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Avanos Tecnolgicos e os Marcadores Moleculares:

O uso de biotecnolgias j vem de milhares de anos.As primeiras tcnicas usadas


em casos fermentativos remontam civilizaes muito antigas e era usada na
fermentao de cereais.Os primeiros relatos de processos fermentativos pelas
civilizaes antigas referemse ! fermentao de cereais em gros para fabricao
de bebidas alcolicas pelos povos sumrios e babil"nios h cerca de #$$$ a.
%.Outras informaes e&istentes podem ser encontradas na 'liblia (agrada no livro
de )enesis onde o vinho era produzido *alm do fermento para a fabricao de po
+ue os ,g-pcios usavam a ./$$$ a. %.0. (Lopes,2002)
As modificaes microbianas esta coligado com a produo de vinagre h cerca de
/$$$ a. %.* mas foi no ano de 123#* depois de ter sido inventado microscpio* +ue
4ouis 5asteur pode provar +ue a fermentao era feita por microrganismos* e +ue
era um tipo caracter-stico de microrganismos +ue realizava esse processo. (KARP,
2005)
6oi no ano de 1278 +ue ,duard '9chner e&p"s +ue os e&tratos celulares isolados de
clulas de leveduras +ue promoviam a fermentao alcolica*definindo +ue o
agente responsvel pelas reao no era o* processo celular comple&o do
microrganismo* mas algo sol:vel* ento chamada de ;zimase<* iniciando nesse
momento as biotransformaes com e&tratos celulares. (KARP, 2005)
=a > )uerra ?undial houve uma fabricao de produtos resultantes de processo
fermentativo como* o caso da a+uisio de um numero grande de glicerol para a
produo de e&plosivos e ainda o processo A', .acetona* butanol e etanol0 +ue foi
desenvolvido pelo +u-mico %haims @eizmann. A tecnologia permitia a fabricao de
um volume grande de acetona* para produo de munio* gerada pela bactria
Clostridium acetobutylicum* e produzia butanol e etanol como subprodutos. A
a+uisio de butanol por fermentao foi usada por muitos pa-ses at os anos 3$*
data em +ue a tecnologia baseadas no petrleo sobrepujaram !+ueles de
fermentao por microrganismos.
A nos anos B$*comearam a produo de antibiticos* neste caso a penicilina
comearo a ser fabricados por meios fermentativos.,sse antibitico a penicilina
produzida a partir de um fungo Penicillium notatum um cone da histria e um dos
acontecimentos mais importantes do sculo /$ e isso foi realizado por um bilogo e
farmaclogo (ir Ale&ander 6leming.Aps esse evento* outros antibiticos puderam
ser fabricados atravs da tecnologia fermentativa usando diferentes linhagens de
bactrias e fungos* e at os dias atuais* as principais ferramentas industriais para
produo de antibiticos envolvem processos fermentativos* sendo +ue as etapas
sintticas so realizadas somente para pe+uenas modificaes estruturais do
produto de origem natural (!"#$A200%)
A nos anos 3$ um grande marco revolucionrio* a descoberta da estrutura tridimensional do
C=A por @atson e %ricD em 173E* houve o desenvolvimento de in:meras ferramentas para
manipulao gentica +ue estabeleceram a base para a tecnologia do C=A recombinante. A
partir da dcada de 8$* as tcnicas de engenharia gentica tornaram poss-vel a obteno de
organismos e prote-nas recombinantes* de modo a produzir substFncias ou catalisar
reaes para as +uais a+ueles no se encontravam naturalmente programados. ,stas
tcnicas ganharam aplicao em vrios processos industriais* sendo um dos pioneiros a
fabricao da insulina recombinante(RAPAP"RT,&''0)
Atributos de C=A* transmitidas geneticamente e +ue servem como base para
diferenciar um ou mais indiv-duos* so chamados de marcadores moleculares. Os
marcadores moleculares*estimularam o desenvolvimento de tecnologias +ue podem
mostrar variabilidades em n-vel gen"mico de uma forma rpida* simples e eficaz. O
aperfeioamento das tcnicas de deteco de polimorfismos no C=A comeou a ser
e&plorado aps o aparecimento de outras duas outras grandes tecnologias* +ue se
pode citar o C=A recombinante e a amplificao da molcula de C=A por 5%G
.5olimerase %hain Geaction0* e as duas ajudaram a tornar o uso de marcadores
moleculares potencialmente ilimitado. ((R)**)T+!,200,)
Cas modificaes das tcnicas de anlise de polimorfismos no C=A* as mais
usadas* seja pela confiaa como pelo custo e menor tempo* estoH (ingle =ucleotide
5olImorphism .(=50* (ingle (trand %onformation 5olImorphism .((%50* Amplified
6ragment 4ength 5olImorphism .A6450* Gandom Amplified 5olImorphic C=A
.GA5C0* (e+uence%haracterized Amplified Gegions .(%AG0* Gestriction 6ragment
4ength 5olImorphism C=A .G6450* C=A (atlite* ?inissatlites ou Jariable =umber
of Kandem Gepeats .J=KG0* ?icrossatlites ou short tandem repeats .(KGs0*
%ombinao entre (=5s e (KGsLmicrossatlites .(=5(KG0* (hort >nsterspersed
,lements .(>=,s0 e Maplides nos ?icrossatlites .MA5(G0.
