y bolsa de polietileno limpia respectivamente. Realizar un anlisis
organolptico de ambas muestras, determinando el olor y color aparente de las mismas.

I. Recolectar y conservar muestras de agua para determinacin (en laboratorio) de variables
microbiolgicas (tambin en sedimentos) y qumicas, entre ellas se considerarn:
coliformes totales y termotolerantes, oxgeno disuelto, DBO
5
, nutrientes (nitritos, nitratos
y fosfatos) y amonio (segn instructivo 2).

J. Recolectar y preservar muestras de agua para la determinacin (en laboratorio) de algunos
agentes contaminantes, entre ellos: sulfuros, aceites y grasas, hidrocarburos y pesticidas.
Tambin recolectar sedimentos para la determinacin de hidrocarburos (segn instructivo
3).

K. Medir algunas variables fsicas en agua, entre ellas: temperatura y pH; tambin
recoleccin y conservacin adecuada de una muestra de agua para determinacin (en
laboratorio) de slidos suspendidos totales (SST) y sedimento para determinacin del pH
(segn instructivo 4).
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RECOLECCIN DE MUESTRAS EN CAMPO

DIAGRAMA DE FLUJO:


CANAL DE MAREA O
CUERPO DE AGUA
AFECTADO
ORGANISMOS
AGUA
SEDIMENTO
BARBASCO
(Branquias)
REFRIGERAR
FSICOS
QUMICOS
MICROBIOLGICOS
CONTAMINANTES
O.D.
DBO
5

FIJAR
NUTRIENTES
Y AMONIO
SST
CONGELAR
REFRIGERAR
HIDROCARBUROS
(Peces e invertebrados)
CONGELAR
FIJAR Y
CONGELAR
COLIFORMES
ACEITES Y
GRASAS
SULFUROS
FIJAR
HIDROCARBUROS
FIJAR Y
REFRIGERAR
PESTICIDAS
pH
REFRIGERAR
O
CONGELAR
ORGANISMOS
MORIBUNDOS
CONSERVAR
EN AGUA
MUERTOS
(Frescos)
pH
REFRIGERAR
REFRIGERAR
HIDROCARBUROS
CONGELAR
TEMPERATURA
MEDICIN IN SITU
COLIFORMES
REFRIGERAR


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2.3. MATERIALES DE CAMPO NECESARIOS PARA UN RECOLECTOR DE INFORMACIN Y
MUESTRAS EN CAMPO:

Entre los materiales esenciales con que debern contar aquellas personas de trabajo continuo en
campo (guarda parques y personal de las instituciones involucradas), previamente capacitadas
con los conocimientos bsicos de muestreo, podemos mencionar:

- Una libreta o cuaderno de notas.
- Lpiz de preferencia o bien un lapicero.
- Un plumn de tinta indeleble.
- Un telfono celular.
- Un GPS.
- Una cmara fotogrfica o filmadora.
- Una tabla de mareas actualizada.
- Mscara con filtro para solventes voltiles.
- Botas de caucho.

Tambin existen materiales, instrumentos y algunos insumos (reactivos y preservantes) de
medicin para la recoleccin de muestras de organismos, agua y sedimentos, entre ellos
tenemos:

Materiales de campo:

- Un cooler o caja de tecnoport de capacidad media o grande para conservacin al fro de
algunas muestras.
- Dos baldes plsticos de 10 a 20 litros.
- Dos baldes plsticos de 4 litros.
- Cabo o cuerda de unos 5 metros de longitud.
- Bolsas chequeras grandes y chicas.
- Bolsas de polietileno grandes.
- Bolsas de plstico de 5x10 cm.
- Un plumn de tinta indeleble.
- Cinta maskin.
- Guantes quirrgicos.
- Papel aluminio.
- Equipo de diseccin de acero inoxidable.
- Jeringas de 1 mL nuevas.
- Cinta de tefln.
- Una probeta de 100 mL.
- Un vaso de precipitacin de 100 mL.
- Esptula de acero inoxidable.
- Pipeta de vidrio de 10 mL.
- Pipeta de vidrio de 5 mL.
- Bombilla de absorcin, o pipetor.
- Frascos de vidrio de 120 mL y tapa esmerilada, para oxgeno disuelto y DBO
5
.
- Frascos de vidrio de 250 mL y tapa rosca ancha, esterilizados (autoclavables), para
coliformes.
- Frascos plsticos de 250 mL y tapa rosca, limpios, para nutrientes, amonio y SST.
- Frascos de vidrio mbar, de 120 mL y con tapa esmerilada, para sulfuros.
- Botellas de vidrio mbar, de 2,5 a 4 litros y con tapa rosca, para hidrocarburos.
- Botellas de vidrio mbar, de 1 litro y con tapa rosca, para aceites y grasas.
- Botellas de vidrio mbar o topacio de 1 litro y con tapa rosca, para pesticidas.
- Papel toalla.

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Instrumentos para medicin en campo:

- Termmetro de mercurio o alcohol. Rango 10 50 C, sensibilidad mnima 0,1 C; con
proteccin de PVC.
- Potencimetro porttil.
- Oxmetro porttil.
- Anemmetro.

