Replicacin de AdN

Postulados de la replicacin:

La sntesis comienza en puntos especficos: orgenes de replicacin, en cada uno ocurre la apertura local de la doble
hlice y comienza la sntesis simultnea de 2 nuevas hebras, l as cuales se van alargando progresivamente por
adicin secuencial de nucletidos. Es bidireccional porque al separarse las hebras progenitoras, progresa en ambas
direcciones. Los puntos de transicin entre doble hebra y hebra sencilla se llaman horquillas de replicacin (se alejan
entre si. Dado a que las 2 hebras del adn son anti paralelas, su separacin con el avance de la horquilla progresa en
sentido opuesto, para una hebra ser 3--> 5 Y para la otra ser en sentido 5--> 3

Caractersticas:
*Carcter semi conservador, *Simultaneo (en ambas hebras, *Secuencial, *Bidireccional,* Origen monofocal
(procariotas) o multifocal (eucariotas, * Carcter semidiscontinuo.




Inicio:
Procariotas: (cromosoma circular) nico punto detreminado llamado ori
c
: Monofocal, Forma 2 horquillas
Eucariotas: existen multiples orgenes de replicacin: multifocal, muchas horquillas dobles

Enzimas: se requiere de:
*Cebador: fragmento de hebra iniciador, aporta un grupo 3-OH libre, generalmente es ARN que debe estar
apareado con la hebra de ADN de forma complementaria y antiparalela
*Sustratos: los 4 dNTP, incorporndose al nuevo ADN la parte dMNT
*Cofactores: ion metalico divalente, in vitro Mn o Mg, in vivo Mg
*Molde o plantilla: Cada hebra de ADN

Reaccin:


Direccin: la adicin de nucletidos se realiza siempre a partir de 5 trifosfatos SOBRE un extremo 3-OH libre; la
hebra crece por su extremo 3, y la sntesis ocurre en direccin 5--> 3






Tipos de ADN polimerasa

ADN polimerasas procariotas
ADN poli-I, ADN poli-II, son auxiliares; AND poli-III replicacin. Las 3 adems de polimerasas tienen actividades
exonucleasa: 3 exonucleasa hidroliza el nucletido en el extremo 3 (un nucletido c/vez) ocurre cuando no se
aparea correctamente con la hebra molde, reconoce el error detiene la adicin de nucletidos y libera el nucletido
mal incorporado (actividad correctora de pruebas). 5 exonucleasa (ADN poli-I) hidroliza secuencialmente ADN o
ARN a partir del extremo 5 de la hebra; elimina el ARN cebador y lo sustituye por ADN durante la sntesis discontinua
de la hebra retardada, complementando la actividad 3 exonucleasa corrigiendo distintos errores (actividad de
reparacin)


ADN polimerasas eucariotas:




ETAPAS EN EL PROCESO DE REPLICACION
Iniciacin: procariotas: membrana celular; eucariotas: matriz nuclear,EL ADN se replica una vez por vez en el
ciclo celular en la fase S

Proteinas de iniciacin: en procariotas y eucariotas el origen de la replicacin es reconocido por varias protenas que
provocan el pliegue de la cadena de ADN y crean una tensin superhelicoidal negativa que facilita la separacin de
las hebras. Ayuda la abundancia de A-T. Existen protenas de iniciacin que se unen especficamente a las secuencias
de inicio eucarioticas formando un complejo de reconocimiento de origen

Conexin entre iniciacin y elongacin: luego del complejo de iniciacin se necesita el desenrrollamiento de la doble
hlice. Inicialmente se da en el origen de replicacin por las protenas de iniciacin pero se debe continuar
avanzando por delante de la polimerasa encabezando la horquilla de replicacin. Se necesitan de operaciones de
desenrrollamiento o relajamiento y enrollamiento o compactacin donde intervienen protenas especializadas que
junto con las ADN polimerasas se conoce como replicona (complejo multiproteico)

a-. Helicasas: separan las 2 hebras de ADN, requiere ATP. Se crean 2 horquillas de replicacin que avanzan en
sentidos opuestos, liderados por una helicasa seguida por el complejo de elongacin asociado a la horquilla
b-. Proteinas de unin a hebra sencilla: evitan el reapariamiento de las hebras , se denominas protenas SSB en
procariotas, en eucariotas: protena de replicacin A
c-. Topoisomerasas:la separacion de las hebras por la helicasa ocasiona superenrrollamiento positivodelante de la
horquilla, lo que impide el avance de la replicacin. Las topoisomerasas alteran el estado de superenrrollamiento del
aDN sin modificar otros aspectos de su estructura. Hay 2 tipos:



d-. Primasa: las ADN polimerasas no son capaces de iniciar la sntesis, solo elongan la hebra preexistente, las
primasas sintetizan el cebador, produciendo cadenas cortas de ARN complementarias de cada una de las hebras
desemparejadas en el origen de replicacin. Procariotas: parte del complejo primosoma. Eucariotas: parte de ADN
polimerasa alfa





Elongacin:
El replisoma o complejo de replicacin, se asocia en torno a la horquilla de replicacin

Asimetria de la replicacin en ambas hebras:





Mecanismo: avance de una de las horquillas de replicacin: la sntesis continua de la hebra conductora es
simultanea a la sntesis discontinua de la hebra retardada, en fragmentos de okasaki

La ultima etapa en esta maduracin de la hebra retardada, la unin de fragmentos, es catalizadas por ADN ligasas
*Mella: 2 hebras apareadas completamente pero en una de ellas falta un enlace fosfodiester.

Maduracin de los fragmentos de Okasaki:










Replicacion de los telomeros:
la replicacin de los extremos del cromosoma eucariotico supone el 3er problema de terminacin, pues no pueden
llevarse a cabo mediante la elongacin por la ADN polimerasa