A importFncia de varios estudos desenvolvidos com relao a esses marcadores*
+ue e&iste varios bancos de dados espec-ficos para distintos marcadores. ,stando
dispon-vel essas ferramentas aumenta e facilita grandemente o processo de
pes+uisas em muitos pa-ses. ((R)**)T+!,200,)
Narl 4andsteiner* >munologista e patologista austr-aco no ano de 17$$ descobriu o
sistema A'O e +ue pode ser considerado o grupo sangu-neo mais importante.
A importFncia esta em +ue os ant-genos A'O no est somente no grupo das
hemcias* mas encontrado em todas as clulas do corpo.
(egundo a literatura esse pode ter sido o primeiro marcador sorolgico +ue foi
usado em pericias criminal (RAPAP"RT,&''0)
?as percebeuse +ue esse sistema .A'O0 necessitava de uma associao com
outros grupos comoH?= e ?4A isso era necessrio pelo fato de e&istir uma pe+uena
variabilidade resultado de apenas trOs alelos (Lopes,2002).O e&ame de amostras
biolgicas como provas forenses do inicio do sec. PP* +ue utilizouse os grupos
sangu-neos A'O*s +ue como citado apresentava uma variabilidade muito
limitada*ou seja apenas +uatro grupo de indiv-duos*sendo os grupos sangu-neos
A*'*A' e O +ue era acompanhado pelo uso do comple&o M4A .Muman 4eucocvte
AntigenAntigenos 4eucocitarios Mumanos0 +ue consistia em um grupo de genes
+ue codifica as molculas de histocompatilidade do sistema ?M% .Major
Histocompatibility Complex Q %omple&o de Mistocompatibilidade Mumana0
(KARP, 2005)
Os genes citados so encontrados na+uilo +ue chamado de brao curto do
cromossomo # e esta agrupado em E subregies +ue soHM4A classe > .A*' e
%0*M4A classe >> .CG*CR e C5 0 e M4A classe >>>.,sse genes do M4A gene mais
polimrfico dos mam-feros.Os M4A com seu comple&o de prote-nas variveis esto
no centro do sistema imunolgico.,les podem ser bastante discriminatrios*mas tem
um custo operacional muito elevado(AL-.!,2005)
O surgimento da gentica forense se deu por causa da diferena gentica normal
nos seres vivos e poderia ser usada como prova nos mais diversos casos criminais.
%om a evoluo continua juntamente com o surgimento da gentica bio+u-mica
pelos anos de 17#$ *p"deQse estudar a variao molecular humana atravs das
mais variadas prote-nas do sangue*ou seja*muitos polimorfismos permitem +ue
estes marcadores sorolgicos e prote-nas seja usados para decifrar casos de
parentescos ((R)**)T+!,200,)
O auge da gentica forense data o ano de 172$*no caso de paternidade*tendo em
vista como sendo o melhor mtodo de identificao biolgica*estudos +ue
cresceram aps 12#7 +uando Aohann.6.?iescher fez o primeiro isolamento do
C=A(K"/+,200%0.
Ruando no ano de mil novecentos e cin+9enta e trOs* Aames CeSeI @atson e
6rancis %ricD mostraram a constituio estrutural da molecula de C=A formada por
dupla helice *a histria na +uesto genetica deu um grande salto em direo a varias
soluoes relacionadas ao funcionamento da comple&a ma+uina animal e uma
enorme perspectiva com relao a saude.
Aa em mil novecentos e setenta e trOs*houve um outro avanco com uma nova
tecnologia *+ue foi a do C=A reconbinante ja mencionado anteriormente*onde p"de
se fazer um detalhado estudo dos genes atraves da distribuio do comple&o
gen"mico. (!"#$A200%)
Ainda com um continuo avano da tecnologia no ano de 1788 houve o isolamento do
primeiro gene humano*+ue foi o gene da insulina tambm ja mencionado* +ue com
isso houve outras descobertas de genes +ue estavam relacionados com outros tipos
de doOnas +ue tem relao com a identidade humana (AL-.!,2005)
Os meios usados para se descobrir a variabilidade do C=A so as chamadas
enzimas de restrio e tambm as sondas de C=A.