Insumos y reactivos qumicos de campo:

- Formol bufferado al 10%, como conservante de organismos.
- Reactivos Winkler para oxgeno disuelto: Cloruro manganoso tetrahidratado o Sulfato
manganoso monohidratado, yoduro de potasio o de sodio e hidrxido de potasio o
de sodio; fijan el oxgeno en la muestra.
- Cinta indicadora de pH. Rangos de 1 a 7 y de 7 a 14.
- Acetato de Zinc dihidratado, para fijar sulfuros.
- Diclorometano o Hexano, para fijar hidrocarburos.
- cido clorhdrico 1:1 cido sulfrico 1:1, para fijar aceites y grasas en aguas.
- Agua destilada.
- Hielo molido.


2.4. INSTRUCTIVOS:

2.4.1. INSTRUCTIVO PARA RECOLECCIN DE MUESTRAS BIOLGICAS.

A) ORGANISMOS MUERTOS:
Los organismo muertos en mejor estado, es decir, los de menor grado de descomposicin,
son recolectados usando guantes quirrgicos, para que no ocurra una contaminacin cruzada
entre el recolector y el espcimen muerto. Debe hacerse un anlisis organolptico del
ejemplar, anotando:
- El estado de frescura (fresco, con mal olor, en rigor mortis, etc,)
- La apariencia de la piel (hmeda, seca o muy seca) si se tratase de un pez; o del
exoesqueleto (entero, roto o con prdida de apndices), si se tratase de un
invertebrado. Anotar, si presentara o no sobre el cuerpo, algn residuo extrao (oler
de ser necesario).
- La apariencia de los ojos (normal, hundido, roto o sin l).
- La apariencia de las branquias.
- La presencia de mordidas o lesiones causadas por depredadores.

Luego de anotar los datos anteriores en la libreta, el ejemplar
debe ser envuelto en varias capas de papel aluminio hasta
quedar totalmente cubierto, el cual debe ser reforzado con cinta
adhesiva; se colocar una etiqueta, grande y clara sobre el
ejemplar cubierto, donde se especifique: el lugar de recoleccin,
la fecha y hora de recoleccin, especie y/o nombre comn del
ejemplar, nombre del recolector e institucin a la que pertenece.
Para finalizar, se deber cubrir el ejemplar envuelto dentro de
una bolsa plstica de polietileno, sellndola adecuadamente con
cinta adhesiva para luego conservarla en refrigeracin a 4 C.
Congelar integralmente hasta su traslado al laboratorio de
anlisis.

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B) ORGANISMOS MORIBUNDOS:
La finalidad de esta recoleccin, es poder concluir en la
verdadera o falaz eficacia de algn supuesto contaminante dentro
de un cuerpo de agua natural. Es decir, comprobar si es
efectivamente en el agua donde se encuentra el agente mortfero.
Para ello se deben recolectar ejemplares moribundos con una red
especial (chinchorro o atarraya), tratando de no estresarlos
demasiado, luego se deben escoger los ms saludables y
dividirlos en dos grupos; uno (A) deber conservarse en un recipiente grande con agua del
canal de marea o cuerpo de agua de donde se extrajeron, y el otro grupo (B) en un recipiente
de igual capacidad, pero con agua de otro canal de marea. La intensin, es brindarles
oxigenacin por circulacin o difusin para observar sus comportamientos. Anotar la forma
e intensidad de natacin, el movimiento de las aletas o apndices y oprculos (en peces).
Luego de 1 a 6 horas anotar la cantidad de ejemplares muertos en ambos casos.

C) BRANQUIAS:
Esta recoleccin se realizar para posteriormente poder
aceptar la posibilidad de envenenamiento de peces por
barbasco o rotenona. Para ello se debern recolectar
las branquias de los peces muertos ms frescos; la extraccin
se deber hacer con guantes quirrgicos y con la ayuda de
una pinza y tijeras de acero inoxidable (equipo de diseccin
limpio y esterilizado). Las branquias extirpadas debern
alcanzar un peso total mximo de unos 20 g y deben ser envueltas en el papel aluminio,
luego colocar en una bolsita de plstico sellada con cinta adhesiva y etiquetada; en la
etiqueta colocar los siguientes datos: cantidad de branquias, nombre cientfico y/o comn
del ejemplar muerto; lugar, hora y fecha de recoleccin, nombre del recolector y de la
institucin a la que representa. Colocar las bolsitas en refrigeracin a 4 C congelar hasta
su envo al laboratorio de anlisis.


2.4.2. INSTRUCTIVO PARA RECOLECCIN DE MUESTRAS MICROBIOLGICAS Y
PARA ANLISIS QUMICOS.

2.4.2.1. EN AGUA:

A) COLIFOMES TOTALES Y TERMOTOLERANTES:
Con los guantes puestos, (a fin de evitar contaminacin cruzada), tomar la muestra
directamente del cuerpo de agua, para ello se utilizan frascos de vidrio de 250 500 mL,
boca ancha, con tapa rosca, los cuales han sido previamente lavados, secados , esterilizados
y cubiertos con papel kraft para su mejor conservacin. Una vez obtenida la muestra se
colocar en un cooler, a una temperatura menor a 10 C hasta llegar al laboratorio. La
muestra deber ser analizada dentro de las 24 horas luego de haber sido recolectada.

B) OXGENO DISUELTO:
Tomar la muestra en un balde de plstico, esperando que el agua este calmada. El frasco
debe estar previamente enjuagado por lo menos con un volumen igual al de la botella.
Llenar totalmente la botella, evitando las burbujas de aire. Tan rpido como sea posible, se
agregar 1 mL de cada uno de los reactivos R1 y R2, en ese orden (R1: cloruro manganoso /
sulfato manganoso y R2: Solucin alcalina de yoduro de potasio hidrxido de potasio/
yoduro de sodio hidrxido de sodio).

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Las pipetas o jeringas de 1 mL tocarn la superficie de la solucin en el cuello de la botella,
(es normal que no se introduzcan burbujas de aire e invertir cuidadosamente para
homogenizar la solucin y distribuir uniformemente el precipitado formado.

Medicin de OD por mtodo sensores de membrana: Se requerir de un Oxmetro
digital. Con el equipo calibrado y la sonda correctamente instalada; insertar la sonda en la
muestra que se medir, agitndola continuamente. Permitir que las lecturas de temperatura y
oxgeno disuelto se estabilicen. Observar/ Registrar las lecturas. Luego del uso enjuagar la
sonda con agua limpia (destilada).

C) DEMANDA BIOQUMICA DE OXGENO (DBO):
Las muestras se recolectan en frascos de vidrio o plstico limpios, de 500 mL, llenndolos
completamente. Estas muestras se deben analizar con prontitud; si no es posible,
refrigerarlas a una temperatura cercana al punto de congelacin, ya que se pueden degradar
durante el almacenamiento, dando como resultado valores bajos (errneos). Sin embargo,
pueden mantenerse por un mximo de 24 horas antes de su anlisis. Si el anlisis se
emprende en el intervalo de 2 h despus de la recoleccin no es necesario refrigerarlas; de
lo contrario, guardar la muestra a 4 C o menos; reportar junto con los resultados el tiempo
y la temperatura de almacenamiento. Bajo ningn concepto iniciar el anlisis despus de 24
h de haber tomado la muestra.

D) NUTRIENTES:

a) Fosfatos: Para la recoleccin de esta muestra se deber usar botellas de polietileno de
100 mL, las que debern ser previamente enjuagadas por lo menos 2 veces con el agua que
ser analizada. Las muestras debern ser guardadas en un lugar fro y oscuro y solo sern
calentadas a temperatura ambiente hasta que sean analizadas. Debern ser refrigeradas a 0
C o menos si los anlisis sern realizados luego de 1 2 horas. Del mismo modo, acidificar
a pH menor a 2 con acido sulfrico, logrando mantener por un periodo de 48 horas.

b) Silicatos: Las muestras debern ser recolectadas en botellas de vidrio o polietileno de
100 mL y guardadas en la oscuridad para prevenir la multiplicacin de diatomeas, las cuales
pueden consumir silicatos. Las muestras podrn ser guardadas en una congeladora a -20 C.

c) Nitratos: Las muestras debern ser recolectadas en botellas de vidrio o polietileno de 100
mL, son estables por muchas horas si son guardadas fras y en la oscuridad, pero el anlisis
no debe demorar ms de 12 horas. Si se piensan guardar mayor tiempo, debern ser
congeladas a 4 C.

d) Nitritos:
Las muestras debern ser recolectadas en botellas de vidrio o polietileno de 100 mL, por un
periodo no mayor a 1 a 2 horas. Si se piensan guardar mayor tiempo, debern ser
congeladas a 4 C, por un perodo mximo de 72 horas.

En caso de querer realizar la toma de muestra de los 4 nutrientes, es recomendable tomar
500 mL de muestra, los que debern ser congeladas a 4 C. No olvidar de rotular
debidamente las muestras.

E) Amonio:
La muestra se recolectar en un recipiente de plstico o vidrio de volumen 500 mL
aproximadamente. Es necesario aadir cido sulfrico para llevar a pH menor que 2, para lo
cual se agregarn 0,8 mL de cido sulfrico concentrado y mantenindolas a 4 C. El pH de
las muestras conservadas con cido debe estar comprendido entre 1,5 y 2.

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2.4.2.2. EN SEDIMENTO:

A) COLIFOMES TOTALES Y TERMOTOLERANTES:
Recolectar unos 100 g (usar guantes) y colocarlos en bolsas plsticas nuevas, sellarlas con
cinta adhesiva y etiquetar debidamente. Conservar en refrigeracin a 4 C y trasladar las
muestras antes de las 18 horas al laboratorio de anlisis.