Os chamados polimorfismos de restrio .G645Ts0 consentiram avaliar uma
alterao do C=A de diferentes individuos.?as esse processo*ou seja o
polimorfismo de um unico nucleotideo .(=50 s admite aprear a variao do C=A
individualmente o +ue se torna muito dificil e muito caro.5or essa razo no ano de
172$*teve inicio o processo de estudos de locais do C=A chamados de regies
hipervariaveis*sendo a razo o fato de serem marcadores gentico com maiores
informaes ((R)**)T+!,200,) .
Cescobriramse regies constitu-das por vrios pares de bases* repetidas in:meras
vezes* com alelos variando +uanto ao n:mero de se+uOncias* denominados
minissatlites .J=KG0. >nicialmente* os J=KGUs foram utilizados como marcadores
genticos informativos* pois estes so compostos por 1$$ ou mais alelos com
diferentes comprimentos na populao humana. ((R)**)T+!,200,)
Outros marcadores altamente polimrficos foram encontrados no genoma humano*
os ?icrossatlites .(KG0. Os (KGUs so repeties curtas de 1 a 3 pares de bases
encontrados em eucariotos. Kais repeties so encontradas tanto em regies
codificantes +uanto no codificantes ((R)**)T+!,200,)
,m 172E* NarI ?ullis e colaboradores desenvolveram a tcnica de 5%G
.Polymerase Chain Reaction Q Geao em %adeia de 5olimerase0 permitindo +ue
pe+uenas +uantidades de C=A fossem amplificadas* de maneira +ue fragmentos
muito curtos de C=A* como no caso dos microssatlites* pudessem ser utilizados.
("L)-.)RA,200')
=o ano de 172B* nasceu a impresso digital do C=A depois de um e&perimento
chave entre amostras de uma fam-lia*pai*me e filho e ainda alguns animais e
plantas sendoHum babu-no* uma foca* uma vaca* um rato e uma planta de tabaco.
=o e&perimento foi feito comparaes entre as amostras e encontrouse fragmentos
altamente variveis de C=A. Analisaram +ue pai e me eram diferentes*mas* o filho
parecia ser a unio de padres de C=A dos pais.,ssa forma funcionou em outras
espcies tambm(RAPAP"RT,&''0)
Co e&perimento obtevese mtodo de C=A .uso de minissatlites0 +ue capaz de
particularizar e constituir relaes familiares. =o ano seguinte .17230* obtevese o
relato do primeiro caso de uso do perfil de C=A para resolver um problema de
imigrao com o uso da tcnica de (outhern blot para produzir o perfil de hibridao
em minissatlites* em uma fam-lia inglesa originada do pais de )ana.O filho ao
visitar )ana e retornar para 4ondres com passaporte adulterado foi interrogado
sobre a relao familiar.Aps varios e&ames de tipagem sanguinea feita na fam-lia
com marcadores sorolgicos emprego do sistema M4A*os resultados foram
duvidosos. 6oi ento feito teste da impresso digital do C=A e desvendado +ue o
menino era da fam-lia e +ue tinha o mesmo pai das outras crianas.O ministrio
publico ar+uivou o processo cedeu residOncia ao menino no pa-s* ficando o menino
com a fam-lia. (KARP, 2005)
=o decorrer dos anos* se discutiu muito sobre cada aspecto do perfil de C=A*
estabelecendose a necessidade de processos +ue visem ! manuteno da
+ualidade e a garantia do processo para a confiabilidade da evidOncia forense nos
tribunais em todo o mundo ("L)-.)RA,200')
Os testes de paternidade usando o C=A* ou testes de J-nculo )entico* viraram
rotina nos laboratrios isso pela certeza dada pelo resultado onde o e&ame e&clui a
suposta paternidade e resultado acima de 77*777V* nos casos de incluso de
paternidade. O campo da gentica no caso da biologia vem sofrendo transformaes
tecnolgicas e conceituais e os assuntos relacionados ! )entica ?olecular esta
muito presente na vida das pessoas. ,m nossa sociedade* os testes de paternidade
so muito anunciados pelos meios de comunicaoW porm* embora presente no
cotidiano das pessoas* a +uesto do ensino da )entica ainda encontra algumas
barreiras*como o ensino limitado por inade+uao nos materiais didtico usados ou
a falta deles* a desatualizao de educadores para a instruo e ainda com a
necessidade da criao de cursos onde se possa haver aprimoramento profissional
dos envolvidos com a +uesto.(/AMP"!,20&0)
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