2.4.3. INSTRUCTIVO PARA RECOLECCIN DE MUESTRAS PARA DETERMINAR
AGENTES CONTAMINANTES.

2.4.3.1. EN AGUA:

A) HIDROCARBUROS:
Si se cree distinguir, visualmente o por olor residuos de
hidrocarburos formando una pelcula sobre la superficie del
agua, entonces se deber proceder de la siguiente manera.
Primero se deber sumergir en el agua una botella de vidrio
mbar de 2,5 a 4 litros de capacidad, previamente lavada y
tratada con solucin cida y nuevamente enjuagada con
abundante agua destilada. Luego de la recoleccin, desechar
unos 100 mL de la muestra y por medio de un vaso de precipitacin o probeta verter 50 mL
de diclorometano (usar guantes quirrgicos y mscara antigases), luego sellar la boca de la
botella con cinta de tefln, recubriendo varias veces; tapar fuerte y agitar vigorosamente
hasta que el diclorometano se disgregue en bolitas muy
pequeas. Etiquetar y rotular la muestra, especificando: el
lugar de recoleccin, hora y fecha, colocar HCP para
diferenciar, nmero de la estacin de muestreo, nombre del
recolector y de la institucin que representa. Conservar las
muestras en un lugar fresco hasta su envo al laboratorio de
anlisis. El tiempo mximo de almacenaje debe ser 72
horas.

B) ACEITES Y GRASAS:
La muestra se recolectar en frascos de vidrio de 500 a 1000 mL, agregndole
inmediatamente 2,5 mL de cido clorhdrico (HCl, 1:1) o tambin cido sulfrico (H
2
SO
4
,
1:1) por 0,5 L de muestra colectada, llevando el pH a un valor menor a 2. Homogenizar bien
la muestra y mantener en refrigeracin a 4 C hasta su anlisis. Etiquetar y rotular la
muestra como en el caso de hidrocarburos. Trasladar al laboratorio de anlisis antes de los
15 das.

C) SULFUROS:
Tomar la muestra en un balde de plstico, recolectndola en un frasco de vidrio oscuro de
115 mL de capacidad con boca y tapa esmerilada, evitando la formacin de burbujas de aire.
Preservar con 1 mL de acetato de zinc y almacenar a temperatura ambiente. Trasladar al
laboratorio de anlisis antes de los 4 das.

D) PESTICIDAS:
Las muestras se recolectarn en botellas de vidrio mbar o topacio de 1 L de capacidad
cerradas con tapa rosca y refrigerar a 4 C en el campo. Conservar las muestras en oscuridad
hasta su traslado al laboratorio de anlisis, la cual no debe exceder de las 12 horas desde su
recoleccin. Etiquetar y rotular la muestra como en el caso de hidrocarburos.


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2.4.3.2. EN SEDIMENTO:

A) HIDROCARBUROS:
Al igual que con el agua se debe poder distinguir visualmente o por olor residuos de
hidrocarburos sobre la superficie del sedimento; si fuera as entonces proceder de la
siguiente manera. Primero recolectar una cantidad aproximada de 300 g con la ayuda de una
esptula de acero inoxidable limpia; la muestra debe ser extrada de los primeros 5 cm de la
superficie del sedimento y colocados sobre una lmina de papel de aluminio. Luego
envolver bien hasta quedar completamente cubierta. Colocar la muestra en una bolsita
plstica que debe ser sellada con cinta adhesiva y finalmente etiquetar y rotular la muestra,
especificando: el lugar de recoleccin, hora y fecha, colocar HCP para diferenciar, nmero
de la estacin de muestreo, nombre del recolector y de la institucin que representa. La
muestra debe refrigerarse o congelarse si el envo al laboratorio de anlisis tomar tiempo.
Tiempo mximo de almacenaje 72 horas.


2.4.4. INSTRUCTIVO PARA RECOLECTAR MUESTRAS PARA ANLISIS FSICOS.

2.4.4.1. EN AGUA:

A) SLIDOS SUSPENDIDOS TOTALES (SST):
La muestra se recolectar en envases de vidrio o plstico, de 300 500 mL, evitando el
ingreso de arena o material grueso que sedimente. Se recomienda refrigerar a 4 C, por un
periodo mximo de 7 das. Etiquetar y rotular la muestra debidamente.

B) TURBIDEZ:
La muestra debe de ser colectada en frascos de 100 mL, de vidrio o
polietileno de boca ancha, cierre hermtico y tapa inerte. Las
muestras deben etiquetarse y rotularse debidamente y mantenerse
en la oscuridad y en refrigeracin durante el transporte al
laboratorio, a una temperatura de 4 C. Las muestras deben de
analizarse lo antes posible y en un periodo no mayor de 24 h. La
determinacin tambin puede realizarse en el sitio de muestreo
empleando un turbidmetro porttil.

C) PH:
La muestra ser tomada en un balde plstico, introduciendo en l el
electrodo del potencimetro. Esperar que la medida se estabilice,
anotar el valor observado. Tambin se puede usar una cinta
indicadora de pH para tener un valor referencial de este parmetro.
Y aunque no es recomendable, recolectar 100 mL en un frasco de
plstico, etiquetar y rotular la muestra debidamente, almacenar en
refrigeracin a 4 C, y trasladar lo antes posible al laboratorio de
anlisis.

D) TEMPERATURA:
La temperatura en una variable de medicin in situ, as que se deber recolectar una muestra
de agua en un balde plstico en donde se sumergir un termmetro de mercurio o de alcohol
protegido con una coraza de PVC y con una cmara de recepcin del lquido, o tambin
puede utilizarse un sensor electrnico o digital. Esperar el tiempo adecuado, entre 3 a 5
minutos; el encargado de hacer la lectura de la temperatura debe posicionar el termmetro
verticalmente y ubicarlo alineadamente en frente de sus ojos u horizonte. Registrar este dato
con un decimal, haciendo los correctos clculos de redondeo.

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2.4.4.2. EN SEDIMENTOS:

A) PH:
Esta medicin puede hacerse in situ, a travs de un potencimetro de campo. Pero, para
recolectar esta muestra de sedimento, slo es necesario verter a una bolsita plstica nueva y
limpia, aproximadamente unos 200 a 250 g con la ayuda de una esptula de acero
inoxidable tambin limpia. Luego atar la bolsita, etiquetar y rotular la muestra,
especificando: el lugar de recoleccin, hora y fecha, colocar pH para diferenciar, nmero de
la estacin de muestreo, nombre del recolector y de la institucin que representa. Luego
conservar en refrigeracin a 4 C o congelacin si el traslado al laboratorio de anlisis
tendr mayor demora. Tiempo mximo de almacenamiento, 10 das.


2.5. ANEXOS:

2.5.1. CONCEPTOS GENERALES:

A) Ecosistema: El ecosistema es un sistema formado por una comunidad natural que
se estructura con los componentes biticos (seres vivos) del ecosistema, y los
componentes abiticos (el ambiente fsico).

B) Canal de marea o estero: Estero o estuario es un
canal angosto y somero por donde ingresan y salen las
mareas a un ro. Los esteros discurren en general en
forma paralela o subparalela a la lnea de costa y los
de varios ros pueden estar encadenados por un
mismo estero. Los esteros constituyen un biotopo
mixto de aguas dulces y saladas y anfibio de reas
terrestres y acuticas. En la zona intertropical, los
esteros son hbitat de los manglares de borde.

C) Muestreo: Recoger una porcin de material lo suficientemente
pequea como para ser fcilmente transportada al Laboratorio
de Anlisis para su investigacin. La muestra debe ser
homognea y representativa de las caractersticas medias del
total del material muestreado. Esto supone que la
concentracin de cualquier componente en la muestra ser
idntica (o razonablemente idntica) a la existente en la masa
global.

Un adecuado muestreo es sumamente importante para garantizar la
representatividad de las muestras y la seguridad de los resultados. Podemos
distinguir tres etapas en el proceso de muestreo:
a) Pre muestreo: Comprende las actividades que se dan previamente a la
recoleccin de la muestra, aqu se definen:
Equipos e instrumentos: Los equipos e instrumentos de medicin in situ deben
estar limpios y calibrados antes de ir al campo, dejndolos en el mismo estado al
finalizar el muestreo.
Tipo de botella o recipiente de muestreo: El material de los envases debe ser
qumicamente inerte, fcil de lavar, resistente al calor y al congelamiento. Pueden
usarse botellas de polietileno, vidrio o algn material especial, aunque por
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cuerpo de agua y su entorno.
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seguridad se prefieren las botellas de plstico. Las botellas de vidrio se usan en
mayor medida para anlisis microbiolgicos, aceites y grasas o en el caso que se
desee evitar alguna reaccin entre el plstico y el agua.
Volumen de muestra: Generalmente se toma de 1 a 2 litros para el anlisis
fisicoqumico, de 0.25 a 1 litro para anlisis bacteriolgicos y 1 litro para anlisis de
metales.
Mtodo de preservacin: Cuando es imposible realizar los anlisis
inmediatamente, las muestras deben preservase en fro y/o con un preservante
qumico. La conservacin es imprescindible a fin de garantizar la certeza de los
resultados analticos, siendo sumamente importante en los anlisis microbiolgicos
y de DBO
5
.
Tiempo mximo de almacenamiento: Los anlisis inmediatos constituyen la
mejor forma de eliminar errores, sin embargo, si las muestras llegan a almacenarse
de manera adecuada deber que ser por un tiempo limitado.
b) Recoleccin de la muestra: Comprende las actividades que se dan durante a la
recoleccin de la muestra, aqu se definen:
Mediciones in situ: Las mediciones de algunos parmetros se realizan in situ
mediante instrumentos o equipos porttiles, aunque gran parte de los parmetros
requieren de equipos precisos y sofisticados, por lo que solo pueden medirse en el
laboratorio. Estos parmetros deben analizarse en campo ya que es posible que
varen durante el transporte hacia el laboratorio.
Parmetros que deben ser registrados in situ:
Parmetros Instrumentos de Medicin
Conductividad Conductmetro
oxigeno Disuelto Oxmetro
pH Papel indicador, Potencimetro o pHmetro
Temperatura Termmetro
Recoleccin de muestras: La muestra debe ser recolectada directamente en el
frasco, para lo cual debe ser enjuagado previamente por lo menos 3 veces a fin de
asegurarnos que el frasco esta completamente saturado con la muestra.
Tipos de muestras:
Puntual o simple: muestra recolectada en un sitio especfico durante un
periodo corto, de minutos a segundos. Las muestras puntuales discretas son
aquellas que corresponden a un sitio seleccionado, a una profundidad y tiempo
definidos. Una muestra puntual integrada en profundidad corresponde a la que es
recolectada a profundidades definidas de la columna de agua, en un sitio y tiempo
seleccionados.
Compuesta o balanceada: provee un muestreo representativo, pudiendo
combinar porciones de varias muestras simples, tomadas cada cuatro horas durante
una misma jornada de trabajo, ellas indican las caractersticas promedio del
ambiente.
Para aguas superficiales, las muestras deben ser tomadas a media profundidad. Si se
tratase de alcantarillas o canales profundos, el muestreo debe ubicarse en un punto
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situado a un tercio de la profundidad media. En canales anchos, el punto de
recoleccin variara de acuerdo al ancho del canal.
Antes de obtener muestras de agua es necesario que el personal que muestreara
cuente con todos los implementos de seguridad: lentes, guantes, mascarilla, casco,
mandil, botas, etc.
Rotulado de muestras: Es importante que cada muestra cuente con una
identificacin o etiqueta numerada. Al nmero o cdigo de la muestra debe
corresponder un registro.
Los frascos y bolsas debern ser rotulados correctamente, consignndose la
informacin en el frasco y no en la tapa. Cada etiqueta debe tener la siguiente
informacin:
Ejemplo para Rotulado de frascos y bolsas de muestras
Nombre del cuerpo de agua
Fecha de muestreo: 10/01/2007 Hora: 07:45:00
Estacin de muestreo: E36
Canal Nicasio
N de muestra: 23254
Preservacin: H
2
SO
4
Cdigo de anlisis
Iniciales de muestreador RPP
Conservacin y preservacin de la muestra: La preservacin ms usada es la
refrigeracin de la muestra a 4 C, adems de los preservantes propios de cada
parmetro.
Transporte y almacenamiento: El transporte puede hacerse en cajas trmicas
aislantes, coolers, refrigeradoras elctricas o en cajas de madera cubiertas
internamente con un material aislante, conteniendo hielo o material refrigerante. El
uso de material esponjo durante el embalaje de muestras ayudara a la prevencin de
rupturas. Las muestras debern ser remitidas al laboratorio lo mas pronto posible,
mantenindose en el contenedor fresco y oscuro, en posicin vertical, en la que
debern ser transportadas.
c) Post muestreo:
El laboratorio elegido: El laboratorio debe garantizar la precisin y exactitud de
los datos del muestreo, para ello debe utilizar los procedimientos estndar dados en:
- Mtodos Estndar para el Anlisis de Agua y Aguas residuales 18th edicin
APHA 1998 (Asociacin Americana de Salud Pblica de EEUU)
- Mtodos para anlisis qumicos de Agua y Aguas residuales EPA.1983
(Agenda de Proteccin Ambiental de EEUU)
- o sus equivalentes Normas Tcnicas Peruanas (NTP/ INDECOPI)
El laboratorio debe estar acreditado por INDECOPI y/o contar con un sistema de
calidad otorgado por una organizacin de garanta como la EPA u otra agencia
similar, debiendo adjuntar las hojas de calibracin y chequeo respectivo.
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A fin de garantizar la calidad del laboratorio, se deber mandar muestras repetidas,
para ello se muestreara dos veces una misma estacin. A esta muestra se le conoce
como muestra doble o muestra repetida.

D) Coliformes totales y termotolerantes: La denominacin
genrica coliformes designa a un grupo de especies
bacterianas que tienen ciertas caractersticas bioqumicas en
comn e importancia relevante como indicadores de
contaminacin del agua, ya que estn asociados a fuentes de
patgenos.

E) Oxgeno disuelto (OD): El OD es la cantidad de oxgeno que
est disuelta en el agua y que es esencial para los cuerpos de
agua saludable. El nivel de oxgeno disuelto puede ser un
indicador de cun contaminada est el agua y cun bien puede
dar soporte a la vida vegetal y animal. Generalmente, un nivel
ms alto de oxgeno disuelto indica agua de mejor calidad. Si
los niveles de oxgeno disuelto son demasiado bajos, algunos peces y otros
organismos no pueden sobrevivir La determinacin de OD se puede realizar por
medio de una titulacin redox (mtodo de Winkler) o electrodos apropiadamente
calibrados.

F) Demanda Bioqumica de Oxgeno (DBO): La DBO es una prueba usada para la
determinacin de los requerimientos de oxgeno para la degradacin bioqumica de
la materia orgnica. Su aplicacin permite calcular los efectos de las descargas de
los efluentes domsticos e industriales sobre la calidad de las aguas de los cuerpos
receptores.

G) Fosfatos: Al igual que los nitratos son sustancias solubles en agua que las plantas
necesitan para su desarrollo, pero si se encuentran en cantidad excesiva inducen el
crecimiento desmesurado de algas y otros organismos provocando la eutrofizacin
de las aguas. Cuando estas algas y otros vegetales mueren, al ser descompuestos por
los microorganismos, se agota el oxgeno y se hace imposible la vida de otros seres
vivos. El resultado es un agua maloliente e inutilizable. Las masas de agua con altos
niveles de fosfatos generalmente tienen niveles altos de DBO
5
debido a las bacterias
que consumen los desechos orgnicos de las plantas y posteriormente a los niveles
bajos de OD. Del mismo modo, los fosfatos se encuentran en los fertilizantes y los
detergentes y pueden llegar al agua con el escurrimiento agrcola, los desechos
industriales y las descargas de aguas negras.

H) Silicatos: La presencia de silicatos en el agua se debe a la disolucin de sales
minerales, principalmente de los aluminosilicatos, pero tambin de la degradacin
del silicio orgnico en particular. Concentraciones elevadas de este parmetro se
traduce en el crecimiento de diatomeas, ya que el silicio es importante para la
estructuracin de su pared celular; por ello la importancia de mantener controlado
este nutriente.

I) Nitratos: Los nitratos constituyen el ltimo eslabn en el ciclo de nitrgeno. Ellos
se producen durante la fase del nitrato, en el curso de que las bacterias del gnero
degradan los nitritos. En concentraciones muy altas, puede ser txico para los peces.
As mismo, un exceso de niveles de nitrato nos indica contaminacin agrcola.

J) Nitritos: Los nitritos, constituyen un paso intermedio en el ciclo del nitrgeno, por
lo que el contenido es variable. Son indicadores de contaminacin fecal a medio-
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corto plazo, ya que desde que se produce la contaminacin hasta que aparecen los
nitritos debe pasar un tiempo no excesivamente largo.

K) Amonio: El amonio es el primer paso en el ciclo del nitrgeno, por ello constituye
probablemente el mejor indicador qumico indirecto de contaminacin fecal en las
aguas, pues el cuerpo los expulsa en esta forma, lo que supone que indica una
contaminacin reciente.

L) Hidrocarburos derivados del Petrleo: Hidrocarburos son compuestos orgnicos
que contienen carbono e hidrgeno. Son los compuestos orgnicos ms simples y
pueden ser considerados como las sustancias principales de las que se derivan todos
los dems compuestos orgnicos (i).El petrleo es un lquido oleoso bituminoso de
origen natural compuesto por diferentes sustancias orgnicas. Se encuentra en
grandes cantidades bajo la superficie terrestre y se emplea como combustible y
materia prima para la industria qumica. El petrleo y sus derivados se emplean para
fabricar medicinas, fertilizantes, productos alimenticios, objetos de plstico,
materiales de construccin, pinturas o textiles y para generar electricidad (ii).

M) Aceites y Grasas: Grupo de compuestos orgnicos existentes en la naturaleza que
consisten en steres formados por tres molculas de cidos grasos y una molcula
del alcohol glicerina. Son sustancias aceitosas, grasientas o cerosas, que en estado
puro son normalmente incoloras, inodoras e inspidas. Las grasas y aceites son ms
ligeros que el agua e insolubles en ella; son poco solubles en alcohol y se disuelven
fcilmente en ter y otros disolventes orgnicos. Las grasas son blandas y untuosas
a temperaturas ordinarias, mientras que los aceites fijos (para distinguirlos de los
aceites esenciales y el petrleo) son lquidos (iii).

N) Sulfuros: Los sulfuros se encuentran a menudo en aguas subterrneas, su presencia
se debe en parte a la descomposicin de la materia orgnica presente en los residuos
industriales, pero procedentes casi siempre de la reduccin bacteriana de sulfatos,
produciendo olores molestos.

O) Pesticidas: La contaminacin del medioambiente por pesticidas se produce por
aplicaciones directas en los cultivos agrcolas, derrames accidentales, lavado
inadecuado de tanques o contenedores, filtraciones en los depsitos de
almacenamiento y residuos descargados o depositados en el suelo.

P) Slidos Suspendidos Totales (SST): Los SST son el residuo no filtrable de una
muestra de agua. Se definen como la porcin de slidos retenidos por un filtro de
fibra de vidrio que posteriormente se seca a una temperatura estndar hasta peso
constante.

Q) Turbidez: Se entiende por turbidez a la falta de transparencia de un lquido, debido
a la presencia de partculas en suspensin. Cuantos ms slidos en suspensin haya
en el lquido, generalmente se hace referencia al agua, ms sucia parecer sta y
ms alta ser la turbidez. La turbidez es considerada una buena medida de la calidad
del agua, cuanto ms turbia, menor ser su calidad.

R) pH: El pH determina el grado de acidez o alcalinidad
(basicidad). Valores de pH mayores a 7 indican basicidad del
agua y valores de menores indicaran acidez. Por lo general
el pH ms recomendado para el pleno desarrollo de especies
de vida acutica es el que se encuentra entre 6,8 y 8,5 (Segn
ECAS, para aguas de Categora 4: Conservacin del
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ambiente acutico, ecosistemas marino costeros, y Categora 2: actividades marino
costeras, extraccin y cultivo de otras especies hidrobiologicas)


2.5.2. TABLAS:
Recoleccin, Preservacin y Almacenamiento de muestras
PARAMETROS
FISICOQUIMICOS
VOLUMEN
MNIMO
(mL)
RECIPIENTE PRESERVACIN
TIEMPO DE
ALMACENAMIENTO
Temperatura 25 P o V - inmediato
pH 100 P o V - anlisis inmediato
Conductividad 500 P o V Refrigerar 28 das
Alcalinidad Total 100 P o V Refrigerar 14 das
Slidos Disueltos 100 P o V Refrigerar 2 - 7 das
Slidos Sedimentables 100 P o V Refrigerar 2 - 7 das
Slidos Totales Suspendidos 100 P o V Refrigerar 2 - 7 das
DBO5 1000 P o V Refrigerar 48 horas
DQO 100 P o V
Refrigerar
H
2
SO
4
pH<2
28 das
Oxigeno Disuelto 300 V - anlisis inmediato
Sodio 200 P o V HNO
3
pH<2 6 meses
Potasio 200 P o V HNO
3
pH<2 6 meses
Calcio 200 P o V HNO
3
pH<2 6 meses
Sulfato 100 P o V Refrigerar 28 das
Cianuro 50 P o V - 28 das
Cloro residual 200 P o V - anlisis inmediato
Fenol 500 P o V
Refrigerar
H
2
SO
4
pH<2
28 das
Grasas y Aceites 500 V
Refrigerar
H
2
SO
4
pH<2
28 das
Detergentes 250 P o V Refrigerar 48 horas
Hidrocaburos 500 Vidrio mbar
Refrigerar
H
2
SO
4
pH<2
28 das
P: Polietileno
V: Vidrio





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NUTRIENTES
VOLUMEN
MINIMO
(mL)
RECIPIENTE PRESERVACION
TIEMPO DE
ALMACENAMIENTO
Nitrgeno Total 500 P o V
Refrigerar
H
2
SO
4
pH<2
28 das
Nitrgeno Amoniacal 100 P o V
Refrigerar
H
2
SO
4
pH<2
28 das
Nitrgeno Orgnico 500 P o V
Refrigerar
H
2
SO
4
pH<2
28 das
Nitrato 100 P o V
Refrigerar
H
2
SO
4
pH<2
28 das
Nitrito 100 P o V Refrigerar 28 das
Fsforo Total 100 P o V
Refrigerar
H
2
SO
4
pH<2
28 das
Fsforo Hidrolizable 100 P o V
Refrigerar
H
2
SO
4
pH<2
28 das
Fosfato 100 P o V
Refrigerar
H
2
SO
4
pH<2
48 horas


PARAMETROS
MICROBIOLOGICOS
VOLUMEN
MINIMO (mL)
RECIPIENTE PRESERVACION
TIEMPO DE
ALMACENAMIENTO
Coliformes Totales 100 - 500 P o V
Refrigerar
Tiosulfato de sodio*
mx. 24 horas
Coliformes Fecales 100 - 500 P o V
Refrigerar
Tiosulfato de sodio*
mx. 24 horas
Recuento Total (Bacterias
Heteroficas)
100 - 500 P o V
Refrigerar
Tiosulfato de sodio*
mx. 24 horas
Solo si el agua tiene cloro residual

EXAMEN
ORGANOLEPTICO
VOLUMEN
MINIMO
(mL)
RECIPIENTE PRESERVACION
TIEMPO DE
ALMACENAMIENTO
Color 500 P o V refrigerar 48 horas
Olor 100 P o V refrigerar 48 horas

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS:
Manual de Anlisis Qumico y Productividad Primaria en el Agua de mar. Instituto del Mar del Per.
1973.
Protocolo de Monitoreo de Efluentes y Cuerpo Marino Receptor. Ministerio de la Pesquera, 2001.

WEB SITE:
http://www.fagro.edu.uy/agrociencia/VOL5/1/P10-22.pdf
ftp://tesis.bbtk.ull.es/ccppytec/cp263.pdf
http://www.bvsde.ops-oms.org/eswww/laborato/requisit.html
(i)http://es.encarta.msn.com/encyclopedia_761579268/Hidrocarburos.html
(ii)http://www.monografias.com/trabajos10/petro/petro.shtml
(iii) http://es.encarta.msn.com/encyclopedia_761552502/Grasas_y_aceites.html


PAMR/Responsable del rea de Estudios Ambientales.
KLAR/Analista de laboratorio.